Citrus species are known by their high content of phenolic compounds, including a wide range of flavonoids. In plants, these compounds are involved in protection against biotic and abiotic stresses, cell structure, UV protection, attraction of pollinators and seed dispersal. In humans, flavonoid consumption has been related to increasing overall health and fighting some important diseases. The goals of this study were to identify expressed sequence tags (EST) in Citrus sinensis (L.) Osbeck corresponding to genes involved in general phenylpropanoid biosynthesis and the key genes involved in the main flavonoids pathways (flavanones, flavones, flavonols, leucoanthocyanidins, anthocyanins and isoflavonoids). A thorough analysis of all related putative genes from the Citrus EST (CitEST) database revealed several interesting aspects associated to these pathways and brought novel information with promising usefulness for both basic and biotechnological applications.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade genética em uma população de 148 híbridos de tangor 'Murcott' (Citrus reticulata Blanco x C. sinensis L. Osbeck) e laranja 'Pêra' (C. sinensis L. Osbeck) obtidos por polinização controlada, pelo uso de marcadores fAFLP e RAPD. Marcadores polimórficos (416 marcadores fAFLP e 33 RAPD) foram utilizados para avaliar a similaridade genética entre os híbridos, calculada com o coeficiente Jaccard pelo método UPGMA. A consistência de cada agrupamento foi determinada pelo programa BOOD. Houve alta similaridade genética entre os parentais. A laranja 'Pêra' apresentou maior número (132) de loci em heterozigose em relação ao tangor 'Murcott' (105), corroborando a teoria de origem híbrida para a laranja-doce. Observaram-se dois grupos distintos de plantas, e um deles abrangeu 80% dos híbridos com maior similaridade com a laranja 'Pêra'. A análise bootstrap não revelou consistência estatística entre esses grupos. Marcadores fAFLP são mais eficientes na avaliação do polimorfismo, sendo indicados para seleção de indivíduos híbridos mais próximos a um dos parentais.

The objective of this work was to evaluate the genetic diversity in a population of 148 hybrids of 'Murcott' tangor (Citrus reticulata Blanco x C. sinensis L. Osbeck) and 'Pêra' sweet orange (C. sinensis L. Osbeck), obtained by controlled polination, using fAFLP and RAPD markers. Polymorphic markers (416 fAFLP and 33 RAPD markers) were used to evaluate genetic similarity among the hybrids, calculated by the coefficient of Jaccard, using the UPGMA method. The consistency of each group was determined by software BOOD. There was high genetic similarity within the parents. 'Pêra' sweet orange had a higher number of loci in heterozygosis (132) compared to 'Murcott' tangor (105), supporting the theory of hybrid origin for sweet oranges. Two distinct groups of plants were observed: one group had 80% of the hybrids that displayed higher genetic similarity with 'Pêra' sweet orange. The bootstrap analysis did not show consistence between the groups. The fAFLP markers are more efficient to obtain polymorphism than RAPDs and are more suitable to select hybrids closer to the parents.

Este trabalho teve como objetivo avaliar in vitro a reação de porta-enxertos de citros (Citrus spp.) a Phytophthora parasitica. As plântulas foram cultivadas em meio MS por 40 dias sendo, submetidas a fotoperíodo de 18 h, à temperatura de 25 ºC. A inoculação foi realizada através da inserção de agulha infestada com micélio de P. parasitica. A avaliação foi realizada aos 15 dias após a inoculação, medindo-se o comprimento das lesões em centímetros. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com 15 repetições. Os resultados estão de acordo com as reações de campo dos genótipos e podem ser de grande utilidade em trabalhos envolvendo resistência varietal e seleção precoce de plantas.

The objective of this work was to evaluate the effect on citrus (Citrus spp.) rootstocks to Phytophthora parasitica by in vitro inoculation. Seedlings were cultivated in MS media for 40 days, under 18 h of light of photoperiod and at 25 ºC. Inoculation was performed by injecting an infested needle into seedling collars. Evaluation was made by the length of lesions in centimeters. The experimental design was random with 15 replicates of each genotype. Results indicate good correlation between in vitro and orchard reactions genotypes to P. parasitica.

O objetivo deste trabalho foi elaborar mapas de ligação de laranja 'Pêra' [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e tangerina 'Cravo' (Citrus reticulata Blanco) utilizando marcadores RAPD e a estratégia pseudo-testcross. Os parentais foram escolhidos tomando-se por base o nível de resistência/suscetibilidade à clorose variegada dos citros (CVC). A segregação de 176 marcadores foi analisada em uma progênie de 94 híbridos F1, obtidos por meio de cruzamentos controlados. O mapa de ligação de laranja 'Pêra' apresentou 117 marcadores distribuídos em 12 grupos de ligação, totalizando 612,1 cM. Apenas seis marcadores não se ligaram a algum dos grupos de ligação e 48,7% deles apresentaram segregação distorcida. O mapa de ligação de tangerina 'Cravo' apresentou 51 marcadores distribuídos em 12 grupos de ligação, totalizando 353,3 cM. Apenas dois marcadores apresentaram-se desligados e 15,7% deles apresentaram segregação distorcida. A elaboração de mapas de ligação dessas cultivares é relevante para futuros estudos da herança da resistência à CVC, cancro cítrico e leprose.

The objective of this work was to construct linkage maps of 'Pêra' sweet orange [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and 'Cravo' mandarin (Citrus reticulata Blanco) using RAPD markers and the pseudo-testcross strategy. The parents were chosen according to the resistance/susceptibility to citrus variegate chlorosis (CVC). The segregation of 176 markers was analyzed in 94 progeny of F1 hybrids, which were obtained from controlled crossings. The linkage map of 'Pêra' sweet orange had 117 markers defined by 12 linkage groups, which spanned 612.1 cM. Only six markers could not be linked to the linkage group and 48.7% of the markers showed segregation distortion. The linkage map of 'Cravo' mandarin had 51 markers defined by 12 linkage groups, which spanned 353.3 cM. Only two markers did not link to the groups and 15.7% showed segregation distortion. The construction of linkage maps is relevant to future mapping studies of the inheritance of CVC, citrus canker and leprosis.

The objective of this work was to analyze the effects of RAPD markers with skewed segregation on genetic linkage maps. Segregation data for 123 Citrus sinensis (L.) Osbeck cv. Pêra markers and 53 C. reticulata Blanco cv. Cravo markers in F1 progeny composed of 94 hybrids were used. Genetic linkage maps of the two varieties were constructed with non-skewed markers (p < 0.05 and p < 0.01) using the program MAPMAKER 3.0 and a pseudo-testcross strategy. The maps were compared to those constructed with all markers. Alterations in the genetic distances were observed based on the location of the skewed markers within the linkage groups. Generally, the skewed markers were located at the end of the linkage groups, sometimes forming entire linkage groups, without causing significant distance modifications. However, skewed markers located between non-skewed markers caused significant distance modifications and, in some cases, altered the order of the markers. Most of the skewed markers can be included in linkage maps, but in each case the degree of distance modification caused by each marker needs to be assessed.

O grupo dos citros apresenta acentuada juvenilidade manifestada pela incapacidade de florescimento, vigor e formação de espinhos. No caso da laranja 'valência', os híbridos de trifoliata, utilizados como porta-enxertos, induzem maior precocidade e produtividade. O número de sementes do fruto (NSF) constitui importante característica da variedade candidata a porta-enxerto de citros. O presente estudo teve como objetivo detectar QTLs associados às características número de frutos por planta (NF) e número de sementes por fruto em uma progênie F1 derivada de um cruzamento entre Citrus sunki e Poncirus trifoliata 'Rubidoux'. Os grupos de ligação (GL) dos parentais foram obtidos usando a estratégia 'pseudotestcross' e marcadores do tipo RAPD. A contagem do número de frutos por planta e o número médio de sementes por fruto foi realizada usando 80 indivíduos da progênie. A detecção dos QTLs foi realizada pelo método de mapeamento por intervalo composto utilizando o programa QTLCartographer. Foram detectados um QTL associado à frutificação e um QTL ligado ao número de sementes situados no GL 4 e GL 5 no mapa de P. trifoliata, respectivamente.

Citrus group shows juvenility strong due incapacity to flowering, vigor and thorn formation. Trifoliata hybrids used as rootstocks to induce early production and better field for 'Valencia' orange scion. Seeds number per fruit is very important characteristic to citrus rootstocks candidate. The present study has as objective to detect quantitative trait loci (QTL) associated to fruiting and seeds production in F1 progeny obtained of Citrus sunki vs. Poncirus trifoliata cross. Linkage groups (LG) of parents were built by pseudotestcross strategy using RAPD markers. Fruits/plant and seeds/fruit numbers were counting using 80 individuals of progeny. QTL detection was made with composite interval mapping using the QTL Cartographer. QTL linked to fruiting and seed production in LG 4 and LG 5 of the P. trifoliata map, respectively, were detected.

Marcadores moleculares RAPD foram utilizados para avaliar a diversidade genética em uma população de 94 híbridos de tangerina 'Cravo' (Citrus reticulata Blanco) com laranja 'Pêra' (C. sinensis (L.) Osbeck), obtidos por polinização controlada. Nas reações de amplificação foram usados 102 "primers" decâmeros de seqüência arbitrária, que amplificaram 640 fragmentos, sendo 77,2% monomórficos entre os parentais. Utilizou-se o coeficiente de Jaccard para estimar a similaridade genética entre os híbridos, o método UPGMA para gerar o fenograma (NTSYS 1,7) e o software BOOD para determinar a consistência de cada agrupamento. Verificou-se que a laranja 'Pêra' apresenta maior heterozigosidade que a tangerina 'Cravo', sendo, respectivamente, 180 e 126 os números observados de loci em heterozigose. Houve alta similaridade genética entre os parentais, caracterizada pelo baixo polimorfismo de marcadores RAPD. Não houve a formação de agrupamentos estatisticamente significativos dos híbridos entre si e com os parentais, demonstrando que a constituição genética dos híbridos foi originada pela segregação independente das marcas RAPD, sendo quebrado o efeito de ligação em função do tamanho amostral em estudo. Híbridos com maior similaridade genética em relação à tangerina 'Cravo' e laranja 'Pêra' podem ser facilmente selecionados a partir de marcadores RAPD.

RAPD molecular markers were used to evaluate the genetic diversity in a progeny of 94 hybrids between 'Cravo' mandarin (Citrus reticulata Blanco) and 'Pêra' sweet orange (C. sinensis (L.) Osbeck), obtained by controlled pollination. One hundred two random decamer primers were screened, amplifying 640 fragments, 77.2% monomorphics between the parents. The Jaccard coefficient was used to estimate the genetic similarity among the hybrids, the UPGMA method to establish the phenogram (NTSYS 1.7) and the software BOOD to determine the significance of each cluster. The results indicated that 'Pêra' sweet orange heterozygosity degree is higher than 'Cravo' mandarin, with 180 and 126 loci in heterozygose, respectively. It was observed high genetic similarity between the parents, characterized by the low degree of RAPD polymorphism. Significant statistic groups were not established among the hybrids and the parents, showing that the hybrid genetic constitution was originated by independent RAPD markers segregation. Then, the ligation effect was broken because of the sample size. Hybrids with high genetic similarity degree in relation to 'Cravo' mandarin and 'Pêra' sweet orange could be easily selected using RAPD markers.

Os marcadores moleculares apresentam várias aplicações no melhoramento de plantas, permitindo uma série de análises genéticas. Este trabalho foi realizado com o objetivo de estabelecer marcadores RAPD para serem utilizados em estudos de mapeamento genético e na seleção de híbridos entre tangerina-'Cravo' (Citrus reticulata Blanco) e laranja-'Pêra' (C. sinensis (L.) Osbeck). Extraiu-se DNA de folhas dos parentais e de seis híbridos F1. As reações de amplificação foram preparadas em 13 uL de solução, constituída por tampão 1x GIBCO BRL; soluções 1,54 mM de MgCl2 e 0,2 mM de cada dNTP; 15 ng de cada 'primer'; 1,5 unidade de 'Taq DNA Polymerase' e 15 ng de DNA genômico. As reações foram realizadas em termocicladores programados para 36 ciclos de 1 min a 92ºC, 1 min a 36ºC, 2 min a 72ºC e 10 min de extensão a 72ºC. Foram testados 'primers' decâmeros arbitrários dos 'kits' A, AB, AT, AV, B, C, D, E, G, H, M, N, P, Q, R e U da Operon, sendo selecionados 113 por apresentarem polimorfismo, com número de marcadores variando de 1 a 6 por 'primer'. Esses 'primers' amplificaram 201 (23,13%) bandas polimórficas, aplicáveis no mapeamento genético e seleção de híbridos. A freqüência de 'primers' com 1; 2; 3; 4; 5 e 6 bandas polimórficas foi de 49,5%, 33,6%, 9,7%, 4,4%, 1,8% e 1,0%, respectivamente.

Molecular markers have many applications in plant breeding, enabling some types of genetic analyses. The aim of this work was to establish RAPD markers to be used to genetic mapping studies and selection of hybrids between 'Cravo' tangerine (Citrus reticulata Blanco) and 'Pêra' orange (C. sinensis (L.) Osbeck). DNA of the parents and six hybrids F1 was isolated from the leaves. The amplification reactions were performed in volumes of 13 µL, composed by GIBCO BRL 1x buffer, 1,54 mM MgCl2, 0,2 mM of each dNTP, 15 ng of each primer, 1,5 unit of Taq DNA Polymerase and 15 ng of genomic DNA. These reactions were carried out in thermocyclers programmed for 36 cycles of 1 min at 92ºC, 1 min at 36ºC, 2 min at 72ºC and 10 min of extension at 72ºC. It were evaluated random decamer primers of the kits A, AB, AT, AV, B, C, D, E, G, H, M, N, P, Q, R e U from Operon. One hundred thirteen primers were selected as polymorphics, with number of markers varying from 1 to 6 per primer. These primers amplified 201 (23,13%) polymorphic fragments, with application in genetic mapping and selection of hybrids. The frequency of primers with 1, 2, 3, 4, 5 and 6 polymorphic fragments was 49,5%, 33,6%, 9,7%, 4,4%, 1,8% e 1,0%, respectively.

Estudou-se a viabilidade de protoplastos de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis Osbeck), submetidos a diferentes doses de radiação gama, com a finalidade de determinar a dose letal (DL) 50 - dose que causa 50% de letalidade. Empregou-se a análise por fluorescência, utilizando-se o corante diacetato de fluoresceína (DAF): suas diluições testadas - 1:50; 1:100 e 1:150 - não mostraram diferenças significativas entre si, tendo sido possível o uso da maior diluição para a determinação da viabilidade dos protoplastos. A viabilidade mostrou-se inversamente proporcional às doses de radiação gama e a DL 50 foi cerca de 41 Gy. Os protoplastos não irradiados apresentaram até 84% de viabilidade, quando esta foi estudada logo após o isolamento daqueles.

The viability of 'Pera' orange (Citrus sinensis Osbeck) protoplasts, submitted to different dosages of Gamma radiation, was studied to determine the lethal dose (DL) 50. The analysis by fluorescence was employed using Fluorescein diacetate (FDA). The dilutions of FDA (1:50; 1:100 and 1:150) did not show any statistical difference: Then it was possible to use the 1:150 dilution in order to determine the protoplasts viability. The viability was inversaly proportional to Gamma radiation and the DL 50 was about 41 Gy. The non-irradiated protoplasts had their viability up to 84% when tested as soon after their isolation.