Abstract In Brazil, rabies occurs mainly within an urban cycle, in which dogs and bats are reservoirs. This paper aims to report the occurrence of rabies in Callithrix sp. in Niterói, Rio de Janeiro, Brazil. In June 2019 a hybrid specimen was referred for diagnosis. The Direct Fluorescent Antibody, Mouse Inoculation, and Polymerase Chain Reaction tests were positive. A phylogenetic analysis was compatible with antigenic variant 3, characteristic of Desmodus rotundus. New studies should be undertaken to elucidate the real role of callitrichids in the urban rabies cycle.

RESUMO: Este estudo investigou a sensibilidade do isolamento viral (VI) em células de neuroblastoma murino (N2A) e células de rim de hamster (BHK-21) como um teste confirmatório para o diagnóstico de raiva bovina. Quarenta e oito amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva foram inicialmente submetidas aos testes diagnósticos de rotina, imunofluorescência direta (FAT) e inoculação intracerebral em camundongos (MIT). Subsequentemente, essas amostras foram submetidas a três protocolos de VI em cada linhagem celular: uma única passagem de 24h ou 72h (T1, T2), ou três passagens de 48h (T3). Os testes FAT e MIT combinados detectaram 32/48 amostras positivas, das quais o MIT detectou 32 e a FAT 31. O tempo médio requerido para o resultado final no MIT foi 12,3 dias (8-21 dias). O teste de VI em células BHK-21 obteve resultados positivos em 100% das amostras em 72h (T2), e em 96,9% após três passagens de 48h (T3). O teste de VI em células N2A forneceu resultado positivo em 100% em 72h (T2), e em 30 das 32 amostras após três passagens de 48h (T3). Sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos foram de 100% tanto em N2A quanto em BHK-21 após 72h de incubação (T2). Além disso, o valor Kappa foi excelente em ambas as células (k=1). Uma única passagem de 24h (T1) em ambas as linhagens celulares não apresentou resultados satisfatórios, detectando menos de 40% das amostras positivas. Esses resultados indicam que o isolamento viral em ambas as linhagens celulares, especialmente em BHK-21 - que multiplica mais rápido e é de mais fácil manutenção - representa uma alternativa adequada para a substituição do MIT como um teste confirmatório para o diagnóstico da raiva em amostras de bovinos, fornecendo resultados confiáveis em tempo reduzido.

ABSTRACT: This study investigated the suitability of virus isolation (VI) in mouse neuroblastoma cells (N2A) and baby hamster kidney cells (BHK-21) as a confirmatory test for diagnosis of bovine rabies. Fourty-eight brain samples from cattle suspected of rabies were initially submitted to fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) for routine diagnostic. Subsequently, these specimens were submitted to three protocols of VI in each cell line: a single 24h or 72h passage (T1, T2), or three 48h passages (T3). The FAT and MIT combined detected 32/48 positive samples, from which MIT detected 32 and FAT 31. The average time required for final MIT results was 12.3 days (8 - 21). VI in BHK-21 cells provided definitive, positive results in 100% of the samples in 72h (T2) and in 96.9% after three 48h passages (T3). VI in N2A cells yielded positive results in 100% in 72h (T2) and in 93.7% of samples after three 48h passages (T3). Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were 100% in T2 in N2A and BHK-21 cells, and the Kappa value was excellent in both cells (k=1). A single 24h passage (T1) in both cell lines performed poorly, detecting less than 40% of the positive samples. Taking together, these results indicate that VI in both cell lines, especially in BHK-21 cells that grow faster and are much easier to maintain, does represent an adequate alternative for MIT as a confirmatory test for rabies diagnostic in bovine specimens, yielding reliable results in reduced time.

A raiva é uma doença infecciosa do sistema nervoso central de mamíferos causada pelo vírus da raiva (RabV), geralmente, transmitido pela mordedura de animais infectados. No Brasil, os morcegos hematófagos Desmodus rotundus são as principais fontes de infecção do RabV para bovinos e equinos. Este artigo descreve uma investigação epidemiológica e molecular de surtos de raiva ocorridos na região central do Rio Grande do Sul, entre maio e agosto de 2012. Nesse período, 45 casos suspeitos de raiva foram relatados em 22 pequenos rebanhos, localizados dentro de um raio de 4,7km, no município de Pinhal Grande. Desses, 32 amostras foram submetidas para diagnóstico da raiva, sendo que o RabV e/ou antígenos virais foram identificados em 27 amostras. Em um segundo momento, 11 amostras foram submetidas à transcrição reversa/reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para o gene da nucleoproteína (N) do RabV, seguido de sequenciamento nucleotídico e análise filogenética. Sete das 11 amostras apresentaram sequências nucleotídicas idênticas e uma apresentou mutação sinônima, não-codificante, indicando uma provável origem comum dos vírus. Por outro lado, três amostras apresentaram mutações que resultaram em alterações de aminoácidos, sugerindo uma origem diferente do vírus. Esses resultados sugerem que RabV de diferentes origens/linhagens co-circulam na região e foram envolvidos nos surtos descritos. Investigações sobre a circulação de ambos os genótipos em morcegos na região estão em andamento.

Rabies is an infectious disease of the central nervous system of mammals caused by rabies virus (RabV), generally transmitted by the bite of rabid animals. In Brazil, vampire bats Desmodus rotundus are the main reservoirs of RabV for livestock. The present study describes a molecular and epidemiological investigation of outbreaks of bovine rabies occurring in the central region of Rio Grande do Sul state, Brazil, between May and August 2012. In this period, 45 cases suspected of rabies were reported in 22 small herds, located within a 4.7km range, in the county of Pinhal Grande. From these, 32 samples were submitted to rabies diagnosis and RabV and/or viral antigens were identified in 27 samples. Subsequently, 11 brain samples were submitted to reverse transcription/polymerase chain reaction (RT-PCR) for the nucleoprotein gene (N) followed by nucleotide sequencing and phylogenetic analysis. Seven out of 11 samples yielded identical sequences; one presented a synonymous, non-coding mutation, indicating a likely common origin of the virus. However, three other samples presented nucleotide mutations which resulted in amino acid changes, suggesting a different origin of the virus. In summary, these results suggest that RabV strains of different origin/lineages co-circulate in the region and were involved in the outbreaks. Investigations on the circulation of both genotypes in bats in the region are currently underway.

No presente estudo, foi realizada uma pesquisa em busca de anticorpos neutralizantes contra os vírus da cinomose (CDV) e da parainfluenza (CPIV) caninos em amostras de soro de 173 cães recolhidos a canis municipais em Novo Hamburgo (n=82) e Porto Alegre (n=91), RS. A pesquisa de anticorpos neutralizantes foi realizada pela técnica de soroneutralização frente a duas amostras vacinais de CDV (Rockborn e Snyder Hill) e frente a uma amostra de CPIV (V660). Em relação ao CDV, 95,9% das amostras de soros foram negativas para anticorpos neutralizantes contra a amostra Snyder Hill e 90,7% soronegativas para a amostra Rockborn. Entre os soropositivos (n=20; 11,6%), somente três deles apresentaram anticorpos neutralizantes frente às duas amostras de CDV testadas, indicando pouca reatividade cruzada entre as mesmas. Quanto ao CPIV, a prevalência de anticorpos neutralizantes encontrada frente à amostra V660 foi de 51,4%. Esses achados indicam que a maioria dos cães examinados não teve contato prévio com o CDV, seja por infecção natural ou por imunização prévia. O CPIV, porém, parece estar amplamente difundido na população canina examinada, provavelmente por exposição natural ao vírus.

In this report a serological survey was carried out in search for antibodies to canine distemper virus (CDV) and canine parainfluenza virus (CPIV) in 173 sera from dogs withdraw in kennels of the municipalities of Novo Hamburgo (n=82) and Porto Alegre (n=91), RS, Brazil. Neutralizing antibodies were evaluated against two CDV strains used for vaccine production (Rockborn and Snyder Hill) as well as one strain of CPIV (V660). Search for anti-CDV neutralizing antibodies revealed that 95.9% of sera were negative for antibodies to CDV Snyder Hill and 90.7% were negative for antibodies to CDV Rockborn. Among the positive sera (n=20; 11.6 %) only three of those had neutralizing antibodies to both CDV strains, indicating a low degree of cross reactivity between those. As regards CPIV, neutralizing antibodies to V660 were detected in 51.4% of sera. These findings suggest that the majority of the dogs from the populations examined in the present study had not previous contact with CDV, either by natural infection or by previous immunization. CPIV, on its turn, seem to be widespread within these populations, most likely by natural exposure to the virus.