RESUMO Este estudo avaliou o índice de patogenicidade, a produção de hemolisina e a determinação de sorogrupos de cepas deEscherichia coli isoladas de fígado de aves de postura comercial com um dia de idade. Para este estudo, foram analisados 32 lotes, dos quais 15 foram positivos para o isolamento de E. coli no fígado, totalizando vinte e quatro amostras. A patogenicidade dos isolados foi determinada por inoculação no saco aéreo de pintinhos e classificada como alta, intermediária, baixa ou não-patogênica. Os sorogrupos foram identificados utilizando um conjunto de antissoros anti-O (O1 a O180). A produção de hemolisina foi determinada por semeadura em ágar sangue de galinha (8%) e em placas de ágar sangue de carneiro (8%). Do total de amostras estudadas, 17 (70,83%) foram classificadas como não patogênica, 6 (25%) como de baixa patogenicidade e 1 (4,17%) de alta patogenicidade. Foram identificados 14 sorogrupos diferentes: O1, O2, O5, O8, O15, O18, O22, O36, O64, O70, O75, O115, O132, O141. Cinco cepas não tiveram o sorogrupo identificado. Com relação ao teste de produção de hemolisina, todas as cepas foram consideradas negativas, tanto para o teste realizado com ágar sangue de galinha quanto para o de carneiro. Os resultados obtidos neste estudo demonstram a importância de se identificar as cepas prevalentes deE. colinas diferentes regiões produtoras, podendo ser utilizados em estudos epidemiológicos.

ABSTRACT This work evaluated the index of pathogenicity, the production of hemolysin and determination of serogroups in Escherichia coli strains isolated from liver of commercial laying hens with one day of age. Thirtytwo lots were analyzed, of which 15 were positive for the isolation ofE. coli in the liver, for a total of 24 samples. The pathogenicity in one-day-old chicks was determined by inoculation in air sac and was classified as high, intermediate or low pathogenicity, or non-pathogenic. Serogroups were identified using a set of anti-O antisera (O1 to O180). The production of hemolysin was determined by plating on chicken blood agar (8%) and sheep blood agar (8%). Of the samples studied, 17 (70.83%) were classified as non-pathogenic, 6 (25%) as low pathogenicity and 1 (4.17%) as high pathogenicity. Fourteen different serogroups were identified: O1, O2, O5, O8, O15, O18, O22, O36, O64, O70, O75, O115, O132 and O141, while 5 samples were non-typable. Regarding the test for production of hemolysin, all strains were considered negative for both the test performed with chicken blood agar and that with sheep blood agar. The results of this study demonstrate the importance of identifying the prevalent strains of E. coli in different producing regions, as this information can be used in epidemiological studies.

Caracterizaram-se a linhagem e o grau de diferenciação das células neoplásicas no estudo histopatológico e ultraestrutural da leucose mielóide. Histologicamente as células neoplásicas apresentaram pleomorfismo, núcleos ovais, nucléolos proeminentes, cromatina distribuída de maneira irregular, figuras de mitose atípicas e moderada quantidade de citoplasma contendo granulações eosinofílicas esféricas. Essas características indicam a linhagem mielóide. Ultraestruturalmente evidenciaram-se células com núcleo oval, volumoso, eletrodenso, com predomínio de eucromatina e citoplasma com numerosos grânulos esféricos, eletrodensos e homogêneos, indicando mielócitos com diferenciação para eosinófilos. Constatou-se também a presença de partículas virais tipo-C no espaço intercelular dos túbulos renais, no interior de vesículas intracitoplasmáticas dos mielócitos imaturos presentes na medula óssea e ovário, e PCR positivo para ALV-J.

An ultrastructural and histological study was performed to determine the degree of differentiation of the neoplastic cells. The histological study revealed neoplastic cells with pleomorphism, oval nuclei, prominent nucleoli, irregularly distributed chromatin, atypical mitotic figures and moderate amount of cytoplasm containing spherical eosinophilic granulations, typical features of the myeloid lineage. Ultrastructurally, there were cells with an electron-dense, oval and voluminous nucleus, with predominant euchromatin and cytoplasm containing many spherical, electron-dense and homogeneous granules, indicative of myelocytes with differentiation to eosinophils. Type-C viral particles were also seen in the intercellular space of renal tubules and inside the intracytoplasmic vesicles of immature myelocytes in the bone marrow and ovary. PCR was positive to ALV-J.

Desenvolveu-se uma reação em cadeia de polimerase (PCR) para amplificação do altamente conservado gene VP3 e da região 5' do gene VP1, para o diagnóstico do vírus da anemia das galinhas (CAV), diretamente em amostras de campo de órgãos de frangos de corte com suspeita clínica da doença. A comparação entre o PCR VP3/VP1 com isolamento viral in vivo indicou 100% de concordância dos resultados, com 13 amostras positivas e três negativas em ambos os testes. Órgãos de outros 24 lotes de frangos com lesões e história clínica compatível com CAV foram testados com o PCR VP3/VP1 e com um PCR de referência com primers conhecidos para o gene VP1. Dezenove amostras resultaram positivas e uma negativa em ambos os PCR e quatro foram positivas apenas no PCR VP3/VP1. Estes resultados indicam que o PCR VP3/VP1 é um teste de diagnóstico sensível e específico, aplicável como alternativa ao método caro e demorado de isolamento viral in vivo e especialmente considerando-se amostras do CAV não adaptáveis a cultivos de células MSB-1.

A PCR assay was designed for amplification of the highly conserved VP3 gene and a 5' region of the VP1 gene, for the diagnosis of CAV in organ samples of broiler flocks suspected of chicken infectious anemia. A comparison of the VP3/VP1 PCR with in vivo virus isolation revealed 100% agreement of the results, with 13 positive and 3 negative samples in both assays, indicating that the VP3/VP1 PCR is a specific diagnostic method. Tissues from additional 24 broiler chicken flocks, with CAV-like lesions and clinical history were then tested only by the VP3/VP1 PCR and a reference PCR with published primers for the VP1 gene. Nineteen samples resulted positive and one negative in both PCR, while another 4 samples were positive only in the VP3/VP1 PCR. These results indicate that the VP3/VP1 PCR is a sensitive, specific diagnostic test, suitable as an alternative to the expensive and time consuming in vivo virus isolation method, specially considering the difficult diagnosis of CAV strains not readily adaptable to MSB-1 cell culture.

RESUMO Escherichia coli não é um componente da microbiota entérica de psitacídeos e a presença da bactéria nestas aves está associada à ocorrência de diarréias, doenças respiratórias e septicemias. Este trabalho avaliou a colonização intestinal por Escherichia coli em psitacídeos criados sob diferentes condições de biossegurança. Foram analisados 85 “swabs” de cloaca, através de exames bacteriológicos (cultura, isolamento e identificação bioquímica). Os resultados mostraram diferenças significativas na colonização intestinal por E. coli em psitacídeos, com 20% (10/50) de aves positivas no criatório conservacionista e 80% (28/35) no criatório recreacionista. Os dados evidenciam a importância da biossegurança, uma vez que o estado sanitário das aves alojadas em cativeiro pode ser influenciado pela finalidade do criatório.

ABSTRACT Escherichia coli is not considered a member of psittacine gut flora and the presence of the bacteria has been associated with enteric disorders, respiratory diseases and septicaemia. This survey determined the gut colonization by Escherichia coli on psittacine birds, raised under different biosecurity levels. The 85 cloacal swabs were examined by bacteriologic cultural methods. The results showed significant differences on E. coli gut colonization, with 20% (10/50) positive psittacine birds on conservationist farms and 80% (28/35) in a recreational zoo. This data suggests the importance of biosecurity level on the sanitary condition, sinced it can be influenced by aviary activity.

RESUMO O presente trabalho teve por objetivo verificar a patogenicidade de cultivos de amostras de Clostridium perfringens tipo A, portadoras do gene CPB-2 codificador da toxina beta-2. Utilizou-se o modelo de alças intestinais ligadas em coelhos, inoculadas com suspensão e filtrado de cultivos de amostras de C. perfringens tipo A, portadoras e não portadoras do gene CPB-2. Comparou-se os efeitos da inoculação das suspensões de culturas com os induzidos pelos filtrados destas suspensões. Obteve-se resultado estatisticamente significante quanto à distensão das alças, a qual foi observada em 19 das 24 alças testadas com inóculos procedentes de amostras CPB-2 positivas e, em apenas uma das 12 testadas com inóculos obtidos de amostra CPB-2 negativa. Não houve diferença estatisticamente significante entre a utilização das suspensões de culturas ou de seus filtrados, no que diz respeito à distensão das alças intestinais devido à exsudação de fluido. O exame histológico dos fragmentos de íleos inoculados com suspensão e filtrado de amostras CPB-2 positivas exibiram lesões acentuadas. Os segmentos inoculados com suspensão e filtrado de amostra CPB-2 negativa e caldo BHI estéril não exibiram alterações. As cepas de C. perfringens tipo A, portadoras do gene codificador da toxina beta-2, demonstraram sua virulência quando inoculadas em íleo de coelho. A CPB2 CPB 2 CPB- beta2. beta2 beta 2. beta-2 Utilizouse Utilizou se coelhos C CPB2. Comparouse Comparou Obtevese Obteve 1 fluido acentuadas alterações beta2, 2, coelho beta-

ABSTRACT The aim of this work was to verify the patogenicity of Clostridium perfringens type-A strains, carrying the CPB-2 gene, that codify the beta-2 toxin production. The rabbit ligated ileal loop model was used, inoculating culture suspensions of C. perfringens type-A CPB-2 carrier strains or its filtrates. The dilatation observed in 19 out of 24 loops receiving innocula from CPB-2 positive strains and in only one out of 12 loops treated with CPB-2 negative innocula constituted a significant statistical difference. There was no statistical difference in the dilatation of loops between using filtrates or bacterial suspensions. In the loops treated with suspensions of CPB-2 positive strains cultures, severe lesions were observed, and for those inoculated with filtrates of the same cultures less severe alterations were observed. In the loops inoculated with culture suspensions or filtrates from a CPB-2 negative strain and in those treated with sterile BHI broth, no histological changes were observed. The C. perfringens biotype-A strains carrying the CPB-2 gene, showed its virulence when inoculated into the rabbit ileum. typeA type A CPB2 CPB 2 CPB- gene beta2 beta beta- production used C 1 broth biotypeA biotype ileum

RESUMO Com base nas toxinas produzidas as amostras de Clostridium perfringens são classificadas em 5 biotipos. A enterite causada pelo C. perfringens tipo A em suínos tem sido descrita na Europa e nos Estados Unidos, porem não tem sido relatada no Brasil. Uma nova toxina denominada β2+ foi recentemente identificada e seu gene codificador caracterizado. Estudos preliminares indicam que amostras de C. perfringens produtoras desta toxina estão associadas à enterite necrótica em leitões e a enterocolite em equinos. Os achados clínicos e microbiológicos de quatro surtos de diarréia neonatal em leitões associados a presença de C. perfringens tipo A, β2+ são descritas neste artigo assim como a caracterização genotípica destes isolados. biotipos C Unidos Brasil β2 β caracterizado equinos isolados

ABSTRACT According to the major toxin types that they produce, Clostridium perfringens isolates are currently classified as one of five biotypes. Enteritis associated with C. perfringens type A in pigs has been described in Europe and United States, but has not been reported in Brazil. A novel toxin called β2+ has been recently identified and its encoding gene characterized. Preliminary studies suggested that strains producing β2-toxin are associated with necrotic enteritis in piglets, and with enterocolitis and typhlocolitis in horses. The clinical and microbiological features of four outbreaks of neonatal pig diarrhea in Brazil associated with C. perfringens type A, β2+ are described in this report, as well as the genotype characterization of the isolated strains. produce biotypes C States β2 β characterized β2toxin βtoxin piglets horses report

This report describes the production of cytotoxic necrotizing factor (CNF) by an Escherichia coli strain isolated from clinical bovine mastitis with clinical signs of toxemia The animal had hemorrhages and necrosis of the mammary glands, and died within 24 hours after the onset of clinical signs. In addition to CNF identification, alpha-haemolysin and siderophores production were also characterized in this strain. This report reinforce the association of CNF and alpha-haemolysin production in E. coli virulence associated with clinical cases of severe bovine mastitis.

RESUMO Escherichia coli é um importante agente causador de enterite em leitões, sendo a infecção de difícil controle devido a elevada capacidade deste agente em desenvolver e disseminar mecanismos de resistência aos antimicrobianos utilizados para o tratamento da doença. Estabeleceu-se o perfil de resistência de 600 amostras de E.coli isoladas de fezes de 100 leitões lactentes com diarréia e procedeu-se a determinação da concentração inibitória mínima para os seguintes antimicrobianos: ampicilina, ceftiofur, estreptomicina, kanamicina, oxitetraciclina, cloranfenicol, flumequina, penicilina, sulfadiazina-trimetoprima, gentamicina, neomicina, enrofloxacina, norfloxacina. Os resultados obtidos mostraram a ocorrência freqüente de resistência múltipla aos principais antimicrobianos utilizados na terapia da diarréia em leitões lactentes. doença Estabeleceuse Estabeleceu se 60 Ecoli E 10 procedeuse procedeu ampicilina ceftiofur estreptomicina kanamicina oxitetraciclina cloranfenicol flumequina penicilina sulfadiazinatrimetoprima, sulfadiazinatrimetoprima sulfadiazina trimetoprima, trimetoprima sulfadiazina-trimetoprima gentamicina neomicina enrofloxacina norfloxacina 6 1

ABSTRACT Escherichia coli is an important causative agent of piglets diarrhea, that control in pig production is complicated by high ability of this agent in develop and spread resistance mechanisms for commonly used antibiotics. This study has as goal determine the resistance pattern of 600 E. coli strains isolated from fecal samples of 100 piglets with diarrhea, against the antibiotics often used in swine production. The determination of minimal inhibitory concentration was done under international standards to the following antibiotics: ampicilin, ceftiofur, streptomicin, kanamicin, oxitetracicline, cloranfenicol, flumequin, penicilin, sulfadiazintrimetoprim, gentamicin, neomicin, enrofloxacin and norfloxacin. The results observed shown that multiple resistance is frequent against the antibiotics often used in piglets diarrhea therapy. 60 E 10 ampicilin ceftiofur streptomicin kanamicin oxitetracicline cloranfenicol flumequin penicilin sulfadiazintrimetoprim gentamicin neomicin norfloxacin therapy 6 1

RESUMO Considerando-se a importância econômica das enterites em leitões lactentes o presente estudo teve como objetivo verificar a freqüência de agentes etiológicos bacterianos, virais e parasitários em fezes de leitões com diarréia em sistemas de produção de suínos do Estado de São Paulo. Foram examinados 174 leitões com idade entre 1 a 38 dias provenientes de 21 sistemas de produção. Amostras de fezes foram submetidas ao exame bacteriológico, parasitológico e virológico. Dos 174 animais examinados, 117 foram positivos para um ou mais agentes pesquisados. Observou-se 70 (40,2%) animais positivos para presença de E. coli ETEC, 55 (31,6%) para Isospora suis, 19 (10,9%) para rotavírus, 2 (1,2%) para o Cryptosporidium parvum e 57 (32,8 %) dos animais amostrados revelaram-se negativos para qualquer agente estudado. A associação mais freqüente entre os agentes pesquisados foi I. suis e E. coli ETEC, presente em 19 animais (10,9%). A freqüência da I. suis foi significativamente maior em leitões com idade entre 8 e 14 dias. Em relação aos 70 leitões onde diagnosticou-se a presença de E. coli ETEC, 25,7% apresentaram genótipo Sta+, 21,5%-STb+, 7,1%-LT+, 4,3%-STa+STb+, 34,3%-STb+LT+ e 7,1%-Sta+STb+LT+. As informações obtidas neste estudo visam contribuir para o conhecimento dos principais microrganismos causadores de enterites em leitões em cidades do Estado de São Paulo, auxiliando os profissionais da área na adoção de medidas preventivas e de controle dos agentes. Considerandose Considerando se bacterianos Paulo 17 3 bacteriológico virológico 11 Observouse Observou 7 40,2% 402 40 (40,2% E ETEC 5 31,6% 316 31 6 (31,6% 10,9% 109 10 9 (10,9% rotavírus 1,2% 12 (1,2% 32,8 328 32 (32, % revelaramse revelaram estudado I 10,9%. . diagnosticouse diagnosticou 257 25 25,7 Sta Sta+ 21,5%STb+, 215STb STb 21,5% STb+, 21,5%-STb+ 7,1%LT+, 71LT LT 7,1% LT+, 7,1%-LT+ 4,3%STa+STb+, 43STaSTb STaSTb 4,3% STa+STb+, 4 STa 4,3%-STa+STb+ 34,3%STb+LT+ 343STbLT STbLT 34,3% STb+LT+ 34 34,3%-STb+LT 7,1%Sta+STb+LT+. 71StaSTbLT StaSTbLT Sta+STb+LT+. 7,1%-Sta+STb+LT+ 40,2 (40,2 31,6 (31,6 10,9 (10,9 1,2 (1,2 32, (32 25, 21,5%STb+ 215 21,5 STb+ 21,5%-STb 7,1%LT+ 71 7,1 LT+ 7,1%-LT 4,3%STa+STb+ 43 4,3 STa+STb+ 4,3%-STa+STb 34,3%STb+LT 343 34,3 STb+LT 7,1%Sta+STb+LT+ Sta+STb+LT+ 7,1%-Sta+STb+LT 40, (40, 31, (31, 10, (10, 1, (1, (3 21,5%STb 21, 7,1%LT 7, 4,3%STa+STb 4, STa+STb 34, 7,1%Sta+STb+LT Sta+STb+LT (40 (31 (10 (1 ( (4

ABSTRACT Considering the economic importance of enteritis in piglets the pourpose of this study was to verify the frequency of bacterial, viral or protozoan agents in the feces of piglets with diarrhea from swine herds of the State of São Paulo. A hundred and seventy-four piglets from 21 swine herds with ages between 1 and 38 days, were examined. Intestinal sections and fecal samples were submitted to bacteriological, parasitological and virological tests and 117 animals were positive. Escherichia coli ETEC was isolated from 70 (40,2%) samples, Isospora suis were found in 55 (36,1%) animals, rotavirus were detected in 19 (10,9%) piglets, 2 (1,2%) animals were positive for Cryptosporidium parvum and 57 (32,8 %) animals were negative for any of above the agents. The most frequent association of agents was I. suis and E. coli ETEC, being observed in 19 (10,9%) animals. The detection of I. suis was statistically associated to piglets with age between 8 and 14 days of age. About the 70 animals positive for E.coli ETEC, 25,7% presented the genotype Sta+, 21,5% the STb+, 7,1% the LT+, 4,3% the Sta+STb+, 34,3% the STb+LT+, and 7,1% the Sta+STb+LT+. This study contributed to the indentification of the most frequent causes of enteritis in piglets from the studied regions, supporting decisions of the swine practitioners for control and preventive measures. bacterial Paulo seventyfour seventy four 3 examined bacteriological 11 7 40,2% 402 40 (40,2% 5 36,1% 361 36 (36,1% 10,9% 109 10 9 (10,9% 1,2% 12 (1,2% 32,8 328 32 (32, % I E Ecoli 257 25 25,7 Sta Sta+ 215 21,5 STb STb+ 71 7,1 LT LT+ 43 4 4,3 StaSTb Sta+STb+ 343 34 34,3 STbLT STb+LT+ StaSTbLT Sta+STb+LT+ regions measures 40,2 (40,2 36,1 (36,1 10,9 (10,9 1,2 (1,2 32, (32 25, 21, 7, 4, Sta+STb 34, STb+LT Sta+STb+LT 40, (40, 36, (36, 10, (10, 1, (1, (3 (40 (36 (10 (1 ( (4