Resumo Durante o presente estudo, o estresse oxidativo mediado pelo cobre (Cu) foi medido que induziu danos ao DNA por concentração nos tecidos de peixes, Catla catla (14,45 ± 1,24g; 84,68 ± 1,45mm) (Hamilton, 1822). Os alevinos foram retidos em 5 grupos por 14, 28, 42, 56, 70 e 84 dias do período de exposição. Eles foram tratados com 2/3, 1/3, 1/4 e 1/5 (T1-T4) de 96h de concentração letal de cobre. Os controles foram executados junto com todos os tratamentos para as mesmas durações. Uma significativa (p <0,05) concentração dependente do tempo e da dose de Cu foi observada nas brânquias, fígado, rim, músculos e cérebro de C. catla. Entre os órgãos, o fígado apresentou uma concentração significativamente maior de cobre, seguido por guelras, rins, cérebro e músculos. O acúmulo de cobre nesses órgãos causou uma variação significativa nas atividades das enzimas viz. superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e peroxidase (POD). A atividade de SOD variou significativamente em resposta ao tempo de exposição de Cu como 56> 70> 42> 84> 28> 14 dias, enquanto a atividade de CAT exibiu uma relação inversa com o aumento na concentração de Cu. A atividade POD mostrou um aumento significativo com um aumento na duração da exposição ao Cu. O ensaio do cometa exibiu dano significativo ao DNA induzido por Cu nos eritrócitos periféricos de C. catla. Entre as quatro concentrações de exposição, 2/3 do LC50 (T1) causou danos significativamente maiores aos núcleos em comparação com o controle. O aumento da atividade de POD e SOD, bem como uma diminuição na atividade de CAT em resposta ao Cu, demonstra o envolvimento de um mecanismo protetor contra espécies reativas de oxigênio (ROS), enquanto o aumento de ROS resultou em maior dano ao DNA. Esses marcadores moleculares mencionados acima podem ser usados de forma eficiente para o biomonitoramento de ambientes aquáticos e conservação da ictiofauna comestível.

Abstract During present study, the copper (Cu) mediated oxidative stress was measured that induced DNA damage by concentrating in the tissues of fish, Catla catla (14.45±1.24g; 84.68±1.45mm) (Hamilton,1822). Fish fingerlings were retained in 5 groups for 14, 28, 42, 56, 70 and 84 days of the exposure period. They were treated with 2/3, 1/3, 1/4 and 1/5 (T1-T4) of 96h lethal concentration of copper. Controls were run along with all the treatments for the same durations. A significant (p < 0.05) dose and time dependent concentration of Cu was observed in the gills, liver, kidney, muscles, and brain of C. catla. Among organs, the liver showed a significantly higher concentration of Cu followed by gills, kidney, brain, and muscles. Copper accumulation in these organs caused a significant variation in the activities of enzymes viz. superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and peroxidase (POD). The SOD activity varied significantly in response to the exposure time of Cu as 56 > 70 > 42 > 84 > 28 > 14 days while CAT activity exhibited an inverse relationship with the increase in Cu concentration. POD activity showed a significant rise with an increase in Cu exposure duration. Comet assay exhibited significant DNA damage in the peripheral erythrocytes of Cu exposed C. catla. Among four exposure concentrations, 2/3rd of LC50 (T1) caused significantly higher damage to the nuclei compared to control. Increased POD and SOD activity, as well as a decrease in CAT activity in response to Cu, demonstrates the involvement of a protective mechanism against reactive oxygen species (ROS), whereas increased ROS resulted in higher DNA damage. These above-mentioned molecular markers can be efficiently used for the biomonitoring of aquatic environments and conservation of edible fish fauna.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos d’água do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; o filo Mollusca possui importante posição na teia alimentar e atua como bioindicador, praga e hospedeiro intermediário. Por serem resistentes, são chamadas baratas de malacologia. Os caramujos físidos foram coletados em diferentes corpos d’água de Faisalabad (Punjab) e identificados até as espécies por meio de marcadores morfológicos. A morfometria dos corpos de prova foi realizada com auxílio de paquímetro digital Vernier em milímetros (mm) por meio de medida linear dos caracteres da casca. A análise de regressão linear da razão AL / SW vs. AL e razão SL / SW vs. AL indicou que o crescimento alométrico existe apenas em Physa acuta quando comparado com P. gyrina e P. fontinalis. Este estudo levará a avaliar a situação das espécies de físido no Punjab Central. A análise do componente principal mostra que o componente 1 (comprimento da casca) e o componente 2 (largura da casca) são os componentes mais prolíficos e quase 80% da identificação. A distância entre P. acuta e P. fontinalis é 5,4699, P. acuta e P. gyrina é 7,6411, P. fontinalis e P. gyrina é 16,6080, mostrando que P. acuta se assemelha a P. fontinalis, e ambos os espécimes não se parecem com P. gyrina. P. acuta é uma espécie invasora e apresenta bioatividade, tornando-se uma candidata potente para substâncias bioativas.

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; Phylum Mollusca have important position in food web and act as bio indicators, pests and intermediate host. Being resistant these are called cockroaches of malacology. Physid snails were collected from different water bodies of Faisalabad (Punjab) and were identified up to species using morphological markers. The morphometry of the specimens was carried out with the help of a digital Vernier caliper in millimeters (mm) using linear measurement of shell characters. Linear regression analysis of the AL/SW ratio vs AL and SL/SW ratio vs AL indicated that allometric growth exists only in Physa acuta when compared with P.gyrina and P. fontinalis. This study will lead to assess the status of the Physid species in Central Punjab. The Principal component analysis shows that the Component 1 (Shell Length) and component 2 (Shell Width) are the most prolific components and nearly 80 percent of the identification. The distance between P. acuta and P. fontinalis is 5.4699, P. acuta and P. gyrina is 7.6411, P. fontinalis and P. gyrina is 16.6080 showing that P. acuta resembles with P. fontinalis, and both these specimens donot resemble with P. gyrina. P.acuta is an invasive species and shows bioactivity making it a potent candidate for bioactive substances.

OBJECTIVE: The aims of this study were to investigate the presence of Enterococcus faecalis in primary endodontic infections and failed endodontic treatments using real-time PCR and to determine the statistical importance of the presence of E. faecalis in a Turkish population with endodontic infections. MATERIAL AND METHODS: E. faecalis was investigated from 79 microbial samples collected from patients who were treated at the Endodontic Clinic of the Dental School of Atatürk University (Erzurum, Turkey). Microbial samples were taken from 43 patients (Group 1) with failed endodontic treatments and 36 patients (Group 2) with chronic apical periodontitis (primary endodontic infections). DNA was extracted from the samples by using a QIAamp® DNA mini-kit and analyzed with real-time PCR SYBR Green. RESULTS: E. faecalis was detected in 41 out of 79 patients, suggesting that it exists in not less than 61% of all endodontic infections when the proportion test (z= -1.645, <x= 0.05) was applied. Real-time PCR SYBR Green allowed for the detection of E. faecalis in 32 out of 43 (74.4%) in Group 1, and in 9 out of 36 (25%) in Group 2. CONCLUSIONS: These results suggest that E. faecalis is a frequent isolate for endodontic infections in Turkish patients, and is more often associated with failed endodontic treatments than primary endodontic infections.