Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.

In the present study the polymerase chain reaction (PCR) was used for sexing ninety-two in vitro fertilized bovine embryos. The embryos were obtained after in vitro fertilization of oocytes from slaughterhouses. The oocytes were matured, fertilized, and cultured until the blastocyst stage. The embryos were washed in PBS solution, and transferred to polypropylene tubes with containing ultrapure water and immediately frozen at -196ºC. The embryos were thawed on ice and treated with proteinase K. For the PCR reaction, aliquots of 34 µl from each tube were mixed to the primers BC1.2 and microsatellite sequence 1715, dNTPs, MgCl2, 10X PCR buffer, Taq DNA polymerase and water in a final volume of 50 µl. The samples were amplified and the PCR products separated by electrophoresis in a 8% polyacrylamide gel. The gels were stained in ethidium bromide solution and vizualized under UV-light. The amplification rate was 93.47%, with 41 (47.67%) male embryos and 45 (52.32%) female embryos. The use of 8% polyacrylamide gel was efficient for separating DNA fragments of very similar size.

Foram utilizados dez animais doadores de sêmen em nível de Central de Inseminação Artificial, da raça Gir, divididos em dois grupos, de acordo com o grau de congelabilidade do sêmen de cada animal. Os animais com sêmen de alta congelabilidade foram aqueles cuja porcentagem de ejaculados viáveis pós-descongelação foi superior a 80%. O grupo de baixa congelabilidade tinha animais com porcentagem menor que 50% de ejaculados viáveis pós-descongelação. Os critérios de avaliação da viabilidade do sêmen e seleção dos animais foram definidos pelo controle de qualidade do Departamento de Produção da Central de Inseminação Artificial. Foram feitas quatro coletas semanais consecutivas, sendo que obtiveram-se as amostras de plasma seminal por centrifugação a 1.500 g por 15 a 20 minutos a 4°C, momentos após a coleta do sêmen em vagina artificial. O plasma seminal foi dialisado em membrana de celulose, em tampão Tris-Glicina pH-7,4 por 24 horas a 4°C, em agitação lenta e constante. As amostras foram padronizadas em 1,0 mg/ml de proteína total, por diluição em tampão Tris-HCl 62mM pH-6,2 mais 20% de glicerol e 4% de SDS. Através de eletroforese do tipo SDS-PAGE, foram feitas as corridas em gel a 13%. A corrida foi feita com a constante de 25 mA, por um período de 5 horas. A coloração do gel foi feita por Coomassie Brilliant Blue. Pelos resultados obtidos, verificou-se que existe uma banda no grupo de alta congelabilidade, cujo fragmento polipeptídico desta proteína tem Mr (mobilidade relativa) 20,3 e PM (peso molecular) aproximado de 61.800 Da. Esta banda não foi detectada nas amostras do grupo de baixa congelabilidade, o que sugere ser um possível marcador bioquímico quanto ao potencial de criopreservação do sêmen de bovinos.

This study was undertaken to determine whether bovine seminal plasma contained protein markers associated with semen freezability. Seminal plasma was obtained from ten Gir bulls of known fertility and freezability, set into two groups of High (up to 80% of viable sperm after thawing) and Low freezability (less than 50%). SDS-PAGE of seminal plasma samples indicated that one protein (Mr =-20.3;-MW-=-61,800Da) predominated in high-freezability semen. These findings indicate that bull seminal plasma contains freezability-associated proteins which can be used as markers for predicting semen freezability.

As neoplasias mamárias em cadelas representam importante parcela das neoplasias em cães, merecendo atenção dos pesquisadores quanto ao diagnóstico, tratamento e prognóstico. No presente trabalho, 23 cadelas de várias raças ou cruzamentos, com idades entre 8 e 11 anos portadoras de neoplasia mamária foram estudadas. Doze eram multíparas, 6 primíparas e 5 nulíparas. Todas eram da região de Jaboticabal, SP, atendidas no Hospital Veterinário da FCAVJ-UNESP. Os animais foram avaliados clínica e radiolagicamente e submetidos à punção aspirativa da massa anormal de tecido, com agulha fina. Dessa mesma massa foi também retirado, cirurgicamente, um fragmento para exame histopatológico. A maior incidência foi de carcinoma (52,17%), seguidos por tumores mistos (17,39%). Os tratamentos cirúrgicos empregados nos 23 animais foram: mastectomia regional ou mastectomia em bloco, com remoção de linfonodos. Quinze cadelas foram tratadas com doxorubicina, na dose de 20mg/m² e ciclofosfamida, na dose de 100mg/m², aos 7, 9 e 11 dias após o ato cirúrgico. Todos os animais tiveram evolução favorável e, 12 meses após a cirurgia, 18 deles foram reavaliados, não constatando nenhuma recidiva ou surgimento de metástase.

Mammary gland tumors in female dogs are among the most important neoplasia in dogs, deserving special attention regarding its diagnosis, treatment and prognosis. In this study, 23 biches of different breeds, from 8 to 11 years of age, with mammary tumors were evaluated. Of the se, 12 were multiparous, 6 primiparous and 5 were nuliparous. All dogs came from the region of Jaboticabal, SP and were referred to the Veterinary Teaching Hospital of the FCAVJ-UNESP. The animals were evaluated clinically and radiographically and the mammary mass submitted to an aspirative needle. A fragment of the tumor was also removed surgically for histopathological examination. Most tumors were classified as carcinomas (52.17°/o), followed in number by mixed tumors (17.39%). Treatment included mamectomy, partial mastectomy or "en bloc" mastectomy with removal of the lymphnodes. Most dogs also received Doxorubicin (20mg/m²) and Cyclokphosphamide (100mg/m²) at, 7, 9 and 11 days post-operative. All dogs recovered uneventfully and at one year post-operative. Twelve dogs were reevaluated an considered to be free of recurrence of metastasis.

O objetivo deste estudo foi identificar um marcador bioquímico de folículos bovinos com diâmetro maior do que 10 mm, o qual poderia ser utilizado para identificar folículos dominantes nesta espécie. Líquido folicular era aspirado de folículos com diâmetros menores do que 5 mm, entre 5 e 10 mm e maiores do que 10 mm, provenientes de ovários de 37 fêmeas bovinas abatidas. Após aspiração, o líquido folicular (LF) era acondicionado em ependorfs etiquetados e congelados. Os padrões eletroforéticos em SDS-PAGE das proteínas do LF foram determinados e verificou-se que os folículos com diâmetro maior do que 10 mm apresentaram um polipeptídeo com PM entre 39 e 43 KDa identificado como a proteína ligante de IGF-3 (IGFBP-3), o qual não foi observado em folículos com diâmetro menor do que 5 mm e entre 5 e 10 mm. Este estudo sugere que este polipeptídeo possa ser utilizado como marcador bioquímico de folículos maiores do que 10 mm.

The objective of this study was to identify a possible biochemical marker from bovine follicles with a diameter of more than 10 mm, which could be useful to identify dominant follicles in this species. Follicular liquid (FL) was aspirated from follicles with diameters less than 5 mm, between 5 and 10 mm and more than 10 mm, from both ovaries of 37 slaughtered bovine females. After aspiration, FL was conditioned in identified eppendorfs and frozen. The eletrophoretic patterns in SDS PAGE from FL proteins were determined and it was verified that, the follicles with more than 10 mm presented a polipeptide with a molecular weight between 39 and 43 KDa identified like the IGF-binding protein-3 (IGFBP-3), which wasn't observed in follicles less than 5 mm and between 5 and 10 mm. This study suggests that this polipeptide may be utilized like a biochemical marker from follicles of more than 10 mm.