Abstract The rapid diagnosis of bovine tuberculosis (BT) allows official surveillance institutions to act in areas that could be potential hotspots for the spread of the disease. The study aimed to identify the Mycobacterium bovis agent by multiplex PCR of isolated colonies. Through the official inspection service (Federal/State), samples suggestive of BT were collected during the post-mortem inspection of bovine carcasses in slaughterhouses and sent to the laboratory for complementary diagnostics. The samples were analyzed using bacteriological culture and Ziehl-Neelsen staining. In isolates characterized as Acid-Alcohol Resistant Bacilli (BAAR), the multiplex PCR technique confirmed the agent Mycobacterium bovis. Nine hundred ninety-one thousand three hundred sixteen cattle carcasses were inspected, collecting 32 BT-suggestive samples in from animalsfrom 30 municipalities. Of these, 28.1% (9/32) showed growth on bacteriological culture media with BAAR. The BAAR isolates submitted to multiplex PCR confirmed the presence of M. bovis. The multiplex PCR technique associated with bacteriological examination and applied to post-mortem findings enabled the diagnosis of M. bovis in the municipalities sampled in the Bahia state. (BT disease colonies Federal/State, FederalState Federal/State , Federal State (Federal/State) postmortem post mortem diagnostics ZiehlNeelsen Ziehl Neelsen staining AcidAlcohol Acid Alcohol BAAR, (BAAR) ninetyone ninety one inspected 3 BTsuggestive these 281 28 1 28.1 9/32 932 9 (9/32 M state (Federal/State (BAAR 2 28. 9/3 93 (9/3 9/ (9/ (9 (

Resumo O diagnóstico rápido da tuberculose bovina (TB), permite a atuação de instituições oficiais de vigilância em áreas que possam constituir possíveis focos de propagação da doença. Essa pesquisa identificou o agente Mycobacterium bovis através do PCR multiplex das colônias isoladas. Através do serviço de inspeção oficial (Federal e Estadual), foram coletadas amostras sugestivas de TB durante a inspeção post-mortem de carcaças bovinas em matadouros-frigoríficos e estas foram encaminhadas ao laboratório para os diagnósticos complementares. As amostras foram comprovadas por meio de cultura bacteriológica e coloração Ziehl-Neelsen. Nos isolados caracterizados por Bacilos ÁcidoÁlcool Resistente (BAAR), aplicou-se a técnica de PCR multiplex visando a confirmação do agente Mycobacterium bovis. Foram analisadas 991.316 carcaças de bovinos. Entre estas, 32 apresentaram amostras sugestivas de TB que foram coletadas, provenientes de animais de 30 municípios. Entre as amostras coletadas, 28,1% (9/32) apresentaram crescimento em meios de cultura bacteriológicos com BAAR. Os BAAR isolados submetidos à PCR multiplex confirmaram a presença de M. bovis. A técnica de PCR multiplex associada ao exame bacteriológico e aplicada aos achados post-mortem permitiu o diagnóstico de M. bovis nos municípios amostrados do estado da Bahia. TB, , (TB) doença isoladas Federal Estadual, Estadual Estadual) postmortem post mortem matadourosfrigoríficos matadouros frigoríficos complementares ZiehlNeelsen. ZiehlNeelsen Ziehl Neelsen. Neelsen Ziehl-Neelsen BAAR, (BAAR) aplicouse aplicou se 991316 991 316 991.31 bovinos 3 281 28 1 28,1 9/32 932 9 (9/32 M Bahia (TB (BAAR 99131 99 31 991.3 2 28, 9/3 93 (9/3 9913 991. 9/ (9/ (9 (

RESUMO: O Mycobacterium bovis é o responsável pela tuberculose bovina e bubalina, doença zoonótica importante e com distribuição global. O conhecimento da distribuição e a identificação precisa dessa enfermidade, incluindo diagnósticos mais avançados como o spoligotyping, permite escolher as melhores estratégias de combate ao avanço da doença. O presente trabalho objetivou investigar a presença de micobactérias, genotipar suas estirpes e avaliar a distribuição espacial dos casos de tuberculose a partir de lesões sugestivas nas carcaças de bovinos e bubalinos inspecionadas em frigoríficos sob regime de inspeção oficial no estado da Bahia. Foram investigados 453.417 animais dentre os quais 31 (0,007%) foram suspeitos de doença e provenientes de 17 municípios. Após o crescimento em meio de cultura, 95% foram categorizados como bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR). Todos os isolados foram submetidos à spoligotyping e 95% foram confirmados M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). A cepa SB0120 foi a mais prevalente e este perfil vem sendo descrito na literatura com casos de tuberculose humana por M. bovis ressaltando o potencial zoonótico deste perfil. Este estudo também identificou cepas nunca relatadas no estado da Bahia, destacando um padrão distinto de outras partes do Brasil, além da existência de infecções mistas. Permitiu ainda relatar linhagens nunca antes descritas no estado com destaque para um padrão novo no Brasil (SB6119 e SB0852 respectivamente). Um perfil inédito identificado foi identificado e inserido no banco de dados internacional (Mbovis.org), nomeado SB2715.

ABSTRACT: Mycobacterium bovis is responsible for bovine and buffalo tuberculosis, an important zoonotic disease with global distribution. The knowledge of the distribution and the precise identification of this disease, including advanced diagnoses such as spoligotyping, allows choosing the best strategies to fight the disease’s progress. The present work aimed to investigate mycobacteria’s presence, genotype their strains, and evaluate tuberculosis cases’ spatial distribution from suggestive lesions in carcasses of bovine and buffalo inspected in slaughterhouses under an official inspection regime in the state of Bahia, Brazil. The study investigated 453,417 animals. Among these, 31 (0.007%) from 17 municipalities were suspected of tuberculosis. Among the culture medium growth, 95% of these were categorized as alcohol-acid resistant bacilli (BAAR). All isolates were subjected to spoligotyping and 95% were confirmed as M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). The strain SB0120 was the most prevalent, and this profile has been described in cases of human tuberculosis by M. bovis, highlighting the zoonotic potential of this profile. This study also identified strains never reported in Bahia, highlighting a distinctive pattern from other parts of Brazil, besides mixed infections. Besides, to identify strains never before described in the state, highlighting a distinctive pattern in Brazil (SB6119 and SB0852, respectively). An unpublished profile was identified and inserted in the international database (Mbovis.org), named SB2715.

RESUMO: A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.

ABSTRACT: Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the “Serviço de Inspeção Estadual” (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.

O objetivo do presente trabalho foi utilizar métodos bacteriológicos e moleculares para a identificação do Mycobacteriumbovis em lesões observadas em carcaças de bovinos durante a inspeção postmortem de rotina em matadouros-frigoríficos com serviço de inspeção oficial. Foi acompanhado o abate e a inspeção de 825.394 bovinos, sadios ao exame ante mortem pelo serviço de inspeção oficial em dez matadouros-frigoríficos do estado da Bahia. Carcaça de 180 bovinos apresentaram lesões sugestivas de tuberculose e por outras linfadenites. No isolamento bacteriano, 25 amostras apresentaram crescimento disgônico de colônias de coloração creme-amareladas em meio de cultura Stonebrink-Leslie. Desses isolados, 14 foram identificados como M. bovis PCR multiplex e pela técnica do spoligotyping foram discriminados oito diferentes espoligotipos do M. bovis, sendo sete descritos na literatura e um novo spoligotipo sem descrição anterior. O espoligotipo majoritário foi o SB0121, com cinco amostras, sendo descrito no Brasil e em outros países, seguidos por dois clusters, SB295 e SB1055, com dois isolados cada. O espoligotipo SB1145 e SB1648 foram referidos apenas no Brasil e Dinamarca, respectivamente. O espoligotipo SB140 já foi encontrado no Brasil, Argentina, Uruguai e Paraguai. Estes resultados demonstram que os espoligotipos obtidos são compartilhados, até o momento, entre estados brasileiros e entre países da América Latina e Europa. Sendo assim, a discriminação molecular de isolados de M. bovis através do Spoligotyping constitui-se numa ferramenta para estudos epidemiológicos da tuberculose bovina no Estado da Bahia.

The aim of this study was to use bacteriological and molecular methods to identify Mycobacteriumbovis in lesions observed in cattle carcasses during routine post-mortem inspection in slaughterhouses with official inspection service. It was accompanied the slaughter and inspection of 825,394 cattle, healthy ante mortem examination by the official inspection service in ten slaughterhouses in the state of Bahia. Carcasses of 180 cattle presented lesions suggestive of tuberculosis and other lymphadenitis. In bacterial isolation, 25 samples showed dysgonic growth of colonies of creamy-yellow in medium-Stonebrink Leslie. From these isolates, 14 were identified as M. bovis and the multiplex PCR technique spoligotyping was discriminated against eight different spoligotypes of M. bovis, seven previously described in the literature and a new spoligotypes without former description. The major spoligotypes was SB0121, with five samples which has been described in Brazil and other countries, followed by two clusters, SB295 and SB1055, with two isolates each. The SB1145 and SB1648 spoligotypes were reported only in Brazil and Denmark, respectively. The spoligotypes SB140 has been found in Brazil, Argentina, Uruguay and Paraguay. These results demonstrate that the spoligotypes obtained are shared, so far, among Brazilian states and among Latin America and Europe. Thus, molecular discrimination of isolates of M. bovis by Spoligotyping constitutes a tool for epidemiological studies of bovine tuberculosis in the state of Bahia.

Com o objetivo de descrever o quadro clínico de envenenamento crotálico em bovinos, cinco fêmeas, mestiças, com idade variando entre dois e três anos, foram inoculadas com veneno crotálico do tipo crotamina positivo. A dose foi de 0,03 mg/kg de peso vivo. Os animais apresentaram, cronologicamente, o seguinte quadro clínico: na 2ª hora de evolução, apatia, cabeça baixa, letargia profunda e edemaciação discreta no local da inoculação; na 6ª hora, o edema local desapareceu e mioclonias foram observadas nas grandes massas musculares; na 10ª hora, houve diminuição do tônus muscular, de reflexos superficiais, aparecimento de incoordenação motora e decúbito esternal; na 14ª hora, observaram-se movimentos de "pedalagem" e diminuição da sensibilidade profunda; na 16ª hora, paralisia flácida dos membros pélvicos; e, na 20ª hora, surgiram dispnéia, sialorréia e morte de todos os animais. A temperatura retal não se alterou até a 20ª hora, porém, a partir daí, ocorreu diminuição constante até a morte. A freqüência respiratória se manteve dentro da faixa de valores normais para bovinos, apesar da dispnéia observada ao atingir a 20ª hora. A duração do curso clínico foi de 28 ± 9 horas e, muito embora estas alterações clínicas sejam comuns a outras doenças, julga-se que a rapidez e a ordem com que aparecem seja um fator determinante no diagnóstico diferencial.

With the aim of describing the clinical picture of experimental crotalic poisoning in cattle, five crossbred female, from two to three years old, were inoculated with type crotalic positive crotamine poison. The dosage was 0.03 mg/kg of body weight. The animals showed chronologically, the following clinical picture: at second hour of evaluation apathy, low head, deep lethargy and discreet swelling at the inoculation place; at sixth hour, local oedema had disappeared and myoclonia was observed in great muscle masses; at tenth hour, there was decreasing of muscular tonus, as well as superficial reflexes, motor incoordination appearing and esternal recumbency; at fourteenth hour it was observed pedal movement and loss of deep sensibility; at sixteenth hour, hind limbs flaccid paralysis and after twenty hours after poisoning it was observed dyspnea, salivation and death of all animals. Rectal temperature did not alter until the twentieth hour, however, from this time it decreased constantly until the death. The respiratory frequency kept within normal range for cattle, despite dyspnea observed since twentieth hour. Clinical course duration was 28 ± 9 hours and, even though these clinical alterations are common to other diseases, it can be judged that the speed and order of appearing are determinant factors in differential diagnosis.