Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da roscovitina na inibição reversível de oócitos de ovelhas pré-púberes, no estádio de vesícula germinativa (VG), e investigar a cinética da progressão da meiose após a remoção do inibidor. Complexos cumulus-oócito, recuperados de cordeiras da raça Sarda com 30-40 dias, foram cultivados por 6 horas em meio de maturação (controle) contendo 75 μmol L-1 de roscovitina (Rosco) a 38,5°C e 5% de CO2. Em seguida, os complexos foram submetidos à maturação in vitro (MIV) por 18 ou 23 horas, em meio isento de inibidor, suplementado com gonadotrofinas. A avaliação da configuração nuclear em coloração Hoescht, sob microscópio invertido de fluorescência, revelou que 88,7% dos oócitos tratados permaneceram no estágio VG, conforme observado para os imaturos (97,3%) corados após a coleta. Essa inibição foi reversível; contudo, a proporção de oócitos (83,3%) em metáfase-II, após 23 horas de MIV, foi significativamente maior do que a observada após 18 horas (29,5%), em que a meiose ainda estava em progressão com 34,2% de oócitos em metáfase-I, 11,6% de oócitos em anáfase-I e 18,5% de oócitos em telófase-I. A roscovitina é eficiente no bloqueio da maturação nuclear em oócitos de ovelhas pré-púberes; no entanto, apesar da reversibilidade, a progressão da meiose é retardada e requer mais tempo para ser concluída.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the efficiency of roscovitine on reversibly inhibiting oocytes from prepubertal sheep at the germinal vesicle (GV) stage, and to investigate the kinetics of meiosis progression after inhibitor removal. Cumulus-oocyte complexes, recovered from Sarda breed lambs aged 30-40 days, were cultured for 6 hours in a maturation medium (control) containing 75 μmol L-1 roscovitine (Rosco) at 38.5°C and 5% CO2. Then, the complexes were subjected to in vitro maturation (IVM) for 18 or 23 hours, in an inhibitor-free medium supplemented with gonadotropins. The evaluation of nuclear configuration by Hoescht staining, under a fluorescence-inverted microscope, showed that 88.7% of the lamb oocytes treated with roscovitine remained at the GV stage, as observed for the immature ones (97.3%) stained after collection. The inhibitory action was reversible; however, the proportion of oocytes (83.3%) at the metaphase-II stage, after 23 hours of IVM, was significantly higher than that observed after 18 hours (29.5%), in which meiosis was still in progression with 34.2% oocytes at metaphase-I, 11.6% oocytes at anaphase-I, and 18.5% oocytes at telophase-I. Roscovitine is efficient to arrest the nuclear maturation in oocytes from prepubertal sheep; however, despite the reversibility, meiosis progression is delayed, requiring more time to be completed.

RESUMO: A recuperação e preservação dos espermatozoides após a morte possibilita maior aproveitamento de animais geneticamente superiores. O objetivo deste trabalho foi avaliar o período máximo após a morte do carneiro para que os espermatozoides possam ser refrigerados em meio diluidor com ou sem plasma seminal. Foram utilizadas três amostras de espermatozoides colhidos em vagina artificial (AV) de 10 carneiros ou da cauda de quatro epidídimos provenientes dos mesmos carneiros no momento da morte (G0) e seis (G6), doze (G12), vinte e quatro (G24) e quarenta e oito (G48) horas após a morte. Após a recuperação os espermatozoides (em AV ou cauda do epidídimo) foram refrigerados à 5°C em dois tratamentos: meio controle (CM) ou meio controle acrescido de 20% de plasma seminal homólogo (SP) e avaliados até 72 horas após o início da refrigeração. As amostras do G48 apresentaram motilidade total (TM) e integridade de membrana plasmática no teste hiposmótico (HOST) menor (P<0,05) que os outros grupos avaliados em todos os momentos estudados. TM diminuiu (P<0,05) após 24 horas de refrigeração no sêmen colhido em AV, no G0 e G24 e a partir de 48 horas de refrigeração no G6 e G12. A TM, integridade de membrana no HOST e morfologia espermática não diferiram entre as amostras refrigeradas em CM ou SP. Contudo, é possível refrigerar espermatozoides epididimários até 24 horas post mortem, a refrigeração prolonga a viabilidade espermática até 48 horas após o início da refrigeração. A adição de 20% de plasma seminal ao meio diluidor não tem efeito sobre a longevidade espermática.

ABSTRACT: Preservation and use of spermatozoa that have been recovered after death can extend the use of genetically superior animals. The objective of this study was to evaluate the maximum period for which ovine spermatozoa could be successfully stored in refrigerated dilution medium post-mortem, with or without added seminal plasma. Three samples of spermatozoa collected in an artificial vagina from 10 rams, or from the tails of four epididymes from the same rams at the time of death (G0) and six (G6), twelve (G12), twenty-four (G24) and forty-eight (G48) hours after death were used. After recovery, the spermatozoa were refrigerated at 5°C in either control medium (CM) or control medium plus 20%homologous seminal plasma (SP) and evaluated for 72 hours from the start of refrigeration. The G48 samples had a lower(P <0.05) total motility (TM) and plasma membrane integrity in the hyposmotic test (HOST) than the other groups evaluated at all analyzed times. The TM decreased (P <0.05) after 24 hours of cooling in semen collected in AV, at G0 and G24 and after 48 hours of refrigeration in G6 and G12. The TM and HOST integrity and sperm morphology did not differ between samples refrigerated in CM or SP. In conclusion, it is possible to collect epididymal spermatozoa up to 24 hours after death. Sperm viability can be prolonged fora further 48 hours by refrigeration. However, total motility decreases from 24 hours after refrigeration and the supplementation of 20% seminal plasma to the extender has no effect on spermatozoa longevity.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi determinar o padrão do desenvolvimento folicular em ovelhas após a ablação de todos os folículos, associado a tratamento superestimulatório ovariano. Após confirmação da ciclicidade reprodutiva por avaliação ultrassonográfica e dosagem de progesterona, cinco ovelhas adultas, sem raça definida, ao início do tratamento, receberam pessário vaginal contendo 60mg de acetato de medroxiprogesterona. Após quatro dias, foi administrado 100µg cloprostenol sódico e, no décimo dia, realizou-se a remoção do pessário e aspiração de todos os folículos ovarianos visíveis, guiada por laparoscopia, além da administração de 300UI eCG associada a 80mg FSH. Ao final do tratamento, a cada 8 horas, foi realizada avaliação ultrassonográfica das estruturas ovarianas por um período de 64 horas, onde o número e o diâmetro de folículos pequenos (<2,5mm), médios (2,5 a 4,5mm) e grandes (>4,5mm) foram contabilizados. O número de folículos pequenos, que inicialmente apresentava média 5,6±1,5, foi reduzido para 0,8±1,3 a partir de 56 horas, folículos grandes somente foram vistos a partir de 32 horas (0,2±0,4); a população de folículos médios, durante o período de observação, apresentou uma distribuição parabólica cujo vértice, considerado o ponto teórico de maior concentração, foi às 34,6 horas, não havendo diferença (P>0,05) nessa população de folículos, entre 24 e 48 horas (4,6±1,5 vs 4,8±2,3). Conclui-se que, em ovelhas submetidas à superestimulação ovariana iniciada imediatamente após remoção de todos os folículos visíveis à laparoscopia, o desenvolvimento folicular é caracterizado pela emergência de nova onda de crescimento, com predomínio de folículos médios (2,5 a 4,5mm) entre 24 e 48 horas, sendo o ponto teórico de maior ocorrência às 34,6 horas.

ABSTRACT: The aim of this study was to determine the pattern of follicular development in ewes following ablation of all follicles associated with ovarian superstimulatory treatment. After confirmation of reproductive cyclicity using ultrasonography and progesterone levels, five adult ewes of undetermined breed received a vaginal pessary containing 60mg of medroxyprogesterone, maintained for 10 days, with the application of 100μg cloprostenol on the fourth day. On the tenth day, 300UI equine chorionic gonadotropin (eCG) was applied together with 80mg FSH, and all visible follicles were aspirated by laparoscopic ovum pick-up (LOPU). Following LOPU, ovarian structures were assessed using sonography every 8 hours for a period of 64 hours, and the number and diameter of small (<2.5mm), medium-sized (2.5-4.5mm), and large (>4.5mm) follicles were recorded. The average diameter of small follicles reduced from 5.6±1.5mm initially to 0.8±1.3mm by 56 hours. Population size of the medium-sized follicles during the observation period followed a parabolic distribution wherein the theoretical maximum size emerged at 34.6 hours with no difference at (P>0.05) 24 (4.6±1.5) and 48 hours (4.8±2.3). It was concluded that in ewes subjected to ovarian superstimulation immediately following LOPU, follicular development is characterized by a new wave of follicle growth with a predominance of medium-sized follicles (2.5-4.5mm) between 24 and 48 hours, and a theoretical population maximum occured at 34.6 hours.

A eficácia da utilização de sêmen ovino congelado em programas de inseminação artificial necessita do desenvolvimento de diluidores e protocolos de congelação que melhorem a taxa de gestação das fêmeas inseminadas. Este trabalho tem como objetivo fazer um levantamento dos principais diluidores, aditivos, crioprotetores penetrantes e não penetrantes que veem sendo empregados, visando incrementar os níveis de manutenção dos parâmetros espermáticos, após o processo de congelação-descongelação. Pode-se considerar que índices superiores de viabilidade do sêmen ovino pós-descongelação podem ser obtidos com alterações na composição do meio de congelação, seja com ajustes dos seus componentes, seja com a introdução de aditivos que inibam a ocorrência de alterações espermáticas durante o processo de criopreservação. Para tanto, as possíveis modificações propostas devem contemplar as características intrínsecas do sêmen da espécie e a variabilidade individual entre animais. É importante ressaltar que um adequado processo de criopreservação do sêmen necessita que todas as etapas sejam conduzidas de forma integrada, para que, dessa forma, sejam maximizados os índices de fertilidade do sêmen ovino congelado.

The effectiveness of using frozen sheep semen in artificial insemination programs requires the development of extenders and freezing protocols that will increase pregnancy rate of inseminated females. This work aimed to survey the main extenders, additives and external and internal cryoprotectants that have been employed to improve the maintenance levels of sperm parameters after the freezing-thawing process. Better rates of post-thawing sheep sperm viability may be obtained with changes in the freezing extender composition, whether by the adjustment of its components or by introducing additives that inhibit the occurrence of sperm changes during the cryopreservation process. Thus, the possible changes proposed must take into consideration the intrinsic characteristics of ram semen and the individual variability among animals. It is important to emphasize that the sperm cryopreservation effectiveness requires that all process steps are conducted in an integrated manner, to maximize the fertility rate of frozen ram semen.

The efficacy of estrus synchronization using short-term protocol was evaluated by ultrasound exams in Suffolk ewes during the pre-breeding season. The control Group (n = 12) was synchronized by treatment for 12 days with vaginal sponges impregnated with medroxyprogesterone acetate, and 400 IU eCG at sponge withdrawal. Experimental groups I, II and III kept the sponge in place for 4 days, and 100 µg of PGF2a was administered at sponge withdrawal. Additionally, Group I (n = 12) had 0.1 mg of estradiol benzoate (EB) administered during sponge placement and 50 µg of GnRH 48 hours after sponge removal. Group II (n = 6) had 35 mg of progesterone (P4) injected, and 0.1 mg of EB administered during sponge placement, 400 IU eCG at withdrawal and 48 hours after, 50 µg GnRH were administrated. Group III (n = 12) had 35 mg of P4 and 0.2 mg of EB administered at sponge placement, 400 IU eCG at withdrawal, and 50 µg of GnRH was administrated after 56 hours. Ovaries were monitored through ultrasound scanning. Concerning the first wave, no difference was detected between the control group and the experimental groups. However, the characteristics of ovulatory wave were significantly different between the groups. The duration of the follicular wave was shorter for Group III than for Group II. The follicle in Group I reached its maximum diameter before the Group II. The diameter of the follicle at the sponge withdrawal in the control group was larger than in Group I. After sponge withdrawal, the follicular growth rate was smaller in the control group than in Group III. The maximum diameter of the follicle in Group II was larger than in the other groups. The short-term protocol in which estrogen was used did not synchronize the emergence of the wave of follicular development.

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.

The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.