Resumo Toxoplasmose é uma doença parasitária causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. A infecção por T. gondii é uma causa significativa de morbidade e mortalidade, nos cetáceos. Apesar da abrangência mundial e amplo registro de espécies de cetáceos infectadas por T. gondii, informações sobre toxoplasmose em cetáceos do hemisfério sul são limitadas. Neste estudo pesquisou-se por meio de histopatologia e imuno-histoquímica a ocorrência de T. gondii em amostras de tecido de 185 animais, compreendendo 20 diferentes espécies de cetáceos que ocorrem no Brasil. Três dos 185 (1,6%) animais apresentaram lesões associadas a T. gondii: uma orca Orcinus orca mantida em cativeiro, um golfinho-nariz-de-garrafa Tursiops truncatus e um boto-cinza Sotalia guianensis de vida livre. As principais lesões observadas nesses animais foram hepatite, adrenalite e linfadenite necrotizantes associadas a cistos protozoários ou taquizoítos extracelulares, marcados com anticorpos anti-T. gondii. O presente estudo amplia o espectro de espécies susceptíveis a esse agente e o seu alcance geográfico no Brasil, fornecendo o primeiro relato da infecção por T. gondii em uma orca mantida em cativeiro e em um golfinho-nariz-de-garrafa de vida livre na América do Sul.

Abstract Toxoplasmosis is a parasitic disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. In cetaceans, T. gondii infection is a significant cause of morbidity and mortality. Despite the worldwide range and broad cetacean host record of T. gondii infection, there is limited information on toxoplasmosis in cetaceans from the Southern hemisphere. We investigated the occurrence of T. gondii by histopathology and immunohistochemistry in tissue samples of 185 animals comprising 20 different cetacean species from Brazil. Three out of 185 (1.6%) animals presented T. gondii-associated lesions: a captive killer whale Orcinus orca, a free-ranging common bottlenose dolphin Tursiops truncatus and a free-ranging Guiana dolphin Sotalia guianensis. The main lesions observed in these animals were necrotizing hepatitis, adrenalitis and lymphadenitis associated with protozoal cysts or extracellular tachyzoites presenting immunolabeling with anti-T. gondii antibodies. This study widens the spectrum of species and the geographic range of this agent in Brazil, and provides the first reports of T. gondii infection in a captive killer whale and in a free-ranging common bottlenose dolphin in South America.

Resumo Um lobo-marinho-subantártico (Arctocephalus tropicalis) juvenil foi achado morto no Estado de Santa Catarina, sul do Brasil, apresentando pneumonia parasitária disseminada por Parafilaroides sp. Infecção concomitante por dois gammaherpesvírus diferentes foi identificada pela PCR em diversos tecidos, um desses herpesvírus possivelmente uma nova espécie (denominada provisoriamente Otariid herpesvirus 7). DNA de Sarcocystis sp. foi identificado molecularmente em amostras de músculo esquelético que apresentavam bradizoítos intra-sarcoplasmáticos sem aparente resposta tecidual. Todas as amostras analisadas (linfonodo mandibular, laríngeo, traqueal e mesentérico, e pulmão) pela PCR para Brucella spp. foram negativas. A causa mais provável da morte do animal foi parafilaroidose pulmonar severa. O papel patogénico dos gammaherpesvírus em vários tecidos não foi evidente. Este estudo descreve a patogenicidade de Parafilaroides sp. em um lobo-marinho-subantártico, amplia a variedade de hospedeiros de herpesvírus em pinípedes e reporta a primeira identificação molecular de Sarcocystis sp. para essa espécie.

Abstract A juvenile subantarctic fur seal (Arctocephalus tropicalis) found dead in Santa Catarina state, southern Brazil, presented with disseminated verminous pneumonia due to Parafilaroides sp. A concomitant infection with two different gammaherpesviruses was identified by PCR in different tissues; one of them possibly a novel species (tentatively named Otariid herpesvirus 7). Sarcocystis sp. DNA was identified molecularly in skeletal muscle samples with intrasarcoplasmic bradyzoites and no apparent tissue response. All analyzed samples (mandibular, laryngeal, tracheal, and mesenteric lymph nodes, and lung) were PCR-negative for Brucella spp. The most likely cause of death was severe pulmonary parafilaroidiasis. The pathogenic role of the gammaherpesviruses in several of the tissues was not evident. This study describes the pathogenicity of Parafilaroides sp. in a subantarctic fur seal, widens the host range of herpesvirus in pinnipeds, and reports the first molecular identification of Sarcocystis sp. in this species.

Resumo Malária aviária é uma das mais relevantes doenças em pinguins cativos. Foram aplicadas técnicas morfométricas para avaliar a hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus ) de vida livre em reabilitação negativos (n = 9) e naturalmente infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp. (n = 24), quanto a: subgênero de Plasmodium (Haemamoeba , Huffia, Outras Linhagens, e Linhagens não identificadas), severidade das lesões histopatológicas causadas por Plasmodium e doenças concomitantes, faixa etária (plumagem juvenil ou adulta), sexo (macho, fêmea, indeterminado), condição corporal (emaciado, magro, bom, excelente, indisponível), muda, presença/ausência de óleo a admissão, suplementação de ferro, e centro de reabilitação. A porcentagem da área ocupada por hemossiderina foi denominada “Índice de Hemossiderose Hepática (IHH)”. Fêmeas Plasmodium -positivas apresentaram IHH significativamente mais elevado que machos, respectivamente, 17,53 ± 12,95% e 7,20 ± 4,25% (p = 0,041). Níveis mais elevados de congestão (p = 0,0182) e pneumonia (p = 0,0250) foram observados entre Linhagens não identificadas vs. Huffia. Possivelmente, a hemossiderose hepática observada nesse estudo seja multifatorial, resultado de processos patológicos causados por malária, muda, catabolismo de hemoglobina e mioglobina durante a migração, anemia, doenças concomitantes e suplementação de ferro, potencialmente intensificados por massa hepática reduzida. Estudos complementares são necessários para esclarecer os mecanismos de tais hipóteses.

Abstract Avian malaria is one of the most important diseases of captive penguins. We employed morphometric techniques to evaluate hepatic hemosiderosis in rehabilitating wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) that were negative (n = 9) or naturally infected by different subgenera of Plasmodium spp. (n = 24), according with: Plasmodium subgenera (Haemamoeba, Huffia, Other lineages, and Unidentified lineages), severity of Plasmodium histopathological lesions, and concurrent diseases, age class (juvenile or adult plumage), sex (male, female or not determined), body score (emaciated, thin, good, excellent, not available), molt, presence or absence of oil contamination upon admission, iron supplementation, and rehabilitation center. The percentage of the area occupied by hemosiderin was called ‘Index of Hepatic Hemosiderosis (IHH)’. Plasmodium-positive females presented significantly higher IHH values (17.53 ± 12.95%) than males (7.20 ± 4.25%; p = 0.041). We observed higher levels of congestion (p = 0.0182) and pneumonia (p = 0.0250) severity between Unidentified lineages vs. Huffia. We believe that the hepatic hemosiderosis observed in this study was multifactorial, the result of pathological processes caused by malaria, molting, hemoglobin and myoglobin catabolism during migration, anemia, concomitant diseases, and iron supplementation, all possibly potentiated by decreased liver mass. Further studies are needed to clarify the mechanisms of these hypotheses.

Resumo Primatas não humanos são extremamente susceptíveis a toxoplasmose. No presente estudo, 126 Leontopithecus chrysomelas foram capturados de uma população de vida livre, exótica e invasora, e amostras de soros foram testadas para a presença de anticorpos anti- Toxoplasma gondii pelo Teste de Aglutinação Modificado (MAT, ponto de corte 1:25). Todos os animais testados foram negativos. O MAT é um teste altamente específico e não é espécie-específico. Esse é o primeiro estudo de pesquisa por anticorpos anti- T. gondii nessa espécie em vida livre. O resultado corrobora com o conhecimento prévio sobre a susceptibilidade dessa espécie a infecção pelo parasite T. gondii.

Abstract New World Nonhuman Primates are highly susceptible to clinical toxoplasmosis. Serum samples from 126 recently captured Leontopithecus chrysomelas, from an exotic and invasive population, were tested for Toxoplasma gondii antibodies by the modified agglutination test (MAT, cut-off 1:25); all were seronegative. The MAT is highly specific and is not species-specific. This is the first report of T. gondii survey in this tamarin in the wild. This result is consistent with prior reports that showed the high susceptibility of the species to infection by T. gondii usually with high mortality rates.

Os termos Anisakiasis e Pseudoterranovosis são utilizados para doença em humanos causada pela ingestão de larvas vivas de parasitas da Família Anisakidae em peixes crus, mal cozidos ou levemente marinados. As larvas foram coletadas de bacalhau salgado vendido para consumo humano num mercado de São Paulo em 2013. Uma parte da larva de cor castanha foi utilizada em análises moleculares. A sequencia parcial do gene COX2 obtida da larva mostrou 99,8% de identidade de nucleotídeos com Pseudoterranova azarasi, que faz parte do complexo de espécies Pseudoterranova decipiens. O risco de reação alérgica envolvido no consumo de larvas mortas em peixe salgado não é bem conhecido e deve ser considerado.

Anisakiasis and Pseudoterranovosis are human diseases caused by the ingestion of live Anisakidae larvae in raw, undercooked or lightly marinated fish. Larvae were collected from one salted cod sold for human consumption in a Sao Paulo market in 2013. One section of one brownish larva was used for molecular analyses. The partial COX2 gene sequence from the larva had a nucleotide identity of 99.8 % with Pseudoterranova azarasi, which belongs to the Pseudoterranova decipiens species complex. The risk of allergy when consuming dead larvae in salted fish is not well known and should be considered.

Many microorganisms are able to cause diseases in amphibians, and in the past few years one of the most reported has been Batrachochytrium dendrobatidis. This fungus was first reported in Brazil in 2005; following this, other reports were made in specimens deposited in museum collections, captive and free-living frogs. The aim of this study was to compare singleplex and nested-PCR techniques to detect B. dendrobatidis in free-living and apparently healthy adult frogs from the Brazilian Atlantic Forest. The sample collection area was a protected government park, with no general entrance permitted and no management of the animals there. Swabs were taken from the skin of 107 animals without macroscopic lesions and they were maintained in ethanol p.a. Fungal DNA was extracted and identification of B. dendrobatidis was performed using singleplex and nested-PCR techniques, employing specific primers sequences. B. dendrobatidis was detected in 61/107 (57%) and 18/107 (17%) animals, respectively by nested and singleplex-PCR. Nested-PCR was statistically more sensible than the conventional for the detection of B. dendrobatidis (Chi-square = 37.1; α = 1%) and the agreement between both techniques was considered just fair (Kappa = 0.27). The high prevalence obtained confirms that these fungi occur in free-living frogs from the Brazilian Atlantic Forest with no macroscopic lesions, characterizing the state of asymptomatic carrier. We concluded that the nested-PCR technique, due to its ease of execution and reproducibility, can be recommended as one of the alternatives in epidemiological surveys to detect B. dendrobatidis in healthy free-living frog populations.

Detectou-se anticorpos das classes IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii em primatas experimentalmente e naturalmente infectados, utilizando-se como técnicas comparativas a RIFI e o ELISA-teste. No grupo dos primatas experimentalmente infectados, anticorpos de valor diagnóstico foram detectados a partir do 9º dia de infecção tanto na RIFI (IgG e IgM) como no ELISA-IgG. O ELISA IgM detectou anticorpos a partir do 3º dia de infecção até o final do experimento (102 dias pós-infecção). Dos 209 soros dos primatas naturalmente infectados, de diversos zoológicos do Estado de São Paulo, 64,59 e 67,94% mostraram-se positivos na RIFI-IgG e no ELISA-IgG, respectivamente. O ELISA-IgM detectou soropositividade em 52,63% dos soros ao passo que a RIFI-IgM detectou apenas 0,96%. Foi realizado também diagnóstico diferencial para Neospora caninum, através da RIFI, observando-se 61 (29,2%) animais soropositivos para este parasita e 149 (70,8%) animais negativos. Sessenta animais foram positivos para T. gondii e N. caninum. Pneumonia, esplenomegalia e úlceras intestinais foram observadas macroscopicamente. Pneumonia intersticial, enterite, colite, esplenite e glomerulite foram os achados microscópicos. A imunoistoquímica não revelou a presença do T. gondii nos tecidos dos animais experimentalmente infectados.

The Indirect Fluorescence Assay (IFA) and the indirect ELISA were comparatively used to detect IgG and IgM antibodies for Toxoplasma gondii in experimentally and naturally infected primates. In the experimentally infected group, antibodies of diagnostic value were detected at day 9 post-infection (PI) with the IFA (IgG and IgM) and with IgG-ELISA. IgM-ELISA detected antibodies for T. gondii starting at day 3 PI until the end of the experiment (102 days PI). Of the 209 naturally infected sera tested, from many zoos of State of Sao Paulo, 64.59 and 67.94% were positive in the IgG-IFA test and IgG-ELISA respectively. IgM-ELISA test detected seropositivity in 52.63% of the sera although IgM-IFA test detected it in only in 0.96% of the samples. The differential toxoplasmosis diagnosis was accomplished with Neospora caninum by IFA, observing 61 (29.2%) seropositive animals for this parasite and 149 (70.8%) negative. Sixty animals were positive for both T. gondii and N. caninum. Pneumonia, splenomegaly, and intestinal ulcers were macroscopically observed. Unremarkable interstitial pneumonia, enteritis, colitis, splenitis, and glomerulitis were microscopically observed. The immunohistochemical stain could not detect the presence of T. gondii in the tissues of the animals infected experimentally.

Este estudo relata a presença de Mycobacterium avium em quatro aves da ordem Psitaciformes, mantidos como animais de estimação. O exame anatomopatológico revelou a presença de bacilos álcool ácido resistentes na coloração de Ziehl-Neelsen, e o diagnostico definitivo foi feito pelo método PRA (PCR Restriction Analysis) a partir de tecidos emblocados em parafina. Este estudo visa alertar o possível potencial zoonótico deste agente em aves mantidas domiciliadas.

The present study is a report on the presence of Mycobacterium avium in four birds of the psittaciform order kept as pets. Anatomopathological diagnosis showed lesions suggestive of the agent and presence of alcohol-acid resistant bacilli (AARB) shown by the Ziehl-Neelsen staining. The identification of Mycobacterium avium was performed by means of PRA (PCR Restriction Analysis). DNA was directly extracted from tissue of the lesions and blocked in paraffin. The role of this agent in pet bird infection is discussed, as well as its zoonotic potential.

A doença do verme do coração é causada pelo nematódeo intravascular Dirofilaria immitis, um patógeno de importância em Saúde Pública geralmente associado a cães e gatos domésticos e, em menor extensão, a outras espécies de mamíferos. O gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) é uma espécie ameaçada de felídeo neotropical que ocorre naturalmente no Brasil. Aqui relatamos o encontro de estágios adultos e larvais de vermes do coração em uma fêmea de L. tigrinus, provavelmente de vida livre e originária de Ubatuba, São Paulo, Brasil, que veio a óbito demonstrando sinais clínicos compatíveis desta doença. Este é o primeiro caso relatado de infecção e doença associada com D. immitis em L. tigrinus, sugerindo também que o gato-do-mato-pequeno agiu como hospedeiro definitivo para este parasita. Estes achados confirmaram que D. immitis é um agente patogênico para esta espécie de felino, sugerindo a recomendação para a inclusão de testes diagnósticos para este patógeno em procedimentos rotineiros de avaliação da saúde para gatos-do-mato-pequenos mantidos em cativeiro e de vida livre no Brasil, especialmente em localidades onde as condições climáticas permitam a ocorrência do parasita. Os gatos-do-mato-pequenos são potenciais reservatórios da D. immitis, mas vivem fora do alcance veterinário, representando desta forma um risco contínuo para animais domésticos e humanos. Encorajamos a realização de outros estudos epidemiológicos a fim de estabelecer as prevalências de infecção por D. immitis em L. tigrinus e outros carnívoros selvagens na região de Ubatuba, assim como estudos ecológicos e médicos veterinários para se acessar o papel deste patógeno para a sobrevivência desta espécie ameaçada de felídeo.

Heartworm disease is caused by the intravascular nematode Dirofilaria immitis, a pathogen of public health importance usually associated to domestic dogs and cats, and to a lesser extend to other mammal species. The oncilla (Leopardus tigrinus) is a threatened neotropic felid species that naturally occurs in Brazil. Here, we report the encounter of adult and larval stages of heartworms in a female specimen of L. tigrinus, probable of free-ranging origin, from Ubatuba, São Paulo, Brazil, which died showing clinical signals compatible with heartworm disease. This was the first reported case of D. immitis infection and associated disease in L. tigrinus, also suggesting that the oncilla acted as a definitive host for this parasite. The present findings confirmed D. immitis as a pathogenic agent for this felid species, thus supporting the recommendation for the inclusion of diagnostic testing for this pathogen in routine health screening procedures for captive and free-ranging oncillas in Brazil, especially in those localities where climate conditions support the occurrence of the parasite. Potential reservoirs as oncillas are established beyond the reach of veterinary care, thus representing a continuing risk for domestic animals and humans acquiring heartworm infection. We encourage further serologic and molecular studies aiming to establish D. immitis prevalences in L. tigrinus and other wild carnivores in the region of Ubatuba, as well as ecological and veterinary studies to access the role of this pathogen for the survival of this threatened felid species.

É relatado um caso de toxoplasmose ocorrido em sagüi-de-bigode (Saguinus imperator). O animal foi encontrado morto sem que tenham sido observados sinais clínicos. Achados de necropsia e histopatológicos incluíram pneumonia intersticial moderada, hepatite necrótica multifocal e linfadenite necrosante multifocal a coalescente. A técnica imunoistoquímica (strepto-avidina-biotina peroxidase) realizada em pulmão, fígado, linfonodos, baço, coração, intestino e tecido adiposo foi fortemente positiva para Toxoplasma gondii.

A case of toxoplasmosis in an adult male emperor tamarin (Saguinus imperator) is reported. The primate was found dead and no clinical sign was noticed before death. Pathological findings included moderate to severe interstitial pneumonia, multifocal necrotizing hepatitis and multifocal to coalescing necrotizing lymphadenitis. Immunohistochemistry assays (strepto-avidin-biotin-peroxidase) performed on paraffin embedded tissues (lung, lymph nodes, liver, spleen, heart, intestine and adipose tissue) were strongly positive for Toxoplasma gondii.

O presente trabalho teve por objetivo investigar a modulação exercida pela temperatura ambiental sobre a cinética celular inflamatória experimentalmente induzida em Rana catesbeiana, rã-touro gigante. Para tanto, 120 espécimes pós-metamórficos foram mantidos a 6ºC e 24ºC e tratados pela transfixação do tecido muscular da coxa por fio de sutura ou injeção intramuscular de carragenina. Os resultados obtidos através de avaliações qualitativa e quantitativa do foco lesional mostraram que a baixa temperatura ambiental modula significativamente a evolução do processo inflamatório. Animais mantidos a 6ºC, em ambos os modelos, apresentaram números de células inflamatórias significativamente menores que os verificados a 24ºC, independentemente do tempo de avaliação. Por outro lado, algum fator pertencente aos mecanismos de defesa do hospedeiro não deve ter sido bloqueado pela temperatura, visto que a área de reação à injúria mostrou-se equivalente na maioria dos tempos pesquisados.

Objectives of this study were to investigate the influence of low environmental temperature on the experimentally induced inflammatory response in post-metamorphic Rana catesbeiana (bullfrogs). To accomplish these goals, 120 specimens of Rana catesbeiana were kept at 6ºC and 24ºC, and treated by transfixion of thigh muscular tissue with a 5-0 suture or IM carrageenan injection. Results obtained through qualitative and quantitative evaluations showed that the lower environmental temperature significantly modulates the inflammatory process development. The animals in both models that were kept at 6ºC showed a significantly lower number of inflammatory cells in the lesion site than the one verified at 24ºC, apart from the evolution time. On the other hand, any factor related to the host mechanism of defense ought not to be blocked by the temperature, since the area of reaction to the injury showed to be equivalent in most of the studied time.