O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da utilização de diferentes fontes de gonadotrofinas para maturação in vitro dos oócitos bovinos fecundados e desenvolvidos in vitro sobre as taxas de clivagem (TC) e de blastocistos (TBL). Oócitos imaturos provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram submetidos a maturação in vitro sob diferentes condições: meio TCM 199, acrescido de 10% de soro de vaca em estro (SVE), aditivos, hepes, NaHCO3, piruvato de sódio, antibióticos (meio B-199), 20 UI/mL de PMSG e 10 UI/mL de hCG (PMSG/hCG) ou meio B-199, acrescido de 5 mg/mL de FSH e 5 mg/mL de LH (FSH/LH). Seguidos 24 h de cultura a 38,5ºC em atmosfera com 5% de CO2, os oócitos maturos foram incubados com sêmen descongelado durante 18 a 21 horas. Após esse período, os oócitos foram transferidos para placas contendo microgotas de meio Ménezo suplementado com 10% de SVE e células epiteliais do oviduto bovino em suspensão, cobertas com óleo de silicone, os quais permaneceram em cultura por mais 9 dias. Os dados foram analisados pelo teste do Qui-quadrado. A TC e a TBL, para PMSG/hCG e FSH/LH, foram 60 e 13,9% e 61,2 e 10,6%, respectivamente. Não houve diferença entre os tratamentos com relação a TC ou a TBL. Esses resultados sugerem que ambas as fontes de gonadotrofinas podem ser utilizadas para maturação in vitro dos oócitos fecundados e desenvolvidos in vitro.

This study aimed to evaluate the effect of different gonadotropin sources for in vitro maturation of bovine oocytes fertilized and developed in vitro on cleavage (CR) and blastocysts rates (BLR). The immature oocytes from slaughterhouse cows ovaries were matured in vitro under different conditions: TCM 199 medium with 10% eostrous cow serum (ECS), aditives, hepes, NaHCO3, sodium pyruvate, antibiotics (B-199 medium), 20 UI/mL PMSG and 10 UI/ml hCG (PMSG/hCG) or B-199 medium with 5 mg/mL FSH and 5 mg/mL LH (FSH/LH). After 24 hours of culture at 38.5°C with 5% CO2 in air the mature oocytes were incubated with frozen-thawed semen for 18-21 hours. After this, the oocytes were transferred into microdroplets of Ménezo medium with 10% ECS and bovine oviduct ephitelial cells (BOEC) in suspension and were further cultured for 9 days. The data were analyzed by chi-square test. The CR and BLR for PMSG/hCG and FSH/LH were 60 and 13.9% and 61.2 and 10.6%, respectively. There was no difference between treatments regarding to CR and BLR. The results indicate that both gonadotropin sources can be used for in maturation medium of oocyte fertilized and developed in vitro.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do diluidor do sêmen no desenvolvimento in vitro de ovócitos bovinos após a maturação e fecundação in vitro. Ejaculado de um reprodutor foi fracionado e submetido a três diluidores: Lactose/gema de ovo (LG), Citrato/gema de ovo (CG) e Tris/gema de ovo (TG). Amostras deste material foram envasadas, congeladas e estocadas em N² e, posteriormente, descongeladas; a fração móvel foi separada por gradiente descontínuo de Percoll. A concentração espermática foi ajustada para 10 x 10(6)/mL e a capacitação espermática, induzida com 10 µg/mL de heparina. Após 24 horas de cultura para maturação in vitro, os ovócitos, aspirados de folículos ovarianos, foram inseminados com sêmen diluído em meio TALP e, após 48 horas de cultura, os zigotos foram transferidos para gotas de meio TCM 199, com 5% de soro fetal bovino, 5% de soro de vaca em estro e suspensão de células epiteliais do oviduto bovino, cobertas com óleo de silicone, e mantidos em cultura por nove dias. Todas as culturas foram realizadas a 38,5ºC em atmosfera com 5% de CO2. Os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado e houve diferença com relação à taxa de clivagem (TC), sendo as médias de 66,0; 69,3; e 54,4% para LG, CG e TG, respectivamente. Não houve diferença entre tratamentos com relação às taxas de mórulas/blastocistos ou de eclosão. O diluidor do sêmen não teve efeito sobre o desenvolvimento in vitro de embriões bovinos, embora a TC tenha sido afetada.

This study investigated the effect of semen extender on in vitro development of bovine oocytes after in vitro maturation and fertilization. The ejaculate from one bull was divided in three parts which were diluted with three different extenders: Egg yolk/Lactose (EYL), Egg yolk/Citrate (EYC) and Egg yolk/Tris (EYT). Samples of semen diluted with these extenders were frozen in liquid nitrogen and, after thawing, were filtered by discontinuous Percoll gradient. The sperm concentration was adjusted to 10 x 106 cells/mL and the sperm capacitation was induced with 10 µg/mL of heparin. After 24 hours of culture for in vitro maturation, the oocytes, aspirated from ovarian follicles, were inseminated with semen diluted in TALP medium and 48 h after the zigotes were transferred into droplets prepared with TCM-199 medium containing 5% of bovine fetal serum, 5% of estrous cow serum and bovine oviduct epithelial cells in suspension under silicon oil and were further cultured of 9 days. All the cultures were performed at 38.5ºC in 5% CO2 in air. Data were analyzed by chi-square analysis. There was a significant difference in terms of cleavage rate (CR) with means of 66.0, 69.3 and 54.4% for EYL, EYC and EYT, respectively. There were no differences in terms of the morulae/blastocysts and hatching rates. These results suggest that the semen extender had no effect on in vitro development of bovine, even the CR have been affected.

Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar o diâmetro máximo e a taxa de crescimento do folículo dominante (FD) em vacas Nelore; 2) determinar o intervalo entre a administração de PGF2<FONT FACE="Symbol">µ</FONT> e as manifestações de estro; 3) investigar a influência da remoção do FD sobre o número de corpos lúteos (CL) e folículos não ovulados (FNO) determinados por ultra-sonografia (CLus e FNOus); e 4) determinar as concentrações de progesterona (P4, ng/ml) e estradiol-17beta (E2, pg/ml) em vacas Nelore submetidas a superovulação com FSH. Após os exames ultra-sonográficos no D0 (48 horas antes do início da superovulação), 42 vacas Nelore foram divididas em 3 grupos experimentais: GI (sem FD, n = 15), GII (com FD, n = 15), e GIII (com FD aspirado, n = 12). Sete dias após a primeira inseminação artificial (D6), foi determinado o número de CL e FNO e colhidos os embriões (D13). Amostras de sangue foram colhidas em D0, D2, D4 (injeção de PGF2<FONT FACE="Symbol">µ</FONT> ), D6 e D13. Os resultados permitem concluir que, embora o diâmetro máximo e a taxa de crescimento apresentados pelos FD tenham sido semelhantes aos descritos previamente em doadoras européias, na raça Nelore a ação do FD sobre a dinâmica folicular ovariana ocorre de maneira diferente.

The objectives of this study were: (1) to determine the maximum diameter and the growth rate of the dominant follicle (DF) in Nelore cows; (2) to determine the interval between PGF2<FONT FACE="Symbol">µ</FONT> administration and the manifestation of estrus; (3) to investigate the influence of the DF removal on the number of corpora lutea (CL) and non-ovulated follicles (NOF) determined by ultrasonography (CLus and NOFus); and (4) to determine the progesterone (P4; ng/ml) and estradiol-17beta (E2; pg/ml) concentrations in Nelore cows submitted to superovulation with FSH. After ultrasonographic examinations on D0 (48 hours before the beginning of the superovulatory treatment), 42 Nelore donors were divided into three experimental groups: GI (without a DF, n = 15), GII (with a DF, n = 15), and GIII (with an aspirated DF, n = 12). Seven days after the first artificial insemination (D6) the number of CL and NOF was determined and the embryos collected (D13). Blood samples were collected on D0; D2; D4 (PGF2<FONT FACE="Symbol">µ</FONT> injection), D6 and D13. The results permit to conclude that although the maximum diameter and the growth rate of the DF were similar to those previously observed in European donors, in the Nelore breed it acts in a different manner on the ovarian follicular dynamic.

O objetivo deste estudo foi identificar um marcador bioquímico de folículos bovinos com diâmetro maior do que 10 mm, o qual poderia ser utilizado para identificar folículos dominantes nesta espécie. Líquido folicular era aspirado de folículos com diâmetros menores do que 5 mm, entre 5 e 10 mm e maiores do que 10 mm, provenientes de ovários de 37 fêmeas bovinas abatidas. Após aspiração, o líquido folicular (LF) era acondicionado em ependorfs etiquetados e congelados. Os padrões eletroforéticos em SDS-PAGE das proteínas do LF foram determinados e verificou-se que os folículos com diâmetro maior do que 10 mm apresentaram um polipeptídeo com PM entre 39 e 43 KDa identificado como a proteína ligante de IGF-3 (IGFBP-3), o qual não foi observado em folículos com diâmetro menor do que 5 mm e entre 5 e 10 mm. Este estudo sugere que este polipeptídeo possa ser utilizado como marcador bioquímico de folículos maiores do que 10 mm.

The objective of this study was to identify a possible biochemical marker from bovine follicles with a diameter of more than 10 mm, which could be useful to identify dominant follicles in this species. Follicular liquid (FL) was aspirated from follicles with diameters less than 5 mm, between 5 and 10 mm and more than 10 mm, from both ovaries of 37 slaughtered bovine females. After aspiration, FL was conditioned in identified eppendorfs and frozen. The eletrophoretic patterns in SDS PAGE from FL proteins were determined and it was verified that, the follicles with more than 10 mm presented a polipeptide with a molecular weight between 39 and 43 KDa identified like the IGF-binding protein-3 (IGFBP-3), which wasn't observed in follicles less than 5 mm and between 5 and 10 mm. This study suggests that this polipeptide may be utilized like a biochemical marker from follicles of more than 10 mm.