A Mancha Preta dos Citros (MPC) tem ocorrência mundial afetando a produção de citros na África, Oceania e América do Sul. No Brasil, onde o clima é favorável ao seu desenvolvimento, a doença está espalhada nas regiões Sul e Sudeste. O controle da MPC, causada pelo fungo Guignardia citricarpa (anamorfo: Phyllosticta citricarpa) é baseado na aplicação de fungicidas, como os benzimidazóis. Na África do Sul, após 10 anos de controle da doença com o fungicida benomil, os casos de resistência a altas concentrações deste fungicida atingiram todas as áreas produtoras. O fungicida estrolilurina chamado azoxistrobina tem se mostrado eficiente no controle dos fitopatógenos de uma grande variedade de culturas economicamente importantes, incluindo a MPC. Neste trabalho foram investigados os efeitos in vitro dos fungicidas benomil e azoxistrobina em 10 linhagens de G. citricarpa isoladas de lesões em plantas cítricas no Brasil e na África do Sul. Houve inibição do crescimento micelial a 0,5 µg/mL do fungicida benomil entre as linhagens testadas, com exceção de PC3C de origem sul-africana, que apresentou resistência até a concentração de 100,0 µg/mL de benomil. A freqüência de mutação espontânea para resistência ao benomil foi de 1,25 <FONT FACE=Symbol>´</font> 10-7. A estrobilurina azoxistrobina, mesmo em altas concentrações, não inibiu o crescimento micelial dos isolados, entretanto reduziu significativamente a produção de esporos, chegando a 100% de inibição em concentrações de 5,0 µg/mL de azoxistrobina. A variação na sensibilidade das linhagens, principalmente com a estrobilurina azoxistrobina, possivelmente está relacionada com a variabilidade genética dos isolados de G. citricarpa.

Citrus black spot (CBS) is a plant disease of worldwide occurrence, affecting crops in Africa, Oceania, and South America. In Brazil, climate provides favorable conditions and CBS has spread to the Southeast and South regions. CBS is caused by the fungus Guignardia citricarpa (anamorph: Phyllosticta citricarpa) and its control is based on the use of fungicides, such as benzimidazoles. In South Africa, the disease was kept under control for 10 years with benomyl, until cases of resistance to high concentrations of this fungicide were reported from all citrus-producing areas. Azoxystrobin (a strobilurin) has been found effective in controlling phytopathogens, including CBS, in a wide range of economically important crops. The present study investigated in vitro the effects of the fungicides benomyl and azoxystrobin on 10 strains of G. citricarpa isolated from lesions in citrus plants from Brazil and South Africa. Benomyl at 0.5 µg/mL inhibited mycelial growth in all strains except PC3C, of African origin, which exhibited resistance to concentrations of up to 100.0 µg/mL. The spontaneous mutation frequency for resistance to benomyl was 1.25 ´ 10-7. Azoxystrobin, even at high concentrations, did not inhibit mycelial growth in any of the strains, but significantly reduced sporulation rates, by as much as 100%, at a concentration of 5.0 µg/mL. Variations in sensitivity across strains, particularly to the strobilurin azoxystrobin, are possibly related to genetic variability in G. citricarpa isolates.

Chicken embryos kept in culture medium were bombarded using a high helium gas pressure biolistic device. To optimize the factors that affect transformation efficiency, the lacZ gene under control of the human cytomegalovirus immediate early enhancer/promoter was used as a reporter gene. There was an inverse relationship between survival rate and transformation efficiency. The best conditions obtained for high embryo survival and high transformation efficiency were achieved with 800 psi helium gas pressure, 500 mmHg vacuum, gold particles, an 8 cm DNA-coated microparticle flying distance to the embryo and embryo placement 0.5 cm from the center of the particle dispersion cone. Under these conditions, transformation efficiency was 100%, survival rate 25% and the number of expression units in the embryo body cells ranged from 100 to 1,000. Expression of green fluorescent protein was also detected in embryos bombarded under optimal conditions. Based on the results obtained, the biolistic process can be considered an efficient method for the transformation of chicken embryos and therefore can be used as a model system to study transient gene expression and tissue-specific promoters.

Este estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar as freqüências gênicas em diferentes gerações de bovinos da raça sintética Canchim (5/8 Charolês, 3/8 Zebu). Uma amostra de 154 animais, representando três classes de gerações de um rebanho das raça Canchim, foi analisada para sete marcadores moleculares. Uma amostra da raça Charolesa (N = 36) foi incluída nas análises para permitir comparações. Observou-se um aumento linear, altamente significativo (P < 0,01), na freqüência do alelo que codifica o aminoácido valina na posição 127 do hormônio de crescimento, ao longo das gerações de Canchim. Este alelo foi observado na amostra da raça Charolesa e não é encontrado em raças zebuínas nacionais. Quatro alelos foram observados para o microssatélite localizado na região 5' não transcrita do gene do fator de crescimento semelhante à insulina do tipo I (IGF-I), com tamanhos variando de 231 a 225 pb. A freqüência do alelo de 225 pb apresentou um aumento significativo (P < 0,05) não linear ao longo das gerações. Este alelo não foi observado na raça Charolesa e é predominante nas raças zebuínas. Para o microssatélite CSFM50, seis alelos foram observados na raça Canchim, tendo sido verificada uma redução linear (P < 0,05) na freqüência do alelo de 168 bp. A hipótese de acasalamento preferencial com relação ao polimorfismo do hormônio de crescimento foi reforçada pelos resultados da análise de estatística F de Wright. O valor estimado de FIS para este loco foi 0,59 (P < 0,01). O aumento simultâneo de um alelo do hormônio de crescimento característico de Bos taurus e de um alelo de IGF-I característico de Bos indicus sugere que a seleção fenotípica tenha favorecido regiões diferentes de ambos os genomas que entraram na formação dessa raça.

This study was developed to evaluate selection effects on gene frequencies in a synthetic beef cattle cross (5/8 Charolais, 3/8 Zebu) named Canchim. A sample of 154 Canchim animals, representing three generation classes, was analyzed for seven molecular markers. Thirty-six Charolais cattle were also studied for comparison. A highly significant variation (P < 0.01), with a linear increase of the allele coding for valine at position 127 of the growth hormone peptide, was observed through generations. This allele was found in the Charolais sample but is not observed in Brazilian Bos indicus breeds. Four alleles were found for a microsatellite in the 5' flanking region of insulin-like growth factor I gene in Canchim. Allele sizes ranged from 231 to 225 bp. There was a significant (P < 0.05) nonlinear increase in the 225-bp allele frequency. This allele was not observed in Charolais. Six alleles were observed for microsatellite CSFM50 in the Canchim population. A significant (P < 0.05) linear reduction of the 168-bp allele was observed over the generations. The hypothesis of preferential mating for growth hormone polymorphism was supported by Wright's F-statistics. Estimated FIS value for growth hormone was 0.59 (P < 0.01). These results suggest that selection influenced three out of seven loci analyzed. The simultaneous increases of a Bos taurus-specific growth hormone allele and a Bos indicus-specific insulin-like growth factor I allele indicate that phenotypic selection favored different regions of both genomes.

Uma linhagem selvagem do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae foi submetida à ação de três agentes mutagênicos: radiação gama, luz ultravioleta e ácido nitroso. Curvas de sobrevivência foram obtidas para cada mutagênicos utilizado e mutantes foram selecionados a partir de doses dos mutagênicos que proporcionassem de 1 a 5% de sobrevivência. Mutantes morfológicos para a coloração de conídios e mutantes auxotróficos foram isolados. Mutantes para coloração de conidios foram agrupados em duas classes, uma com conídios amarelos e outra com conídios vinho pálido. Os mutantes auxotróficos obtidos foram deficientes para aminoácidos e vitaminas e mais de 58% deles eram auxotróficos para prolina/argmina. Radiação gama foi o mutagênico mais eficiente com uma porcentagem de obtenção de mulantes auxotróficos de aproximadamente 0,2%, seguido pela luz ultravioleta (0.12%) e pelo ácido nitroso (0.06%).Os mulantes morfológicos e auxotróficos obtidos até o momento em Metarhizium anisopliae foram revistos.

A wild strain of Metarhizium anisopliae, an entomopathogenic fungus, was submitted to three mutagenic agents: gamma radiation, ultraviolet light and nitrous acid. Survival curves were obtained and mutants were selected using different mutagenic doses which gave 1 to 5% survival. Morphological and auxotrophic mutants were isolated. Morphological mutants were grouped in a class with yellow conidia and other with pale vinaceous conidia as opposed to the green wild type conidia. Auxotrophic mutants had requirements for vitamin and aminoacid biosynthesis. More than 58% of the total auxotrophk mutants required proline/aipnine. Gamma radiation showed to be the most efficient mutagenic agent giving 0.2% of auxotrophk mutants followed by ultraviolet light (0.12%) and nitrous acid (0.06%).The conidial colour and auxotrophk mutants isolated until now from M. anisopliae were reviewed.

Duas linhagens de bactérias fitopatogênicas do gênero Pseudomonas e duas do gênero Erwinia produtoras de bacteriocinas, foram submetidas a diferentes tratamentos visando estimar a estabilidade desse caráter. Houve eliminação da produção de bacteriocinas após tratamento com duas concentrações de brometo de etídio e a porcentagem de eliminação variou com o hospedeiro e com a concentração da droga. Não houve eliminação em temperaturas elevadas e também a preservação da linhagem por três anos em laboratório não causou perda do caráter. A eliminação da produção de bacteriocinas com brometo de etídio sugere que os genes envolvidos tenham localização plasmidiana.

Four strains, two from each of the plant pathogenic bacteria Pseudomonas and Erwinia, all producing bacteriocins, were submitted to different treatments in order to evaluate the persistance of bacteriocin production. After ethidium bromide treatment elimination of the bacteriocin production was achieved and the percentage of loss varied with the host strain and drug concentration. Elimination was not detected after treatment with high temperatures, above the normal ones. Also preservation of the strains for three years, in laboratory, did not cause elimination of the character. The curing of bacteriocin production after ethidium bromide treatment suggests that the involved genes are located in plasmids.

A detecção da produção de bacteriocinas foi estudada em diferentes condições, utilizando-se linhagens de bactérias fitopatogênicas dos gêneros Erwinia, Pseudomonas e Xanthomonas. Obtiveram-se, respectivamente, 58,06%, 71,31% e 40,00% de linhagens produtoras no meio 523, que foi o mais indicado para detecção dessa produção. Uma maior concentração de ágar adicionada ao meio (1,5%) produziu melhores resultados mas, a quantidade de meio nas placas não influenciou a detecção de bacteriocinas. O maior tempo de incubação utilizado (72 h.) facilitou detecção de halos de produção de bacteriocinas. Irradiação com luz ultra-violeta em baixas doses parece facilitar a liberação de bacteriocinas, mas isso varia com a linhagem empregada.

Detection of bacteriocin production was studied under distinct conditions using strains of plant pathogenic bacteria from the genera Erwinia, Pseudomonas and Xanthomonas. 58.06%, 79.31% and 40.00% of producing strains were found respectivelly in the three groups of bacteria using the 523 medium which was the best for the detection of bacteriocin production. Increasing agar concentrations added to the medium up to 1,5% improved the detection. The amount of medium added to the Petri dishes did not affect bacteriocin production. The longest incubation time (72h.) improved the detection of haloe production. Ultra-violet irradiation in low dosages seems to improve the visualization of haloe prodution but this is dependent on the tested strains.