The aim of this study was to assess the effect of eugenol on the in vitro production of ovine embryos. Oocytes were aspirated and taken for in vitro maturation (IVM), where they were divided into 4 groups: the CON (control), in which the oocytes were immersed in medium without an antioxidant; in the EU10, EU20, EU40 groups, the same medium as in the COM group was used, supplemented with 10, 20, and 40 µM of eugenol, respectively. The degree of expansion of cumulus cells was evaluated. Subsequently, the oocytes underwent in vitro fertilization and in vitro culture, and at the end of this process, the rate of cleaved structures was assessed. Regarding the expansion rate of cumulus cells, the CON group exhibited higher rates compared to the groups supplemented with eugenol. Evaluating oocytes with fully expanded cumulus cells, only the EU40 group showed a lower rate when compared to the rest of the treatment groups. Whereas observing oocytes with partially expanded cumulus cells, the EU40 group showed higher expansion percentages compared to the other treatments. Concerning the presence of the first polar body in the oocytes, it was observed that there was no statistical difference between the treatment groups. Lastly, concerning the cleaved structures, the CON and EU10 groups showed the highest rates compared to the EU20 and EU40 groups. Thus, it was possible to conclude that the use of 10 µM of eugenol in the IVM of ovine oocytes proved to be the optimal concentration of this substance.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del eugenol en la producción in vitro de embriones ovinos. Los ovocitos fueron aspirados y llevados para la maduración in vitro (MIV), donde se dividieron en 4 grupos: el CON (control), en el cual los ovocitos fueron sumergidos en medio sin antioxidantes; en los grupos EU10, EU20, EU40 se utilizó el mismo medio que en el grupo CON, pero con la adición de 10, 20 y 40 µM de eugenol, respectivamente. Se evaluó el grado de expansión de las células del cúmulo. Después de esto, los ovocitos fueron sometidos a la fecundación in vitro y al cultivo in vitro, y al final de este proceso se evaluó la tasa de estructuras clivadas. En cuanto a la tasa de expansión de las células del cúmulo, el grupo CON mostró tasas más altas en comparación con los grupos suplementados con eugenol. Al evaluar los ovocitos con células del cúmulo totalmente expandidas, solo el grupo EU40 mostró una tasa más baja en comparación con el resto de los grupos de tratamiento. Mientras que al observar los ovocitos con células del cúmulo parcialmente expandidas, el grupo EU40 mostró porcentajes de expansión más altos en comparación con los otros tratamientos. Respecto a la presencia del primer corpúsculo polar en los ovocitos, se observó que no hubo diferencia estadística entre los grupos de tratamiento. Por último, en relación con las estructuras clivadas, los grupos CON y EU10 mostraron las tasas más altas en comparación con los grupos EU20 y EU40. Por lo tanto, se pudo concluir que el uso de 10 µM de eugenol en la MIV de ovocitos ovinos resultó ser la concentración óptima de esta sustância.

Objetivando avaliar o efeito do eugenol na produção in vitro de embriões ovinos. Os oócitos, foram aspirados e levados para a maturação in vitro (MIV), onde foram divididos em 4 grupos: o CON (controle), no qual os oócitos foram imersos em meio, sem antioxidante, já nos grupos EU10, EU20, EU40 foi utilizado o mesmo meio do grupo CON, acrescido de 10, 20 e 40 µM de eugenol, respectivamente. Foi avaliado o grau de expansão das células do cumulus. Após isso, os oócitos seguiram para a fecundação in vitro e cultivo in vitro, sendo, ao final desse processo, avaliada a taxa de estruturas clivadas. Em relação à taxa de expansão das células do cumulus, o grupo CON apresentou maiores taxas, quando comparado aos grupos adicionados de eugenol. Avaliando os oócitos com células do cumulus totalmente expandidas, somente o grupo EU40, apresentou-se menor, quando comparado ao restante dos grupos de tratamento. Já observando os oócitos com células do cumulus parcialmente expandidas, o grupo EU40, apresentou maiores percentuais de expansão, quando comparado aos demais tratamentos. Sobre a presença do primeiro corpúsculo polar nos oócitos, observou-se que não houve diferença estatística entre os grupos de tratamentos. E, por último, em relação às estruturas clivadas, os grupos CON e EU10 apresentaram as maiores taxas, quando comparado aos grupos EU20 e EU40. Dessa maneira, foi possível concluir que a utilização de 10 µM de eugenol na MIV de oócitos ovinos apresentou ser a melhor concentração dessa substância.

The aim of this study was to evaluate the effect of quercetin on the in vitro maturation (IVM) of oocytes and the subsequent in vitro fertilization (IVF) of ovine embryos. For this purpose, oocytes were collected and divided into the following treatment groups: control group, containing CON medium (control); and groups Q2, Q4, and Q8, with control medium supplemented with 2, 4, and 8 µM of quercetin, respectively. After IVM, the degree of cumulus cells expansion, presence of the first polar body (PB), and the other part of the oocytes proceeded to in vitro fertilization (IVF), where oocytes were incubated with spermatozoa for a period of 20 hours. Subsequently, the presumptive zygotes underwent in vitro culture (IVC) for 48 hours, and at the end of the process, the rate of cleaved structures was evaluated. The results were expressed in percentage and compared using the Chi-square test, with a significant difference considered when P<0.05. Evaluating the expansion of cumulus cells, the CON and Q2 groups showed the best expansion rates compared to the Q4 and Q8 groups. Regarding the presence of the 1st PB, it was observed that only the Q8 group exhibited lower rates compared to the control group. When evaluating the rate of cleaved structures, it was observed that the Q2 group showed a higher number compared to the Q8 group. Quercetin does not influence the maturation of ovine oocytes.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de la quercetina en la maduración in vitro (MIV) de ovocitos y la posterior fertilización in vitro (FIV) de embriones ovinos. Para ello, se recolectaron y seleccionaron ovocitos divididos en los siguientes grupos de tratamiento: grupo control, que contenía medio CON (control); y los grupos Q2, Q4 y Q8, con medio control al que se le añadieron 2, 4 y 8 µM de quercetina, respectivamente. Tras la MIV se evaluó el grado de expansión de las células del cúmulo, la presencia del primer corpúsculo polar (CP) y la otra parte de los ovocitos se utilizó para la fecundación in vitro (FIV), donde los ovocitos fueron incubados con espermatozoides durante un período de 20 horas. Posteriormente, los presuntos cigotos pasaron a cultivo in vitro (CIV) durante 48 horas y, al final del proceso, se evaluó la tasa de estructuras clivadas. Los resultados se expresaron en porcentaje y se compararon utilizando la prueba de Chi-cuadrado, considerando una diferencia significativa cuando P<0,05. Al evaluar la expansión de las células del cúmulo, los grupos CON y Q2 mostraron las mejores tasas de expansión en comparación con los grupos Q4 y Q8. En cuanto a la presencia del 1er CP, se observó que solo el grupo Q8 mostró tasas más bajas en comparación con el grupo control. Al evaluar la tasa de estructuras clivadas, se observó que el grupo Q2 mostró un número mayor en comparación con el grupo Q8. La quercetina no influye en la maduración de ovocitos ovinos.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da quercetina na MIV de oócitos e na subsequente PIV de embriões ovinos. Para isso, foram colhidos e selecionados oócitos divididos nos seguintes grupos de tratamento: grupo controle, contendo meio CON (controle); e grupos Q2, Q4 e Q8, com meio controle, acrescido de 2, 4 e 8 µM de quercetina, respectivamente. Após a MIV foi avaliado o grau de expansão das células do cumulus, presença do primeiro corpúsculo polar (CP) e a outra parte dos oócitos seguiu para a fecundação in vitro (FIV), onde os oócitos foram incubados com os espermatozoides, por um período de 20 h. Em seguida, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro (CIV), por um período de 48 h e, ao final do processo, foi avaliada a taxa de estruturas clivadas. Os resultados foram expressos em porcentagem e comparados, usando o Teste do Qui-quadrado e foi considerada diferença significativa quando P<0,05. Avaliando a expansão das células do cumulus, os grupos CON e Q2 apresentaram as melhores taxas de expansão, quando comparadas aos grupos Q4 e Q8. Quanto à presença do 1º CP, foi possível observar que somente o grupo Q8 apresentou taxas menores, quando comparado ao grupo controle. Já avaliando a taxa de estruturas clivadas, foi possível observar que o grupo Q2 apresentou maior número quando comparado ao grupo Q8. A quercetina não influencia na maturação de oócitos ovinos.

The objective of this study was to evaluate the effect of α-lipoic acid on in vitro maturation and of l-arginine on in vitro fertilization of oocytes for in vitro production of sheep embryos. Thus, the ovaries were collected at a local slaughterhouse and the oocytes collected by the method of follicular aspiration with a vacuum pump were divided equally into five maturation groups: CON, without addition of antioxidant; CIS group, with cysteamine as an antioxidant source; and the groups ALA5, ALA10 and ALA20, containing concentrations of 5.0, 10.0 and 20.0 µM of ALA. After 24h of maturation, the oocytes were evaluated concerning occurrence and degrees of expansion of the cumulus cells. The oocytes of the best IVM group were destinated for in vitro fertilization (IVF). The selected and capacitated sperm were included in five groups: CON, without addition of capacitator agent; HEP group, with heparin as a capacitator source; and ARG5, ARG10 and ARG20 groups, where IVF occurred in the same HEP medium, replacing heparin with 5 mM, 10 mM and 20 mM L-arginine, respectively. The results were expressed as a percentage and the variables of cumulus cell expansion and number of cleaved structures were compared using the chi-square test in Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P < 0.05. Regarding the expansion of cumulus cells all groups showed 100% expansion, on the total expansion category of COCs it was observed that ALA5 and ALA20 groups did not present the same proportion of COCs with total expansion as CIS group. After in vitro fertilization (IVF), there were no statistical differences in relation to the cleaved structures between CON, HEP, ARG5 and ARG10 groups. However, it was also observed that the use of 20.0 mM of L-arginine reduced the percentage of cleaved structures when compared to the ARG10 group (P<0.05).

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del ácido α-lipoico en la maduración in vitro y la l-arginina en la fecundación in vitro de ovocitos para la producción in vitro de embriones ovinos. Así, se recolectaron ovocitos de ovarios obtenidos de mataderos mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío, los cuales se dividieron en cinco grupos de maduración: CON, sin adición de antioxidante, grupo CIS, con cisteamina como fuente antioxidante y los grupos ALA5, ALA10 y ALA20, que contienen concentraciones de 5, 10 y 20 µM de ácido α-lipoico. Después de 24 h de maduración, se evaluó la aparición y el grado de expansión de las células del cúmulo en los ovocitos. Los ovocitos del mejor grupo MIV fueron destinados a fecundación in vitro (FIV), siendo por tanto incluidos en gotas con medio de fecundación in vitro, junto con los espermatozoides seleccionados y capacitados, resultando en los siguientes grupos: CON, sin adición de agente capacitador; grupo HEP, con heparina como fuente de condensadores; y los grupos ARG5, ARG10 y ARG20, donde se produjo la FIV en el mismo medio HEP, reemplazando la heparina por L-arginina 5, 10 y 20 mM, respectivamente. Los resultados se expresaron en porcentajes y las variables expansión celular del cúmulo y número de estructuras escindidas se compararon mediante la prueba chicuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En cuanto a la expansión de las células del cúmulo, todos los grupos mostraron 100% de expansión. Evaluando los grados de expansión de las células del cúmulo, en la categoría de expansión total, se observó que los grupos ALA5 y ALA20 presentaron la misma proporción de CCO con expansión total que el grupo CIS (Plt;0.05), sin embargo se observa que hay una tendencia a la baja de las estructuras con plena expansión cuando se utilizan antioxidantes. En cuanto a las estructuras escindidas, fue posible identificar que no hubo diferencias estadísticas en relación a las estructuras escindidas, entre los grupos CON, HEP, ARG5 y ARG10. Sin embargo, también se observó que el uso de Larginina 20 mM redujo el porcentaje de estructuras escindidas en comparación con el grupo ARG10 (Plt;0.05).

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido α-lipóico na maturação in vitro e da l-arginina na fertilização in vitro de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos. Desta forma, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro através do método de aspiração folicular com bomba de vácuo, que foram divididos em cinco grupos de maturação: CON, sem adição de antioxidante, grupo CIS, com cisteamina como fonte antioxidante e os grupos ALA5, ALA10 e ALA20, contendo as concentrações de 5, 10, e 20 µM de ácido α-lipóico. Após 24h de maturação, os oócitos foram avaliados quanto à ocorrência e grau de expansão das células do cumulus. Os oócitos do melhor grupo MIV foram destinados à fertilização in vitro (FIV), sendo, portanto, incluídos em gotas com meio de fertilização in vitro, juntamente com os espermatozoides selecionados e capacitados, resultando nos seguintes grupos: CON, sem adição de capacitador agente; grupo HEP, com heparina como fonte de capacitor; e grupos ARG5, ARG10 e ARG20, onde a FIV ocorreu no mesmo meio HEP, substituindo a heparina por L-arginina 5, 10 e 20 mM, respectivamente. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Avaliando os graus de expansão das células do cumulus, na categoria de expansão total observou-se que os grupos ALA5 e ALA20 apresentaram a mesma proporção de CCO com expansão total que o grupo CIS (Plt;0,05), porém se observa que há uma tendência de queda de estruturas com expansão total quando os antioxidantes foram utilizados. Em relação às estruturas clivadas, foi possível identificar que não houve diferenças estatísticas em relação às estruturas clivadas, entre os grupos CON, HEP, ARG5 e ARG10. Contudo, também foi observado que o uso de 20 mM de L-arginina reduziu o percentual de estruturas clivadas quando comparado ao grupo ARG10 (Plt;0,05).

The objective of this study was to evaluate the effect of including cilostazol in the in vitro maturation medium of oocytes on the in vitro production of sheep embryos. Oocytes were collected from ovaries obtained from a slaughterhouse by follicular aspiration with a vacuum pump. The oocytes were divided into four maturation groups: the CON group, where the cumulus-oocyte complexes were immersed in TCM-199 supplemented with 500 IU of penicillin, 0.5 mg of streptomycin, 1.25 µg of amphotericin, 0.2 mM of sodium pyruvate, 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 10 ng/mL of epidermal growth factor (EGF), 10 µg/mL of FSH, 10 µg/mL of LH, 10 µg/mL of estradiol, and 100 µM of cysteamine; and in the CILO0.3, CILO1, and CILO10 groups, the oocytes were matured in the CON group medium without the addition of cysteamine and supplemented with concentrations of 0.3, 1, and 10 µM of cilostazol, respectively. After 24 hours, the oocytes were evaluated for the presence or absence of cumulus cells and the degree of expansion and then subjected to in vitro fertilization (IVF) with sperm in FIV medium. After IVF, the presumptive zygotes were cultured in vitro. Cleavage was evaluated on day 2, with day 0 being the start of IVF. Results were expressed as a percentage, and variables such as cumulus cell expansion and the number of cleaved structures were compared using the chi-square test in the Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P lt; 0.05. All groups showed 100% cumulus cell expansion, and there were no significant differences in cumulus cell expansion degree between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P gt; 0.05), as well as no significant differences in cleavage rates between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P gt; 0.05).

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la inclusión de cilostazol en el medio de maduración in vitro de ovocitos sobre la producción in vitro de embriones ovinos. Para ello, se realizaron recolecciones de ovocitos provenientes de ovarios obtenidos en un matadero mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío. Los ovocitos se dividieron en cuatro grupos de maduración: grupo CON, donde los complejos cúmulus ovocitos se sumergieron en TCM-199, suplementado con 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sodio, 10% (v/v) de suero fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de factor de crecimiento epidérmico (EGF), 10 µg/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol y 100 µM de cisteamina; y en los grupos CILO0,3; CILO1 y CILO10, los ovocitos se maduraron en el medio del grupo CON, pero sin la adición de cisteamina y suplementado con las concentraciones de 0,3; 1 y 10 µM, respectivamente. Después de 24 horas, los ovocitos se evaluaron en cuanto a la presencia o no de células del cúmulus y en cuanto al grado de expansión y se destinaron a la fecundación in vitro, en medio FIV, junto con espermatozoides. Después de la FIV, los presuntos cigotos siguieron para el cultivo in vitro. Se evaluaron las clivajes en el día 2, siendo el día 0 el día del inicio del CIV. Los resultados se expresaron en porcentaje y las variables de expansión de las células del cúmulus y número de estructuras clivadas se compararon mediante la prueba del chi-cuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EE. UU., 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En relación a la expansión de las células del cúmulus, todos los grupos presentaron el 100% de expansión. No hubo diferencias significativas en cuanto al grado de expansión de las células del cúmulus entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P gt; 0,05), así como no hubo diferencias significativas entre las tasas de clivaje entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P gt; 0,05).

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da inclusão de cilostazol no meio de maturação in vitro de oócitos sobre produção in vitro de embriões ovinos. Para isso, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro por meio do método de aspiração folicular com bomba de vácuo. Os oócitos foram divididos em quatro grupos de maturação: grupo CON, onde os complexos cumulus oócitos foram imersos em TCM-199, suplementado com 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sódio, 10% (v/v) de soro fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de fator de crescimento epidérmico (EGF), 10 µg/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol e 100 µM de cisteamina; e nos grupos CILO0,3; CILO1 e CILO10, os oócitos foram maturados no meio do grupo CON, mas sem a adição de cisteamina e suplementado com as concentrações de de 0,3; 1 e 10 µM , respectivamente. Após 24h, os oócitos foram avaliados quanto a presença ou não de células do cumulus e quanto ao grau de expansão e destinados à fecundação in vitro, em meio FIV, juntamente com espermatozoides. Após a FIV, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro. Foram avaliadas clivagens no dia 2, sendo dia 0 o dia do início do CIV. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Não houve diferenças significativas quanto ao grau de expansão das células do cumulus entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P gt; 0,05), assim como não houve diferenças significativas entre as taxas de clivagem entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P gt; 0,05).

Resumen Antecedentes: La tinción con azul cresil brillante (BCB) es un método no invasivo para seleccionar ovocitos aptos para el desarrollo embrionario. Por tanto, es una herramienta útil para selecionar los ovocitos de mejor calidad en temporadas de restricción de forraje. Objetivo: Evaluar el efecto de la estacionalidad sobre la maduración nuclear y calidad de los ovocitos seleccionados por el test BCB. Métodos: Los complejos cumulus-oophorus (CCOs) fueron obtenidos durante el verano y el invierno de 2010 y 2011. Los CCOs seleccionados se mantuvieron durante 90 min a 38,5 oC en una incubadora de CO2 en un medio TCM 199 con 10% de suero fetal bovino y antibióticos, suplementado con 26 µM de azul cresil brillante. Luego se separaron según el color del citoplasma (BCB+ -azul y BCB− -incoloro). Posteriormente, los CCOs se maduraron durante 22 h. La evaluación de la maduración nuclear se realizó a las 22 h de cultivo. Resultados: La proporción de ovocitos BCB− fue mayor en el invierno de 2010, pero no hubo un aumento de ese grupo en el invierno de 2011. El porcentaje de ovocitos que alcanzaron la etapa de metafase II fue mayor en el grupo control y BCB+ con respecto al grupo BCB−. Conclusión: La estación del año influye en el porcentaje de ovocitos más aptos para la producción de embriones en situaciones donde las donadoras de ovocitos reciben alimentación a base de pastos, ya que este método fue eficaz para determinar el efecto de la estacionalidad en la competencia de ovocitos bovinos en alcanzar la maduración nuclear.

Abstract Background: The brilliant cresyl blue (BCB) staining is a non-invasive test to select the best-suited oocytes for embryonic development. This makes it a useful tool to select best-quality oocytes at the times of the year when there is forage restriction. Objective: To evaluate the effect of seasonality on the nuclear maturation and quality of oocytes selected by the BCB test. Methods: The cumulus-oophorus complexes (COCs) were obtained in summer and winter of 2010 and 2011. Selected COCs were maintained for 90 min at 38.5 °C in a CO2 incubator, in TCM 199 medium containing 10% fetal bovine serum and antibiotics, and supplemented with 26 µM brilliant cresyl blue. Afterwards, they were divided according to the ooplasm staining (BCB+ -blue; BCB− -unstained). Subsequently, COCs were matured for 22 h. Nuclear maturation was evaluated at 22 h of culture. Results: The proportion of BCB− oocytes was higher in the winter of 2010, but there was no increase in this group in the winter of 2011. The percentage of oocytes that reached metaphase II was higher in control and BCB+ groups in relation to oocytes from BCB− group. Conclusion: The season of the year influences the percentage of oocytes best suited for embryonic production in situations in which oocyte donors receive pasture-based feeding, since the method was effective in determining the effect of seasonality on the competence of bovine oocytes to reach nuclear maturation.

Resumo Antecedentes: O método do azul cresil brilhante (BCB) não é invasivo e seleciona ovócitos mais aptos ao desenvolvimento embrionário. Portanto é ferramenta útil para selecionar ovócitos de melhor qualidade em épocas do ano que ocorre restrição de pastagem. Objetivo: Avaliar o efeito da sazonalidade sobre a maturação nuclear e a qualidade dos ovócitos selecionados pelo teste BCB. Métodos: Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram obtidos no verão e inverno de 2010 e 2011. Os CCOs selecionados foram mantidos por 90 min, a 38,5 °C, em incubadora de CO2, em meio TCM 199 contendo 10% de soro fetal bovino e antibióticos, e suplementado com 26 µM de azul cresil brilhante. Em seguida, estes foram divididos de acordo com a coloração do citoplasma (BCB+ -azuis e BCB− -incolores). Então os CCOs foram maturados durante 22 h. A avaliação da maturação nuclear foi realizada às 22 h de cultivo. Resultados: A proporção dos ovócitos BCB− foi maior no inverno de 2010, mas não houve aumento desse grupo no inverno de 2011. O percentual de ovócitos que atingiu o estágio de metáfase II foi maior no controle e no grupo BCB+ em relação ao grupo BCB−. Conclusão: A estação do ano influencia o percentual de ovócitos mais aptos a produção de embriões, em situações onde as doadoras de ovócitos recebem alimentação baseada em pastagens, já que o método se mostrou efetivo para determinação do efeito da sazonalidade sobre a competência de ovócitos bovinos em atingirem a maturação nuclear.

The study was conducted on the embryo/foeti of goat from 0-150 days of gestation, divided into group I (0-30 days), group II (31-60 days), group III (61-90 days), group IV (91-120 days) and group V (121-150 days of gestation). In group I whole embryo was processed and serial sections were cut whereas, in rest of the groups, pelvic urethra was dissected out and the tissues from the representative areas were used for the study. Grossly, on 49.33 days of gestation the pelvic urethra was present in the form of smooth cylindrical tube, approximately 4mm in length. The primordial of vesicular gland and bulbourethral gland appeared on 52 days of gestation at the junction of neck of urinary bladder with pelvic urethra and at the junction of pelvic and penile urethra respectively. The length, width, height and circumference of pelvic urethra increased with increased in gestation period, however the length (7 times) and circumference (9 times) increased maximum from group II to group V. The morphometrical parameters (length, width, height and circumference) of pelvic urethra were significantly correlated with the age and weight of foetus throughout gestation period. The colliculus seminalis, which was present in the form of ridge on 72 days of gestation, became distinct on 75 days of gestation. Histologically, on 28 days of gestation, the urogenital sinus was present as a cleft with in the cluster of cells. On 55 days of gestation, the process of luminization started with in the wall of pelvic urethra, which started first in its caudal part and proceeded cranially. All the four layers (Tunica mucosa, submucosa, muscularis and adventitia) were distinct. The lumen was lined with 3-4 layers of stratified epitheliumin group II but in group III on 70 days of gestation and beyond this distinct transitional epithelium was present. The formation of cavernous spaces started at 59 days of gestation. Their number and size increased with increased in gestation period. The thickness of submucosa, muscularis and adventitia increased with the advancement in the age of foetus, whereas the height of epithelium decreased.

El estudio se realizó sobre embriones/fetos de cabras de 0 a 150 días de gestación, divididos en grupo I (0-30 días), grupo II (31-60 días), el grupo III (61-90 días), grupo IV (91 a 120 días) y grupo V (121-150 días de gestación). En el grupo I embriones enteros fueron procesados mediante cortes seriados, en el resto de los grupos, la uretra pélvica fue disecada y los tejidos de las áreas representativas se utilizaron para su estudio. Macroscópicamente, a los 49,33 días de gestación de la uretra pélvica estaba presente en forma de tubo cilíndrico liso, aproximadamente 4 mm de longitud. El primordio de la glándula vesicular y la glándula bulbouretral apareció a los 52 días de gestación en el cruce de cuello de la vejiga urinaria con la uretra pélvica y el cruce de la uretra pélvica y pene respectivamente. La longitud, ancho, alto y circunferencia de la uretra pélvica aumentó con el avance del período de gestación, sin embargo, la longitud (7 veces) y el perímetro (9 veces) aumentó en el grupo II y V. Los parámetros morfométricos (longitud, ancho, alto y circunferencia) de la uretra pélvica se correlacionaron significativamente con la edad y el peso del feto durante toda la gestación. El colículo seminal, que estaba presente en la forma de cresta a los 72 días de gestación, se mostró distinta a los 75 días de gestación. Histológicamente, en 28 días de gestación, el seno urogenital estaba presente como una hendidura con un grupo de células. En 55 días de gestación, el proceso de luminización comenzó en la pared de la uretra pélvica, que comenzó en su primera parte caudal y procedió cranealmente. Las cuatro capas (túnica mucosa, submucosa, muscular y adventicia) eran distintas. La luz estaba cubierta con 3-4 capas de epitelio estratificado en el grupo II, pero en el grupo III a los 70 días de gestación y más, un epitelio de transición distinto estuvo presente. La formación de espacios cavernosos comenzó a los 59 días de gestación. Su número y tamaño aumentan con el aumento en el período de gestación. El espesor de la submucosa, muscular y adventicia aumenta con el avance de la edad del feto, mientras que la altura del epitelio disminuye.

The aim was to study the effect of preconception gamma irradiation on the gross morphometry of the adult female mice and its embryo. Twenty-seven mice; 18 females and 9 males: subdivided into 3 groups namely (Control, Non-Irradiation and Radiation) containing 6 females and 3 male mice each in 2:1 ratio. A gamma irradiation dose of 1Gy/min was delivered to each batch of mice exposed by a Cobalt 60, Theratron 780c model, by Atomic Energy of Canada Limited (AECL) at the Radiotherapy department of the University College Hospital, Ibadan. All the animals were mated 1 week post irradiation. Vaginal plugs were confirmed, and the pregnant females were sacrificed on day 14 of gestation by chloroform inhalation. The gross morphology of the female mice and their harvested litters were assessed and statistically analysed. A total of 113 embryos were harvested in all groups; 54 for Control, 50 for Non-Irradiated and 9 for the irradiation group. The gross morphologic assessments of the fetuses were statistically significant at P value < 0.05 for all the 3 groups compared. These findings suggest that a preconception irradiation affects the morphology of the female mice and its progeny.

El objetivo fue estudiar el efecto de la irradiación gamma antes de la concepción sobre la morfometría macroscópica de ratones hembra adultos y los embriones de sus crías. Veinte y siete ratones, 18 hembras y 9 machos, divididos en 3 grupos (control, sin irradiación e irradiado) con 6 hembras y 3 machos cada uno en proporción 2:1. Una dosis de radiación gamma de 1 Gy/min fue aplicada a uno de los ratones expuestos por un equipo Cobalt 60, Theratron modelo 780c, Atomic Energy of Canada Limited (AECL) en el departamento de radioterapia del Hospital University College de Ibadan. Todos los animales se aparearon 1 semana después de la irradiación. Se confirmaron los tapones vaginales, y las hembras preñadas fueron sacrificadas en el día 14 de la gestación por inhalación de cloroformo. La morfología general de los ratones hembras y sus camadas fueron evaluadas y analizadas estadísticamente. Un total de 113 embriones se recolectaron en todos los grupos, 54 del grupo control, 50 del grupo no irradiados y 9 del grupo irradiado. Las evaluaciones morfológicas macroscópicas de los fetos fueron estadísticamente significativas (p<0,05) para los 3 grupos de comparación. Estos hallazgos sugieren que una irradiación previa a la concepción afecta a la morfología de los ratones hembra y su progenie.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del estatus reproductivo (gestantes versus vacías) de hembras mestizas Cebú postmortem sobre el número de ovocitos recuperados, la tasa de división embrionaria y la tasa de producción de blastocitos. Los complejos cúmulo ovocito (CCO) recolectados a través del tasajeo de los ovarios, fueron seleccionados, contados y separados por grupo en: hembras gestantes (ovarios con o sin cuerpo lúteo [CL]) y hembras vacías (ovarios con o sin CL). El número de CCO recuperados fue analizado utilizando el procedimiento GENMOD, asumiendo una distribución de Poisson, mientras que los datos de división y producción de blastocitos fueron analizados utilizando una regresión logística asumiendo una distribución binomial. Se evaluó un total de 4658 CCO obtenidos de 437 ovarios, siendo significativamente mayor (p<0,03), el número de CCO obtenidos de ovarios procedentes de vacas gestantes (12,5±2,8), comparado con el número de CCO provenientes de ovarios de hembras vacías (9,4±2,5). La tasa de división embrionaria, fue significativamente mayor (p<0,006) para el grupo de hembras vacías (42,3±0,01%) con respecto a las gestantes (34,5±0,02); asimismo, la interacción estatus reproductivo por CL afectó (p<0,006) la tasa de división embrionaria: vacas gestantes con CL (Gest-CL) y vacas gestantes sin CL (Gest-NoCL; 31,1±0,02% [76/244] vs. 38,0±0,03% [98/258], respectivamente) y vacas vacías con CL (Va-CL) y vacas vacías sin CL (Va-NoCL; 46,7±0,03% [312/738] vs. 38,0±0,03% [143/376], respectivamente). No hubo diferencia significativa en la tasa de producción de blastocitos a partir de embriones divididos de hembras gestantes (10,7±0,02%; 17/160) comparado con el grupo de hembras vacías (10,0±0,02%; 30/312). Estos resultados indican que la selección de los CCO, con base en el estatus reproductivo de la hembra bovina, es un aspecto importante a tomar en cuenta para mejorar la producción de embriones in vitro.

In order to improve the oocyte selection for in vitro embryo production, the present work evaluated the effect of the reproductive status of postmortem Crossbred Zebu cows (pregnant [P] versus non-pregnant [NP]) on the number of recovered oocytes, the cleavage (number of cleaved embryos/number of recovered oocytes) and the blastocyst production (number of blastocyst/number of cleaved embryos) rates. Cumulus oocytes complexes (CCOs) were selected, counted and separated depending on the donor status: P cows with or without a corpus luteum (CL) and NP cows with (CL) or without (NoCL) a CL. Data for number of recovered oocytes was analyzed using the GENMOD procedure assuming a Poisson distribution, whereas data for cleavage and blastocyst production rates were analyzed using a logistic regression assuming a binomial distribution. The statistical model for all the analyses included the effects of the reproductive status (P vs. NP), presence or not of a CL (CL vs. NoCL) and the interaction of reproductive status x CL. A total of 4658 CCOs obtained from 437 ovaries was evaluated. The number of CCOs collected per ovary from P cows (12.5±2.8) was significantly higher (p<0.03) than from NP cows (9.4±2.5). On the other hand, the cleavage rate was significantly higher (p<0.006) in NoP cows (42.3+0.01%) than in P cows (34.5+0.02). Nevertheless, the interaction between reproductive status and CL affected (p<0.006) the cleavage rate: P-CL: 31.1+0.02% (76/244); P-NoCL: 38.0+0.03% (98/258); NoP-CL: 46.7+0.03% (312/738) and NoP-NoCL: 38.0+0.03% (143/376). There were not differences in blastocyst production rate from cleaved embryos for P cows (10.7+0.02%; 17/160) compared with NoP cows (10.0+0.02%; 30/312). These results show that the reproductive status of a cow should be taken into account for oocyte selection, in order to improve embryo production.

One thousand twenty five oocytes from sow ovaries, obtained in slaughter houses were recovered. From them, 165 (treatment 1 ) were matured with 075 U.I. of FSH and 0.75 U.I. of LH, and 125 (treatment 2 ) with 1.5 U.I. of FSH and 1.5 U.I. of LH. Maturation was evaluated by fixation with alcohol-acetic acid and stained with acetic orcein. There was a 40% and 39% of maturated oocytes from the treatments 1 and 2 respectively, without significant statistical differences among them. In the two treatments for in vitro fertilization, the maturation of oocytes was evaluated by polar body observation. They were divided into two groups: one having 155maturated with the first treatment and the other having 137 oocytes with the second treatment, which corresponded to a 42.1% and 37.3% respectively . As result of in vitro fertilization, 122 embryos were obtained in their different stages, reaching 76 with the first treatment and 46 with the second one, for a 49% and 33.5% (a different fom b p <0.05) respectively . It is concluded that even though FSA and LH supplement to the maturation medium TCM-199 (in vitro) did not significantly affect such maturation, in the development of embryos, there was a higher percentage of morulas and embryonic development with the use of 0.75U.I. of FSH and 0.75 0.75U.I: of LH.

Se recuperaron 1025 ovocitos de ovarios de cerdo obtenidos en mataderos, de estos 165 (tratamiento 1) se maduraron con 0.75 U.I. de FSH y 0.75 U.I. de LH y 125 (tratamiento 2) con 1.5 U.I. de FSH y 1.5 U.I. de LH, la maduración fue evaluada por fijación con alcohol-ácido acético y teñido con orceína acética. Se obtuvo un 40 % y 39.2 % de ovocitos madurados para los tratamientos 1 y 2 respectivamente, sin diferencia estadística significativa entre los mismos. En los dos tratamientos para la fertilización in vitro se evaluó la maduración de los ovocitos mediante la observación de cuerpo polar, los cuales fueron divididos en dos grupos: se obtuvieron 155 ovocitos madurados con el primer tratamiento y 137 ovocitos con el segundo tratamiento, lo que corresponde a 42.1% y 37.3% de madurados, respectivamente. Como resultado de la fertilización in vitro se obtuvieron 122 embriones en sus diferentes etapas alcanzando, 76 embriones en el primer tratamiento y 46 con el segundo tratamiento, para un 49%ª y 33.5%b (a diferente de b P<0.05). Se concluye que si bien el suplemento de FSH y LH al medio de maduración TCM-199 in vitro, no afectó significativamente la maduración, en el desarrollo de embriones se obtuvo un mayor porcentaje de mórulas y desarrollo embrionario con el empleo de 0.75 U.I. de FSH y 0.75 U.I. de LH.

El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilización in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitió la centrifugación de los espermatozoides para los procesos de lavado y selección espermática. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo más pequeño (pozos internos) de aproximadamente 50 μl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de diámetro). El procedimiento consistió en llenar los pozos interno y externo con 700 μl de medio de fertilización, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30 μl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Despuιs de una hora se removiσ todo el contenido del pozo externo y se dejσ el contenido del pozo interno con el medio y las células germinales por un periodo de incubación de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete días con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizó un gradiente de Percoll 45-90% para la selección espermática. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporción de ovocitos que llegaron al estadio de morúla y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodológica son similares a los obtenidos con la metodología convencional (p<0.05). Estos resultados indican que ambos métodos producen resultados similares pero la nueva propuesta metodológica permite ahorrar tiempo, es menos laboriosa, consume menos reactivos y permite reducir la manipulación de las células espermáticas con buenos efectos eventuales en el mejoramiento de los procedimientos de reproducción in vitro.

This study was conducted to evaluate an in vitro fertilization (IVF) procedure that avoids the washing-selection-centrifugation of spermatozoa prior to coincubation with oocytes. A special dish was constructed as follows: in the middle of each of the 4-wells of a conventional plastic dish (larger wells), another little (≈50 μl) glass dish (inner well) was placed (0.3 mm-tall x 0.8 mm in diameter), in such a way that when the larger plate was filled with 700 μl of IVF media (Fert-TALP), the inner well was also filled up to overflowing. Ten in vitro matured oocytes were set into the inner well, and 30 μl of thawed semen were placed on the bottom of the outer well. After one hour of incubation, the media from the outer well was removed, and the well with the remaining media and the germ cells, were incubated for 16 hours. Presumptive zygotes were cultured in a CR1aa media for seven days with a culture media replace at 72 h. As a control, a conventional IVF, using the classical 45%-90% Percoll gradient selection, was carried out. The cleavage rates (70.8 vs. 73.1) and the proportion of oocytes reaching morula and blastocyst stages (18.8 vs. 20.3) by the "easy-IVF" were similar to the results obtained by the classical method (p<0.05). These results indicate that the two methods yield similar results but the "easy-IVF" definitely saves time, human effort, reagents, and after all reduces the manipulation of the sperm with eventual good effects in the long run toward improving in vitro reproduction procedures.

O objetivo deste estudo foi avaliar um novo procedimento de fertilização in vitro (FIV) de oócitos bovinos, que foi omitida na centrífuga esperma lavar os processos de seleção e de esperma. Dentro de cada um dos poços pratos convencionais quatro poços (poços externa) um novo bem menor (poços internos) cerca de 50 μl fato em vidro (0,3 mm de altura por 0,8 mm de diâmetro) foram introduziu. O procedimento foi de encher poços interna e externamente com 700 μ l meio de fertilizaηγo, até que a fossa foi coberto por meios internos e, em seguida, depositadas 10 CCOs em poços internos; então 30 μl previamente descongelados sêmen foi depositado no fundo da cova fora. Depois de uma hora é retirada a todo o conteúdo da cova, e foi deixada fora da doméstica no conteúdo do bem com o ambiente e células germinativas por um período de incubação de 16 h. A alegada zygotes foram cultivados em meio CR1aa por um período de 7 dias com uma mudança no meio-72h. Como um controle, utilizado uma gradiente de Percoll 45-90% de selecção de espermatozóides. A taxa de oócitos foi dividida (70.8 vs 73.1) e da proporção de oócitos que atingiu o estádio e foi Mórula blastocisto (18.8 vs 20.3), respectivamente. Os resultados obtidos com a nova metodologia proposta são semelhantes aos obtidos com a metodologia convencional (p<0.05). Estes resultados indicam que ambos os métodos produzem resultados semelhantes, mas a nova proposta metodológica economiza tempo, é menos trabalhoso, consome menos reativo e reduzem a manipulação de células espermáticas com bons potenciais efeitos na melhoria dos procedimentos reprodução in vitro.

Introduction: Embryo donation displays special characteristics within the Latin American context, where spare cryopreserved embryos are not currently available as is the case of industrialized countries. The catholic church also plays a significant role. The need to regulate ethically and legally the practice of embryo donation suggests that we need to take into account the opinions from the main key players: patients, health professionals, and society. The objective of this study is to explore the patients perceptions vis a vis potential embryo donation for research purposes. Materials and methods: A descriptive, cross-sectional design included a tape recorded semi-structured interview administered to 3 2 patients attending a private clinic in Lima, Peru. Participants had undergone complex techniques of assisted fertilization (FIV and ICSI). The verbal Gottschalk analytical method was used to identify predominant anxiety manifestations in the interviews. Results: The most common types of anxiety associated with embryo donation for research in this group of participants were guilt, separation anxiety and shame. Divided by gender, the more common types of anxiety reported by men were guilt, shame and separation anxiety. Women reported guilt, separation anxiety and shame.

Introducción: La donación de embriones presenta características especiales en el marco latinoamericano, donde no existe la constante de los países desarrollados de tener embriones criopreservados sobrantes. Además, la religiosidad cristiana occidental es un poco mayor. La necesidad de regular desde lo ético y lo jurídico la práctica de la donación de embriones sugiere que se pueden tomar en cuenta las opiniones de los involucrados: los pacientes, los profesionales de la salud, y la sociedad. El objetivo de este estudio es explorar la esfera de los pacientes mediante la búsqueda de tipos de ansiedad frente a la donación hipotética de embriones para investigación. Material y métodos: Con un diseño descriptivo y transversal se realizó una entrevista semiestructurada, individual y grabada, a 32 pacientes en una clínica privada en Lima, Perú, que habían acudido a técnicas complejas de fecundación asistida (FIV e ICSI); al transcrito de la entrevista se le aplicó la escala de ansiedad del método de análisis de la conducta verbal de Gottschalk et al., identificándose el tipo de ansiedad predominante en cada entrevistado. Resultados: Los tipos de ansiedad más comunes frente a la donación de embriones para investigación en este grupo de participantes fueron la ansiedad por sentimiento de culpa, la ansiedad por separación y la ansiedad por vergüenza. Divididos por género, los tipos de ansiedad más comunes para el género masculino fueron la ansiedad por culpa, vergüenza y separación; para el femenino, la ansiedad por culpa, separación y vergüenza.