Resumen El CIGB-370 es un polipéptido recombinante antiangiogénico y antimetastásico in vitro y antiproliferativo in vivo en modelos de ratones xenotransplantados con células tumorales humanas. La respuesta de anticuerpos de esa biomolécula bacteriana puede provocar reacciones adversas y alterar la eficacia del medicamento durante su estudio en seres humanos. Se realizó la validación de dos inmunoensayos escalonados, heterogéneos, con el CIGB-370 recubierto directamente en la fase sólida y revelados con proteína A-peroxidasa: uno de pesquisaje y otro competitivo de confirmación de la especificidad. Con esos inmunoensayos se evaluaron retrospectivamente muestras de plasma de 18 pacientes con cáncer que recibieron tres dosis de CIGB-370 (1,8; 3,7; y 6,1 mg/m2) endovenoso durante una hora, dos veces por semana durante cuatro semanas. Con los umbrales de corte fluctuantes de pesquisaje y de confirmación calculados, estos inmunoensayos detectaron anticuerpos anti- CIGB-370 y no otros contaminantes del proceso, del producto o de la matriz biológica. Los coeficientes de variación intra e interanálisis de los inmunoensayos fueron menores de 20%. La sensibilidad de esos inmunoensayos permitió la detección de una prevalencia de los anticuerpos anti-CIGB-370 mayor del 82% con predominio de los pacientes con anticuerpos inducidos sobre los pacientes con anticuerpos preexistentes. Esta metodología escalonada de inmunoensayos con una adecuada sensibilidad, especificidad, selectividad y precisión detectó un aumento de la prevalencia de anticuerpos anti-CIGB-370 en pacientes con cáncer tratados con el CIGB-370 con o sin modificaciones estructurales en un ensayo clínico inicial y favorece el estudio de la relevancia clínica de esos anticuerpos.

Abstract The CIGB-370 recombinant polypeptide is antiangiogenic and antimetastatic in vitro and antiproliferative in vivo in xenograft mouse models with human tumor cells. The antibody response of this bacterial biomolecule can cause inmunoenadverse reactions and alters the effectiveness of the drug during its study in humans. The validation of two tiered heterogeneous immunoassays with CIGB-370 coated directly on the solid phase and revealed with protein A-peroxidase was performed. One was a screening immunoassay and the other was a competitive immunoassay confirming of specificity. With these immunoassays, plasma samples were evaluated. These samples were extracted in a retrospective clinical trial of 18 cancer patients who received an infusion of three doses of CIGB-370 (1.8, 3.7, and 6.1 mg/m2) intravenously over 1 hour, twice in a week for 4 weeks. The calculated screening and confirmation cut-point were floating. These immunoassays detected antibodies to CIGB-370 and not to other contaminants of process or product or of human plasma. The intra- and inter-assay coefficients of variation of the immunoassays were less than 20%. The sensitivity of these immunoassays allowed for the detection of a prevalence of anti CIGB-370 antibodies higher than 82%. The prevalence of patients with induced antibodies was significantly higher than that of patients with pre-existing anti-CIGB-370 antibodies. This tiered immunoassay methodology with adequate specificity, sensitivity, selectivity and precision allows for the detection of anti-CIGB-370 antibodies in cancer patients treated with CIGB-370 with or without structural modifications in an initial clinical trial and makes it possible to study clinical relevance of these antibodies.

Resumo O CIGB-370 é um polipeptídeo recombinante antiangiogênico e anti-metastático in vitro e antiproliferativo in vivo em modelos de ratos xenotransplantados com células tumorais humanas. A resposta de anticorpos dessa biomolécula bacteriana pode causar reações adversas e alterar a eficácia do medicamento durante o seu estudo em seres humanos. Foram validados dois imunoensaios escalonados, heterogêneos, por etapas, com o CIGB-370 revestido diretamente na fase sólida e revelados com proteína A-peroxidase: um ensaio de pesquisa e um ensaio de confirmação da especificidade competitiva. Com esses imunoensaios foram avaliadas retrospectivamente amostras de plasma de 18 doentes com câncer que receberam três doses de CIGB-370 (1,8, 3,7 e 6,1 mg/m2) endovenoso durante uma hora, duas vezes por semana, durante quatro semanas. Com os limiares de interrupção flutuante e de confirmação calculados, estes imunoensaios detectaram anticorpos anti-CIGB-370 e não outros contaminantes do processo, do produto ou da matriz biológica. Os coeficientes de variação intra e inter-ensaio dos imunoensaios foram inferiores a 20%. A sensibilidade destes imunoensaios permitiu a deteção de uma prevalência dos anticorpos anti-CIGB-370 superior a 82% com predomínio dos doentes com anticorpos induzidos sobre doentes com anticorpos pré-existentes. Esta metodología escalonada de imunoensaios com uma adequada sensibilidade, especificidade, seletividade e precisão detectou um aumento da prevalência de anticorpos anti-CIGB-370 em doentes com câncer tratados com o CIGB-370 com ou sem modificações estruturais em um ensaio clínico inicial e favorece o estudo da relevância clínica destes anticorpos.

Resumen Hay una necesidad de nuevas alternativas al uso medicinal de alopurinol. En este sentido, el presente estudio obtuvo un extracto de hojas de L. leucocephala al cual se le determinó su composición química, acción inhibitoria contra xantina oxidasa (XO) in vitro, interacción inhibitoria entre el extracto y alopurinol, y acción inhibitoria contra XO in vivo empleando ratones bajo administración de hipoxantina y oxonato de potasio. Compuestos polifenoles y flavonoides fueron detectados y cuantificados en el extracto de hojas. Para el extracto solo, su valor IC50 y máximo de inhibición contra XO fueron de 334.60 µg/mL y 46.4 %. La combinación a una proporción 3:1 de alopurinol y extracto obtuvo valores IC50 y waDRI de 1.35 µg/mL, 1.13 (alopurinol) y 1015.72 (extracto) para inhibir a XO, resultando en una interacción sinérgica contra XO in vitro. Donde esta misma combinación incrementó el éxito terapéutico en el modelo murino al compararse con la administración de alopurinol solo. Nuestro estudio presenta la primera evidencia para el uso de una combinación de alopurinol y extracto de L. leucocephala a una proporción 3:1 como un sustituto para la administración de alopurinol solo.

Abstract There is a need for novel alternatives to the medical use of allopurinol. In this sense, the present study obtained a leaf extract from L. leucocephala, and its chemical composition, inhibitory action against xanthine oxidase (XO) in vitro, inhibitory interaction between the extract and allopurinol, and the inhibitory action on XO in vivo using mice treated with potassium oxonate and hypoxanthine, were determined. Polyphenol and flavonoid compounds were found in the leaf extract. For the leaf extract, the IC50 and maximal values were 334.60 µg/mL and 46.4 % for the inhibition of XO. The 3:1 ratio combination of allopurinol and extract showed IC50 and waDRI values of 1.35 µg/mL, 1.13 (allopurinol) and 1015.72 (extract) to inhibit XO, resulting in a synergistic interaction against XO in vitro. This combination also enhanced the therapeutic success in the mouse model compared with allopurinol administered alone. The present study presents the first evidence for the use of an allopurinol and L. leucocephala extract combination at a 3:1 ratio, as a substitute for the administration of allopurinol alone.

SUMMARY: There is a significant correlation between regulatory functions of orexin system and depressive symptoms. Parvalbumin (PV) interneurons, the main subtype of inhibitory g-aminobutyric acid (GABA) interneurons, are involved in the regulation of depression-like behaviors too. To provide several lines of evidence regarding neural connection between two types of neurons in the depression associated nuclei, a double-label immunohistochemical staining technique was employed to reveal overlap between PV and orexin immunoreactivity in the mouse brain. Medial prefrontal cortex (mPFC) mainly consists of the cingulate cortex, area 1 (Cg1), prelimbic cortex (PrL) and infralimbic cortex (IL), in which regions contained similar obvious overlap between orexin fibers and PV somas with axons. In the basal forebrain (BF), overlap was observed in the lateral septal nucleus, ventral part (LSV), the nucleus accumbens shell (AcbSh), bed nucleus of the stria terminalis, ventral division (BSTV), ventral pallidum (VP), central amygdaloid nucleus (Ce). In the diencephalon, besides the lateral hypothalamic area (LH) and dorsomedial hypothalamic nucleus (DM), in which two regions contained overlap between orexin positive perikarya with fibers and PV immunoreactivity, different densities of orexin and PV fibers were closely intermingled in the paraventricular hypothalamic nucleus (PVN), paraventricular thalamic nucleus (PVT), arcuate hypothalamic nucleus (Arc). In the brainstem, densities of intermixed orexin and PV fibers were from high to low in the dorsal raphe nucleus (DR), laterodorsal tegmental nucleus (LDTg), periaqueductal gray (PAG), lateral parabrachial nucleus (LPB), median raphe nucleus (MnR), and orexin buttons were embedded within PV fibers, as for the ventral tegmental area (VTA), overlap was observed between PV somas with axons and orexin fibers. Hence, PV and orexin neurons and its projections jointly target several brain regions involved in regulating depression, which provides anatomic evidence supporting coordinated PV/orexin actions within these brain regions.

RESUMEN: Existe una correlación significativa entre las funciones reguladoras del sistema de orexina y los síntomas depresivos. Las interneuronas de parvalbúmina (PV), el principal subtipo de interneuronas inhibidoras del ácido g-aminobutírico (GABA), también están implicadas en la regulación de conductas similares a la depresión. Para proporcionar varias líneas de evidencia con respecto a la conexión neuronal entre dos tipos de neuronas en los núcleos asociados a la depresión, se empleó una técnica de tinción inmunohistoquímica de doble marcación para revelar la superposición entre la interneurona de PV y la inmunorreactividad de la orexina en el cerebro del ratón. La corteza prefrontal medial (mPFC) está formada principalmente por la corteza cingulada, área 1 (Cg1), corteza prelímbica (PrL) y corteza infralímbica (IL), en las que las regiones contenían una superposición similar entre las fibras de orexina y los somas de las interneuronas PV y sus axones. En el prosencéfalo basal (BF), se observó superposición en el núcleo septal lateral, parte ventral (LSV), la superficie del núcleo accumbens (AcbSh), el núcleo del lecho de la estría terminal, división ventral (BSTV), núcleo pálido ventral (VP) y núcleo amigdaloide central (Ce). En el diencéfalo, además del área hipotalámica lateral (LH) y el núcleo hipotalámico dorsomedial (DM), en los que dos regiones contenían superposición entre pericario positivo para orexina con fibras e inmunorreactividad de PV, se observaron que diferentes densidades de fibras de orexina e interneuronas PV estaban estrechamente entremezcladas en el núcleo hipotalámico paraventricular (PVN), núcleo talámico paraventricular (PVT) y núcleo hipotalámico arqueado (Arc). En el tronco encefálico, las densidades de fibras de orexina e interneuronas PV entremezcladas fueron altas a bajas en el núcleo del rafe dorsal (DR), núcleo tegmental laterodorsal (LDTg), sustancia gris periacueductal (PAG), núcleo parabranquial lateral (LPB) y núcleo del rafe medio (MnR). La orexina estaba incrustada dentro de las fibras de interneuronas PV. Respecto al área tegmental ventral (VTA), se observó superposición entre somas PV con axones y fibras de orexina. Por lo tanto, las neuronas PV y orexina y, sus proyecciones, actúan conjuntamente sobre varias regiones cerebrales implicadas en la regulación de la depresión, lo que proporciona evidencia anatómica que respalda las acciones coordinadas PV/orexina dentro de estas regiones cerebrales.

SUMMARY: Currently, the bacteriophages have been applied as the phage therapy for using as a new technology for treating many cancers including lung cancer. This recent study explored the of a double cyclic form of arginine-glycine-aspartic acid with four cysteine residues (RGD) modified phage particles carrying the tumor necrosis factor therapeutic gene to suppress tumor growth. Adult male BALB/c nude mice were injected with A549 lung cancer cells to induce xenograft tumor growth. The control animals were subcutaneously injected with PBS while M13 and RGD-TNF animals were injected with M13 (control phage) and RGD-TNF phage, respectively. At the end of experiment. the tumor mass size was measured. Removed tumor masses and lung tissues of all groups were performed for immunohistochemistry and western blot analysis against Ki67, TNF-α, IL-2, and IFNγ antibodies. The results obviously showed that RGD-TNF phage could suppress the xenograft tumor growth. Additionally, the tissues of tumor mass and lung were localized with all cancer markers. It was revealed that RGD-TNF phage could significantly decrease the expressions of Ki67, TNF-α, and IL-2, but increase that of IFNγ in tumor mass. Only Ki67 and TNF-α expressions were decreased in lung tissue of mice treated with A549 lung cancer cells. It was concluded that RGD-TNF phage is a potential phage therapy for lung cancer treatment to reduce the tumor mass and to regulate the cancer markers.

RESUMEN: En la actualidad, los bacteriófagos se han aplicado como terapia fágica para su uso como una nueva tecnología para tratar muchos tipos de cáncer, incluido el cáncer de pulmón. Este estudio reciente intentó utilizar el fago modificado con factor de necrosis tumoral (TNF) y ácido aspártico-arginina-glicina (RGD) para suprimir el crecimiento de tumores pulmonares. Se inyectaron células de cáncer de pulmón A549 a ratones desnudos BALB/c machos adultos para inducir el crecimiento de tumores de xenoinjerto. A los animales control se les inyectó por vía subcutánea PBS, mientras que a los animales M13 y RGD-TNF se les inyectó M13 (fago de control) y fago RGD-TNF, respectivamente. Al final del experimento, se midió el tamaño de la masa tumoral. Las masas tumorales extirpadas y los tejidos pulmonares de todos los grupos se sometieron a análisis de inmunohistoquímica y transferencia Western contra anticuerpos Ki67, TNF-α, IL-2 e IFNγ. Los resultados mostraron obviamente que el fago RGD-TNF podía suprimir el crecimiento de tumores de xenoinjerto. Además, se localizaron los tejidos de la masa tumoral y del pulmón con todos los marcadores de cáncer. Se reveló que el fago RGD-TNF podía disminuir significativamente las expresiones de Ki67, TNF-α e IL- 2, pero aumentar la de IFNγ en la masa tumoral. Solo las expresiones de Ki67 y TNF-α disminuyeron en el tejido pulmonar de ratones tratados con células de cáncer de pulmón A549. Se concluyó que el fago RGD-TNF es una terapia de fagos potencial para el tratamiento del cáncer de pulmón para reducir la masa tumoral y regular los marcadores de cáncer.

SUMMARY: The current study aimed to demonstrate the physiological and histological effects of methotrexate (MTX) in laboratory mice's testes. 24 male laboratory mice, Mus musculus L., were used. The experimental mice were divided into three groups of equal number, with eight mice for each group. The first group of mice was injected with 0.1 ml of distilled water and adopted (as a control group), the second group was also injected with a low concentration of methotrexate (2 mg/kg), while the third group was injected with a high concentration of the drug (4 mg/kg). The mice were injected into the Intraperitoneal daily for 16 days. The results of the current study showed a significant decrease in sperm count at both doses (2,4 mg/kg) with a probability level of P <0.05 compared to the control group. The drug also caused a significant decrease in the number of normal sperm in mice treated with both doses, and an increase in the number of abnormalities of the sperm's head and tail. In addition, injecting males with the drug caused a significant reduction in the concentration of testosterone at both doses. The drug also had a clear effect on testicular tissue in general and the process spermatogenesis in particular. The results of the histological examination showed that the testicular tissue was affected in the treatment group compared with the control group, to varying degrees between the group treated with the low concentration and the high concentration. It has been observed that there are vacuoles in some seminiferous tubules, the appearance of degeneration and necrosis processes of germ cells, a decrease in the thickness of the germ mass, and a narrowing of the lumen of some seminiferous tubules. It was also observed that there was exfoliated, cytolysis, loss of germ cells, infiltration of inflammatory cells in some seminiferous tubules, and the appearance of amyloid between the seminiferous tubules, significantly in the group treated with the high concentration. The current study concluded that methotrexate causes severe damage to the testicles through a decrease in the number of sperm, distortions in their external appearance, a decrease in the level of testosterone, and a significant decrease in the process of spermatogenesis.

RESUMEN: El estudio tuvo como objetivo demostrar los efectos fisiológicos e histológicos del metotrexato (MTX) en los testículos de ratones de laboratorio. Se utilizaron 24 ratones macho, Mus musculus L. Los ratones se dividieron en tres grupos de ocho ratones. Al primer grupo de ratones - grupo control- se le inyectó 0,1 ml de agua destilada; al segundo grupo se le inyectó una concentración baja de metotrexato (2 mg/kg), mientras que al tercer grupo se le inyectó una concentración alta del fármaco (4 mg/kg). Los ratones fueron inyectados por vía intraperitoneal diariamente durante 16 días. Los resultados del estudio mostraron una disminución significativa en el recuento de espermatozoides en ambas dosis (2,4 mg/kg) con un nivel de probabilidad de P<0,05 en comparación con el grupo control. El fármaco provocó una disminución significativa en el número de espermatozoides normales en ratones tratados con ambas dosis, y un aumento en el número de anomalías de la cabeza y de la cola de los espermatozoides. Además, la inyección del fármaco provocó una reducción significativa en la concentración de testosterona en ambas dosis. El metotrexato también tuvo un claro efecto sobre el tejido testicular en general y en el proceso de espermatogénesis en particular. Los resultados del examen histológico mostraron que el tejido testicular se vio afectado en el grupo con tratamiento en comparación con el grupo control, en diversos grados entre el grupo tratado con la concentración baja y la concentración alta. Se observó que existían vacuolas en algunos túbulos seminíferos, la aparición de procesos de degeneración y necrosis de las células germinales, además de una disminución del grosor de la masa germinal y un estrechamiento del lumen de algunos túbulos seminíferos. También se observó que hubo exfoliación, citólisis, pérdida de células germinales, infiltración de células inflamatorias en algunos túbulos seminíferos y aparición de amiloide entre los túbulos seminíferos, significativamente mayor en el grupo tratado con concentración alta de metotrexato. Concluimos que el metotrexato causa daño severo a los testículos a través de una disminución en el número de espermatozoides, distorsiones en su apariencia externa, disminución en el nivel de testosterona y disminución significativa en el proceso de espermatogénesis.

SUMMARY: The rapid advancement of the Internet of Things (IoT) has transformed our lives by connecting objects and creating an intelligent environment that drives automation and massive data collection. IoT has overcome challenges through remote monitoring, robotics, and sensors, with powerful wireless technologies opening up possibilities in various fields, including anatomical techniques. The objective of this study is to demonstrate the feasibility and benefits of integrating IoT technology into the body maceration process by developing a low-cost, accessible, automated maceration control device compatible with theArduino IDE programming environment. Using an open-source NodeMCU system based on the ESP-12E chip, which employs the LUA programming language and is compatible with Arduino IDE, we incorporated a microSD card reader module for data storage, a digital temperature sensor (DS18B20), a clock module (DS3231), a magnetic stirrer, and an aquarium heater controlled by a digital thermostat with relay (W1209). To validate the device, we conducted maceration tests on C57BL mice, comparing two groups: Control (n=5; weight=17g) subjected to maceration in 4 liters of water at 10°C without agitation; Experimental (n=5; weight=17g) exposed to maceration in 4 liters of water at 35°C, with agitation at 1500 r/min and water flow renewal at a rate of 900 ml/h. Specimens were evaluated for their degree of maceration, cleaned, weighed, and photographed. The maceration time for the control and experi- mental groups was 730 hours and 60 hours, respectively. In the experimental group, no foul odors, damage, or bone demineralization were detected. The device cost was 60 USD, and programming through the Arduino IDE environment was straightforward. The focus on hardware contributed to accessibility and time savings. The system operated with a conventional power supply and required a water supply, making it adaptable to various configurations with greater capacity. Under this configuration, we effectively controlled the variables (temperature, agitation, and water flow). The NodeMCU-based bone maceration system improved the performance and adaptability of existing systems and increased accessibility by reducing costs, complexity, and foul odors.

RESUMEN: El rápido avance del Internet de las Cosas (IoT) ha transformado nuestras vidas al conectar objetos y crear un entorno inteligente que impulsa la automatización y la recolección masiva de datos. El IoT ha superado desafíos a través del monitoreo remoto, la robótica y los sensores, con tecnologías inalámbricas potentes que abren posibilidades en diversos campos, incluidas la anatomía y las técnicas anatómicas. El objetivo de este estudio fue demostrar la viabilidad y los beneficios de integrar la tecnología IoT en el proceso de maceración cadavérica mediante el desarrollo de un dispositivo de control de maceración automatizado, accesible y de bajo costo, compatible con el entorno de programación Arduino IDE. Usando un sistema NodeMCU de código abierto basado en el chip ESP-12E, que emplea el lenguaje de programación LUA y es compatible con Arduino IDE, incorporamos un módulo lector de tarjetas microSD para el almacenamiento de datos, un sensor de temperatura digital (DS18B20), un módulo de reloj (DS3231), un agitador magnético y un calentador de acuario controlado por un termostato digital con relé (W1209). Para validar el dispositivo, realizamos pruebas de maceración en ratones C57BL, comparando dos grupos: control (n=5; peso=17g) sometido a maceración en 4 litros de agua a 10°C sin agitación; experimental (n=5; peso=17g) expuesto a maceración en 4 litros de agua a 35°C, con agitación a 1500 r/min y renovación del flujo de agua a una velocidad de 900 ml/h. Los especímenes fueron evaluados según su grado de maceración, limpiados, pesados y fotografiados. El tiempo de maceración para los grupos control y experimental fue de 730 horas y 60 horas, respectivamente. En el grupo experimental no se detectaron malos olores, daños ni desmineralización de los huesos. El costo del dispositivo fue de 60 USD y la programación a través del entorno Arduino IDE fue sencilla. El enfoque en el hardware contribuyó a la accesibilidad y al ahorro de tiempo. El sistema operaba con una fuente de alimentación convencional y requería un suministro de agua, lo que lo hace adaptable a diversas configuraciones con mayor capacidad. Bajo esta configuración, controlamos eficazmente las variables (temperatura, agitación y flujo de agua). El sistema de maceración ósea basado en NodeMCU mejoró el rendimiento y la adaptabilidad de los sistemas existentes, y aumentó la accesibilidad al reducir los costos, la complejidad y los malos olores.

SUMMARY: To explore morphological evidence for neuronal circuits between adenosine A2A receptor (A2AR) neurons in the nucleus accumbens (NAc) and orexin neurons. The utilized adeno-associated virus (AAV) encoding humanized Renilla green fluorescent protein (hrGFP) as a tracer to visualize the expression of the A2AR neurons in the NAc and their axon distributions in orexin neurons. The Cre-dependent AAV was injected into the NAc in adenosine A2AR-Cre mice. Immunohistochemistry was then used to visualize hrGFP and their projections in orexin neurons. The data revealed that NAc A2AR neurons, mainly expressed in γ-aminobutyric acidergic (GABAergic) projection neurons, projected to the hypothalamus, with apparent contacts of hrGFP containing boutons onto orexin-immunoreactive (IR) soma and dendrites. We also observed strong staining of orexin-IR varicose terminals in the NAc, with apparent contacts of orexin-IR terminals onto A2AR neurons. Furthermore, in the NAc, orexin-IR varicosities contained vesicular glutamate transporter 2 (VGluT2) and synaptophysin (Syp). These data provide morphological evidence for exploring the function between NAc A2AR neurons and orexin neuron in the hypothalamus, particularly in regulating sleep processes.

RESUMEN: El objetivo de este trabajo fue explorar la evidencia morfológica de los circuitos neuronales entre las neuronas del receptor de adenosina A2A (A2AR) en el núcleo accumbens (NAc) y las neuronas de orexina. El virus adenoasociado (AAV) que codifica la proteína fluorescente verde Renilla humanizada (hrGFP) se utilizó como trazador para visualizar la expresión de las neuronas A2AR en la NAc y sus distribuciones de axones en las neuronas de orexina. El AAV dependiente de Cre se inyectó en la NAc en ratones adenosina A2AR-Cre. Luego se utilizó inmunohistoquímica para visualizar hrGFP y sus proyecciones en las neuronas de orexina. Los datos revelaron que las neuronas NAc A2AR, expresadas principalmente en neuronas de proyección acidérgicas γ-aminobutíricas (GABAérgicas), se proyectaban hacia el hipotálamo, con contactos aparentes de botones que contenían hrGFP en el soma y las dendritas inmunorreactivas con orexina (IR). También observamos una fuerte tinción de las terminales varicosas de orexina-IR en la NAc, con contactos aparentes de las terminales de orexina-IR en las neuronas A2AR. Además, en la NAc, las varicosidades de orexina-IR contenían transportador vesicular de glutamato 2 (VGluT2) y sinaptofisina (Syp). Estos datos proporcionan evidencia morfológica para explorar la función entre las neuronas NAc A2AR y la neurona orexina en el hipotálamo, particularmente en la regulación de los procesos del sueño.

Abstract Introduction: Fructose supplementation is recognized as a risk factor for metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease (MASLD), but its role in the progression to metabolic dysfunction-associated steatohepatitis (MASH) remains less understood. This study aimed to evaluate the effect of dietary fructose on hepatic lipid metabolism (SREBP-1c, FAS, CD36, PPAR-α, ACOX-1, and CAT-1) in a murine model of hepatic steatosis progression from MASLD to MASH, as characterized by a NAS score. Materials and Methods: Male C57BL/6 mice were fed for 20 weeks with one of the following diets: 1) control diet (CD; 10% fat, 20% protein, 70% carbohydrates); 2) CD+F (30% fructose w/v); 3) high-fat diet (HFD; 60% fat, 20% protein, 20% carbohydrates); and 4) HFD+F (30% fructose w/v). General parameters, liver histology, and expression (qPCR, immunohistochemistry) of lipid metabolism markers (SREBP-1c, FAS, CD36, PPAR-α, ACOX1, CAT-1) were evaluated. Results: Mice fed an HFD+F showed increased SREBP-1c nuclear translocation and mRNA expression of FAS and CD36, while mitochondrial β-oxidation of free fatty acids was impaired due to the inhibition of PPAR-α activity and ACOX1 mRNA levels. Conclusion: Fructose supplementation exerted a strong pro-lipogenic and antilipolytic effect on the liver of mice fed an HFD, leading to increased lipid accumulation, elevated activity, and expression of FAS and CD36, as well as impairment in mitochondrial β-oxidation of free fatty acids compared to CD-fed mice. These findings suggest that fructose-induced alterations in hepatic lipid metabolism may play a critical role in the progression from MASLD to MASH, and its impact may be influenced by the metabolic state.

Resumen Introducción: La suplementación con fructosa se reconoce como un factor de riesgo para la enfermedad hepática esteatótica asociada a la disfunción metabólica (MASLD), pero su papel en la progresión hacia la esteatohepatitis asociada a la disfunción metabólica (MASH) sigue siendo menos comprendido. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de la fructosa dietaria en el metabolismo lipídico hepático (SREBP-1c, FAS, CD36, PPAR-α, ACOX-1 y CAT-1) en un modelo murino de progresión de la esteatosis hepática de MASLD a MASH, caracterizado por un puntaje NAS. Materiales y métodos: Se alimentaron ratones machos C57BL/6 durante 20 semanas con una de las siguientes dietas: 1) dieta control (DC; 10% grasa, 20% proteína, 70% carbohidratos); 2) DC+F (30% fructosa p/v); 3) dieta alta en grasa (DAG; 60% grasa, 20% proteína, 20% carbohidratos); y 4) DAG+F (30% fructosa p/v). Se evaluaron parámetros generales, histología hepática y expresión (qPCR, inmunohistoquímica) de los marcadores del metabolismo lipídico (SREBP-1c, FAS, CD36, PPAR-α, ACOX1, CAT-1). Resultados: Los ratones alimentados con DAG+F mostraron un aumento en la translocación nuclear de SREBP-1c y la expresión de ARNm de FAS y CD36, mientras que la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos libres se vio afectada debido a la inhibición de la actividad de PPAR-α y los niveles de ARNm de ACOX1. Conclusión: La suplementación con fructosa ejerció un fuerte efecto pro-lipogénico y antilipolítico en el hígado de los ratones alimentados con DAG, lo que llevó a un aumento en la acumulación de lípidos, mayor actividad y expresión de FAS y CD36, así como una disminución en la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos libres en comparación con los ratones alimentados con DC. Estos hallazgos sugieren que las alteraciones en el metabolismo lipídico hepático inducidas por la fructosa pueden desempeñar un papel crítico en la progresión de MASLD a MASH y que su impacto podría depender del estado metabólico.

SUMMARY: Marein is a flavonoid compound that reduces blood glucose and lipids and has a protective effect in diabetes. However, the effect and mechanism(s) of marein on renal endothelial-mesenchymal transition in diabetic kidney disease (DKD) have not been elucidated. In this study, single-cell sequencing data on DKD were analyzed using a bioinformation method, and the data underwent reduced dimension clustering. It was found that endothelial cells could be divided into five subclusters. The developmental sequence of the subclusters was 0, 1, 4, 2, and 3, of which subcluster 3 had the most interstitial phenotype.The expression of mesenchymal marker protein:Vimentin(VIM), Fibronectin(FN1), and fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1) increased with the conversion of subclusters. In db/db mice aged 13-14 weeks, which develop DKD complications after 8-12 weeks of age, marein reduced blood levels of glucose, creatinine, and urea nitrogen, improved structural damage in kidney tissue, and reduced collagen deposition and the expression of FN1 and VIM. Marein also up-regulated autophagy marker:Light chain 3II/I(LC3II/I) and decreased FGFR1 expression in renal tissue. In an endothelial-mesenchymal transition model, a high glucose level induced a phenotypic change in human umbilical vein endothelial cells. Marein decreased endothelial cell migration, improved endothelial cell morphology, and decreased the expression of VIM and FN1. The use of the FGFR1 inhibitor, AZD4547, and autophagy inhibitor, 3-Methyladenine(3-MA), further demonstrated the inhibitory effect of marein on high glucose-induced endothelial-mesenchymal transition by reducing FGFR1 expression and up-regulating the autophagy marker protein, LC3II/I. In conclusion, this study suggests that marein has a protective effect on renal endothelial- mesenchymal transition in DKD, which may be mediated by inducing autophagy and down-regulating FGFR1 expression.

RESUMEN: La mareína es un compuesto flavonoide que reduce la glucosa y los lípidos en sangre y tiene un efecto protector en la diabetes. Sin embargo, no se han dilucidado el efecto y los mecanismos de la mareína sobre la transición endotelial- mesenquimatosa renal en la enfermedad renal diabética (ERD). En este estudio, los datos de secuenciación unicelular sobre DKD se analizaron utilizando un método de bioinformación y los datos se sometieron a una agrupación de dimensiones reducidas. Se descubrió que las células endoteliales podían dividirse en cinco subgrupos. La secuencia de desarrollo de los subgrupos fue 0, 1, 4, 2 y 3, de los cuales el subgrupo 3 tenía el fenotipo más intersticial. La expresión de la proteína marcadora mesenquimatosa: vimentina (VIM), fibronectina (FN1) y receptor del factor de crecimiento de fibroblastos. 1 (FGFR1) aumentó con la conversión de subgrupos. En ratones db/db de 13 a 14 semanas de edad, que desarrollan complicaciones de DKD después de las 8 a 12 semanas de edad, la mareína redujo los niveles sanguíneos de glucosa, creatinina y nitrógeno ureico, mejoró el daño estructural en el tejido renal y redujo la deposición y expresión de colágeno de FN1 y VIM. Marein también aumentó el marcador de autofagia: Cadena ligera 3II/I (LC3II/I) y disminuyó la expresión de FGFR1 en el tejido renal. En un modelo de transición endotelial-mesenquimal, un nivel alto de glucosa indujo un cambio fenotípico en las células endoteliales de la vena umbilical humana. Marein disminuyó la migración de células endoteliales, mejoró la morfología de las células endoteliales y disminuyó la expresión de VIM y FN1. El uso del inhibidor de FGFR1, AZD4547, y del inhibidor de la autofagia, 3-metiladenina (3-MA), demostró aún más el efecto inhibidor de la mareína en la transición endotelial-mesenquimal inducida por niveles altos de glucosa al reducir la expresión de FGFR1 y regular positivamente la proteína marcadora de autofagia. , LC3II/I. En conclusión, este estudio sugiere que la mareína tiene un efecto protector sobre la transición endotelial-mesenquimatosa renal en la ERC, que puede estar mediada por la inducción de autofagia y la regulación negativa de la expresión de FGFR1.

ABSTRACT Introduction: Myrciaria dubia known as “camu camu” is a fruit that grows in the Amazon and its main characteristic is its high content of vitamin C. Ascorbic acid has a protective role in spermatogenesis as it is a compound that has excellent reducing action. The purpose of this research was to evaluate in vivo the cytoprotective capacity of the aqueous extract of the fruit of Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh “camu-camu” against the mutagenic damage produced by the antineoplastic drug cyclophosphamide (CP) on the male germ line. Methodology: Mice (n= 60) were divided into five treatment groups: T1= negative control (without treatment); T2 ingested the aqueous extract (10mgkg-1), T3 ingested the aqueous extract (50mgkg-1), T4 ingested the aqueous extract (100mgkg-1); T5 is the positive control. All of them were injected with a single dose of CP (50 mgkg-1) intraperitoneally. Treatment with camu-camu continued for 45 days, then the mice were euthanized to determine sperm quality and the frequency of DNA damage using the Index protocol. Sperm DNA fragmentation - Halomax protocol. Results: The effect of camu-camu extract was observed in all trials (p< 0.05) compared to the negative control. Group T4, which was administered the highest concentration of the aqueous extract of the fruit, evidenced the cytoprotective effect of camu-camu (p< 0.05). Conclusion: The damaging effect on DNA due to the oxidative action of CP could be inhibited by the aqueous extract of the “camu camu” fruit.

RESUMEN Introduccion: Myrciaria dubia conocido como “camu camu” es una fruta que crece en la Amazonía y tiene como principal característica su alto contenido de vitamina C o ácido ascórbico, el cual tiene el rol de protección en la espermatogénesis por ser un compuesto con excelente acción reductora. El proposito de esta investigacion fue evaluar la capacidad citoprotectora in vivo del extracto acuoso del fruto de Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh “camu-camu” frente al daño mutagénico producido por el antineoplásico ciclofosfamida (CP) sobre la línea germinal masculina. Metodología: Se utilizaron ratones (n= 60) divididos en cinco grupos tratamiento: T1= control negativo (sin tratamientos); T2 ingirió el extracto acuoso (10mgkg-1), T3 ingirió el extracto acuoso (50mgkg-1), T4 ingirió el extracto acuoso (100mgkg-1); T5 es el control positivo (se le administró solamente CP). A todos se inyectaron una dosis única de CP (50 mgkg-1) vía intraperitoneal., El tratamiento con camu-camu continúo por 45 días, luego los ratones fueron eutanizados para determinar la calidad espermática y la frecuencia del daño al ADN mediante el protocolo de índice de fragmentación de ADN espermático - protocolo Halomax. Resultados: Se observó en todos los ensayos el efecto del extracto de camu-camu (p< 0,05) respecto al control. El grupo T4, el cual se administró la mayor concentración del extracto acuoso del fruto (100 mgkg-1), evidenció el mayor efecto citoprotector del camu-camu (p< 0,05). Conclusión: El efecto dañino al ADN por la acción oxidativa del CP podría estar siendo inhibido o modulado por el extracto acuoso del fruto de “camu camu”.

RESUMEN Introduccion: Myrciaria dubia conocido como “camu camu” es una fruta que crece en la Amazonía y tiene como principal característica su alto contenido de vitamina C o ácido ascórbico, el cual tiene el rol de protección en la espermatogénesis por ser un compuesto con excelente acción reductora. El proposito de esta investigacion fue evaluar la capacidad citoprotectora in vivo del extracto acuoso del fruto de Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh “camu-camu” frente al daño mutagénico producido por el antineoplásico ciclofosfamida (CP) sobre la línea germinal masculina. Metodología: Se utilizaron ratones (n= 60) divididos en cinco grupos tratamiento: T1= control negativo (sin tratamientos); T2 ingirió el extracto acuoso (10mgkg-1), T3 ingirió el extracto acuoso (50mgkg-1), T4 ingirió el extracto acuoso (100mgkg-1); T5 es el control positivo (se le administró solamente CP). A todos se inyectaron una dosis única de CP (50 mgkg-1) vía intraperitoneal., El tratamiento con camu-camu continúo por 45 días, luego los ratones fueron eutanizados para determinar la calidad espermática y la frecuencia del daño al ADN mediante el protocolo de índice de fragmentación de ADN espermático - protocolo Halomax. Resultados: Se observó en todos los ensayos el efecto del extracto de camu-camu (p< 0,05) respecto al control. El grupo T4, el cual se administró la mayor concentración del extracto acuoso del fruto (100 mgkg-1), evidenció el mayor efecto citoprotector del camu-camu (p< 0,05). Conclusión: El efecto dañino al ADN por la acción oxidativa del CP podría estar siendo inhibido o modulado por el extracto acuoso del fruto de “camu camu”.

ABSTRACT Introduction: Myrciaria dubia known as “camu camu” is a fruit that grows in the Amazon and its main characteristic is its high content of vitamin C. Ascorbic acid has a protective role in spermatogenesis as it is a compound that has excellent reducing action. The purpose of this research was to evaluate in vivo the cytoprotective capacity of the aqueous extract of the fruit of Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh “camu-camu” against the mutagenic damage produced by the antineoplastic drug cyclophosphamide (CP) on the male germ line. Methodology: Mice (n= 60) were divided into five treatment groups: T1= negative control (without treatment); T2 ingested the aqueous extract (10mgkg-1), T3 ingested the aqueous extract (50mgkg-1), T4 ingested the aqueous extract (100mgkg-1); T5 is the positive control. All of them were injected with a single dose of CP (50 mgkg-1) intraperitoneally. Treatment with camu-camu continued for 45 days, then the mice were euthanized to determine sperm quality and the frequency of DNA damage using the Index protocol. Sperm DNA fragmentation - Halomax protocol. Results: The effect of camu-camu extract was observed in all trials (p< 0.05) compared to the negative control. Group T4, which was administered the highest concentration of the aqueous extract of the fruit, evidenced the cytoprotective effect of camu-camu (p< 0.05). Conclusion: The damaging effect on DNA due to the oxidative action of CP could be inhibited by the aqueous extract of the “camu camu” fruit.

Resumen Objetivo: Analizar la influencia de las hormonas durante la enfermedad de Chagas. Métodos: Se separaron grupos de ratones macho y hembras BALB/c, todos infectados con T. cruzi (cepa NINOA), 4 grupos experimentales de machos (Sham, orquidectamizados, orquidectimezados y suplementados con estradiol, orquidectamizaos y suplementados con testosterona). 4 grupos experimentales de hembras (oforectomizadas, oforectomizadas y suplementadas con estradiol, oforectomizadas y suplementadas con testosterona y sham), and y dos grupos control para cada sexo (sin infección e infectados intraperitonealmente con T. cruzi (cepa NINOA). Los datos clínicos fueron registrados diariamente, la parasitemia fue evaluada durante toda la infección utilizando una cámara de Neubauer y el análisis histopatológico del corazón fue realizada con la técnica de inclusión en parafina. Para el análisis de las curvas de parasitemia y el área bajo la curva, se realizó una prueba de ANOVA de dos vías, p < 0.05 fueron considerados estadísticamente diferentes. Resultados: Las mayores tasas de mortalidad, cardiomegalia, hepatomegalia y mayor infiltrado inflamatorio, se encontró en los ratones con una mayor concentración de testosterona. En contraste los ratones con mayor concentración de estradiol presentaron paresia, postración edema y necrosis. Conclusiones: Nuestros resultados ponen en manifiesto que la testosterona incrementa la severidad del curso de la enfermedad de Chagas, mientras que el estradiol tuvo el efecto opuesto. Este trabajo mejora el entendimiento del rol que juegan las hormonas sexuales en esta infección para contribuir en un mejor manejo de la enfermedad de Chagas.

Abstract Objective: Analyze sex hormone's influence during Chagas disease. Methods: Male and female BALB/c mice were divided into six groups, four experimental (sham, orchiectomized, orchiectomized and supplemented with estradiol, orchiectomized supplemented with testosterone, oophorectomized, oophorectomized and supplemented with estradiol, and oophorectomized and supplemented with testosterone), and two control (healthy and intraperitoneally with T. cruzi strain NINOA infected). Clinical data were recorded daily, parasitemia was evaluated using a Neubauer chamber during the infection, and heart histopathological analysis was performed using the paraffin embedding technique. To analyze parasitemia curves and the area under the parametric curves, two-way ANOVA test was performed to correlate groups' data. P-values < 0.05 were considered statistically significant. Results: Higher mortality rates, cardiomegaly, hepatomegaly, ascites, edema, higher parasitemia levels, more amastigote nests, and more severe inflammatory infiltrate were found in higher testosterone concentration mice, whereas in higher estradiol concentration groups, paresia, prostration, edema, and necrosis were found. Conclusions: Our results showed that testosterone increased infection severity, whereas estradiol had the opposite effect. This research improves the understanding of sex hormones´ infuence upon this infection to contribute with the handling of Chagas´ disease.

SUMMARY: Both the academic and popular worlds have paid close attention to the link between exercise and cognitive performance. It is increasingly important to understand the numerous mechanisms by which exercise might influence cognitive abilities in view of the continuous societal issues caused by aging populations and the prevalence of disorders associated to cognitive decline. A rising amount of evidence showing a favorable association between physical activity and cognitive well-being serves as the foundation for the justification for studying the effects of exercise on cognitive function and learning ability. The study employed an 8-week treadmill based on exercise on male adults C57BL/6 mice. The exercise group were engaged in 5 sessions a week gradually increasing the intensity of the protocol by 5 % each week. The Mice cognitive assessments were done using Morris Water Maze and Novel Object Recognition tests. The long term-impact on learning ability were further assessed through immmohistochemistry and molecular analysis of the hippocampal and prefrontal cortex tissues of the animals’ brain tissues. The findings showed improved spatial learning abilities, recognition memory, and heighted synaptic plasticity indicated by elevated synaptic makers. The study underscores the role of long-term aerobic exercise in augmenting cognitive performance. It not only contributes to the understanding of the interplay between neuroplasticity and cognitive benefits but also the growing body of research on the impact of exercise on cognitive function.

RESUMEN: Tanto el mundo académico como el popular han prestado mucha atención al vínculo entre el ejercicio y el rendimiento cognitivo. Es cada vez más importante comprender los numerosos mecanismos por los cuales el ejercicio podría influir en las capacidades cognitivas en vista de los continuos problemas sociales causados por el envejecimiento de la población y la prevalencia de trastornos asociados al deterioro cognitivo. Una cantidad cada vez mayor de evidencia que muestra una asociación favorable entre la actividad física y el bienestar cognitivo sirve como base para justificar el estudio de los efectos del ejercicio sobre la función cognitiva y la capacidad de aprendizaje. El estudio se realizó en ratones machos adultos C57BL/6 utilizándose en los ejercicios una cinta rodante durante 8 semanas. El grupo de ejercicio realizó 5 sesiones por semana aumentando gradualmente la intensidad del protocolo en un 5 % cada semana. Las evaluaciones cognitivas de los ratones se realizaron utilizando las pruebas Morris Water Maze y Novel Object Recognition. El impacto a largo plazo en la capacidad de aprendizaje se evaluó mediante inmunohistoquímica y análisis molecular de los tejidos del hipocampo y la corteza prefrontal de los tejidos cerebrales de los animales. Los hallazgos mostraron mejoras en las habilidades de aprendizaje espacial, la memoria de reconocimiento y una mayor plasticidad sináptica indicada por unos creadores sinápticos elevados. El estudio subraya el papel del ejercicio aeróbico a largo plazo para aumentar el rendimiento cognitivo. No sólo contribuye a la comprensión de la interacción entre la neuroplasticidad y los beneficios cognitivos, sino también al creciente conjunto de investigaciones sobre el impacto del ejercicio en la función cognitiva.

SUMMARY: Prior research on post-COVID-19 or long COVID primarily focused on the presence of SARS-CoV-2 mostly in symptomatic patients. This study aimed to investigate the persistence of SARS-CoV-2 after 1 year of asymptomatic or mild COVID-19. SARS-CoV-2 infected and control K18-hACE2 transgenic mice (n=25) were studied. Moderate and severe symptomatic subjects were sacrificed after eight days, while mild or asymptomatic mice were kept in BSL-III for twelve months. Analyses included general condition, histochemistry, immunohistochemistry, transmission electron microscopy, and qRT-PCR. Lungs from the twelve-month group showed thickening of alveolar walls, with some lungs exhibiting the recruitment of inflammatory cells, the presence of SARS- CoV-2 mRNA, immunopositivity for the SARS-CoV-2 spike protein, and TEM showed viruses (60-125 nm) within vesicles, indicating continued replication. Certain lung samples showed persistent SARS-CoV-2 presence in Club cells, endothelial cells, and macrophages. The eight-day group exhibited viral interstitial pneumonitis, SARS-CoV-2 immunopositivity, and mRNA. The eight-day hearts displayed viral mRNA, while the twelve-month hearts tested negative. Some asymptomatic twelve-month subjects presented reduced surfactant, basal membrane thickening, fibrosis, and mild autonomic nerve degeneration. In this study conducted on mice, findings indicate the potential for chronic persistence of SARS-CoV-2 in the lungs one year post initial mild or asymptomatic infection, which could suggest the possibility of recurrent episodes in similar human conditions. The observed thickening of alveolar walls and potential fibrotic areas in these mice may imply an increased risk of post-COVID fibrosis in humans. Furthermore, the presence of SARS-CoV-2-positive inflammatory cells in some asymptomatic murine cases could herald a progression toward ongoing inflammation and chronic lung disease in humans. Therefore, the necessity for further studies in human subjects and vigilant monitoring of high-risk human populations is underscored.

RESUMEN: Investigaciones anteriores sobre COVID-19 o COVID prolongado se centraron principalmente en la presencia de SARS-CoV-2 principalmente en pacientes sintomáticos. Este estudio tuvo como objetivo investigar la persistencia del SARS-CoV-2 después de 1 año de COVID-19 asintomático o leve. Se estudiaron ratones transgénicos K18-hACE2 infectados con SARS-CoV-2 y de control (n=25). Los animales con síntomas moderados y graves se sacrificaron después de ocho días, mientras que los ratones con síntomas leves o asintomáticos se mantuvieron en BSL-III durante doce meses. Los análisis incluyeron estado general, histoquímica, inmunohistoquímica, microscopía electrónica de transmisión y qRT- PCR. Los pulmones del grupo de doce meses mostraron engrosamiento de las paredes alveolares, y algunos pulmones exhibieron reclutamiento de células inflamatorias, presencia de ARNm del SARS-CoV-2, inmunopositividad para la proteína de la espícula del SARS-CoV-2 y TEM mostró virus (60 -125 nm) dentro de las vesículas, lo que indica una replicación continua. Ciertas muestras de pulmón mostraron una presencia persistente de SARS- CoV-2 en exocrinocitos bronquiolares, células endoteliales y macrófagos. El grupo de ocho días presentó neumonitis intersticial viral, inmunopositividad al SARS-CoV-2 y ARNm. Los corazones de ocho días mostraron ARNm viral, mientras que los corazones de doce meses dieron negativo. Algunos animales asintomáticos de doce meses presentaron disminución del surfactante, engrosamiento de la membrana basal, fibrosis y degeneración leve del nervio autónomo. En este estudio realizado en ratones, los hallazgos indican la posibilidad de persistencia crónica del SARS-CoV-2 en los pulmones un año después de la infección inicial leve o asintomática, lo que podría sugerir la posibilidad de episodios recurrentes en condiciones humanas similares. El engrosamiento observado de las paredes alveolares y las posibles áreas fibróticas en estos ratones puede implicar un mayor riesgo de fibrosis post-COVID en humanos. Además, la presencia de células inflamatorias positivas para SARS- CoV-2 en algunos casos murinos asintomáticos podría presagiar una progresión hacia una inflamación continua y una enfermedad pulmonar crónica en humanos. Por lo tanto, se subraya la necesidad de realizar más estudios en seres humanos y realizar un seguimiento atento de las poblaciones humanas de alto riesgo.

SUMMARY: Hypoxic preconditioning is known to induce neuroprotection, but its effects and pathways in chronic brain pathology still unknown. The aim was to establish an involvement of a7 subunit of nicotinic acetylcholine receptors (a7nAchRs), and sirtuins of 1 (SIRT1) and 3 (SIRT3) types in the effects of hypoxic hypobaric preconditioning on brain damage in mice with chronic cerebral hypoperfusion caused by the left common carotid artery occlusion. The male C57/6j (C57, wild type) and a7nAchRs(-/-) mice were divided to six experimental groups (10 mice per group): sham-operated C57, C57 with chronic cerebral hypoperfusion, C57 with hypoxic hypobaric preconditioning and chronic cerebral hypoperfusion, sham-operated a7nAchRs(-/-) mice, a7nAchRs(-/-) with chronic cerebral hypoperfusion, a7nAchRs(-/-) with hypoxic hypobaric preconditioning and chronic cerebral hypoperfusion. For preconditioning, mice were exposed to hypoxia by “lifting” in barochamber to simulated altitude of 5600 m a.s.l. for 1 h/day on 3 consecutive days before surgical manipulation. Expressions of SIRT1, SIRT3 in brain tissue, and histopathological changes of the hippocampi were examined. It was shown that 8-week chronic hypoperfusion of the brain, caused by unilateral occlusion of the common carotid artery, was accompanied by injury to the neurons of the hippocampi of both hemispheres, which was more pronounced on the side of the occlusion. This damage, as well as the mechanisms of neuroprotection induced by hypoxic preconditioning, were maintained for at least 8 weeks by mechanisms mediated through a7nAChRs. Deficite of a7nAChRs was accompanied with reduction of neuronal damage caused CCH in 8 weeks, as well as preconditioning effects, and lead to compensatory activation of regulatory and protective mechanisms mediated by SIRT1, in normal conditions and in CCH. In wild-type (C57) mice, protective mechanisms in CCH were realized to a greater extent by increased expression of SIRT3 in both hemispheres of the brain.

RESUMEN: Se sabe que el precondicionamiento hipóxico induce neuroprotección, pero aún se desconocen sus efectos y vías en la patología cerebral crónica. El objetivo fue establecer la participación de la subunidad a7 de los receptores nicotínicos de acetilcolina (a7nAchR) y las sirtuinas de tipo 1 (SIRT1) y 3 (SIRT3) en los efectos del precondicionamiento hipóxico hipobárico sobre el daño cerebral en ratones con hipoperfusión cerebral crónica causada por la oclusión de la arteria carótida común izquierda. Los ratones macho C57/6j (C57, tipo salvaje) y a7nAchRs(-/-) se dividieron en seis grupos experimentales (10 ratones por grupo): C57 con operación simulada, C57 con hipoperfusión cerebral crónica, C57 con precondicionamiento hipobárico hipóxico y crónica. hipoperfusión cerebral, ratones a7nAchRs(-/-) operados de forma simulada, a7nAchRs(-/-) con hipoperfusión cerebral crónica, a7nAchRs(-/-) con precondicionamiento hipobárico hipóxico e hipoperfusión cerebral crónica. Para el preacondicionamiento, los ratones fueron expuestos a hipoxia "levantándolos" en una cámara de barro a una altitud simulada de 5600 m s.n.m. durante 1 h/día durante 3 días consecutivos antes de la manipulación quirúrgica. Se examinaron las expresiones de SIRT1, SIRT3 en tejido cerebral y los cambios histopatológicos de los hipocampos. Se demostró que la hipoperfusión cerebral crónica de 8 semanas, causada por la oclusión unilateral de la arteria carótida común, se acompañaba de lesión de las neuronas del hipocampo de ambos hemisferios y que era más pronunciada en el lado de la oclusión. Este daño, así como los mecanismos de neuroprotección inducidos por el precondicionamiento hipóxico, se mantuvieron durante al menos 8 semanas mediante mecanismos mediados por a7nAChR. El déficit de a7nAChR se acompañó de una reducción del daño neuronal causado por CCH en 8 semanas, así como de efectos de precondicionamiento, y condujo a una activación compensatoria de mecanismos reguladores y protectores mediados por SIRT1, en condiciones normales y en CCH. En ratones de tipo salvaje (C57), los mecanismos de protección en CCH se realizaron en mayor medida mediante una mayor expresión de SIRT3 en ambos hemisfe- rios del cerebro.