OBJETIVO: Apresentar um modelo experimental de análise qualitativa e quantitativa de células tronco mesênquimais proveniente da gordura de coelhos obtido por lipectomia. A gordura poderia ser uma grande fonte de obtenção de células tronco mesenquimais, criando condições para a reparação de tecidos lesados. MÉTODOS: Foram removidos os panículos adiposos (2-3 cm) da região cervical de Coelhos Nova Zelândia (n = 10) por lipectomia. Os panículos foram fragmentados e lavados com PBS e, posteriormente, dissociados enzimaticamente com tripsina / EDTA. As células extraídas do panículo adiposo foram incubadas em meio de cultura DMEM e após 20 dias, foi realizada uma análise quantitativa da adesão de primeira e segunda passagem das células mesênquimais em garrafas de cultura. RESULTADOS: Foram extraídas 1,62 x106 cel/ mL células totais de gordura (CTG) with 98% de viabilidade. Essas células foram levadas para o cultivo e após 20 dias, foi realizada a primeira passagem (1pd) sendo quantificadas 2,88 x10(6) cel/mL células tronco mesênquimais (CTM). Na segunda passagem (2pd) foi obtido 4,28 x10(6) cel/mL CTM. CONCLUSÃO: A lipectomia do paniculo adiposo é um método muito satisfatório para extrair células tronco a partir de gordura, quantitativamente e qualitativamente.

PURPOSE: To present an experimental model of qualitative and quantitative analysis of mesenchymal stem cells from fat of rabbits obtained by lipectomy. The fat could be a great source for obtaining mesenchymal stem cells and to create conditions for repairing injured tissues by bioengineering. METHODS: New Zealand rabbits (n= 10) adipose panicle (2-3 cm) were removed by lipectomy, fragmented and washed with PBS and enzymatically dissociated with trypsin/EDTA. Lately, these cells were incubated in culture medium DMEM and after 20 days, was performed quantitative analysis of the accession of first and second mesenchymal cells in cell culture bottles. RESULTS: The fat total cells (CTF) were 1.62 x10(6) cells/mL and presented 98% of viability. These cells were taken for cultivation and after 20 days were counted 2.88 x10(6) cells/mL MSC. The same was done and after 20 days we quantified 4.28 x10(6) cells/mL MSC. CONCLUSION: The lipectomy of adipose panicule is a very satisfactory method to extract stem cells from fat, quantitatively and qualitatively.

OBJETIVO: Avaliar a técnica mais promissora para a coleta de células tronco adultas de medula óssea de coelhos para a utilização do mesmo como modelo experimental na medicina regenerativa. MÉTODOS: Foram utilizados 30 coelhos divididos em 2 grupos: GRUPO A, n=8, onde realizamos a coleta de sangue de medula óssea (MO) da crista ilíaca e grupo B, n=22, onde realizamos a coleta de sangue da medula óssea da epífise do fêmur. Após as coletas, realizamos a separação das células mononucleadas através do gradiente de densidade (Ficoll-Hystopaque). Através da câmara de Neubauer realizamos a contagem das células mononucleadas por ml. Testamos a viabilidade celular através do método Tripan Blue. RESULTADOS: Na coleta de sangue de MO na crista ilíaca obtivemos a média de 1 ml durante 1 hora de procedimento cirúrgico, obtendo a quantidade de 3,6 .10(6) células/ml, enquanto que a punção na epífise do fêmur obtivemos a média de 3 ml durante 30 minutos de procedimento cirúrgico obtendo a quantidade de 11,79.10(6) cél./ml diminuindo o óbito dos animais. CONCLUSÃO: A análise para a obtenção de maior número de células mononucleadas/ml de sangue de medula óssea de coelho foi mais satisfatória na região da epífise do fêmur em comparação com a crista ilíaca.

PURPOSE: To assess the technique for the collection of rabbit bone marrow stem cells from different regions to be used as an experimental model in regenerative medicine. METHODS: Thirty rabbits were allocated into 2 groups: GROUP A, n=8, animals that underwent bone marrow blood (BMB) harvesting from the iliac crest; and GROUP B: including 22 rabbits that underwent BMB harvesting from the femur epiphysis. After harvesting, mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation (Ficoll - Histopaque). The number of mononuclear cells per ml was counted in a Neubauer chamber and cell viability was checked through Tripan Blue method. RESULTS: Harvesting from the iliac crest yielded an average of 1 ml of BMB and 3,6.10(6) cells/ml over 1 hour of surgery, whereas an average of 3ml of BMB and 11,79.10(6) cells./ml were obtained in 30 min from the femur epiphysis with a reduced animal death rate. CONCLUSION: The analysis for the obtention of a larger number of mononuclear cells/ml from rabbit bone marrow blood was more satisfactory in the femur epiphysis than in the iliac crest.

OBJETIVOS: Avaliar a morfologia das organelas e do citoesqueleto em células pancreáticas humanas cultivadas e a mobilização de Ca2+ em resposta à glicose e ACh por medidas fluorimétricas. MATERIAL E MÉTODOS: As células foram semeadas em lamínulas, fixadas e marcadas com uma combinação de fluoróforos: o núcleo foi corado com DAPI e as mitocôndrias, com Mytotracker Red. Foram utilizados faloidina e anticorpos secundários conjugados com Alexa Fluor verde e vermelho fluorescentes (488 e 594) para identificar proteína actina F e receptor muscarínico tipo M3, respectivamente. Para estudar a mobilização de Ca2+, as células foram incubadas com fura-2/AM. RESULTADOS: As células pancreáticas humanas apresentaram morfologia preservada com grande quantidade de mitocôndrias. Na região de maior densidade celular, evidenciou-se as pseudo-ilhotas e os receptores muscarínicos M3. Por meio da elevação da [Ca2+]c, devido à ação da glicose e ACh, mostrou-se preservação da capacidade responsiva a esses estímulos e foi dependente de concentração desses agonistas. A glicose promoveu uma resposta sustentada e a ACh induziu uma resposta bifásica. CONCLUSÃO: As células pancreáticas humanas cultivadas conservaram sua morfologia. A mobilização de Ca2+ em resposta à glicose e a ACh confirma a sua funcionalidade. Os receptores muscarínicos M3 estão presentes nessas células.

AIMS: The proposal of this study was to analyze morphology of the organelles and cytoskeleton in human pancreatic cells cultured and the mobilization of the cytosolic calcium ([Ca2+]c) in response to glucose and ACh by fluorimetry method. MATERIAL AND METHODS: The cells were plated on glass coverslips, fixed and stained with a combination of fluorophores: the nuclei were stained with DAPI and mitochondria with Mytotracker Red. It was used phalloidin and the secondary antibodies Alexa Fluor conjugated green and red-fluorescent (488 and 594) to identify the protein cell actin F and type M3 muscarinic receptor respectively. The cells also were loaded with fura-2/AM to study Ca2+ mobilization. RESULTS: The human pancreatic cells show characteristics morphologically preserved with great amount of mitochondria. In region major cell density was evidenced pseudo-islets and type M3 muscarinic receptors. Through increase of [Ca2+]c due to action of glucose and ACh were shown that the cells’ capacity to respond to these stimuli were conserved. The elevation of the [Ca2+]c depended on concentration by glucose-induced promoting sustained phase and ACh-induced a biphasic response. CONCLUSION: The morphologic characteristics of human pancreatic cells cultured were preserved. The Ca2+ mobilization in response to glucose and ACh confirmed its functionality. The expression of the M3 muscarinic receptors in human pancreatic cell cultured was demonstrated.