RESUMO Doenças causadas por fungos associadas a condições climáticas adversas são uma das principais causas da queda na produção de cana-de-açúcar. Objetivou-se desenvolver um protocolo para identificação rápida de Phaeocytostroma sacchari, agente causal da podridão da casca de cana-de-açúcar. Sequências de referência de três regiões de DNA de P. sacchari, sendo região espaçadora transcrita interna, grande subunidade ribossômica e fator de elongação da tradução 1-alfa (TEFl-α), foram analisadas por meio de desenhos de primers específicos. Os primers gerados que se alinharam em sua totalidade com P. sacchari foram selecionados e sintetizados. Ensaios baseados na reação em cadeia de polimerase (PCR) foram realizados para verificar a especificidade do primer, utilizando-se isolados de P. sacchari e 10 espécies de outros gêneros. Dois conjuntos de primers que amplificam a região TEF-la (PsFl/Psfl e PsF2/PsR2) demonstraram alta especificidade e sensibilidade na detecção de P. sacchari com PCR convencional, o que permitirá o levantamento em larga escala do patógeno na cultura de cana-de-açúcar. canadeaçúcar. canadeaçúcar cana açúcar. açúcar cana-de-açúcar Objetivouse Objetivou P interna 1alfa alfa 1 TEFlα, TEFlα TEFl α , (TEFl-α) específicos sintetizados (PCR primer utilizandose utilizando gêneros TEFla TEF la PsFl/Psfl PsFlPsfl PsFl Psfl PsF2/PsR2 PsF2PsR2 PsFPsR PsF2 PsR2 PsF PsR convencional (TEFl-α PsF2/PsR PsF2PsR

ABSTRACT Diseases caused by fungi associated with adverse weather conditions are one of the main causes of decreases in sugarcane production. This study aimed to develop a protocol for a fast identification of Phaeocytostroma sacchari, which is the causal agent of bark rot in sugarcane. The reference sequences of three DNA regions of P. sacchari, namely internal transcribed spacer, ribosomal large subunit and translation elongation factor 1-alpha (TEFl-α), were analyzed with specific primers design. The specific primers generated that aligned in their entirety with P. sacchari were selected and synthesized. Polymerase chain reaction (PCR) assays were performed to confirm the primer specificity, using P. sacchari isolates and 10 species of other genera. Two sets of primers that amplify the TEF-1α region (PsFl/Psfl and PsF2/PsR2) showed a high specificity and sensitivity in detecting P. sacchari using conventional PCR, what will allow large-scale surveys of this pathogen in sugarcane crops. production P spacer 1alpha alpha 1 TEFlα, TEFlα TEFl α , (TEFl-α) design synthesized PCR (PCR genera TEF1α TEFα TEF 1α PsFl/Psfl PsFlPsfl PsFl Psfl PsF2/PsR2 PsF2PsR2 PsFPsR PsF2 PsR2 PsF PsR largescale scale crops (TEFl-α PsF2/PsR PsF2PsR

RESUMO O milho doce está sujeito ao ataque de vários patógenos que afetam o seu metabolismo e comprometem a sua qualidade e produção. Objetivou-se identificar o agente causal da podridão do colmo em plantas de milho doce, em casa-de-vegetação. A identidade do isolado patogênico foi confirmada pelo sequenciamento do espaço interno transcrito (ITS1/ITS4), beta-tubulina (BT2A/BT2B), calmodulina (CL1/CL2) e fator de elongação da tradução 1α (TEF1). As características morfológicas e de sequenciamento revelaram que Fusarium sacchari, pertencente ao complexo Fusarium fujikuroi, está diretamente associado aos sintomas observados em campo. Esse isolado fúngico nunca foi associado a doenças em Zea mays (grupo saccharata) no Brasil; portanto, este é o primeiro relato do fungo infectando milho doce em área de cultivo. produção Objetivouse Objetivou se casadevegetação. casadevegetação casa vegetação. vegetação casa-de-vegetação ITS1/ITS4, ITS1ITS4 ITSITS ITS1/ITS4 , ITS1 ITS4 ITS (ITS1/ITS4) betatubulina beta tubulina BT2A/BT2B, BT2ABT2B BTABTB BT2A/BT2B BT2A BT2B BT B (BT2A/BT2B) CL1/CL2 CL1CL2 CLCL CL1 CL2 CL (CL1/CL2 α TEF1. TEF1 TEF . (TEF1) sacchari fujikuroi campo grupo saccharata Brasil portanto cultivo ITS1ITS ITS1/ITS (ITS1/ITS4 ABT BTA BTB (BT2A/BT2B CL1/CL CL1CL (CL1/CL (TEF1 (ITS1/ITS (TEF

ABSTRACT Sweet corn is susceptible to the attack of various pathogens that affect its metabolism and compromise its quality and production. This study aimed to identify the causal agent of stem rot in sweet corn plants under greenhouse conditions. The identity of the pathogenic isolate was confirmed by sequencing of internal transcribed spacer (ITS1/ITS4), beta-tubulin (BT2A/BT2B), calmodulin (CL1/CL2) and translation elongation factor 1α (TEF1). The morphological and sequencing characteristics showed that Fusarium sacchari, which belongs to the Fusarium fujikuroi complex, is directly associated with the symptoms observed in the field. This fungal isolate has never been associated with diseases in Zea mays (saccharata group) in Brazil; therefore, this is the first report of the fungus infecting sweet corn in a cultivated area. production conditions ITS1/ITS4, ITS1ITS4 ITSITS ITS1/ITS4 , ITS1 ITS4 ITS (ITS1/ITS4) betatubulin beta tubulin BT2A/BT2B, BT2ABT2B BTABTB BT2A/BT2B BT2A BT2B BT A B (BT2A/BT2B) CL1/CL2 CL1CL2 CLCL CL1 CL2 CL (CL1/CL2 α TEF1. TEF1 TEF . (TEF1) sacchari complex field saccharata group Brazil therefore area ITS1ITS ITS1/ITS (ITS1/ITS4 ABT BTA BTB (BT2A/BT2B CL1/CL CL1CL (CL1/CL (TEF1 (ITS1/ITS (TEF

Resumo Considerando a falta de informação para extração de RNA de plantas arbóreas, especialmente as do Cerrado brasileiro, o objetivo do estudo foi testar métodos de extração de RNA para uma ampla variedade de espécies de plantas nativas deste bioma. Os métodos testados foram: (i) reagente TRIzol®, (ii) reagente TRIzol® com modificações, (iii) tampão CTAB e (iv) tampão CTAB modificado, inicialmente para amostras foliares de Xylopia aromatica e Piper arboreum. O procedimento com melhores resultados foi utilizado posteriormente para obtenção de RNA de 17 outras espécies nativas. Baseado na razão de absorbância A260/A280 o método com CTAB modificado mostrou-se melhor para extração de RNA destas espécies arbóreas. Dez das onze espécies testadas por meio de RT-PCR geraram fragmentos de tamanho esperado a partir do RNA total extraído utilizando o método selecionado, confirmando-o como melhor opção para obtenção de RNA de alta qualidade para análises moleculares e para uso na detecção de vírus infectando essas espécies arbóreas.

Abstract Considering the lack of information on RNA extraction from arboreal species, specially from the Brazilian Cerrado, the aim of this study was to test RNA extraction methods for a wide variety of native plant species from this biome. The methods tested consisted of: (i) TRIzol® reagent, (ii) TRIzol® reagent with modifications, (iii) CTAB buffer, and (iv) Modified CTAB buffer, initially for leaf samples of Xylopia aromatica and Piper arboreum. Later the procedure with the best results was used to obtain purified RNA from 17 other native species. Based on A260/A280 absorbance ratio the Modified CTAB method was the best for total RNA extraction for those woody species. Ten out of eleven species tested through RT-PCR generated fragments of the expected size from the total RNA extracted by the selected method, confirming it as the best option to obtain high-quality RNA for molecular analyses and for use in the detection of viruses infecting these tree species.

Resumo A espécie Zamioculcas zamiifolia (Araceae) está entre as espécies exóticas mais utilizadas e cultivadas no Brasil como plantas ornamentais e requisitada em projetos de paisagismo. Apesar de apresentar durabilidade no transporte e adaptação em ambientes com pouca luz, esta ornamental é acometida por diferentes patógenos. Assim o objetivo foi detectar e identificar o patógeno causador de podridão na haste de Z. zamiifolia em cultivos comerciais. Plantas de Z. zamiifolia apresentando sintomas de podridão nas hastes foram encaminhadas para diagnose fitossanitária. O isolado fúngico obtido, SR-001, apresentou, em meio de cultura, características morfológicas de micélio aéreo de aspecto cotonoso, hifas hialinas septadas, sem produção de esporos, e com formação de pequenos escleródios esféricos de coloração marrom. Para comprovar a patogenicidade, plantas de Z. zamiifolia foram inoculadas com o isolado SR-001 e, após quinze dias, procedeu-se o reisolamento do fungo quando do aparecimento dos mesmos sintomas de podridão. O isolado SR-001 foi identificado como Sclerotium rolfsii e a sequência representativa de S. rolfsii foi depositada no GenBank (Acesso MG694322). Este isolado fúngico não tem sido associado com doenças em Z. zamiifolia no Brasil, sendo assim este o primeiro relato do fungo infectando essa espécie de planta ornamental em área de cultivo.

Abstract Zamioculcas zamiifolia (Araceae) is one of the most widely grown exotic species in Brazil as ornamental plants and in landscape design. Despite tolerating transport and being well adapted to low-light environments, this ornamental is attacked by different pathogens. Thus, the aim was to detect and identify the pathogen that causes stem rot in commercial Z. zamiifolia crops. Z. zamiifolia plants exhibiting stem rot symptoms were sent for phytosanitary diagnosis. In a culture medium, the fungal isolate obtained (SR-001) displayed the following morphological characteristics: cotton-like aerial mycelium, septate hyaline hyphae with no spore production, and the formation of small brown spherical sclerotia. To confirm pathogenicity, Z. zamiifolia plants were inoculated with the SR-001 isolate and, after fifteen days, the fungus was re-isolated when the same rot symptoms emerged. The SR-001 isolate was identified as Sclerotium rolfsii and its representative sequence was deposited in GenBank (Access MG694322). This fungal isolate has not been associated with diseases in Z. zamiifolia in Brazil, and this is the first report of the fungus infecting this ornamental plant species in a cultivated area.

RESUMO O tratamento térmico de toletes para a formação de mudas de cana-de-açúcar é a principal forma de manejo de Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), atualmente, no Brasil. Quando imersos, as enzimas e proteínas da célula bacteriana são desnaturadas, sem causar prejuízos às gemas dos toletes. Devido a possíveis escapes à detecção e consequente sobrevivência da bactéria à termoterapia, o que pode dar origem a mudas assintomáticas, objetivou-se realizar a detecção da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli em toletes de cana-de-açúcar, utilizando-se técnicas moleculares e combinações de tempo e temperatura, com ou sem a adição de antibióticos. A técnica PCR convencional detectou o DNA bacteriano de Lxx somente no controle positivo, constituído de planta altamente suscetível, com alta concentração bacteriana. Já pela nested-PCR, o DNA de Lxx foi detectado em todos os tratamentos utilizados. Assim, nenhum dos tratamentos adotados na termoterapia foi capaz de eliminar a Lxx dos toletes, bem como o uso de kasugamicina também não propiciou a eliminação da bactéria, mas reduziu sua população nos tratamentos testados. Estes resultados atestam a nested-PCR como ferramenta útil para a comprovação da presença da fitobactéria em toletes que serão utilizados como mudas.

ABSTRACT The thermotherapy of sugarcane setts is currently the primary management method for Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), in Brazil. When they are immersed, the enzymes and proteins of the bacterial cell are denatured without harming the setts buds. Due to possible escapes from detection and consequent bacterium survival to thermotherapy, what may result in asymptomatic seedlings, this study aimed to detect the Leifsonia xyli subsp. xyli bacterium in sugarcane setts using molecular techniques and different time and temperature combinations, with or without the addition of antibiotics. The conventional PCR method detected the Lxx bacterial DNA only in the positive control, consisting of a highly susceptible plant with a high bacterial concentration. Using the nested-PCR, the Lxx DNA was detected in all the treatments used. Thus, none of the treatments adopted in the thermotherapy was able to eliminate the Lxx from the setts, and the use of kasugamicin also did not eliminate the bacterium, but reduced the bacterial population in the tested treatments. These results confirm that the nested-PCR is a useful tool to detect the presence of this phytobacterium in setts that will be used as seedlings.

RESUMO A mancha-alvo da soja (Corynespora cassiicola) tornou-se uma importante doença na maioria das regiões produtoras de soja no Brasil. A sensibilidade de 34 isolados de Corynespora cassiicola a 11 fungicidas foi avaliada pela inibição do crescimento micelial (boscalida, carbendazim, ciproconazol, fluopiram, fluxapiroxada, protioconazol e tiofanato-metílico) ou inibição da germinação de esporos (azoxistrobina, picoxistrobina, piraclostrobina e trifloxistrobina). Além disso, a eficácia de cinco fungicidas para controlar mancha-alvo foi testada em quatro ensaios no campo, conduzidos durante três safras: 2011/2012, 2012/2013 e 2013/2014. Os isolados do fungo foram coletados de plantas de soja em diversas regiões produtoras de soja do Brasil. A concentração efetiva para inibir o crescimento micelial ou a germinação dos esporos em 50% (EC50), para cada fungicida, foi calculada para todos os isolados. Fluxapiroxada e protioconazol proporcionaram as maiores inibições de crescimento micelial do patógeno e piraclostrobina a menor porcentagem de germinação de esporos, com os menores valores de EC50. Nos ensaios de campo, ciproconazol e carbendazim apresentaram percentuais de controle de mancha-alvo variando de 26% a 29%. Por outro lado, fluxapiroxada e protioconazol preveniram a epidemia da doença na ordem de 45% e 55%, respectivamente. No geral, a eficácia dos fungicidas no campo refletiu as médias de sensibilidade in vitro. Foi detectada ampla redução da sensibilidade aos benzimidazóis (MBC) indicando que esse grupo de fungicidas não deve ser mais usado no controle de mancha-alvo. Houve uma correlação negativa e significativa (-0,265) entre severidade da doença e produção da soja. O patógeno mostrou variabilidade na sensibilidade aos grupos fungicidas carboxamidas (SDHI), triazóis (DMI) e estrobilurinas (QoI), o que demonstra alto risco de seleção para resistência.

ABSTRACT Soybean target spot (Corynespora cassiicola) has become an important disease in most soybean growing regions in Brazil. The sensitivity of 34 isolates of C. cassiicola to 11 fungicides was evaluated based on mycelial growth inhibition (boscalid, carbendazim, cyproconazole, fluopyram, fluxapyroxad, prothioconazole and thiophanate-methyl) or spore germination inhibition (azoxystrobin, picoxystrobin, pyraclostrobin and trifloxystrobin). In addition, the efficacy of five fungicides to control target spot was tested in four field trials carried out during three crop seasons: 2011/2012, 2012/2013 and 2013/2014. Fungal isolates were collected from soybean plants in several soybean growing areas in Brazil. The effective concentration of each fungicide to inhibit fungal growth or spore germination by 50% (EC50) was calculated for all isolates. Fluxapyroxad and prothioconazole provided the greatest mycelial growth inhibition and pyraclostrobin led to the lowest spore germination percentage, with the lowest EC50 values. At field experiments, cyproconazole and carbendazim showed target spot control ranging from 26% to 29%. On the other hand, fluxapyroxad and prothioconazole prevented an epidemic of the disease by 45% to 55%, respectively. In general, the efficacy of fungicides in the field reflected the in vitro sensitivity averages. Large sensitivity reduction was detected to benzimidazoles (MBC), indicating that this group of fungicides should no longer be used for target spot control. There was a negative and significant correlation (-0.265) between target spot severity and soybean yield. The pathogen showed variability in sensitivity to the fungicide groups carboxamides (SDHI), triazoles (DMI) and strobilurins (QoI), which denotes a high risk of selection for resistance.

RESUMO A pinta preta ou mancha preta dos citros, causada pelo fungo Guignardia citricarpa, é considerada uma doença quarentenária, que impõe restrições ao transporte de frutas frescas para países da União Europeia. A ocorrência de infecções latentes e o tempo para o diagnóstico por métodos convencionais levam à necessidade de validar protocolos moleculares rápidos, eficientes e reprodutíveis para detecção do patógeno em tecidos assintomáticos. Assim, este trabalho visou detectar G. citricarpa em tecidos de frutos sintomáticos e em folhas assintomáticas de laranja Pêra por PCR convencional e por PCR em tempo real. A especificidade e o limite de detecção foram avaliados em amostras de tecidos de lesões em frutos e em folhas assintomáticas. Em folhas assintomáticas a presença do fungo foi detectada em baixas concentrações, nessas condições, a PCR em tempo real demonstrou ser viável, reprodutível e altamente sensível para a detecção do patógeno.

ABSTRACT Citrus black spot, a fungal disease caused by the quarantine fungus Guignardia citricarpa, restricts the exportation of fresh fruit to countries in the European Union. The occurrence of latent infections and the time required for diagnosis using conventional methods have brought about the need to validate fast, efficient and reproducible molecular techniques to detect the pathogen in asymptomatic tissue. As such, this study aims to detect G. citricarpa in the symptomatic fruit and asymptomatic leaf tissue of sweet oranges by conventional and real-time polymerase chain reaction (PCR). Specificity and limit of detection (LOD) were assessed in tissue samples of fruit lesions and asymptomatic leaves. Low concentrations of the fungus were found in asymptomatic leaves. Under these conditions, real-time PCR proved to be viable, reproducible and highly sensitive to detection of the pathogen.

RESUMO Murchas vasculares em tomateiro constituem importante grupo de doenças causadas por patógenos habitantes do solo, com destaque para Verticillium dahliae, que ocasiona perdas significativas na produção. A dificuldade de controle dessa doença advém de características intrínsecas do patógeno, como alta adaptabilidade ao ambiente subterrâneo, em associação com o hospedeiro, e produção de estruturas de resistência que permanecem viáveis no solo por longo tempo. A introgressão de genes que expressam resistência destaca-se como principal medida de controle, o que requer um programa contínuo de caracterização de acessos resistentes. Objetivou-se avaliar e identificar acessos de tomateiro (Solanum lycopersicum) resistentes a V. dahliae, pelos métodos fenotípico e genotípico. A reação de 33 acessos de tomateiro a diferentes isolados de V. dahliae foi corroborada com análises empregando-se marcadores moleculares ligados aos genes de resistência Ve. A combinação de bioensaios e marcadores moleculares específicos mostrou elevada correlação (94,3 %), com a seleção de 25 acessos resistentes a V. dahliae.

ABSTRACT Vascular wilting in tomato plants is an important disease caused by soil-inhabiting pathogens, especially Verticillium dahliae, which results in significant production losses. Control measures against this disease are difficult to implement due to intrinsic pathogen characteristics, such as high adaptability to the subterranean environment, in association with the host, and development of resistance structures that remain viable in the soil for long periods. The introgression of genes that express resistance is the main control measure and requires a continuous characterization program of resistant accessions. This study aimed at identifying tomato (Solanum lycopersicum) accessions resistant to V. dahlia, by using the phenotypic and genotypic methods. The reaction of 33 tomato accessions to different V. dahliae isolates was reinforced by molecular analysis, through markers linked to Ve resistance genes. The combination of bioassays and specific molecular markers showed a high correlation (94.3 %), with the selection of 25 accessions resistant to V. dahliae.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi elaborar e validar um protocolo de detecção simultânea, via reação em cadeia da polimerase multiplex (PCR multiplex), de regiões genômicas do tomateiro (Solanum lycopersicum) associadas a fatores de resistência às três raças fisiológicas de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL). Os pares de iniciadores empregados foram SSR-67 (específico para o gene I-1), TFusrr (específico para o gene I-2) e SSRD (específico para o gene I-3). Os resultados de genotipagem com marcadores moleculares foram comparados aos resultados de fenotipagem de uma coleção de germoplasma de tomateiro, em bioensaios de inoculação de isolados das três raças de FOL em plântulas, pelo método de imersão das raízes. A resistência ou a suscetibilidade foi confirmada por PCR, por meio de visualização dos âmplicons específicos para as regiões-alvo ligadas aos fatores de resistência às distintas raças de FOL. O protocolo elaborado para o uso conjunto dos marcadores moleculares, em PCR multiplex, permite a seleção de acessos de tomateiro resistentes às raças 1, 2, e 3 de F. oxysporum f. sp. lycopersici de maneira similar à realizada com a utilização de cada um separadamente. O PCR multiplex representa uma ferramenta viável para monitorar a incorporação desses fatores de resistência em linhagens de tomateiro.

Abstract: The objective of this work was to develop and validate a protocol for simultaneous detection by multiplex polymerase chain reaction (multiplex PCR) of tomato (Solanum lycopersicum) genomic regions associated with factors of resistance to three physiological races of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL). The employed primer pairs were SSR-67 (specific to the I-1 gene), TFusrr (specific to the I-2 gene), and SSRD (specific to the I-3 gene). Genotyping results with molecular markers were compared with the phenotyping ones of a tomato germplasm collection, in bioassays of isolate inoculation of the three FOL races in seedlings by root dipping. The resistance or susceptibility was confirmed by PCR, through the visualization of specific amplicons corresponding to the target regions linked to the factors of resistance to distinct FOL races. The elaborated protocol for the joint use of the molecular markers, by multiplex PCR, allows of the selection of tomato accessions that are resistant to the races 1, 2, and 3 of F. oxysporum f. sp. lycopersici in a similar way to that done with each one separately. PCR multiplex is a viable tool to monitor the incorporation of these resistance factors into tomato inbred lines.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a reação de 48 acessos de tomateiro (Solanum lycopersicum), inclusive de espécies selvagens, a diferentes isolados das três raças de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL). Utilizaram-se marcadores moleculares ligados aos genes de resistência I-1, I-2 e I-3. A combinação de bioensaios e marcadores moleculares específicos mostrou elevada correlação para a maioria dos acessos. Acessos de S. peruvianum e S. corneliomuelleri apresentaram resistência contra todas as raças de FOL; a introgressão de fatores de resistência destes genótipos em germoplasma-elite de tomateiro é de elevado interesse para o melhoramento genético desta cultura.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the reaction of 48 tomato (Solanum lycopersicum) accessions, including ones of wild species, to isolates of the three Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) races. Molecular markers in close linkage to I-1, I-2, and I-3 resistance genes were used. The combination of bioassays and specific molecular markers showed high correlation levels for most accessions. Solanum peruvianum and S. corneliomuelleri accessions showed resistance to all FOL races; the introgression of resistance factors of these genotypes into elite tomato germplasm is of great significance to breeding programs.

RESUMOMurchas vasculares em tomateiro constituem importante grupo de doenças incitadas por patógenos habitantes de solos, com destaque para Fusarium oxysporumf. sp. lycopersici, que ocasiona perdas significativas de produção. A introgressão de genes que expressam resistência é a principal medida de controle, mas, devido à rápida emergência de raças que suplantam a resistência, vem aumentando a importância do biocontrole, em integração com o controle genético. Objetivou-se avaliar a capacidade de isolados de rizobactérias, especialmente do gênero Bacillus, como agentes de biocontrole da murcha de fusário em tomateiro. O ensaio de laboratório consistiu na verificação da habilidade de os isolados atuarem como inibidores de crescimento micelial, além da detecção de genes envolvidos na expressão de polipeptídios de ação antimicrobiana. Em casa-de-vegetação, o ensaio foi composto por sementes microbiolizadas e adição, ao solo, de suspensão de propágulos de cada rizobactéria, no momento do transplantio das mudas de tomateiro. Todos os isolados de rizobactérias apresentaram controle variável do patógeno in vitro. Os isolados UFG-07 e UFG-10, com alta similaridade a Bacillus subtilis e Bacillus circulans, destacaram-se na supressão da doença. Resultados da PCR detectaram genes-alvo para expressão de polipeptídios, o que reforça a hipótese da ação de substâncias antimicrobianas no biocontrole.

ABSTRACTVascular wilting in tomato plants constitutes an important group of diseases incited by soil inhabiting pathogens, especially Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, that causes significant production losses. The introgression of genes that express specific resistance is considered the main control method, however, due to the rapid emergence of races that suppress resistance, biocontrol has been presented as an option to be integrated with genetic control methods. This study aimed at evaluating the ability of rhizobacteria isolates, especially from the Bacillus genus, as biological control agents of Fusarium wilt in tomato plants. The laboratory assay was carried out to verify the ability of the isolates in acting as inhibitors of mycelial growth, besides detecting the genes involved in the expression of polypeptides with antimicrobial action. In the greenhouse, the assay comprised of microbiolized seeds and addition of a suspension of propagules of each rhizobacteria to the soil at the moment of transplanting the tomato seedlings. All the rhizobateria isolates showed variable control levels of the pathogen in vitro. The UFG-07 and UFG-10 isolates, with high similarity with Bacillus subtilis and Bacillus circulans, excelled in the disease suppression. PCR results detected target genes for expression of polypeptides, what reinforces the hypothesis of action of antimicrobial substances in biocontrol.

RESUMOO cultivo ininterrupto e intensivo de tomateiro tem favorecido o estabelecimento de diversas doenças que afetam a produção e a qualidade dos frutos. A resistência genética é o melhor método para o controle da doença chamada 'viracabeça' (causada por distintas espécies do gênero Tospovirus), sendo o Sw-5 o primeiro gene de resistência efetivamente identificado para o seu controle no tomateiro. Objetivou-se avaliar novas potenciais fontes de resistência às tospoviroses, em germoplasma de espécies selvagens de Solanum (Lycopersicon), bem como conduzir análises filogenéticas relacionadas à característica evolutiva do gene Sw-5b, em acessos de espécies selvagens de tomateiro. Essas análises evidenciaram que as diferentes espécies de tomateiros pertencem a distintos grupos evolutivos. A maioria dos acessos com resistência ampla contra espécies de Tospovirus correspondem a variantes alélicas muito próximas da cópia original do gene Sw-5b. No entanto, acessos resistentes de S. chilense e S. habrochaites localizamse em grupos filogeneticamente distintos, indicando que eles podem representar fontes promissoras de novos genes/alelos, condicionando resistência ampla aos tospovírus.

ABSTRACTThe intensive and uninterrupted tomato cultivation has favored the establishment of several diseases that affect fruit yield and quality. Genetic resistance is the best method to control the disease called 'vira-cabeça' (caused by distinct species of the genus Tospovirus), being Sw-5 the first resistance gene effectively identified to control it in tomato plants. This study aimed at identifying new potential sources of tospovirus resistance in wild Solanum(Lycopersicon) species, as well as performing phylogenetic analysis related to the evolutionary characteristics of the Sw -5b gene, in accessions of wild tomato species. These analyses showed that the different tomato species belong to distinct evolutionary groups. Most of the accessions with wide-spectrum resistance to Tospovirus species correspond to allelic variants closely related to the original Sw-5b gene copy. However, resistant accessions of S. chilense and S. habrochaites are located in distinct phylogenetic groups, meaning that they may represent promising sources of new genes/alleles, providing wide resistance to tospovirus.

Resumo:O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência e a praticidade de métodos de inoculação de Sclerotinia sclerotiorum, para uso na seleção de cultivares de soja resistentes ao mofo-branco. Avaliaram-se quatro métodos de inoculação, em plantas no estádio fenológico V3/V4. Aos três e sete dias após a inoculação, mediu-se o comprimento da lesão na haste das plantas. As cultivares de soja BRS 8460RR, BRSGO Ipameri e P98Y11 apresentaram as menores lesões. O método de inoculação por meio de ponteira no pecíolo é o mais eficiente e mais prático para avaliar a resistência ao mofo-branco em soja.

Abstract:The objective of this work was to evaluate the efficacy and usefulness of methods of Sclerotinia sclerotiorum inoculation for screening soybean cultivars resistant to white mold. Four inoculation methods were evaluated in plants at the V3/V4 phenological stages. Stem lesion length was measured three and seven days after inoculation. The soybean cultivars BRS 8460RR, BRSGO Ipameri, and P98Y11 had the smallest stem lesions. The inoculation method with pipette tip on the petiole is the most effective and practical to evaluate soybean resistance to white mold.

A soja (Glycine max L. Merrill) é infectada por grande número de patógenos, entre eles o agente causal do mofo-branco [Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary]. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito das etapas de beneficiamento nas qualidades física e fisiológica e na incidência de S. sclerotiorum em sementes de soja. Trabalhou-se com sementes de oito cultivares provenientes de campos de produção naturalmente infestados em municípios do Estado de Goiás, de duas safras. Foram coletadas amostras nas etapas do beneficiamento: moega, pré-limpeza, descarte um (da pré-limpeza), limpeza, classificadores de peneira, espiral, mesa de gravidade e descarte dois (após a limpeza até o final do beneficiamento). Realizaram-se análises de grau de umidade, pureza física, germinação e tetrazólio, além dos testes para a detecção de S. sclerotiorum em rolo de papel e método neon. O beneficiamento de sementes de soja aprimora as qualidades física e fisiológica do lote, além de eliminar os escleródios. As etapas de pré-limpeza e limpeza reduzem significativamente os escleródios das sementes. A quantidade de escleródios na amostra não está necessariamente correlacionada com a incidência de S. sclerotiorum na forma micelial.

Soybean (Glycine max L. Merrill) is infected by a large number of fungal pathogens, among them white mold agent [Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary]. The objective of this study was to verify the effect of the seed-processing stages on the physical and physiological qualities and on the incidence of S. sclerotiorum in soybean seeds. In this study, seeds from eight cultivars coming from production fields naturally infested in the counties of the State of Goiás, Brazil, from two harvests (2009/2010 and 2010/2011), were used. Samples were collected in the processing stages: hopper, pre-cleaning, discard one (from pre-cleaning), cleaning, sieve classifiers, spiral, gravity table, and discard two (after cleaning until processing ending). The following parameters were evaluated: seed- moisture content, physical purity, germination and tetrazolium. Additional tests and the detection of S. sclerotiorum in paper roll and the neon method were performed. The processing of soybean seeds improves the physical and physiological quality of the seed lots, in addition to eliminating sclerotia. The stages of pre-cleaning and cleaning significantly reduce sclerotia in seed lot. The amount of sclerotia in the sample is not necessarily correlated with the incidence of S. sclerotiorum in mycelial form.

O experimento foi desenvolvido no município de Silvânia (GO), em pomar comercial de uva `Patrícia' (IAC 871 - 41) durante o período de fevereiro a outubro de 2003. O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento fenológico e as características dos cachos e das bagas da cv. Patrícia em diferentes épocas de poda (13/3, 28/3, 12/4 e 27/4). A duração do ciclo (poda - colheita) foi de 152, 172, 185 e 178 dias para as podas realizadas em 13/3, 28/3, 12/4 e 27/4 respectivamente. As épocas de podas não afetaram significativamente o tamanho e a forma dos cachos, entretanto, grandes e medianamente compactos com comprimento médio de 20,52 cm. O maior diâmetro de baga foi encontrado na poda realizada em 27/4 com 19,14 mm, padrões considerados adequados para a cultivar. As diferentes épocas de poda não exerceram influência sobre os teores de sólidos solúveis totais, com média de 18,4 ºBrix. Todavia, houve variação significativa para a acidez total titulável, evidenciada nas podas de 13/3 e 27/4, respectivamente, com 1,44 e 0,87g de ácido tartárico/100 mL de mosto de uva. As diferentes épocas de poda afetaram significativamente a relação SST/ATT, sendo a menor relação encontrada na poda realizada em 13/3 com apenas 13,0 e a maior na poda de 27/4 com 21,9.

The experiment was developed in the council of Silvânia, State of Goiás, in commercial orchard of grape `Patrícia' (IAC 871 - 41) during the period of February to October of 2003. The objectives of this work were to evaluate the phenologycal behavior and the characteristics of the bunches and berries of Patrícia cultivar in different pruning times (March 13, March 28, April 12 and April 27). Durations of the stage (pruning - harvest) were of 152, 172, 185 and 178 days for the prunings accomplished on March 13, March 28, April 12, and April 27, respectively. The pruning times did not affect the size and the form of the bunches significantly, however, these became large with length of about 20.52 cm. The largest berry diameter was found in the pruning accomplished on April 27 with 19.14 mm, patterns considered appropriate for cultivation. The different pruning dates did not show influence on total soluble solids, with an average of 18.4 ºBrix, however there was no variation for the total acidity titratable, evidenced in the prunings of March 13, and April 27, respectively, with 1.44 and 0.87g of tartaric acid /100 mL of grape juice. The different pruning dates affected significantly the SST/ATT relationship, being the smallest relationship found in the pruning date of March 13 with 13.0 and the largest in the pruning date on April 27 with 21.9.