ABSTRACT: Pythium insidiosum is an important oomycete pathogen of mammals that causes pythiosis, an endemic disease in warm climates that stands out for its unfavorable prognosis, lethality in the affected species, and difficulties in treatment. This study evaluated in vitro anti-P. insidiosum potential of aqueous, hydroethanolic, and ethanolic extracts of indigenous wild mushrooms from southern Brazil. The extracts were prepared from Amanita gemmata, Amanita muscaria, Auricularia auricula, Gymnopilus junonius, Lactarius deliciosus, Laccaria laccata, Psilocybe cubensis, and Russula xerampelina. In vitro susceptibility assays employed the microdilution technique according to the M38-A2 protocol CLSI. The hydroethanolic and ethanolic extracts of R. xerampelina showed anti-P. insidiosum activity at minimum inhibitory concentrations ranging from 1.87-7.50 mg/mL. The other mushroom species extracts showed no inhibitory effects on growth of P. insidiosum. This is the first study to evaluate the antimicrobial activity of mushrooms on oomycetes, evidencing the antimicrobial potential of R. xerampelina on the pathogen P. insidiosum. So, the present study expands new perspectives, since the secondary metabolites produced by mushrooms can be potential targets for the development of new categories of medicines. However, considering the wide biodiversity of Brazilian mushrooms, we suggested that the search for other basidiomycetes species with anti-P. insidiosum action needs to be expanded. ABSTRACT pythiosis prognosis treatment antiP. antiP anti P anti-P aqueous Brazil gemmata muscaria auricula junonius deliciosus laccata cubensis M38A2 MA M38 A2 M A M38-A CLSI R 1.877.50 187750 1.87 7.50 1 87 7 50 1.87-7.5 mgmL mg mL mg/mL oomycetes So perspectives medicines However expanded M38A M3 877 1.877.5 18775 187 1.8 750 7.5 8 5 1.87-7. 1.877. 1877 18 1. 75 7. 1.87-7 1.877 1.87-

RESUMO: Pythium insidiosum é um importante oomiceto patógeno de mamíferos causador da pitiose, uma doença endêmica em climas quentes e que se destaca pelo prognóstico desfavorável, letalidade nas espécies afetadas e dificuldades no tratamento. Este estudo avaliou in vitro o potencial anti-P. insidiosum dos extratos aquosos, hidroetanólicos e etanólicos de cogumelos silvestres do sul do Brasil. Os extratos foram preparados a partir de Amanita gemmata, Amanita muscaria, Auricularia auricula, Gymnopilus junonius, Lactarius deliciosus, Laccaria laccata, Psilocybe cubensis e Russula xerampelina. Os ensaios de suscetibilidade in vitro empregaram a técnica de microdiluição em caldo de acordo com o protocolo M38-A2, CLSI. Os extratos hidroetanólico e etanólico de R. xerampelina apresentaram atividade anti-P. insidiosum em concentrações inibitórias mínimas que variaram de 1,87-7,50 mg/mL. Os extratos das demais espécies de cogumelos não apresentaram efeitos inibitórios sobre o crescimento de P. insidiosum. Este é o primeiro estudo a avaliar a atividade antimicrobiana de cogumelos sobre oomicetos, evidenciando o potencial antimicrobiano de R. xerampelina sobre o patógeno P. insidiosum. Assim, o presente estudo amplia novas perspectivas, uma vez que os metabólitos secundários produzidos pelos cogumelos podem ser alvos potenciais para o desenvolvimento de novas categorias de fármacos. Porém, levando em consideração a ampla biodiversidade de cogumelos brasileiros, sugere-se que a busca por outras espécies de basidiomicetos com atividade anti-P. insidiosum precisa ser ampliada. RESUMO pitiose desfavorável tratamento antiP. antiP anti P anti-P aquosos Brasil gemmata muscaria auricula junonius deliciosus laccata M38A2, M38A2 MA M38 A2, A2 M A M38-A2 CLSI R 1,877,50 187750 1,87 7,50 1 87 7 50 1,87-7,5 mgmL mg mL mg/mL oomicetos Assim perspectivas fármacos Porém brasileiros sugerese sugere ampliada M38A M3 M38-A 877 1,877,5 18775 187 1,8 750 7,5 8 5 1,87-7, 1,877, 1877 18 1, 75 7, 1,87-7 1,877 1,87-

RESUMO: Este estudo avaliou o efeito inibitório do gás ozônio (O3) sobre o micélio e zoósporos de Pythium insidiosum e verificou as alterações morfológicas causadas pela ação do gás nas hifas do oomiceto. O efeito de O3 foi avaliado sobre o micélio (n = 21) e zoósporos (n = 10) de P. insidiosum. O3 foi borbulhado no interior de frascos contendo água destilada estéril e micélio ou meio de indução e zoósporos. Após 15 minutos, alíquotas de micélio e zoósporos foram cultivadas em ágar levedura a 37 ºC/96 horas. Os frascos ozonizados foram incubados a 37 ºC/72 horas; e a cada 24 horas, alíquotas foram recultivadas a 37 ºC/96 horas. Adicionalmente, realizou-se a microscopia eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV) das hifas expostas ao gás. Os resultados revelaram que o O3 inibiu o crescimento do micro-organismo a partir de todas as suspensões ozonizadas. Por outro lado, nas suspensões controle o crescimento de P. insidiosum ocorreu em 24 horas de incubação. Na MEV evidenciou-se que as hifas tratadas apresentavam cavitações e perda da continuidade da parede celular; na MET as organelas e a membrana citoplasmática desapareceram e a parede celular estava retraída. Este estudo demonstra, pela primeira vez, que o O3 causa danos irreversíveis nas hifas de P. insidiosum e comprova a ação oomicida in vitro do gás sobre zoósporos e hifas. RESUMO (O3 oomiceto n 21 10 P 1 minutos 3 ºC96 ºC 96 ºC/9 ºC72 72 ºC/7 2 Adicionalmente realizouse realizou se (MET (MEV microorganismo micro organismo ozonizadas lado incubação evidenciouse evidenciou retraída demonstra vez (O ºC9 9 ºC/ ºC7 7

ABSTRACT: This study evaluated the inhibitory effect of ozone gas (O3) on the mycelia and zoospores of Pythium insidiosum and verified the morphological changes it caused on the hyphae. The effects of O3 were evaluated on the mycelia (n = 21) and zoospores (n = 10) of P. insidiosum. O3 was bubbled into vials with sterile distilled water and mycelium or induction medium and zoospores. After 15 minutes, aliquots of mycelia and zoospores were grown on yeast agar at 37 °C/96 hours. Ozonated flasks were incubated at 37 ºC/72 hours; and every 24 hours, aliquots were subcultured at 37 ºC/96 hours. Transmission (TEM) and scanning (SEM) electron microscopy of O3-exposed hyphae were performed. The results revealed that O3 inhibited microorganism growth in all ozonated suspensions. Conversely, in control suspensions, P. insidiosum growth occurred within 24 hours of incubation. In the SEM, the treated hyphae presented cavitations and cell wall continuity loss; in the TEM, the organelles and cytoplasmic membrane disappeared, and the cell wall was retracted. We demonstrated, for the first time, that O3 causes irreversible damage on P. insidiosum hyphae and prove in vitro oomicidal action on zoospores and hyphae. ABSTRACT O (O3 n 21 10 P 1 minutes 3 C96 C 96 °C/9 ºC72 ºC 72 ºC/7 2 ºC96 ºC/9 TEM (TEM SEM (SEM O3exposed Oexposed exposed performed suspensions Conversely incubation loss disappeared retracted demonstrated time (O C9 9 °C/ ºC7 7 ºC/ ºC9 °C

RESUMO: O oomiceto aquático Pythium insidiosum é um patógeno emergente de relevância em medicina humana e veterinária. É o agente etiológico da pitiose, uma enfermidade de distribuição mundial, que acomete principalmente em equinos, caninos e seres humanos, podendo apresentar-se nas formas cutâneas, subcutâneas, oculares, gastrointestinais e sistêmicas. Considerando que os métodos terapêuticos disponíveis para o tratamento da doença não são completamente efetivos, há uma necessidade de investigar formas de tratamentos com melhor eficácia, como os compostos de diferentes classes farmacológicas, compostos de origem natural, bem como, novas alternativas tecnológicas, incluindo a nanotecnologia. Deste modo, este trabalho objetivou avaliar publicações científicas referentes a utilização de nanotecnologia em P. insidiosum. Para isso, realizou-se uma revisão sistemática da literatura, buscando artigos no período de 2010 a 2022, nas bases de dados LILACS, MEDLINE, Google Scholar, PubMed e SciELO, utilizando-se os descritores Pythium insidiosum, pitiose, nanotecnologia, nanopartículas, nanoemulsão e tratamento. Encontrou-se 162 artigos com familiaridade a temática pesquisada; no entanto, apenas quatro estudos foram incluídos, pois atendiam os critérios estabelecidos na pesquisa. Para análise estatística dos dados obtidos nos estudos in vitro, utilizou-se meta-análise. Demonstrou-se o promissor uso de nanotecnologia como alternativa no desenvolvimento de compostos antimicrobianos com atividade anti-P. insidiosum. Entretanto, constata-se que estudos adicionais se fazem necessários para verificar o potencial uso desta tecnologia na terapêutica clínica contra infecções por P. insidiosum.

ABSTRACT: The aquatic oomycete Pythium insidiosum is an emerging pathogen highly relevant in human and veterinary medicine and an etiologic agent of pythiosis, a disease of worldwide distribution mainly affecting horses, dogs, and humans, presenting cutaneous, subcutaneous, ocular, gastrointestinal, and systemic forms. The available therapeutic methods to treat this disease and its forms are not entirely effective, thus highlighting the need to investigate the forms of treatments with better efficacy, such as compounds from different pharmacological classes, compounds of natural origin, and new technological alternatives, including nanotechnology. Therefore, this study evaluated scientific publications regarding the use of nanotechnology in P. insidiosum treatment. For this, a systematic literature review, was carried out on articles published from 2010 to 2022 on the LILACS, MEDLINE, Google Scholar, PubMed, and SciELO databases using the descriptors ‘Pythium insidiosum,’ ‘pythiosis,’ ‘nanotechnology,’ ‘nanoparticles,’ ‘nanoemulsion,’ and ‘treatment.’ We reported 162 articles for the researched theme; although, only four studies were included because they met the criteria established herein. A meta-analysis was used for the statistical analysis of the data obtained in vitro studies, and we reported the use of nanotechnology can be a promising alternative in developing antimicrobial compounds with anti-P. insidiosum activity. Nevertheless, additional research is needed to verify the potential use of this technology in clinical therapy against P. insidiosum infections.

Resumo O estudo avaliou a atividade ovicida de extratos enzimáticos de Purpureocillium lilacinum e Trichoderma virens sobre ovos de tricostrongilídeos de ovinos. Extrato filtrado (EF) e extrato macerado bruto (EMB) foram preparados a partir de culturas fúngicas em caldo mínimo. No ensaio experimental, 100 ovos de tricostrongilídeos, obtidos de fezes de ovinos naturalmente infectados, foram expostos durante 24 e 48 horas/25ºC aos extratos dos fungos. No grupo controle, os ovos foram incubados em caldo mínimo. O número de larvas L1 foi determinado. Cada tratamento consistiu em quatro repetições e o experimento foi repetido cinco vezes. Observou-se que o efeito ovicida do EF e EMB de P. lilacinum e T. virens diferiu do grupo controle. O EMB de T. virens e P. lilacinum evidenciou atividade ovicida superior ao EF em ambos os períodos avaliados e em 48 horas de exposição, respectivamente. O percentual de redução de eclodibilidade evidenciou que o EMB foi superior ao EF em ambos os fungos. Este estudo demonstra o potencial ovicida desses fungos sobre ovos de tricostrongilídeos. No entanto, estudos adicionais são necessários para identificar as moléculas responsáveis pelo efeito ovicida, bem como avaliar o comportamento dos extratos fúngicos em interações bióticas e abióticas.

Abstract The study evaluated the ovicidal activity of enzymatic extracts of Purpureocillium lilacinum and Trichoderma virens against trichostrongylid eggs from sheep. Filtered extract (FE) and macerated crude extract (MCE) were prepared from fungal cultures in minimal broth. In the experiment, 100 trichostrongylid eggs, obtained from the feces of naturally infected sheep, were exposed to fungal extracts for 24 and 48 hours/25°C. In the control group, eggs were incubated in minimal broth. The number of L1 larvae was ascertained. Each treatment consisted of four repetitions and the experiment was repeated five times. It was observed that the effect of FE and MCE of P. lilacinum and T. virens on egg hatchability differed from that of the control group. MCE of T. virens and P. lilacinum showed higher ovicidal activity than FE over both periods and at 48 hours of exposure, respectively. From the percentage reductions in hatchability of the eggs, MCE was shown to be superior to FE for both fungi. This study demonstrated the ovicidal potential of these fungi against trichostrongylid eggs. However, further studies are needed in order to identify the molecules responsible for the ovicidal effects, and to evaluate the behavior of fungal extracts in biotic and abiotic interactions.