Resumen El objetivo del presente artículo es presentar el análisis de costos de producción de un embrión por la técnica de producción in-vitro de embriones (PIVE), y lo que esta conlleva hasta la transferencia del embrión, considerando la medición de tiempos de las actividades que comprenden los procesos del programa de transferencia de embriones, en la región del Eje Cafetero de Colombia. Partiendo de una investigación cualitativa, con un enfoque descriptivo exploratorio y correlacional; se aspiraron 16 donadoras de la raza Gyr, sin tratamiento hormonal, se transfirieron 47 receptoras y se midieron los tiempos empleados en las actividades del proceso de transferencia del embrión, además los costos de producción se calcularon con un promedio de 4,8 embriones transferibles por donadora y con 2 sesiones de aspiración folicular por mes. El costo de producción del embrión transferido y la confirmación de la preñez en la receptora se da a los 90 días de gestación; para el productor el mayor costo del programa es el mantenimiento de las receptoras hasta lograr su preñez; lo cual es el factor económico más importante, contrario a lo que sucede en los esquemas de superovulación, en los cuales el mayor costo lo representa la donadora.

Abstract The objective of this article is to present the cost analysis of the production of an embryo by follicular oocyte aspiration technique, in vitro fertilization and embryo transfer, considering the time measurement of the activities that comprise the processes of the embryo transfer program in the coffee triangle of Colombia. Based on qualitative research, with a descriptive, exploratory and correlational approach, 16 Gyr breed donors, without hormone treatment, were aspired, 47 bovine recipients were transferred, and the times used in the activities, the times of the embryo transfer process were measured, besides the production costs were calculated with an average of 4.8 transferable embryos per donor and with 2 ovum pick up sessions by month per donor. The production cost of the embryo transferred and confirmed is given at 90 days of pregnancy. For the producer, the major cost of the program is the maintenance of the recipients until pregnancy is achieved, which is the most important economic factor, contrary to what happens in superovulation schemes, in which the highest cost is represented by the donor.

Abstract The aim of this study was to compare embryo production efficiency in Flemish and Holstein donor females using ovum pick-up and in vitro fertilization (OPU-IVF) or in vivo production (superovulation; SOV) procedures. The study was conducted using a split-plot design, with eight Flemish and eight Holstein non-lactating cycling females. Females were subjected to ten weekly OPU/IVF sessions and/or two SOV/embryo collections sessions at a 63-day interval, for a total of 160 OPU-IVF and 32 SOV sessions. Mean numbers of follicles and corpora lutea, and cumulus-oocyte complex (COC) recovery rates were similar between breeds after the OPU and SOV sessions. However, Flemish donors yielded better quality grade II COCs (301, 41.9%) than Holstein females (609, and 202, 33.1%). Also, cleavage and blastocyst rates, and the total number and the mean number of viable embryos obtained after OPU-IVF were higher in Flemish (49.6% and 11.8%, and 63 and 11.8 per donor, respectively) than in Holstein (32.8% and 7.2%, and 34 and 7.2 per donor, respectively) females. Flemish females were also more efficient in yielding viable embryos after SOV (111, 7.3 per donor) than Holstein (48, 3.3 per donor) females. Overall, Flemish donor females had better responses to OPU-IVF or SOV procedures than Holstein counterparts. Irrespective of the breeds, SOV procedures were more efficient than OPU-IVF in yielding more viable embryos, under the conditions of this study. Both reproductive procedures were useful tools for the genetic conservation of the Flemish cattle breed in Southern Brazil. pickup pick up OPUIVF IVF (OPU-IVF superovulation (superovulation splitplot split plot design nonlactating non lactating andor SOVembryo 63day day interval 16 3 lutea cumulusoocyte cumulus oocyte COC (COC However 301, 301 (301 41.9% 419 41 9 609, 609 (609 202 33.1%. 331 33.1% . 33 1 33.1%) Also 49.6% 496 49 6 (49.6 118 11 8 11.8% 11. respectively 32.8% 328 (32.8 72 7 2 7.2% 7. 111, 111 (111 73 48, 48 (48 3. Overall counterparts Brazil 30 (30 41.9 4 60 (60 20 33.1 49.6 (49. 32.8 (32. (11 (4 (3 41. (6 33. 49. (49 32. (32 (1 (

ABSTRACT Ovarian Hyperstimulation Syndrome (OHSS) is uncommon among oocyte donors during in vitro fertilization (IVF) procedure and is rarely associated with death. We report a case of a 23-year-old oocyte donor who suddenly died on the operation table during oocyte retrieval. She had no risk factors in her menstrual history, laboratory, or clinical parameters. The antagonist cycle, triggered with the GnRH agonist protocol, was carried out. The cause of death at autopsy was attributed to respiratory failure due to acute massive pulmonary edema, which developed due to the complication of OHSS. Only a few autopsy cases associated with OHSS have been published, but, as far as we know, no clinical or autopsy cases of sudden death caused by OHSS have been reported.

RESUMO O objetivo foi avaliar a produção in vitro de embriões bovinos a partir de doadoras zebuína e taurina. Os complexos cumulus oócitos (COC’s) foram obtidos de 167 doadoras Bos taurus e 161 Bos indicus, por meio de Ovum pick-up. Os COC’s foram classificados quanto à qualidade morfológica, maturados em incubadora por 22 a 24h em meio de maturação, e encaminhados à fertilização entre 18 e 22h. Os zigotos foram transferidos para meio de cultivo, onde permaneceram durante sete dias. Os embriões foram classificados em mórula (MO), blastocisto inicial (BI), blastocisto (BL) e blastocisto expandido (BX), envasados em palhetas contendo meio de cultivo, e inovulados em receptoras sincronizadas. Após 30 e 45 dias da inovulação, realizou-se o diagnóstico de gestação. Os animais Bos indicus apresentaram maior produção oocitária (n = 2556) em comparação aos Bos taurus (n = 1903) (P = 0,008). Os COCs das doadoras zebu apresentaram melhor qualidade morfológica do que das doadoras taurina (n = 689 vs. 444 para COCs grau I, P < 0,0001; n = 681 vs. 509 para COCs grau II, P = 0,010, para doadoras zebu e taurina, respectivamente). Quanto à produção de embriões, houve diferença nas porcentagens obtidas de MO (0,44% zebuínas e 6,42% taurinas, P = 0,017), BL (14,18% zebuínas e 3,74% taurinas, P < 0,0001) e BX (81,43% zebuínas e 75,13% taurinas, P < 0,0001). Não foi observado diferença para BI e taxa de prenhez (P > 0,05). Os animais Bos indicus apresentaram maior recuperação oocitária e maior número de oócitos viáveis em comparação às vacas Bos taurus, como também, maior produção de embriões viáveis.

ABSTRACT In this study, the in vitro production of bovine embryos from zebu and taurine donors was compared. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were obtained from 167 Bos taurus and 161 Bos indicus donors by ovum pick-up. COCs were classified based on their morphological quality, matured in incubators for 22 to 24 h in maturation medium, and then fertilized for 18 to 22 h. The zygotes were transferred to the culture medium for seven days. The embryos were classified as morula (OM), initial blastocyst (BI), blastocyst (BL), and expanded blastocyst (BX), before being transferred to synchronized recipient cows. Pregnancy was diagnosed 30-45 days post-transfer. The Bos indicus donors had a higher oocyte yield (n = 2556) than Bos taurus donors (n = 1903) (P = 0.008). The COCs from zebu donors had a better morphological quality than those from taurine donors (n = 689 vs. 444 for grade 1 COC, P < 0.0001; n = 681 vs. 509 for grade 2 COC, P = 0.010, for zebu and taurine donors, respectively). There were differences in embryo production percentages obtained from OM (0.44% from zebu and 6.42% from taurine, P = 0.017), BL (14.18% from zebu and 3.74% from taurine, P < 0.0001), and BX (81.43% from zebu and 75.13% from taurine, P < 0.0001). No significant difference was observed for embryo production from BI and pregnancy rate (P > 0.05). The Bos indicus cows showed greater oocyte recovery, number of viable oocytes, and production of viable embryos than the Bos taurus cows.

Abstract Transvaginal follicular aspiration technique together with in vitro embryo production are the biotechnological alternatives currently available to support genetic improvement breeding programs in buffalo species. However, aspects related to animal management, lack of knowledge of the metabolic needs and biochemical peculiarities of gametes and embryos, as well as the reproductive physiology characteristics have hampered progress in the results. Despite the low availability of good quality oocytes collected after OPU in donors as a physiological characteristic of buffalo species, high rates of oocyte maturation, modest embryo cleavage, blastocyst production and pregnancy rates after transvaginal embryo transfer in recipients could be obtained in buffalo in vitro embryo production programs. The results of implementing an in vitro embryo production program in buffaloes in the northern region of Pará state, Brazil, and results published by other groups demonstrate the feasibility of implementing this biotechnology in the routine of breeding programs. Nevertheless, in order to achieve better and consistent results, it is necessary to deepen the knowledge on the peculiarities of reproductive biology in this specie. Selection of donor animals based on ovarian size and ovarian follicular reserve and on the rate of blastocyst production is presented as an effective alternative to increase the efficiency of the in vitro embryo production technique applied to the buffalo species.

RESUMO: Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.

ABSTRACT Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P< 0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.

Resumo A sincronia espacial e temporal e a compatibilidade entre o oócito receptor e o núcleo celular doador são necessárias para o processo de clonagem de embriões a fim de permitir a reprogramação nuclear e o desenvolvimento embrionário precoce. O objetivo do presente estudo foi avaliar três métodos de sincronização do ciclo celular em uma cultura primária de fibroblastos bovinos durante 24, 48 ou 72 h. Estes fibroblastos foram utilizados como doadores nucleares para avaliar o seu potencial de desenvolvimento in vitro e a qualidade dos embriões produzidos por meio da técnica de Handmade cloning (HMC). Não foram encontradas diferenças entre os métodos utilizados para a sincronização de fibroblastos em G0 / G1 (p> 0,05). Produção de clones de fibroblastos nos quatro grupos - sem tratamento a 0 h e com restrição de soro RS, alta confluência celular ACC e RS + ACC às 24 h - resultou em altas taxas de clivagem que não foram diferentes. As taxas de produção de embriões foram de 37,9%, 29,5% e 30,9% nos grupos 0h, RS24h e RS + ACC24h, respectivamente, e 19,3% no grupo ACC, que foi significativamente diferente dos outros três (p <0,05). Não houve diferenças no parâmetro de qualidade entre os clones produzidos com fibroblastos submetidos à sincronização diferente. Finalmente, quando a produção geral de clones foi comparada versus partenotos e embriões de FIV, a única diferença foi entre clones e embriões partenogênicos com zona pelúcida (30,2% vs 38,6%). O número de blastômeros dos blastocitos produzidos através da FIV foi significativamente maior do que os de embriões ativados partenogeneticamente e de clones (117, 80, 75,9 e 67,1, respectivamente). A avaliação de três métodos de sincronização em diferentes pontos de tempo não demonstrou um aumento na porcentagem de fibroblastos nas fases G0/G1 do ciclo celular. No entanto, obteve-se boa qualidade e altas taxas de clonagem, sugerindo que nem sempre é necessário submeter as células a quaisquer tratamentos de sincronização, uma vez que renderiam resultados de clonagem igualmente bons.

Abstract Spatial and temporal synchrony and compatibility between the receptor oocyte and the donor cell nucleus are necessary for the process of embryo cloning to allow nuclear reprogramming and early embryonic development. The objective of the present study was to evaluate three cell cycle synchronization methods on a primary bovine fibroblast culture for 24, 48, or 72 h. These fibroblasts were used as nuclear donors to evaluate their in vitro developmental potential and the quality of the embryos produced through handmade cloning (HMC). No differences were found between the methods used for fibroblast synchronization in G0/G1 (p > 0.05). Production of clones from fibroblasts in four groups- no treatment at 0 h and using serum restriction SR, high culture confluence HCC, and SR+HCC at 24 h- resulted in high cleavage rates that were not different. Embryo production rates were 37.9%, 29.5%, and 30.9% in the 0h, SR24h, and SR+HHC24h groups, respectively, and 19.3% in the HCC group, which was significantly different from the other three (p < 0.05). There were no differences in the quality parameter among the clones produced with fibroblasts subjected to the different synchronization. Finally, when overall clone production was compared versus parthenotes and IVF embryos, the only difference was between clones and parthenogenetic embryos with zona pellucida (30.2% vs 38.6%). The number of blastomeres from the blastocytes produced through IVF was significantly greater than those from embryos activated parthenogenetically and from clones (117, 80, 75.9, and 67.1, respectively). The evaluation of three synchronization methods at different time points did not demonstrate an increase in the percentage of fibroblasts in the G0/G1 phases of the cell cycle; however, good quality and high cloning rates were obtained, suggesting that it is not always necessary to subject the cells to any synchronization treatments, as they would yield equally good cloning results.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da doadora, estação do ano, do touro e do tipo de sêmen, na produção in vitro de embriões da raça Sindi (Bos indicus). Para isso, avaliaram-se 434 sessões de aspiração folicular in vivo (OPU), realizadas em 152 doadoras, com a utilização de sêmen sexado e não sexado de 22 touros. Analisaram-se as seguintes variáveis: doadora; idade da doadora; estação do ano; touro; tipo de sêmen; oócitos recuperados; viáveis e degenerados; e as taxas de clivagem e de blastocistos. Observaram-se efeitos da doadora e do touro sobre os oócitos recuperados, viáveis e degenerados e sobre a taxa de blastocisto. O ano foi dividido em estações chuvosa, de outubro a março, e seca, de abril a setembro. Na estação chuvosa, a proporção de oócitos viáveis aumentou, enquanto a de degenerados diminuiu. As doadoras com menos de seis anos tiveram maior proporção de oócitos viáveis e menor, de degenerados. O sêmen não sexado obteve as melhores taxas de clivagem e de blastocistos. Doadoras de até seis anos apresentam a maior proporção de oócitos viáveis, e o maior número de oócitos viáveis é produzido na estação chuvosa. O sêmen não sexado resulta em melhores taxas de clivagem e de blastocistos.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the effects of donor, season of the year, sire, and type of semen on in vitro embryo production of the Sindhi breed (Bos indicus). To this end, 434 in vivo ovum pick up (OPU) sessions, performed in 152 oocyte donors, were evaluated using sex-sorted or unsorted semen from 22 sires. The following variables were analyzed: donor; age of the donor; season of the year; sire; type of semen; recovered, viable, and degenerated oocytes; and cleavage and blastocyst rates. The effects of the donor and sire were observed on recovered, viable, and degenerated oocytes, and on blastocyst rates. The year was split into rainy season, from October to March, and dry season, from April to September. In the rainy season, the proportion of viable oocytes increased, while the proportion of the degenerated ones reduced. Donors with less than six years of age had a higher proportion of viable oocytes and a lower proportion of degenerated ones. Unsorted semen obtained the best cleavage and blastocyst rates. Donors with up to six years of age show the greatest proportion of viable oocytes, and the greatest number of viable oocytes is produced during the rainy season. Unsorted semen shows the best rates for cleavage and blastocysts.

Turner syndrome is a chromosome aberration with complete or partial loss of one of the sexual chromosomes. Classical characteristics are short stature and ovarian failure due to dysgenesia. Oocyte donation has made possible gestation in Turner's patients but resulting in high maternal mortality due to rupture of the aorta or hypertensive disorders. The case of a Turner syndrome patient resulting in multiple pregnancy in a vitrified oocyte donor program is presented.

El síndrome del Turner es una aberración cromosómica con pérdida total o parcial de uno de los dos cromosomas sexuales. La característica clásica es la baja estatura y la insuficiencia ovárica debido a la disgenesia ovárica. La donación de ovocitos ha hecho posible que pacientes con ST puedan gestar, pero con alta mortalidad materna por rotura de la arteria aorta o por desórdenes hipertensivos. Se da a conocer el embarazo múltiple de un paciente con ST en un programa de donación de ovocitos vitrificados.

Resumo: Para estudar os fatores anatomofisiológicos que interferem na qualidade de complexos cumulus-oócitos (CCOs) bovinos, foram obtidas 396 ovários após abate de 198 fêmeas Bos indicus em frigorífico. Os ovários foram separados por categorias, sendo distribuídos em nulípara vs multípara e com progesterona (P4 - presença de corpo lúteo em um dos ovários) vs sem progesterona (NP4 - ausência de corpo lúteo). Todos os folículos foram mensurados e categorizados em pequenos (<6mm), médios (6 a 9mm) ou grandes (>9mm). Em seguida todos os folículos foram puncionados e os CCOs recuperados e avaliados morfologicamente. Não houve diferença na taxa de recuperação nem na qualidade dos CCOs de fêmeas nulíparas vs multíparas. O percentual de CCOs desnudos/degenerados foi maior no grupo NP4 e os CCOs expandidos foram superiores no grupo P4. A taxa de recuperação e o percentual de CCOs selecionados para PIV (graus I e II) foram similares nos grupos P4 vs NP4. Folículos pequenos apresentam menor taxa de recuperação em comparação aos de tamanho médio e grande, porém o percentual de CCOs de grau I foi superior em folículos pequenos e médios. Diante dos resultados aqui encontrados conclui-se que a categoria da doadora e a progesterona não influenciaram a qualidade de CCOs selecionados para PIV e que folículos menores apresentam de CCOs de melhor qualidade.

Abstract: To study the anatomical and physiological factors that affect the bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) quality, were examined 396 ovaries obtained after slaughter of 198 Bos indicus females. Ovaries were categorized in nulliparous vs multiparous and progesterone (P4 - a corpus luteum at least one ovary) vs without progesterone (NP4 - absence of corpus luteum). All follicles were measured and categorized into small (<6mm), medium (6 to 9mm) or large (>9mm). Then all follicles were punctured and COCs recovered and assessed morphologically. There was no difference in COCs recovery rate or quality from nulliparous vs multiparous females. The rate of denuded or degenerated oocytes was higher in NP4 and expanded COCs were higher in P4. The COCs recovery and grades I and II rates were similar in P4 vs NP4 groups. Small follicles have lower COCs recovery rate than medium or large follicles, but the grade I oocytes rates was higher in small and medium follicles. In conclusion, the category of donor female and progesterone did not affect the quality of COCs selected for PIV and smaller follicles present best quality of COCs.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del estatus reproductivo (gestantes versus vacías) de hembras mestizas Cebú postmortem sobre el número de ovocitos recuperados, la tasa de división embrionaria y la tasa de producción de blastocitos. Los complejos cúmulo ovocito (CCO) recolectados a través del tasajeo de los ovarios, fueron seleccionados, contados y separados por grupo en: hembras gestantes (ovarios con o sin cuerpo lúteo [CL]) y hembras vacías (ovarios con o sin CL). El número de CCO recuperados fue analizado utilizando el procedimiento GENMOD, asumiendo una distribución de Poisson, mientras que los datos de división y producción de blastocitos fueron analizados utilizando una regresión logística asumiendo una distribución binomial. Se evaluó un total de 4658 CCO obtenidos de 437 ovarios, siendo significativamente mayor (p<0,03), el número de CCO obtenidos de ovarios procedentes de vacas gestantes (12,5±2,8), comparado con el número de CCO provenientes de ovarios de hembras vacías (9,4±2,5). La tasa de división embrionaria, fue significativamente mayor (p<0,006) para el grupo de hembras vacías (42,3±0,01%) con respecto a las gestantes (34,5±0,02); asimismo, la interacción estatus reproductivo por CL afectó (p<0,006) la tasa de división embrionaria: vacas gestantes con CL (Gest-CL) y vacas gestantes sin CL (Gest-NoCL; 31,1±0,02% [76/244] vs. 38,0±0,03% [98/258], respectivamente) y vacas vacías con CL (Va-CL) y vacas vacías sin CL (Va-NoCL; 46,7±0,03% [312/738] vs. 38,0±0,03% [143/376], respectivamente). No hubo diferencia significativa en la tasa de producción de blastocitos a partir de embriones divididos de hembras gestantes (10,7±0,02%; 17/160) comparado con el grupo de hembras vacías (10,0±0,02%; 30/312). Estos resultados indican que la selección de los CCO, con base en el estatus reproductivo de la hembra bovina, es un aspecto importante a tomar en cuenta para mejorar la producción de embriones in vitro.

In order to improve the oocyte selection for in vitro embryo production, the present work evaluated the effect of the reproductive status of postmortem Crossbred Zebu cows (pregnant [P] versus non-pregnant [NP]) on the number of recovered oocytes, the cleavage (number of cleaved embryos/number of recovered oocytes) and the blastocyst production (number of blastocyst/number of cleaved embryos) rates. Cumulus oocytes complexes (CCOs) were selected, counted and separated depending on the donor status: P cows with or without a corpus luteum (CL) and NP cows with (CL) or without (NoCL) a CL. Data for number of recovered oocytes was analyzed using the GENMOD procedure assuming a Poisson distribution, whereas data for cleavage and blastocyst production rates were analyzed using a logistic regression assuming a binomial distribution. The statistical model for all the analyses included the effects of the reproductive status (P vs. NP), presence or not of a CL (CL vs. NoCL) and the interaction of reproductive status x CL. A total of 4658 CCOs obtained from 437 ovaries was evaluated. The number of CCOs collected per ovary from P cows (12.5±2.8) was significantly higher (p<0.03) than from NP cows (9.4±2.5). On the other hand, the cleavage rate was significantly higher (p<0.006) in NoP cows (42.3+0.01%) than in P cows (34.5+0.02). Nevertheless, the interaction between reproductive status and CL affected (p<0.006) the cleavage rate: P-CL: 31.1+0.02% (76/244); P-NoCL: 38.0+0.03% (98/258); NoP-CL: 46.7+0.03% (312/738) and NoP-NoCL: 38.0+0.03% (143/376). There were not differences in blastocyst production rate from cleaved embryos for P cows (10.7+0.02%; 17/160) compared with NoP cows (10.0+0.02%; 30/312). These results show that the reproductive status of a cow should be taken into account for oocyte selection, in order to improve embryo production.

Aims: To identify the motivating factors of candidates to donate oocytes, and the significance they assign to oocyte donation. Methods: We evaluated 18 volunteers trough a semi-structured interview. Topics discussed included: past experiences, fantasies and expectations towards the process of oocyte donation. Results: The ages fluctuated between 19 and 29 years; 13 were single and 6 had one or more children. More than a half were studying and working at the moment of the interview. None had familiar or personal psychiatric disorders. The economical compensation was the most important reason for the intention to donate, though the empathy with infertile couples was a significant motivator too. Potential donors perceived anonymity as protective for both donor and receptor. They perceived motherhood as rising the child rather than having a genetic link. Conclusions: We found that potential donors perceive motherhood as linked to rising a child, rather than having a genetic link. Therefore, they assimilate oocyte donation to the donation of any other organ. However, they prefer to have no contact with the oocyte receptor. As expected, the main motivator is the economical compensation, however they have strong feelings of empathy towards infertile couples.

Objetivos: Determinar las motivaciones de mujeres para donar óvulos, y las significaciones que le otorgan a la misma. Método: Entrevista semiestructurada, cualitativa, a 18 mujeres candidatas a donantes de óvulos. Los tópicos analizados incluyeron: experiencias pasadas, fantasías y expectativas en relación a la ovodonación. Resultados: Las edades de las entrevistadas fluctuaron entre 19 y 29 años; 13 eran solteras y 6 tenían al menos un hijo. Más de la mitad estaban estudiando y trabajando al momento de la entrevista. Ninguna tenía antecedente de patología psiquiátrica personal ni familiar. La compensación económica fue la principal motivación para donar, aunque la empatía con las parejas infértiles fue otro importante motivador. Las potenciales donantes refirieron que el anonimato como protector para la donante y la pareja receptora. Las donantes percibieron la maternidad más relacionada con la crianza que con el vínculo genético. Conclusiones: Encontramos que las candidatas para ovodonar perciben la maternidad en función de la crianza y no del vínculo genético. Por lo tanto, asimilaron la donación de ovocitos con la donación de cualquier órgano. Sin embargo, manifiestan su rechazo a tener contacto con la familia receptora. Como era de esperar, la motivación económica fue la principal razón para donar, sin embargo, sentían fuerte empatía con las parejas infértiles.

Comparou-se a quantidade relativa de transcritos de origem materna entre oócitos bovinos maturados in vivo e maturados em diferentes condições in vitro. Avaliou-se também o efeito dos sistemas de maturação in vitro sobre a viabilidade das células do cumulus. Para a maturação in vivo, os oócitos foram coletados 19-20h após aplicação de gonadorelina em doadoras superestimuladas com FSH e sincronizadas com implante de progesterona. Para a maturação in vitro, oócitos imaturos, obtidos de ovários coletados em matadouro, foram maturados sob diferentes tensões de oxigênio e suplementação proteica. Avaliou-se a abundância dos transcritos de Zar1, MATER e GDF9 por PCR em tempo real. A viabilidade das células do cumulus de oócitos maturados in vitro foi analisada pela coloração de Azul de Tripan. Observou-se sub-regulação (P<0,05) dos transcritos em oócitos submetidos às diferentes condições de maturação in vitro em relação aos maturados in vivo. Não houve diferença (P>0,05) na viabilidade das células do cumulus. Conclui-se que o sistema de maturação influencia a quantidade de transcritos de origem materna armazenados no citoplasma de oócitos bovinos

The relative abundance of maternal transcripts among bovine oocytes in vivo matured or under different in vitro conditions was compared. Viability of cumulus cells of in vitro matured oocytes was also evaluated. For in vivo maturation, oocytes were recovered from 19 to 20h after gonadorelin injection in donor cows, which were previously superestimulated with FSH and synchronized with progesterone implant. For in vitro maturation, immature cumulus-oocyte complexes, obtained from ovaries collected at slaughterhouse, were matured under different oxygen tensions and protein supplementation. Relative amount of Zar1, MATER, and GDF9 transcrispts were analyzed by real time PCR. Cumulus cell viability was analyzed by trypan blue. The expression of maternal effect genes were down-regulated (P<0.05) in oocytes matured under different in vitro conditions when compared to those in vivo matured. There was no difference (P>0.05) on cumulus cell viability among different in vitro maturation conditions. In conclusion, different maturation conditions affect the relative abundance of maternal transcripts stored into oocyte cytoplasm

A metodologia de produção in vitro de embriões de ovinos implica no desenvolvimento de meios de maturação, fertilização e cultivo que permitam aumentar a taxa de clivagem e desenvolvimento, tanto para o investimento biotecnológico em programas comerciais, quanto para sua utilização em clonagem e transgenia dessa espécie animal. Do ponto de vista da pesquisa, os ovócitos podem ser obtidos pelas técnicas de punção e slicing a partir de ovários oriundos de matadouros, ou através de aspiração folicular por laparoscopia. Como vantagem, este método permite o uso de uma mesma doadora estimulada hormonialmente em intervalos periódicos, mantida sob rigoroso controle sanitário, o que é de vital importância para a produção de biofármacos em programas que utilisem os ovinos como modelo biológico. Por outro lado, em nosso país a demanda pela multiplicação de animais de alto valor genético, seja pela produtividade ou pelo elevado valor comercial dos mesmos, impõe o desenvolvimento, adaptação e otimização das diferentes metodologias desenvolvidas ao longo dos ultimos anos em laboratórios de referência mundiais. Nesse contexto, cresce de importância o perfeito conhecimento da fisiologia dessa espécie e das raças criadas em nosso país, e da problemática da produção in vitro de seus embriões. Respeitando essas premissas, gerar o desenvolvimento de protocolos que permitam não apenas aumentar a população de ovócitos passíveis de maturação in vitro, mas de sua competência ao desenvolvimento ao estágio de blastocisto, ou, alternativamente, sua transferência a receptoras em estágios precoces do desenvolvimento, evitando assim as conhecidas perdas durante o desenvolvimento in vitro, e o baixo percentual de gestações que chegam a termo, com cordeiro saudáveis. Trata-se de um desafio, que já apresenta os primeiros resultados em nosso país, tanto na produção comercial de embriões produzidos in vitro, quanto em programas de clonagem e transgenia.

The methodology of in vitro embryo production in ovine requires the development of maturation, fertilization and culture media, in order to increase cleavage and development rates. This, in turn, would improve the implement of biotechnological programs for commercial purposes, as well as the use of this technique for cloning and transgenesis in this species. From the point of view of research, the oocytes can be obtained by puncture or slicing of ovaries collected from abattoirs, or by laparospic follicular aspiration (LOPU). One of the advantages of the LOPU is allowing the use of the same hormonally stimulated donor several times in periodic intervals. This could be extremely important, for instance, when using the ovine as a biological model for the production of biodrugs, as long as animals are submitted to a strict sanitary control. On the other hand, in Brazil, due to their improved productivity or high commercial value, there is a demand for animals of high genetic value, which requires the development, adaptation and maximization of the different methodologies designed throughout the last years in reference laboratories worldwide. In this context, the perfect knowledge of the ovine physiology, especially from the breeds raised in Brazil, as well as the problems of the ovine in vitro embryo production are becoming more and more important. Therefore, it is fundamental to create protocols to allow not only the increase on the population of oocytes with enough quality to undergo in vitro maturation, but competence to reach the blastocyst stage, or alternatively, the transference of early stages embryos to the recipients, avoiding the common embryo losses during the in vitro development and the low rates of full-term pregnancies, with healthy lambs. The first results of this challenge are already being observed in Brazil, not only in the in vitro embryo production for commercial purposes, but in programs of cloning and transgenesis.

OBJETIVO: comparar os resultados de ciclos de reprodução assistida em mulheres doadoras de oócitos no ciclo de tratamento com o de mulheres não doadoras. MÉTODOS: foram avaliadas, retrospectivamente, as taxas de gravidez, implantação e abortamento de 50 pacientes que doaram oócitos durante o ciclo de reprodução assistida (grupo de doadoras) e de 50 pacientes que não doaram oócitos (grupo de não-doadoras), em clínica privada de reprodução assistida em São Paulo, entre os anos de 2001 e 2003. Os critérios de inclusão no estudo foram os seguintes: idade menor que 35 anos; ciclos menstruais regulares; dosagem basal de FSH<10 mUI/mL; pacientes submetidas à primeira tentativa de fertilização assistida; recuperação de mais de seis oócitos maduros após a aspiração folicular. Os resultados foram analisados estatisticamente por meio do teste do chi2. RESULTADOS: ambos os grupos eram comparáveis em termos de idade, indicação e duração da infertilidade. A média de idade no grupo de doadoras foi de 30,6 anos e no grupo de não doadoras, 31,1 anos. Todas as pacientes tiveram mais do que seis oócitos aspirados e identificados. No grupo de doadoras foram recuperados 590 oócitos e 215 oócitos foram doados para receptoras (36,5%), levando à transferência de 152 embriões. Foram obtidas 15 gestações (30% por transferência), com 2 abortamentos (13,3%), sendo que a taxa de implantação foi de 11,2%. No grupo de não-doadoras, recuperaram-se 545 oócitos e foram transferidos 153 embriões. Foram obtidas 17 gravidezes (34% por transferência) e houve três abortamentos (17,6%). A taxa de implantação foi de 14,3%. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos no que se refere às taxas de gravidez, implantação e abortamento (p>0,05). CONCLUSÃO: em pacientes que recuperam mais de seis oócitos, a doação de oócitos no ciclo de tratamento não prejudica os resultados dos ciclos de reprodução assistida e não eleva as taxas de abortamento.

PURPOSE: to compare the outcome of treatment in patients undergoing assisted reproductive technology (ART) cycles who donated eggs during their own ART treatment with the outcome of patients undergoing ART without egg donation. METHODS: we studied retrospectively the pregnancy and implantation rates of 50 patients who donated eggs during the course of their ART treatment (donor group), and the pregnancy and implantation rates of 50 patients who underwent ART cycles and kept all their eggs (non-donor group). between the years 2001-2003. The inclusion criteria used were as follows: age <35 years old, normal menstrual cycles, FSH<10 mIU/mL, first attempt of ART treatment and more than six mature oocytes retrieved. The results were analyzed statistically using the chi2 test. RESULTS: both groups were comparable in terms of age, indication, and duration of infertility. The mean age was 30.6 years for the donor group and 31.1 years for the non-donor group. All the patients of the donor group produced more than 6 eggs. From the donor group we collected 590 oocytes; 215 eggs were donated to recipients (36.5%) and 152 embryos were transferred. A total of 15 pregnancies were achieved (pregnancy rate per transfer: 30%); the implantation rate was 11.2% and there were 2 miscarriages (miscarriage rate: 13.3%). From the non-donor group, 545 oocytes were collected and 153 embryos were transferred. A total 17 pregnancies were achieved (pregnancy rate per transfer: 34%); the implantation rate was 14.3% and there were 3 miscarriages (miscarriage rate: 17.6%). The pregnancy and implantation rates were similar in both groups, and there were no significant statistical differences regarding the miscarriage rate (p>0.05). CONCLUSION: this study suggests that in patients who produce more than 6 oocytes, egg donation in the treatment cycle does not influence adversely the outcome of ART cycles and does not increase the miscarriage rate.