Resumen Introducción. La miel Klanceng (Tetragonula laeviceps) es muy demandada por sus beneficios. No hay información sobre la fecha de caducidad de la miel Klanceng. Objetivo. Predecir la vida útil de la miel Klanceng mediante la evaluación del efecto del calentamiento (40 ºC / 48 h y 70 ºC / 7 h) y el almacenamiento durante dos años. Materiales y métodos. El análisis se llevó a cabo tres veces (2020, 2021 y 2022) en el Laboratorio de la Agencia Nacional de Investigación de Innovación, Yakarta, Indonesia. Se tomaron muestras de miel Klanceng (Tetragonula laeviceps) de una granja de abejas en Magetan, Java Oriental, Indonesia. La muestra (5 kg) se dividió en 3: sin proceso de calentamiento (UT), calentamiento a 40 °C / 48 h (T1) y calentamiento a 70 °C / 7 h (T2). Luego se analizaron HMF, diastasa, invertasa, fosfatasa ácida (AP), glucosa oxidasa (GO), DPPH, absorbancia y actividad fenólica a los 0, 12 y 24 meses. Resultados. Los resultados mostraron que el calentamiento corto a alta temperatura (70 °C / 7 h) tuvo un mayor impacto en la disminución de la actividad enzimática en comparación con el calentamiento prolongado a baja temperatura (40 °C / 48 h). El almacenamiento tuvo un impacto significativo en el aumento de 5-hidroximetil (furano)-2-carbaldehído (HMF) en comparación con el calentamiento. Durante el almacenamiento (24 meses) el valor de HMF superó el límite máximo. Conclusiones. El valor de HMF (55,33 ± 0,57 mg/kg) superó el límite máximo permitido (máximo 40 ppm), esto se debió al efecto significativo del calentamiento en T2 y el proceso de almacenamiento. La vida útil de la miel Klanceng fue de dos años, siempre que no se calentara a altas temperaturas (70 °C).

Abstract Introduction. Klanceng honey (Tetragonula laeviceps) is in great demand because of its benefits. There is no information on the expiration date of the Klanceng honey. Objective. To predict the shelf life of Klanceng honey by evaluating the effect of heating (40 ºC / 48 h and 70 ºC / 7 h) and storage for two years. Materials and methods. The analysis was carried out three times (2020, 2021, and 2022) at the National Innovation Research Agency Laboratory, Jakarta, Indonesia. Samples of Klanceng honey (Tetragonula laeviceps) were taken from a bee farm in Magetan, East Java, Indonesia. The sample (5 kg) was divided into 3: without heating process (UT), heating at 40 ºC / 48 h (T1), and heating at 70 ºC / 7 h (T2). Then analyzed the activity of HMF, diastase, invertase, acid phosphatase (AP), glucose oxidase (GO), DPPH, honey color, and phenolic at 0, 12 and 24-months. Results. The results showed that short heating at high temperature (70 ºC / 7 h) had a greater impact on decreasing enzyme activity compared to prolonged heating at low temperature (40 ºC / 48 h). Storage had a major impact on the increase of 5-hydroxymethyl (furan)-2-carbaldehyde (HMF) compared to the heating process. During storage (24-months) the HMF value exceeded the maximum limit. Conclusions. The HMF value (55.33 ± 0.57 mg/kg) exceeded the maximum allowable limit (max 40 ppm), this was due to the significant effect of heating on T2 and the storage process. The shelf life of Klanceng honey was two years, as long as it was not heated to high temperatures (70 ºC).

RESUMEN Se describe una presentación clínica inusual de infección por Aeromonas complejo hydrophila y se destaca la importancia del correcto diagnóstico microbiológico para adecuar el tratamiento. Paciente de 6 años consultó por fiebre y drenaje de líquido serohemático de herida quirúrgica por antecedente de craneotomía con duroplastia la semana previa. Laboratorio con parámetros normales y tomografía computada sin cambios relevantes. Punción lumbar: leucocitos 91/mm3, proteínas 89 mg/dl, glucosa 36 mg/dl. Comenzó tratamiento con vancomicina y ceftazidima. Cultivo de líquido cefalorraquídeo: bacilo gramnegativo, oxidasa positivo, fermentador de glucosa. Se rotó a meropenem. A las 72 horas, se informó, por método difusión y Vitek2, Aeromonas complejo hydrophila: sensible a trimetoprima- sulfametoxazol, ciprofloxacina, cefotaxima y meropenem. Se realizó método Blue Carba para detección de carbapenemasas con resultado positivo. Se rotó a trimetoprima-sulfametoxazol. Completó 21 días de tratamiento con evolución clínica favorable.

Abstract: Fructooligosaccharides (FOS) are fructose polymers, linked by β-glucosidic bonds (2-1), considered low caloric food sweeteners with prebiotic function and can be obtained from sucrose by biosynthesis. The fruits of the carob tree (Prosopis pallida) contain mainly carbohydrates where sucrose stands out. For this reason, the production of FOS from carob extract was optimized using a pectinase from A. aculeatus. The response surface methodology using was applied to optimize the parameters that affected production: time, temperature and carob extract; then they were verified experimentally. The biosynthesis process of FOS was carried out with carob extract at the concentrations of 20, 35 and 50 ° Bx, Pectinase at 10, 35 and 61mg, at 45, 55 and 65 °C for 0,5, 9,5 and 18 h, with stirring at 150 rpm The analysis methods were glucose oxidase and AOAC 999.03, for glucose and FOS respectively and the Minitab 16 program. The optimal reaction conditions for the production of FOS were: carob extract 38 °Bx, enzyme 31 mg, 54 °C, 150 rpm and 12 h. The experimental yield in the transformed extract was FOS 16, 1% quantified by HPLC.

RESUMEN Los fructooligosacáridos (FOS) son polímeros de fructosa, unidos mediante enlaces glucosídicos β(2-1), considerados edulcorantes de bajo aporte calórico con función prebiótica que pueden ser obtenidos a partir de sacarosa por biosíntesis. Los frutos del algarrobo (Prosopis pallida) contienen principalmente carbohidratos y, en particular, alta concentración de sacarosa. Por tal motivo, se optimizó la producción de FOS a partir del extracto de algarrobo usando pectinasa de A. aculeatus. La metodología de superficie de respuesta se aplicó para optimizar los parámetros que afectan la producción como: tiempo, temperatura y extracto de algarrobo; después se verificaron experimentalmente. El proceso de biosíntesis de FOS se realizó con extracto de algarrobo a las concentraciones de 20, 35 y 50 °Bx, pectinasa a 10, 35 y 61 mg, a 45, 55 y 65 °C durante 0,5; 9,5 y 18 h, con agitación a 150 rpm. Los métodos de análisis para glucosa y FOS fueron glucosa oxidasa y AOAC 999,03 respectivamente y el programa Minitab 16. Las condiciones óptimas de reacción para la producción de FOS fueron: extracto de algarrobo 38 °Bx, pectinasa 31 mg, 54 °C, 150 rpm y 12 h. El rendimiento experimental en el extracto transformado fue FOS 16,1 % cuantificados por HPLC.

Abstract: Bread was made with wheat flour substitution for pumpkin flour (13%), following a central rotational composite design 22. The independent variables were glucose oxidase (0-20 ppm) and cooking time of pumpkin before being ground to flour (0-20 min). The dependent variables were specific volume, instrumental color and content of resistant starch. The mixtures of flours were characterized in Mixolab and an acceptance test was carried out for sensory evaluation. The results showed that a longer cooking time and average enzyme values increase the stability of the dough. The weakening of the proteins increased with average enzyme values and longer cooking time, while retrogradation of the starch decreased under the same conditions. The specific volume and content of resistant starch increased with longer cooking time. There was no significant statistical difference between treatments in the sensory evaluation analysis.

Resumen: Se elaboraron panes de molde con sustitución de harina de trigo por harina de zapallo (13%), siguiendo un diseño central compuesto rotacional 22. Las variables independientes fueron glucosa oxidasa (0-20 ppm) y tiempo de cocción del zapallo antes de ser molido para la obtención de harina (0-20 min). Las variables dependientes fueron: volumen específico, color instrumental y contenido de almidón resistente. Se caracterizaron las mezclas de harinas en Mixolab y se realizó una prueba afectiva de aceptación. Los resultados indican que a mayor tiempo de cocción y valores medios de enzima aumenta la estabilidad de la masa. El debilitamiento de las proteínas aumentó con valores medios de enzima y mayor tiempo de cocción, mientras que la retrogradación del almidón disminuyó en las mismas condiciones. El volumen específico y el contenido de almidón resistente aumentaron con mayor tiempo de cocción. No hubo diferencia estadística significativa sensorial entre tratamientos.

Abstract The decentralization of clinical laboratories is under development, which has led to the design of instruments that offer fast, reliable and patient-side results, this trend is known as point of core testing (POCT) and It offers the possibility of giving an immediate follow-up to the disease. The objective of this investigation was the implementation of an absorbance meter, using the structure of an optical microscope, to which a light filter and a digital camera have been adapted. This allows to obtain values of average intensity of solid images of enzymatic reactions, and from them to estimate absorbance or concentration. As results, we present absorbance calibration lines and concentration measurements for cases of gentian violet, a glucose oxidase kit and samples of volunteer patients. We conclude that there is a measurement error of less than ± 1mg / dl compared with the measurements of an Elisa plate reader and a semi-automated blood chemistry analyzer. Taking into account the above, the system turns out to be a viable alternative for estimating absorbance and increasing the functionality of optical microscopes in health clinics.

Resumen La descentralización de laboratorios clínicos, se encuentra en desarrollo, lo anterior ha llevado a diseñar instrumentos que ofrecen resultados rápidos, confiables y al lado del paciente, esta tendencia se le conoce como prueba en el punto de atención (point of core testing POCT) y brinda la posibilidad de dar un seguimiento inmediato al padecimiento. El objetivo de esta investigación fue la implementación de un medidor de absorbancia, empleando la estructura de un microscopio óptico, al cual se le ha adaptado un filtro de luz, y una cámara digital. Lo anterior permite obtener valores de intensidad promedio de imágenes sólidas microscópicas de reacciones enzimáticas, y a partir de ellas estimar absorbancia o concentración. Como resultados se presentan rectas de calibración de absorbancia y mediciones de concentraciones para los casos de violeta de genciana, un kit de glucosa oxidasa y muestras problemas de pacientes voluntarios. Concluimos que existe un error de medición menor de ±1mg/dL comparados con las mediciones de un lector de placas de Elisa y un analizador de química sanguínea semiautomatizado. Teniendo en cuenta lo anterior el sistema resulta ser una alternativa viable para la estimación de absorbancia y aumenta la funcionalidad de microscopios ópticos en clínicas de salud.

Abstract Introduction Mexico is the main producer of pricly pear in the world, with approximately 400,000 tons per year. However, it is a highly perishable fruit (9 to 15 days at room temperature), besides the presence of thorny hairs on its pericarpio limits consumption and limiting its commercialization which causes losses in its production. Therefore, it is necessary to propound for alternatives to be consumed as minimally processed product and the use of controlled atmospheres to extend its shelf life. Method: Different controlled atmospheres treatments (AC1: 5% O2 + 95% N2, AC2: Air + 10% CO2, AC3: 10% CO2 + 5% O2 + 85% N2 and air as control) were applied on minimally processed red prickly pear storaged at 5 ºC during 16 days. Sugars (S), total soluble solids (TSS), pH, polyphenol oxidase activity (PPO), physiological weight loss (PWL) and visual quality (VQ) were analized every four days. Results: At the end of the storage period the treatments with controlled atmospheres showed the less physiological weight loss of pricly pear. The treatment with 10% CO2 + 5% O2 + 85% N2 highly contributed for the visual quality retention (6.24), physiological weight loss (9 %) and pH (5.34), and the treatment with 10% CO2 + Air on the sugars content (176.21 mg Glucose mL-1); while the TSS and PPO enzyme activity did not differ between treatments. Also, the multivariate analysis of two principal components (PC) explained 85% of the variance, two components in six physicochemical variables of the pricly pear. Conclusion: The results show that controlled atmospheres can extend shelf life until 16 storage days when used on minimally processed prickly pear.

Resumen Introducción: México es el principal productor de tuna en el mundo, con aproximadamente 400,000 toneladas por año. Sin embargo, es un fruto muy perecedero (9 a 15 días a temperatura ambiente), además la presencia de espinas en su pericarpio reduce su consumo y limita su comercialización causando así pérdidas en su producción. Por lo tanto, es necesario proponer alternativas de consumo como producto mínimamente procesado (PMP) y el uso de atmósferas controladas (AC) para alargar su vida poscosecha. Método: En rodajas de tuna roja minímamente procesada se aplicaron diferentes tratamientos de AC (AC1: 5% O2 + 95% N2, AC2: Aire + 10% CO2, AC3: 10% CO2 + 5% O2 + 85% N2 y aire como control) durante 16 días de almacenamiento a temperatura de 5 ºC. Cada cuatro días se analizó la concentración de azúcares totales (AT), sólidos solubles totales (SST), pH, actividad de polifenol oxidasa (PFO), pérdida fisiológica de peso (PFP) y calidad visual (CV). Resultados: Los tratamientos en AC presentaron menor PFP. El tratamiento con 10% CO2 + 5% O2 + 85% N2 contribuyó a la retención de la CV (6.24), PFP (9%) y pH (5.34), y el tratamiento con 10% CO2 + Aire en el contenido de azúcares (176.21 mg Glucosa mL-1); mientras que los (SST) y la actividad de PFO no presentó diferencia entre los tratamientos. Por su parte, el análisis multivariado de componentes principales (CP) explicó el 85% de la varianza en dos componentes para seis variables fisicoquímicas de los frutos de tuna. Conclusión: El uso de AC prolongó la vida poscosecha de los frutos de tuna roja mínimamente procesados hasta por 16 días de almacenamiento.

Resumen Las especies del género Aeromonas se encuentran ampliamente distribuidas en ecosistemas acuáticos, son bacilos Gram negativas, oxidasa positivas y fermentadoras de glucosa que han sido consideradas patógenas emergentes en humanos. Por otra parte, Aeromonas pertenece a la microbiota normal de los peces, no obstante, estos microorganismos poseen una diversidad de factores de virulencia responsables de una variedad de infecciones en humanos, principalmente de tipo gastrointestinal. La presencia de Aeromonas en productos destinados a consumo de alta demanda comercial como la tilapia genera preocupación sanitaria por el potencial patogénico que posee esta bacteria. En este contexto, identificar genes de virulencia presentes en cepas de Aeromonas aisladas en Oreochromis spp. para consumo humano en Reynosa, Tamaulipas, México; es de importancia ante la escasez de estudios moleculares al respecto en la zona. En el presente estudio se analizó el potencial patogénico de 15 cepas de Aeromonas previamente identificadas molecularmente mediante PCR y secuenciación, procedentes de Oreochromis spp. Mediante PCR se analizaron seis genes de virulencia (alt, ast, aerA, hlyA, gcat y stx1) y las cepas utilizadas como control fueron: Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila ATCC 7966, Aeromonas caviae 429865 INP, Escherichia coli O157:H7 y Escherichia coli K12. El 100 % (n = 15) de las cepas presentaron al menos un gen de virulencia, el gen aerA se detectó en 86.66 % de las cepas analizadas, mientras que los genes ast y stx1 no fueron identificados. Se encontró que las cepas de Aeromonas presentaban genes asociados en una misma cepa: aerA/gcat, alt/aerA, alt/ aerA/gcat/hlyA y alt/aerA/gcat, de los cuales aerA/gcat se observó con mayor frecuencia y principalmente en A. veronii, mientras que, A. hydrophila presentó el mayor número de asociaciones de genes de virulencia. Estos hallazgos indican que las cepas de Aeromonas aisladas en Oreochromis spp. tienen el potencial de causar enfermedades en humanos. Por lo tanto, es necesario proporcionar información sobre esta bacteria emergente, para tratar y controlar eficazmente cualquier posible evento epidemiológico causado por la misma.

Abstract The genus Aeromonas are widely distributed in aquatic ecosystems are Gram-negative rods, oxidase-positive, and glucose-fermenting, considered emerging pathogens in humans. Aeromonas belongs to the fish microbiota, these microorganisms have a diversity of virulence factors responsible for a variety of infections in humans mainly gastrointestinal diseases. The presence of Aeromonas in products intended for consumption with high commercial demand such as tilapia generates sanitary concern due to the pathogenic potential of this bacteria. In this context, identification of virulence genes in strains of Aeromonas isolated in Oreochromis spp. intended for human consumption in Reynosa, Tamaulipas, Mexico is important due to the lack of molecular studies in this geographical area. In the present study the pathogenic potential of 15 strains of Aeromonas (A. veronii, A. hydrophila and A. schubertii) from Oreochromis spp. for human consumption were analyzed. Through PCR six virulence genes were analyzed (alt, ast, aerA, hlyA, gcat and stx1) and the strains used as control were: Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila ATCC 7966, Aeromonas caviae 429865 INP, Escherichia coli O157: H7 and Escherichia coli K12. El 100 % (n = 15) of the strains harbored at least one virulence gene, aerA gene was detected in 86.66 % of the analyzed strains, while ast and stx1 genes were not identified. Moreover, Aeromonas strains had associated genes in the same strain: aerA / gcat, alt / aerA, alt / aerA / gcat / hlyA and alt / aerA / gcat, of which aerA / gcat were observed mostly in A. veronii, while A. hydrophila had the highest associations. These findings indicate that the strains of Aeromonas isolated in Oreochromis spp. have the potential to cause human diseases, and therefore, this species used as food, could be a vehicle for infections caused by Aeromonas. It also allows to provide information on this emerging microorganism to effectively treat and control any epidemiological event caused by Aeromonas spp. in the future.

RESUMEN En la industria avícola, las infecciones por Salmonella son un problema, debido a los efectos sobre la producción y los riesgos a la salud pública. En las aves infectadas puede ocurrir una diseminación sistémica de las bacterias, que afecta los órganos y favorece, tanto la transmisión entre las aves como la contaminación de los productos avícolas, tales como las carnes, durante el proceso de sacrificio de los animales. Se decidió evaluar el efecto que diferentes combinaciones de glucosa oxidasa (GOX) y glucosa tienen sobre el crecimiento de diversos serotipos de Salmonella aislados de aves en crecimiento y de engorde, y determinar su potencial como antibacteriano. Se tomaron muestras de corazón y de ciego de aves de 7 y 42 días de edad y se aislaron e identificaron S. typhimurium y S. enteritidis. Estas bacterias fueron cultivadas en medio Luria-Bertani (LB) en presencia de GOX (0,5; 1 y 2U/mL) y glucosa (0,5, 1 y 2%), en combinaciones bajo un diseño factorial 32. El crecimiento fue monitoreado por el cambio de absorbancia a 600 nm, durante 6 horas de incubación. Se observó una reducción significativa del crecimiento de ambos serotipos al utilizar 2U/mL de GOX y diferentes concentraciones de glucosa, lo cual, demostró la capacidad antibacteriana que posee el sistema GOX/glucosa sobre este género, por lo que se podría emplear como un aditivo para la conservación de carnes de aves y productos derivados, a fin de alargar su vida de anaquel y minimizar riesgos a la salud.

SUMMARY In the poultry industry, Salmonella infections are a problem due to the effects on production and risks to public health. In infected birds, a systemic spread of bacteria can occur, which affects the organs and favors both the transmission between birds and the contamination of poultry products, such as meat, during the animal´s slaughter process. It was evaluated the effect that different combinations of glucose oxidase (GOX) and glucose have on the growth of different Salmonella serotypes isolated from broilers, and thus determine their potential as antibacterial. Heart and caecal samples were taken from birds 7 and 42 days old. S. typhimurium and S. enteritidis were isolated and identified. These bacteria were cultured in Luria-Bertani medium (LB) in the presence of GOX (0.5, 1 and 2U/mL) and glucose (0.5, 1 and 2%) in combinations under a factorial design 32. Growth was monitored by absorbance change at 600nm for 6 hours of incubation. A significant reduction of the growth of both serotypes was observed when using 2 U/mL of GOX and different concentrations of glucose. This demonstrated the antibacterial capacity that the GOX/glucose system has on this genus, so it could be used as an additive for the preservation of poultry meats and derived products, in order to lengthen its storage time and minimize health risks.

Biosensors are mobile devices that allow rapid and easy detection of metabolic diseases and viral infections of veterinary and clinical interest, such as rotavirus and hepatitis B and C. The objective of this work was to determine the significant variables of the production process of the glucose biosensors manufactured in the Immunoassay Center (Havana, Cuba). Eight experimental runs were carried out taking into account the normative operating procedures of the biosensor production plant. Accuracy tests were carried out to release produced batches. The experiments provided information about which factors should be carefully controlled during the manufacture procedure in order to avoid high levels of faulty products or the erratic behavior of the process. The factors selected for the study were those related with the preparation of the enzymatic solution. A multiple regression analysis was carried out to determine the statistically significant factors of the model. The coefficient of determination was higher than 90%, and the 98.637% of the variation between the values of percentage of accuracy and the mean value could be explained. The significant factors were the concentration of the glucose oxidase enzyme, the electric mediator concentration, and the ultrapure water conductivity (95% confidence level). The analysis carried out showed satisfactory results. In the present study, it was demonstrated that varying parameters of the production process it is possible to decrease the accuracy percentage values

Los biosensores son dispositivos móviles que permiten detectar de forma rápida y sencilla enfermedades del metabolismo e infecciones víricas de interés veterinario y clínico, como el rotavirus y la hepatitis B y C. Este trabajo tuvo como objetivo determinar las variables significativas del proceso de producción de los biosensores de glucosa fabricados en el Centro de Inmunoensayo (La Habana, Cuba). Se produjeron ocho corridas experimentales teniendo en cuenta los procedimientos normativos de operación implementados en la planta de producción de biosensores y se realizaron las evaluaciones de calidad correspondientes (pruebas de exactitud) para liberar analíticamente los lotes producidos. Los experimentos realizados proporcionaron información acerca de cuáles variables deben controlarse con más cuidado durante la producción a fin de evitar altos niveles de productos no conformes o el comportamiento errático del proceso. Las variables seleccionadas para el estudio fueron las relacionadas con la preparación de la solución enzimática. Con los resultados obtenidos se realizó un análisis de regresión múltiple para determinar los factores estadísticamente significativos del modelo, obteniéndose un coeficiente de determinación superior al 90%, logrando explicar el 98,637% de la variación entre los valores de porcentaje de exactitud y la media. Los factores que resultaron ser significativos fueron la concentración de la enzima glucosa oxidasa, la concentración del mediador eléctrico y la conductividad del agua ultrapura para un nivel de confianza del 95%. El análisis realizado arrojó resultados satisfactorios demostrando que variando parámetros del proceso productivo es posible disminuir los valores del porcentaje de exactitud

La adaptación es un importante mecanismo por el cual las células y los organismos responden a retos ambientales y a cambiantes necesidades funcionales. Para lograrlo, las células integran cambios en el fenotipo, actividad metabólica, expresión génica y función celular, que deben coordinarse adecuadamente para mantener la viabilidad ante estímulos nocivos, como es el caso del reto ante un exceso de especies reactivas de oxígeno (ROS). En este estudio, se evaluó la hipótesis que pulsos crónicos y repetitivos con peróxido de hidrógeno (H2O2), pueden activar respuestas celulares que resultan en adaptación a estrés oxidativo. Para probar esto, se estableció un modelo in vitro, donde las células de origen mioblastoide C2C12, fueron expuestas a 5 mU/ml de la enzima glucosa oxidasa que durante breves pulsos de 1 hora/día genera una concentración constante de 50 μM de H2O2 en el medio. Este régimen de tratamiento se extendió durante 7 días, tras los cuales se evaluaron los efectos sobre la morfología y viabilidad celular, el contenido de ADN mitocondrial, la acumulación de ROS mitocondrial y la expresión de genes de defensa antioxidante. Los resultados obtenidos apoyan la idea de que los estímulos prolongados, repetitivos y a bajas concentraciones de ROS, pueden actuar como moléculas de señalización induciendo procesos celulares que convergen en la adaptación al estrés oxidativo crónico.

Adaptation is an important mechanism in cells and organisms that allow them to respond to environmental challenges and changing functional demands. To accomplish these requirements, cells integrate modifications at different levels such as gene expression, metabolic activity, cellular functionality and phenotype. The orderly coordination of these changes is fundamental for cells to maintain viability despite a variety of harmful stimuli, such as the case of exceedingly concentrations of reactive oxygen species (ROS). In this study, we tested the hypothesis that chronic and repetitive stimuli with a mild concentration of hydrogen peroxide (H2O2) would activate cellular responses, resulting in adaptation. This was done confronting cell cultures to prolonged exposures of H2O2 obtained with glucose oxydase (GlucOx) added to the medium to generate a constant concentration of the oxidant (≈ 50 μM); this treatment protocol (1h/d) was extended during seven continuous consecutive days after which the following parameters were evaluated: cell morphology and viability, mitochondrial DNA content, mitochondrial ROS accumulation and antioxidant defense gene expression. These data further support the idea that exposure to continuous and low concentrations of ROS, could act as signaling molecules inducing cellular processes that converged toward adaptation to chronic oxidative stress.

In this work the electrochemical behavior of Co(II) complexes with substituted bidentate and tridentate polypyridine ligands [CoL3](BF4)2 and [CoL'2](NO3)2 in 0.1M phosphate buffer pH 7.2 was studied. A reversible electrochemical process Co(II)Ln →Co(III) Ln+1e- was observed. A linear relationship between the redox potential (E°) and the pKa of the non-coordinated ligand was found. It was demonstrated by DFT calculations the use of pKa value as a descriptor of the π acceptor character of a ligand. The electrochemical response in the presence of glucose oxidase (GOx) was also studied. It was possible to establish a tendency between the homogeneous electron transfer rate constant (ks) and the redox potential (E°) for the compounds studied in this work and other examples taken from the literature.

En este trabajo se estudió el comportamiento electroquímico de complejos de Co(II) con ligantes polipiridinicos bidentados y tridentados sustituidos [CoL3](BF4)2 y [CoL'2](NO3)2 en soluciones tampón de fosfato pH 7.2 0.1 M. Se observó un proceso electroquímico reversible Co(II)Ln → Co(III)Ln + 1e, encontrándose una relación lineal entre el potencial redox (E°) y el pKa del ligante no coordinado. Mediante cálculos DFT se demostró el uso del valor pKa como descriptor del carácter aceptor π de los ligantes. Se estudió la respuesta electroquímica en presencia de glucosa oxidasa (GOx). Se estableció una tendencia entre la constante de velocidad de transferencia de electrónica homogénea (ks) y el potencial redox (E°) para los compuestos estudiados en este trabajo y otros ejemplos tomados de la literatura.

We present a methodology for improving some enzymatic characteristics of glucose oxidase (GOx) (EC 1.1.3.4). The enzyme was chemically modified with a ß-cyclodextrin-branched carboxymethylcellulose polymer (CMC-CD), using carbodiimide as coupling agent. The obtained neoglycoenzyme had 0.78 mol of polysaccharide per mol of GOx and retained 67% of its initial activity. Comparison of some characteristics of the modified and free enzymes showed a higher Km for derivatized GOx and better thermostability, which increased from 45 °C to 51 °C. In addition, derivatization of GOx with CMC-CD increased its resistance to inactivation at 45 °C by 2.2-fold, protected the molecule against inactivation with the anionic surfactant sodium dodecylsulphate to the point that it retained 75% of its activity after an incubation of 3 h, and extended its pH tolerance toward alkaline pH (7.5). Covalent glycosidation of glucose oxidase with CD-branched carboxymethylcellulose polymer constitutes therefore an effective strategy for enhancing the stability of this enzyme.

La glucosa oxidasa (GOx; EC 1.1.3.4) se modificó químicamente con el polímero carboximetilcelulosa ramificado con unidades de ß ciclodextrina (CMC-CD) utilizando una carbodiimida como agente acoplante. La neoglicoenzima contenía 0.78 mol de polisacáridos por mol de GOx y retuvo, después de la transformación, el 67% de su actividad inicial. Se compararon algunas características de la enzima modificada y la nativa. La enzima modificada mostró valores de Km superiores a la enzima libre. La termoestabilidad de la glucosa oxidasa modificada con el polímero CMC-CD se incrementó de 45 ºC hasta 51 ºC. A través de esta metodología, se logró una mayor estabilidad de la enzima modificada con CMC-CD, la cual mostró 2.2 veces más resistencia a la inactivación térmica a 45 ºC. Por otra parte, este derivado retuvo el 75% de su actividad inicial después de tres horas de incubación lo cual demuestra una remarcada estabilidad en presencia del surfactante aniónico duodecilsulfato de sodio y reveló una máxima actividad a valores de pH alcalinos (7.5). La glicosilación covalente de la glucosa oxidasa con el polímero CMC-CD puede ser utilizada efectivamente para el mejoramiento de la estabilidad de esta enzima.

The aim of this work was to develop a glucose biosensor based on electrochemical properties of a graphite-epoxy-platinum- glucose oxidase composite. The food and beverage industry demand fast, precise and reliable analytical methods to evaluate and to assure the quality of its products and to optimize its processes. The development of amperometric enzyme biosensors represents a viable option that satisfies these requirements. The working potential and the characterization of the response of the biosensor were determined by cyclic voltammetry and amperometry, respectively. The biosensor response was máximum at 600 mV, with a response time of 20 seconds within the concentration range of linear response from 0.1 to 5 mM glucose and sensitivity of 1.4 μA/mM. The stability and lifetime of the proposed biosensor depend on the frequency of use, where the biocomposite acts as a reservoir of enzymes and electrochemical mediator.

El objetivo del trabajo consistió en desarrollar un biosensor de glucosa basado en las propiedades electroquímicas de un compósito grafito-epoxi-platino-glucosa oxidasa. La industria de alimentos y bebidas demanda métodos analíticos rápidos, precisos y confiables para evaluar y asegurar la calidad de sus productos y optimizar sus procesos. El desarrollo de biosensores enzimáticos amperométricos representa una opción viable que satisface estos requerimientos. El potencial de trabajo y la caracterización de la respuesta del biosensor desarrollado se determinaron por voltamperometría de barrido lineal y amperometría, respectivamente. La respuesta del biosensor fue máxima a 600 mV, su tiempo de respuesta fue de 20 segundos en un intervalo de concentración de respuesta lineal de 0.1 a 5 mM de glucosa y sensibilidad de 1.4 μA/mM. La estabilidad y vida útil del biosensor desarrollado dependen de la frecuencia de uso y el biocompósito actúa como reservorio de enzimas y de mediador electroquímico.

La enzima glucosa oxidasa (GOX) es componente esencial de reactivos para determinación de glicemia y otros parámetros paraclínicos. Para su producción suele utilizarse Aspergillus niger cultivado en medios con sustratos costosos de grado analítico. Por tanto, se planteó purificar GOX producida por A. niger, cultivado con nutrientes complejos y económicos, y evaluar su efectividad en mediciones de concentración de glucosa. Para ello se formularon 4 tipos de medio, uno estándar y tres alternativos con azúcar industrial y fertilizantes. Los cultivos se realizaron en fiolas con 50 mL de medio bajo un diseño de bloques al azar, evaluando el crecimiento y la actividad enzimática. El medio alternativo con mejor rendimiento fue seleccionado para producción en biorreactores de 5 L y posterior purificación de GOX (fraccionamiento salino y cromatografías en Sephadex G-25 y DEAE-Sephacel). Se obtuvieron altos rendimientos de enzima (7 mg por carga) de alta pureza (39000 U/g) y un K M aparente para glucosa de 22 ± 1 mM. El reactivo de diagnóstico formulado presentó un intervalo de linealidad óptima (de 50 a 600 mg/dL de glucosa). Por lo que se concluyó que los sustratos en el medio de cultivo alternativo no interfieren en la calidad y cantidad del producto purificado.

The enzyme glucose oxidase (GOX) is an essential component of reagents used for determining blood sugar and other clinical parameters. Aspergillus niger grown in media prepared with expensive analytical grade substrates is used for its production. Therefore, we decided to purify GOX produced by A. niger grown in media with complex and inexpensive nutrients and to evaluate its efficiency in glucose concentration measurement assays. For this purpose we formulated four types of media, one standard and other three alternatives in which we used industrial sugar and fertilizers. The cultures were done in 50 mL flasks under a random block design, evaluating growth and enzymatic activity. The alternative medium with the best yield was selected for production in 5 liter bioreactors and later GOX purification (saline fractioning and Sephadex G-25 and DEAE-Sephacel chromatography ). Two large enzyme yields were obtained (7 mg per load), highly purified (39000 U/g), and with an apparent 22 ± 1 mM glucose K M. The diagnostic reagent formulated presented an optimal linearity interval (between 50 and 60 mg/dL glucose). Therefore, it was concluded that the substrates in the alternative culture medium did not interfere in the quality and quantity of the purified product.

Glucose-oxidase (GOD), suffers conformational change during freeze-drying. In order to determine the protection level granted by amorphous matrices (AM) of saccharose, maltose, trehalose and their combinations, the thermal inactivation constants (K D) of GOD trapped in these systems were determined. For its evaluation, GOD samples were balanced at different water activities and heated up to 30, 50 and 70 ºC. The best AM found for GOD stability was saccharose-trehalose (5/10% p/v). The K D values (K D.10-4) at a w = 0.0 were 3 at 30 ºC and 6 at 70 ºC. For non-protected GOD under the same conditions these values were 48 at 30 ºC and 257 at 70 ºC.