ABSTRACT Background: Despite the large use of folic acid supplements, there are very few cases of reported allergy. Clinical case: A 38-year-old woman, experienced palmoplantar pruritus, generalized urticaria, angioedema and conjunctival hyperemia, 30 minutes after the intake of a 5mg folic acid tablet. She was taken to the Emergency Department and on discharge was referred to the Allergy and Clinical Immunology Department, where the patient underwent a diagnostic workup. The Skin Prick Test (SPT) was positive for the 5 mg/mL concentration and the Basophil Activation Test (BAT) was considered positive for both dilutions, from an initial solution concentration of 5mg/ml: 1/100 dil (CD63=9.03%; SI=10.1) and 1/160 dil (CD63=7.46%; SI=8.4). Discussion/Conclusion: We report a patient with an immediate reaction to folic acid with positive SPT and BAT, which favors an IgE-mediated allergy. To our knowledge, this is the first case describing the use of a BAT in the diagnostic workup of folic acid allergy.

RESUMO Introdução: Apesar da grande utilização de suplementos de ácido fólico, existem poucos casos de alergia relatados. Descrição do caso: Mulher de 38 anos, que apresentou prurido palmoplantar, urticária generalizada, angioedema e hiperemia conjuntival 30 minutos após a ingestão de um comprimido de ácido fólico de 5mg. Foi levada ao serviço de urgência e, à data de alta, referenciada para o serviço de imunoalergologia para realização de estudo. O teste cutâneo por picada (TCP) foi positivo para a concentração de 5 mg/ml e o teste de ativação de basófilos (TAB) foi considerado positivo para ambas as diluições, a partir de uma concentração inicial de 5mg/ml: 1/100 dil (CD63=9,03%; SI=10,1) e 1/160 dil (CD63=7,46%; SI=8,4). Discussão/conclusões: Descrevemos uma doente com uma reação imediata ao ácido fólico com TCP e TAB positivos, o que favorece uma alergia IgE-mediada. Tanto quanto sabemos, este é o primeiro caso a descrever a utilização do TAB no estudo da alergia ao ácido fólico.

The selection of an underground mining method stems from a multivariate analysis that considers geomechanical, geological, economic, and operational parameters. Even after identifying the most compatible method, there is no assurance that the mining company will achieve the best performance. The geological complexity of some deposits requires adaptations of methods described in the literature to obtain more selectivity and reduce mining waste. There are some studies on geometry of underground structures, but a methodology that describes an adaptation of a room-and-pillar mining method for ore bodies with down-dip varying from 20° to 25° is novel. The present work aimed to reduce dilution by adapting the traditional room-and-pillar mining method (TRP) to inclined ore bodies. This new method is entitled short-hole room-and-pillar (SHRP). The equations that measure the dilution are defined according to the geometry of stopes and openings. The results comprise comparative analyses of the operational and planned dilutions to measure the performance of the SHRP method. The average operating dilution of the SHRP method was more than five times lower than the planned dilution according to the TRP method. Low operational dilution indicates high selectivity of the method and its potential to reduce underground mining tailings.

ABSTRACT The canonical correlation is used to correlate groups of distinct variables. The objective of this study was to use canonical correlation analysis to evaluate the interaction between water quality attributes clogging-causing and the hydraulic performance of non-pressure compensating drippers operating with dilutions of aquaculture effluent in well water. The experiment was in a completely randomized design in a split-split-plot scheme with three replicates, with five dilutions in the plots (Dilution 1: 100% aquaculture effluent; Dilution 2: 75% aquaculture effluent + 25% well water; Dilution 3: 50% aquaculture effluent + 50% well water; Dilution 4: 25% aquaculture effluent + 75% well water; and Dilution 5: 100% well water), three emitters in the sub-plots (ST (1.6 L h-1), SL (1.6 L h-1) and NJ (1.7 L h-1)), and three operating times in the sub-subplots (0, 80 and 160 hours, in which 0 hours operating time means the start of evaluations). The statistical analyses performed were correlation matrix and canonical analysis. The canonical correlation analysis indicated that when the concentrations of attributes increase, the hydraulic performance of the drippers decreases. The interaction of this group of attributes indicates that the clogging of drippers operating with the five dilutions of aquaculture effluent in well water occurs by the combined action of physical, chemical, and biological agents. The ST dripper was the least sensitive to the group of quality attributes of the dilutions, whereas the most sensitive was the SL dripper. variables cloggingcausing causing nonpressure non pressure splitsplitplot split plot replicates 1 100 2 75 25 3 50 4 5 water, , water) subplots sub 1.6 16 6 (1. h1, h1 h h-1 1.7 17 7 h-1)) subsubplots 0, (0 8 evaluations. evaluations . evaluations) increase decreases physical chemical agents 10 1. (1 h- (

RESUMO A correlação canônica é usada para correlacionar grupos de variáveis distintas. O objetivo deste estudo foi utilizar análise de correlação canônica para avaliar a interação entre atributos de qualidade da água causadores de entupimento e o desempenho hidráulico de gotejadores não autocompensantes operando com diluições de efluente de aquicultura em água de poço. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, em esquema de parcelas subsubdivididas, com três repetições, com cinco diluições nas parcelas (Diluição 1: 100% de efluente de aquicultura; Diluição 2: 75% de efluente de aquicultura + 25% de água de poço; Diluição 3 : 50% efluente de aquicultura + 50% água de poço; Diluição 4: 25% efluente de aquicultura + 75% água de poço; e Diluição 5: 100% água de poço), três emissores nas subparcelas (ST (1,6 L h-1) , SL (1,6 L h-1) e NJ (1,7 L h-1)), e três tempos de operação nas subsubparcelas (início do experimento, 80 e 160 horas, em que 0 horas de operação significa o início das avaliações). As análises estatísticas realizadas foram matriz de correlação e análise canônica. A análise de correlação canônica indicou que quando as concentrações dos atributos aumentam, o desempenho hidráulico dos gotejadores diminui. A interação desse grupo de atributos indica que o entupimento dos gotejadores que operam com as cinco diluições de efluente de aquicultura em água de poço ocorre pela ação combinada de agentes físicos, químicos e biológicos. O gotejador ST foi o menos sensível ao grupo de atributos de qualidade das diluições, enquanto o mais sensível foi o gotejador SL. distintas casualizado subsubdivididas repetições 1 100 2 75 25 50 4 5 poço, poço) 1,6 16 6 (1, h1 h h-1 1,7 17 7 h1, h-1)) 8 avaliações. avaliações . avaliações) aumentam diminui físicos biológicos 10 1, (1 h- (

Resumen: El nitrógeno en el suelo es crucial para la agricultura, pero a menudo es limitante, afectando el rendimiento de los cultivos. La deficiencia requiere fertilizantes sintéticos, pero su uso inadecuado causa daños ambientales y costos elevados. Las bacterias del género Rhizobium, simbiontes de leguminosas, ofrecen una solución al fijar nitrógeno de manera sostenible, reduciendo la dependencia de fertilizantes. Esta investigación determinó el número más probable (NMP) de células de Rhizobium spp. procedente de dos biofertilizantes comerciales de origen ecuatoriano y mexicano en condiciones de invernadero. Para esto, se realizó la inoculación directa con disoluciones seriadas (10-1 a 10-10) en macetas con pomina esterilizada al vapor, donde se germinaron plantas de frijol ejotero (Phaseolus vulgaris L.) de la variedad Blue Lake. A los 45 días después de siembra (DDS) se evaluaron los siguientes indicadores morfológicos: área foliar, peso de la planta en húmedo, altura de planta y número de flores, determinándose diferencias estadísticas entre el tipo de biofertilizante y la concentración de cada dilución. El experimento se adecuó a un diseño de bloques completos al azar con arreglo de parcela dividida con tres repeticiones por dilución, en consideración de las fluctuaciones de temperatura presentes en la zona de estudio. El NMP, al 95% de confianza, fue de 4,45x107 rizobios g-1 de pomina en una dilución 10-5 para el biofertilizante mexicano, y 1,48x105 rizobios g-1 de pomina en una dilución 10-4 para el biofertilizante ecuatoriano. La dilución óptima estimada para ambos productos fue de 10-8.

Abstract: Soil nitrogen is crucial for agriculture, but it is often limited, affecting crop yields. Deficiency requires synthetic fertilizers, but their improper use results in environmental damage and high costs. Bacteria of the genus Rhizobium, symbionts of legumes, offer a sustainable solution by fixing nitrogen, thus reducing dependence on fertilizers. This research determined the most probable number (MPN) of cells of Rhizobium spp. from two commercial biofertilizers of Ecuadorian and Mexican origin under greenhouse conditions. For this, direct inoculation with serial dilutions (10-1 to 10-10) was performed in pots with steam-sterilized pumice where Blue Lake variety snap bean (Phaseolus vulgaris L.) plants were germinated. The following morphological indicators were evaluated at 45 days after sowing (DAS): leaf area, plant wet weight, plant height, and number of flowers, determining statistical differences between the type of biofertilizer and the concentration of each dilution. The experiment followed a randomized complete block design with a split-plot arrangement, with three replicates per dilution, considering temperature fluctuations in the study area. The MPN at 95% confidence was 4.45x107 rhizobia g-1 of pumice at a 10-5 dilution for the Mexican biofertilizer, and 1.48x105 rhizobia g-1 of pumice at a 10-4 dilution for the Ecuadorian biofertilizer. The estimated optimal dilution for both products was 10-8.

Abstract The paper describes data from the study of cultural, morphological, and biochemical properties and the pathogenicity and virulence of epizootic isolates of Pasteurella multocida obtained from cattle and saigas. The study aimed to investigate the properties of P. multocida isolated from saigas and cattle during their seasonal migration, with a focus on its role in the epizootic process and potential transmission to farm animals. The research was conducted in a laboratory setting at the West Kazakhstan Agrarian-Technical University. White mice, saigas, and cattle were examined, and pathological and bacteriological analyses were performed on tissues and secretions. Pathogenicity, virulence, and toxigenicity of the isolated Pasteurella cultures were determined through biological tests on white mice. The morphological, cultural, and biochemical properties of the isolates were studied using standard microbiological methods. The study found that P. multocida isolates from both saigas and cattle exhibited high pathogenicity and virulence when tested on white mice. The isolates from sick and dead animals displayed 65.3 and 83.3% pathogenicity, respectively. The isolates were toxic to white mice, with filtrate dilutions showing 100% toxigenicity. Comparative analysis showed morphological and cultural similarities between Pasteurella isolates from saigas and cattle, confirming their identity. This research demonstrates that P. multocida, isolated from both saigas and cattle, contributes to the epizootic process and poses a threat to farm animals. Saigas, in particular, play a role in disease transmission during seasonal migrations. Understanding the ecological interactions between wild and farm animals is crucial for implementing preventive measures to control the spread of infectious diseases, emphasizing the need for comprehensive monitoring and intervention strategies. P migration AgrarianTechnical Agrarian Technical University mice examined secretions Pathogenicity methods 653 65 3 65. 833 83 83.3 respectively 100 identity Saigas particular migrations diseases strategies 6 8 83. 10 1

Resumo O artigo descreve dados do estudo das propriedades culturais, morfológicas e bioquímicas e da patogenicidade e virulência de isolados epizoóticos de Pasteurella multocida obtidos de bovinos e saigas. A pesquisa foi conduzida em laboratório na Universidade Técnica Agrária do Cazaquistão Ocidental. Camundongos brancos, saigas e bovinos foram examinados, e análises patológicas e bacteriológicas foram realizadas em tecidos e secreções. A patogenicidade, virulência e toxigenicidade das culturas isoladas de Pasteurella multocida foram determinadas através de testes biológicos em camundongos brancos. As propriedades morfológicas, culturais e bioquímicas dos isolados foram estudadas utilizando métodos microbiológicos padrão. O estudo descobriu que isolados de P. multocida tanto de saigas quanto de gado exibiram alta patogenicidade e virulência quando testados em camundongos brancos. Os isolados de animais doentes e mortos apresentaram patogenicidade de 65,3 e 83,3%, respectivamente. Os isolados foram tóxicos para camundongos brancos, com diluições de filtrado apresentando 100% de toxigenicidade. A análise comparativa mostrou semelhanças morfológicas e culturais entre isolados de Pasteurella de saigas e bovinos, confirmando sua identidade. Esta pesquisa demonstra que P. multocida, isolado tanto de saigas quanto de gado, contribui para o processo epizoótico e representa uma ameaça para os animais de fazenda. As saigas, em particular, desempenham um papel na transmissão de doenças durante as migrações sazonais. Compreender as interações ecológicas entre animais selvagens e de criação é crucial para a implementação de medidas preventivas para controlar a propagação de doenças infecciosas, enfatizando a necessidade de estratégias abrangentes de monitorização e intervenção. Ocidental brancos examinados secreções padrão P 653 65 3 65, 833 83 83,3% respectivamente 100 identidade fazenda particular sazonais infecciosas intervenção 6 8 83,3 10 83, 1

Abstract Indian major carps are the widely consumed fish species of Pakistan, being a cheap source of proteins and unsaturated fatty acids, they are good for cardiovascular health. Water pollution due to discharge of untreated industrial waste water into water bodies contaminates this precious source of nutrients. The present study therefore, was aimed to assess deterioration of fatty acid profile of three Indian major carp species due to different concentrations of industrial wastes. The water samples were collected from the river Chenab at the site where it receives industrial wastewater via Chakbandi drain. After exposure to 1.5%, 3.0%, and 4.5% dilutions of collected water in different aquaria it was observed that proportion of unsaturated fatty acids in selected fish species were decreased significantly as the intensity of the dose increased (P < 0.05). Conversely the level of saturated fatty acids increased with the increasing dose of treatment (P < 0.05). These findings suggest that untreated wastewater not only deteriorate the fatty acid profile of aquatic animals but also these toxic substances can reach human body through fish meat and pose further health hazards. Therefore, it is highly recommended that industrial effluents should be treated before they are dumped into water bodies. Pakistan nutrients therefore wastes drain 15 1 5 1.5% 30 3 0 3.0% 45 4 4.5 P 0.05. 005 0.05 . 05 0.05) hazards Therefore 1.5 3.0 4. 00 0.0 1. 3. 0.

Resumo As carpas indianas são as espécies de peixes mais consumidas no Paquistão, sendo uma fonte barata de proteínas e de ácidos graxos insaturados e boa para a saúde cardiovascular. A poluição da água por causa do descarte de resíduos industriais não tratados em corpos d’água contamina essa preciosa fonte de nutrientes. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a deterioração do perfil de ácidos graxos de três principais espécies de carpas indianas em diferentes concentrações de resíduos industriais. As amostras de água foram coletadas do rio Chenab no local onde recebe esgoto industrial via dreno de Chakbandi. Após a exposição a diluições de 1,5%, 3% e 4,5% da água coletada em diferentes aquários, foi observado que a proporção de ácidos graxos insaturados em espécies de peixes selecionadas diminuiu significativamente com o aumento da intensidade da dose (P < 0,05). Por outro lado, o nível de ácidos graxos saturados aumentou com a elevação da dose de tratamento (P < 0,05). Essas descobertas sugerem que águas residuais não tratadas não apenas deterioram o perfil de ácidos graxos dos animais aquáticos, mas também essas substâncias tóxicas podem atingir o corpo humano por meio da carne de peixe e representar mais riscos à saúde. Portanto, é recomendável que os efluentes industriais sejam tratados antes de serem despejados em corpos d’água. Paquistão cardiovascular dágua d nutrientes Portanto Chakbandi 15 1 5 1,5% 3 45 4 4,5 aquários P 0,05. 005 0,05 . 0 05 0,05) lado aquáticos dágua. água. 1,5 4, 00 0,0 1, 0,

Resumo Boophilus microplus é uma das principais espécies de carrapatos bovinos, causando grandes perdas econômicas para a indústria de laticínios em todo o mundo, incluindo o Paquistão. Triclorfon e deltametrina são usados no controle de carrapatos bovinos, e seus sprays também são usados em outros programas de controle de pragas que exercem pressão sobre os carrapatos para ganhar resistência. Este estudo tem como objetivo examinar o nível de resistência de Rhipicephalus microplus contra triclorfon e deltametrina. Os carrapatos ingurgitados foram coletados de duas regiões ecológicas de Khyber Pakhtunkhwa, KPK Paquistão, ou seja, Swat & Dir (Zona 1) e Charsadda & Nowshera (Zona 2). Quatro concentrações de acaricidas em duas e dez vezes ppm com três repetições para cada foram usadas em ambos os bioensaios. O ensaio de eclosão de ovos e testes de imersão em adultos foram usados para avaliar o status de resistência. A análise probit do ensaio de eclosão de ovos mostrou a maior porcentagem de eclosão na zona 1 em ambas as diluições (67% na diluição de duas vezes e 68,33% na diluição de dez vezes), enquanto a concentração letal (CL95) foi de 2,187 ppm e dose discriminante (DD) como 4,374 ppm para triclorfon. Na zona 2, a porcentagem de eclosão foi de 73 em duas vezes e 72% em dez vezes, enquanto LC95 foi registrado como 0,599 ppm e DD como 1,198 ppm. Os mesmos parâmetros foram estudados para a deltametrina, e na zona 1 a porcentagem de eclosão foi de 38% na diluição de duas vezes e 37% na diluição de dez vezes, enquanto CL95 foi registrado como 0,001 ppm e DD como 0,002 ppm. Na zona 2, a eclodibilidade foi registrada como 42% na diluição de duas vezes e 43% na diluição de dez vezes. Os valores para LC95 foram registrados como 0,001 ppm e DD como 0,002 ppm. Além disso, a análise do teste de imersão de adulto contra triclorfon revelou os valores de LC50 como 2,85 ppm e LC95 como 4,71 ppm na zona 1 e na zona 2 como 3,14 ppm e 5,28 ppm, respectivamente. Da mesma forma, LC50 e LC95 contra deltametrina foram registrados como 0,79 ppm e 1,71 ppm na zona 1 e 0,45 ppm e 4,325 ppm na zona 2, respectivamente. Com base nos achados deste estudo, o isolado Rhipicephalus microplus mostrou-se mais resistente ao acaricida amplamente utilizado, ou seja, triclorfon do que deltametrina. Para manter a eficácia dos acaricidas em nível nacional, o estudo recomenda o monitoramento contínuo da resistência.

Abstract Boophilus microplus is a major cattle tick specie causing great economic loss to the dairy industry throughout the globe including Pakistan. Trichlorfon and Deltamethrin are used to control bovine ticks, and their sprays are also used in other pest control programs that exert pressure on ticks to gain resistance. This study is aimed to examine the resistance level of Rhipiciphalus microplus against trichlorfon and deltamethrin. The engorged ticks were collected from two ecological regions of Khyber Pakhtunkhwa, KPK Pakistan i.e., Swat & Dir (zone-1), and Charsadda & Nowshera (zone-2). Four concentrations of acaricides in two-fold and ten-fold ppm with three replicates for each were used in both bioassays. Egg hatch assay and adult immersion tests were used to assess the resistance status. The probit analysis of egg hatch assay showed the highest hatching percentage in zone 1 on both dilutions (67-76% on two-fold and 68-88% on ten-fold dilution) while lethal concentration (LC95) was found to be 2.187 ppm and discriminating dose (DD) as 4.374 ppm for trichlorfon. In zone 2, hatching percentage was 73-84 on two-fold and 72-91% on ten-fold dilution while LC95 was recorded as 0.599 ppm and DD as 1.198 ppm. The same parameters were studied for deltamethrin and in zone 1 the hatching percentage was found as 38-56% on two-fold dilution and 37-80% on ten-fold dilution while LC95 was recorded as 0.001 ppm and DD as 0.002 ppm. In zone 2, the hatchability was recorded as 42-58% on two-fold and 43-85% on ten-fold dilution. The values for LC95 was recorded as 0.001 ppm and DD as 0.002 ppm. Further, analysis of adult immersion test against trichlorfon revealed the values of LC50 as 2.85 ppm and LC95 as 4.71 ppm in zone 1 and in zone 2 as 3.14 ppm and 5.28 ppm, respectively. Similarly, LC50 and LC95 against deltamethrin was recorded as 0.79 ppm & 1.71 ppm in zone 1 and 0.45 ppm & 4.325 ppm in zone 2, respectively. Based on the findings of this study, the isolated Rhipicephalus microplus was found to be more resistant to the widely used acaricides i.e., trichlorfon than deltamethrin. In order to maintain the efficacy of acaricides at country level, the study recommends continuous monitoring of resistance.

Resumo A lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda) é a principal espécie que causa danos à cultura do milho no Brasil. Na perspectiva de estudar alternativas de controle desta praga que preservem os inimigos naturais, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência inseticida dos óleos essenciais de Vanillosmopsis arborea e Lippia microphylla sobre S. frugiperda e verificar a seletividade ao predador Euborellia annulipes. Os bioensaios foram realizados no Laboratório de Entomologia Agropecuária da Universidade Federal da Paraíba, utilizando insetos, de 3º instar de S. frugiperda e E. annulipes, oriundos de criação massal no próprio laboratório. As diluições dos óleos foram realizadas em Tween® 80 nas concentrações de 0, 100, 150 e 200 mg mL-1. 1,0 μL de cada diluição foi aplicado na região protorácica dos insetos. A mortalidade de S. frugiperda foi verificada pelo contato tópico do óleo de V. arborea com LC10 = 74,3 mg mL-1 e LC50 = 172,86 mg mL-1, para L. microphyla, LC10 = 51,26 mg mL-1 e LC50 = 104,52 mg mL-1. As concentrações letais observadas para E. annulipes foram V. arborea LC10 = 71,3 mg mL-1 e LC50 = 160,2 mg mL-1. Enquanto L. microphyla, foram LC10 = 50,3 mg mL-1 e LC50 = 134,67 mg mL-1. Os óleos essenciais de V. arborea e L. microphylla são eficientes no controle de S. frugiperda, mas não são seletivos ao predador E. Annulipes.

Abstract Fall armyworm (Spodoptera frugiperda) is the main species that causes damage to the maize crop in Brazil. In the perspective of studying alternatives of control of this pest that preserve the natural enemies, the aim of this research was to evaluate the insecticidal efficiency of the essential oils of Vanillosmopsis arborea and Lippia microphylla on S. frugiperda and verify the selectivity to the predator Euborellia annulipes. The bioassays were carried out in the Agricultural Entomology Laboratory of the Federal University of Paraiba, using insects, from 3rd instar of S. frugiperda and E. annulipes, originating from mass rearing in the laboratory itself. Dilutions of the oils were performed in Tween® 80 at concentrations of 0, 100, 150 and 200 mg mL-1. 1.0 μL from each dilution was applied to the prothoracic region of the insects. The S. frugiperda mortality was verified by topical contact of V. arborea oil with LC10 = 74.3 mg mL-1 and LC50 = 172.86 mg mL-1, for L. microphyla, LC10 = 51.26 mg mL-1 and LC50 = 104.52 mg mL-1. The observed lethal concentrations for E. annulipes were V. arborea LC10 = 71.3 mg mL-1 and LC50 = 160.2 mg mL-1. While L. microphyla, were LC10 = 50.3 mg mL-1 and LC50 = 134.67 mg mL-1. The essential oils of V. arborea and L. microphylla are efficient in the control of S. frugiperda, but are not selective to the predator E. Annulipes.

ABSTRACT: Present study aimed for detection, purification, quantification of Sind Krait (Bungarus sindanus) antivenom from chicken eggs and to determine extracted antivenom efficacy in mice. Hens’ three groups were immunized by sub-lethal doses of Sind Krait venom with adjuvant paraffin oil+lecithin. Booster doses were injected subcutaneously on pectorals muscles at multiple sites after every two weeks upto eight weeks. Antibodies-IgY produced against Sind Krait venom was purified form eggs’ yolk by precipitation method with PEG-6000. Purified antivenom-IgY protein contents were quantified by Nanodrop-photometer, purity accessed by SDS-PAGE, specificity checked by Ochterloneys method and titer estimated by indirect ELISA. Antivenom efficacy was assessed in albino mice. Purified antivnom-IgY exhibited single protein band 180-190 kDa on SDS-PAGE under non-reduced condition and two-bands 63 - 65 kDa and 22 - 25 kDa correspondingly under-reduced condition. Immunodiffusion exhibited sharp precipitation lines of immune-complex (venom and extracted-IgY). In all groups (G1, G2 and G3) antivenom level sharply increase from 3rd to 4th week and maintained thereafter. G2 and G3 presented high titer upto 1:2048 dilutions, while G1 showed upto 1:1024 dilutions, as tested by indirect ELISA. In neutralization assay ED50 dose of G2 and G3 obtained antivenom was 400.23 µg/mice for more than twofold LD50 dose of venom and 100% protection was at 508.84 µg/mice that completely neutralized highly lethal dose of venom. But G1 ED50 was 405.66 µg/mice and provides 100% protection at 554.21 µg/mice. Extracted antivenom, against Sind Krait venom were highly pure, and with high neutralization capacity were produced successfully from eggs yolk first time in Pakistan. ABSTRACT detection purification Bungarus sindanus mice Hens sublethal sub oillecithin oil lecithin oil+lecithin AntibodiesIgY Antibodies IgY PEG6000. PEG6000 PEG 6000. 6000 PEG-6000 antivenomIgY Nanodropphotometer, Nanodropphotometer Nanodrop photometer, photometer Nanodrop-photometer SDSPAGE, SDSPAGE SDS PAGE, PAGE ELISA antivnomIgY antivnom 180190 180 190 180-19 nonreduced non reduced twobands bands 6 2 underreduced immunecomplex immune complex extractedIgY. extractedIgY . extracted-IgY) G1, G (G1 rd th thereafter 12048 1 2048 1:204 dilutions 11024 1024 1:102 ED ED5 40023 400 23 400.2 µgmice µg LD LD5 100 50884 508 84 508.8 40566 405 66 405.6 55421 554 21 554.2 pure Pakistan PEG600 600 PEG-600 18019 18 19 180-1 extracted-IgY (G 1204 204 1:20 1102 102 1:10 4002 40 400. 10 5088 50 8 508. 4056 405. 5542 55 554. PEG60 60 PEG-60 1801 180- 120 20 1:2 110 1:1 4 5 PEG6 PEG-6 12 1: 11 PEG-

RESUMO: O presente estudo teve como objetivo a detecção, purificação, quantificação do soro antiofídico em ovos de galinha e determinar a eficácia do soro antiofídico extraído em camundongos. Os três grupos de galinhas foram imunizados por doses subletais de veneno de cobra Sindhi krait com óleo de parafina adjuvante + lecitina. As doses de reforço foram injetadas por via subcutânea nos músculos do peito em vários locais após cada duas semanas até oito semanas. Anticorpos-IgY produzidos contra o veneno de Krait foram purificados da gema de ovo pelo método de precipitação com PEG-6000. Os conteúdos de proteína antiveneno-IgY purificada foram quantificados por fotômetro nanodrop enquanto a pureza foi acessada por SDS-PAGE. A especificidade do antiveneno-IgY foi verificada pelo método de Ochterloneys e o título foi estimado por ELISA indireto. A eficácia do antiveneno foi avaliada em camundongos albinos. A IgY purificada exibiu uma única banda de proteína 180-190 KDa em SDS-PAGE sob condição não reduzida e duas bandas 63 - 65 KDa e 22 - 25 KDa correspondentemente condição sub-reduzida. A imunodifusão exibiu linhas de precipitação nítidas de imunocomplexo (veneno e IgY extraída). Em todos os grupos (G1, G2 e G3) o nível do soro aumentou acentuadamente da 3ª para a 4ª semana e manteve-se a partir daí. G2 e G3 apresentaram títulos elevados até diluições de 1:2048, enquanto G1 apresentou diluições de até 1:1024, testado por ELISA indireto. No ensaio de neutralização, a dose ED50 de antiveneno G2 e G3 obtida foi de 400,23ug/camundongos para mais de duas vezes a LD50 e 100% de proteção foi @ 508,84ug/camundongos que neutralizam completamente a dose altamente letal de veneno. Mas G1 ED50 foi de 405,66ug/camundongos e forneceu 100% de proteção @ 554,21ug/camundongos. Antivenenos extraídos, contra veneno de Bungarus sindanus eram altamente puros, seu título de anticorpos e capacidade de neutralização foram produzidos com sucesso a partir de gemas de ovos de galinhas imunizadas pela primeira vez no Paquistão. RESUMO detecção purificação lecitina AnticorposIgY Anticorpos PEG6000. PEG6000 PEG 6000. 6000 PEG-6000 antivenenoIgY SDSPAGE. SDSPAGE SDS PAGE. PAGE indireto albinos 180190 180 190 180-19 6 2 subreduzida. subreduzida sub reduzida. sub-reduzida extraída. extraída . extraída) G1, G (G1 ª mantevese manteve se daí 12048, 12048 1 2048, 2048 1:2048 11024, 11024 1024, 1024 1:1024 ED ED5 40023ugcamundongos ugcamundongos 400 23ug ug LD LD5 100 50884ugcamundongos 508 84ug 40566ugcamundongos 405 66ug 55421ugcamundongos 554 21ug 554,21ug/camundongos extraídos puros Paquistão PEG600 600 PEG-600 18019 18 19 180-1 (G 1204 204 1:204 1102 102 1:102 40 10 50 55 PEG60 60 PEG-60 1801 180- 120 20 1:20 110 1:10 4 5 PEG6 PEG-6 12 1:2 11 1:1 PEG- 1:

ABSTRACT Water scarcity is a significant challenge faced in semi -arid regions, especially concerning agriculture. Therefore, alternatives for utilizing available water resources of inferior quality and adding organic matter to the soil are fundamental strategies to address this challenge. Considering this, the objective was to investigate the use of fish farming effluent and cattle manure in the production of melon seedlings of the Cantaloupe variety, specifically the Hales Best Jumbo cultivar. The experiment was conducted in a greenhouse, using a completely randomized design with a 5 x 5 factorial scheme. The treatments consisted of five proportions of cattle manure (0%, 5%, 10%, 15%, and 20%) combined with five dilutions of fish farming effluent (FFE) in public-supply water (PSW): D1 - 0% FFE; D2 - 15% FFE and 85% PSW; D3 - 30% FFE and 70% PSW; D4 - 45% FFE and 55% PSW; D5 - 60% FFE and 40% PSW, with six repetitions, totaling 150 experimental units. The results indicate that using substrate containing 20% cattle manure, irrigated with the D3 dilution (30% fish farming effluent and 70% public-supply water), promoted benefits for morphological variables of melon. The reuse of fish farming effluent, with electrical conductivity up to 1.75 dS m-1, is an alternative for reutilization and favors the growth and biomass production of Cantaloupe melon, Hales Best Jumbo cultivar. arid regions agriculture Therefore variety cultivar greenhouse scheme 0%, 0 (0% 5% 10 10% 15 20 (FFE publicsupply public supply PSW (PSW) D 85 30 70 45 55 60 40 repetitions units (30 water, , water) 175 1 75 1.7 m1, m1 m 1, m-1 (0 2 (PSW 8 3 7 4 6 (3 17 1. m- (

RESUMO A escassez hídrica é um grande desafio enfrentado nas regiões semiáridas, especialmente, no que diz respeito à agricultura. Assim, alternativas para o uso de águas disponíveis que têm qualidade inferior, bem como a adição de matéria orgânica no solo, são estratégias fundamentais para enfrentar esse desafio. Diante disso, objetivou-se investigar o uso de efluente da piscicultura e esterco bovino na produção de mudas de meloeiro da variedade Cantaloupe, cultivar Hales Best Jumbo. Realizou-se o experimento em casa de vegetação, com delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 x 5, cujos tratamentos foram compostos de cinco proporções de esterco bovino - E (0%; 5%; 10%; 15% e 20%) e cinco diluições do efluente de piscicultura (EP) em água de abastecimento público (AA): D1 - 0% EP; D2 - 15% EP e 85% AA; D3 - 30% EP e 70% AA; D4 - 45% EP e 55% AA; D5 - 60% EP e 40% AA, com 6 repetições, totalizando 150 unidades experimentais. Os resultados indicam que a utilização do substrato contendo 20% de esterco bovino, irrigado com a diluição D3 (30% de efluente de piscicultura e 70% de água de abastecimento) proporcionou benefícios no desempenho das variáveis de crescimento e fitomassa do meloeiro. O reúso de efluente da piscicultura, apresentando condutividade elétrica até 1,75 dS m-1, é uma alternativa de reaproveitamento e favorece o crescimento e a produção de fitomassa de meloeiro Cantaloupe da cultivar Hales Best Jumbo. semiáridas especialmente agricultura Assim inferior solo disso objetivouse objetivou se Jumbo Realizouse Realizou vegetação casualizado 0 (0% 5% 10% 10 15 20 (EP AA (AA) D 85 30 70 45 55 60 40 repetições experimentais (30 175 1 75 1,7 m1, m1 m 1, m-1 (0 2 (AA 8 3 7 4 (3 17 m- (

SUMMARY Calcitonin (CT) is a diagnostic and follow-up marker of medullary thyroid carcinoma. Heterophile antibodies (HAbs) may interfere during immunometric assay measurements and result in falsely high CT levels and different markers. A 50-year-old female patient was referred to our institution for elevated CT levels (3,199 pg/mL [0-11,5]). Physical examination and thyroid ultrasonography show no thyroid nodules. Because of the discrepancy between the clinical picture and the laboratory results, various markers and hormones were examined to determine whether there was any interference in the immunometric assay. Thyroglobulin (Tg) and Adrenocorticotropic hormone (ACTH) levels were also found inaccurately elevated. After precipitation with polyethylene glycol, CT, Tg, and ACTH levels markedly decreased, showing macro-aggregates. Also, serial dilutions showed non-linearity in plasma concentrations. Additionally, CT samples were pretreated with a heterophilic blocking tube before measuring, and the CT level decreased to < 0.1 pg/mL, suggesting a HAb presence. Immunoassay interference should be considered when conflicting laboratory data are observed. This may help reduce the amount of unnecessary laboratory and imaging studies and prevent patients from complex diagnostic procedures. (CT followup follow up carcinoma HAbs (HAbs 50yearold yearold 50 year old 3,199 3199 3 199 (3,19 pgmL pg mL 011,5. 0115 0 11,5 . 11 5 [0-11,5]) nodules results Tg (Tg (ACTH glycol macroaggregates. macroaggregates macro aggregates. aggregates macro-aggregates Also nonlinearity non linearity concentrations Additionally measuring 01 1 0. presence observed procedures 3,19 319 19 (3,1 011 011,5 115 11, [0-11,5] 3,1 31 (3, 011, [0-11,5 3, (3 [0-11, ( [0-11 [0-1 [0- [0 [

ABSTRACT Introduction: Dichrostachys cinerea L. (marabou) is a plant that grows in Cuba, medicinal properties of this plant are being studied. The resistance of yeasts of the Candida genus to current available synthetic antifungals is increasingly greater. This is why, new compounds of plant origin are being searched for the effective treatment of infections caused by this germ. Objective: To evaluate the in vitro antifungal activity of Dichrostachys cinerea L against a strain of Candida albicans. Methods: An in vitro a cross-sectional analytic observational study was carried out to evaluate the antifungal activity of fluid extracts of D. cinerea L leaves and stems using the broth macro-dilution method and alcohol as the reference substance. Results: Through the process was shown the antifungal activity of the fluid extract of Dichrostachys cinerea L. stems at 50% up to the 1/32 dilution; it was determined as the minimum inhibitory concentration. The leaves fluid extract at 30% failed to inhibit the growth of the Candida albicans ATCC 10231 strain. Conclusions: The antifungal activity of the fluid extract at 50% of the leaves was effective, but not the pharmaceutical preparation at 30%. The minimum inhibitory concentration of the fluid extract of leaves at 50% was determined and it was shown that it exceeded that of alcohol at 50% in three dilutions against Candida albicans.

RESUMEN Introducción: La Dichrostachys cinerea L. (marabú) es una planta que crece en Cuba, de la que se estudian propiedades medicinales. La resistencia de levaduras del género Candida a los antifúngicos sintéticos disponibles en la actualidad es cada vez mayor, por lo que se buscan nuevos compuestos de origen vegetal que puedan ser eficaces en el tratamiento de infecciones causadas por este germen. Objetivo: Evaluar la actividad antifúngica in vitro de Dichrostachys cinerea L. contra una cepa de Candida albicans. Métodos: Se realizó un estudio observacional analítico transversal in vitro para evaluar la actividad antifúngica de extractos fluidos de hojas y de tallos de D. cinerea L mediante el método de macrodilución en caldo y como sustancia de referencia el alcohol. Resultados: A través del proceso se mostró la actividad antifúngica del extracto fluido de tallos de D. cinerea L. al 50 % hasta la dilución 1/32, determinada como la concentración mínima inhibitoria; el extracto fluido de hojas al 30 % no logró inhibir el crecimiento de la cepa de Candida albicans ATCC 10231. Conclusiones: La actividad antifúngica del extracto fluido al 50 % de las hojas de Dichrostachys cinerea L. fue efectiva, no así el preparado farmacéutico al 30 %. Se determinó la concentración mínima inhibitoria del extracto fluido de hojas al 50 % y se demostró que ésta superó a la del alcohol al 50 % en tres diluciones contra la Candida albicans.

ABSTRACT To evaluate the damage of oil exploration to ecosystems, ecotoxicological tests are a fundamental tool in environmental risk programs. The products used constitute xenobiotics that can be potentially toxic to soil biota and cause severe metabolic alterations in organisms, which affect structural and functional changes in terrestrial ecosystems. The objective of this research was to carry out a toxicological diagnosis of a water-based drilling fluid for use in oil exploration in Cuba. Toxicological procedures recommended by the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD) were used, with two terrestrial contamination bioindicators, earthworms of the species Eisenia andrei and lettuce seeds (Lactuca sativa). The fluid was prepared by making a 1:9 dilutions (sludge: water) (v/v) and the dilutions to be tested were made from the fraction of suspended solids (FSS). As a toxicity criterion, the mean lethal concentration (LC50) was calculated from the mortalities of the bioindicators, with the Statgraphics Centurion XV statistical program, according to the Probit method. The values were compared with the current federal codes (CFR) that classify a toxic fluid when the LC50 is less than 3%. The LC50 for the bioassay with worms was 36.95% and 30.1% for lettuce seeds. According to established criteria, this fluid is non-toxic for the survival of terrestrial biota. These results support the use of this drilling fluid responsibly and with respect to the environment.

RESUMEN Para evaluar los daños de la exploración petrolera a los ecosistemas, los ensayos de ecotoxicológicos son una herramienta fundamental en los programas de riesgo ambiental. Los productos utilizados constituyen xenobióticos que pueden ser potencialmente tóxicos para la biota del suelo y ocasionar severas alteraciones metabólicas en los organismos, que repercuten en cambios estructurales y funcionales en los ecosistemas terrestres. El objetivo de esta investigación fue realizar un diagnóstico toxicológico a un fluido de perforación base agua para su uso en la exploración petrolera en Cuba. Se utilizaron procedimientos toxicológicos recomendadados por la Organización para la Cooperación Económica y el Desarrollo (OECD), con dos bioindicadores de contaminación terrestres, lombrices de tierra de la especie Eisenia andrei y semillas de lechuga (Lactuca sativa). El fluido se preparó realizando una dilución 1:9 (lodo: agua) (v/v) y a partir de la fracción de sólidos suspendidos (FSS) se realizaron las diluciones a ensayar. Como criterio de toxicidad se calculó la concentración letal media (CL50) a partir de las mortalidades de los bioindicadores, con el programa estadístico Statgraphics Centurion XV, según el método Probit. Los valores se compararon con los códigos federales (CFR) vigentes que cataloga a un fluido tóxico cuando la CL50 es menor que 3 %. La CL50 para el bioensayo con lombrices fue de 36.95 % y de 30.1 % para las semillas de lechuga; según los criterios establecidos este fluido es no tóxico para la supervivencia de la biota terrestre. Estos resultados apoyan el uso de este fluido de perforación con la responsabilidad y respecto al medio ambiente.

Abstract Immunodiagnostic tests for detecting dengue virus infections encounter challenges related to cross-reactivity with other related flaviviruses. Our research focuses on the development of a synthetic multiepitope antigen tailored for dengue immunodiagnostics. Selected dengue epitopes involved structural linearity and dissimilarity from the proteomes of Zika and Yellow fever viruses which served for computationally modeling the three-dimensional protein structure, resulting in the design of two proteins: rDME-C and rDME-BR. Both proteins consist of seven epitopes, separated by the GPGPG linker, and a carboxy-terminal 6 × -histidine tag. The molecular weights of the final proteins rDME-C and rDME-BR are 16.83 kDa and 16.80 kDa, respectively, both with an isoelectric point of 6.35. The distinguishing factor between the two proteins lies in the origin of their epitope sequences, where rDME-C is based on the reference dengue proteome, while rDME-BR utilizes sequences from prevalent Dengue genotypes in Brazil from 2008 to 2019. PyMol analysis revealed exposure of epitopes in the secondary structure. Successful expression of the antigens was achieved in soluble form and fluorescence experiments indicated a disordered structure. In subsequent testing, rDME-BR and rDME-C antigens were assessed using an indirect Elisa protocol against Dengue infected serum, previously examined with a commercial diagnostic test. Optimal concentrations for antigens were determined at 10 µg/mL for rDME-BR and 30 µg/mL for rDME-C, with serum dilutions ranging from 1:50 to 1:100. Both antigens effectively detected IgM and IgG antibodies in Dengue fever patients, with rDME-BR exhibiting higher sensitivity. Our in-house test showed a sensitivity of 77.3 % and 82.6 % and a specificity of 89.4 % and 71.4 % for rDME-C and rDEM-BR antigens. No cross-reactivity was observed with serum from Zika-infected mice but with COVID-19 serum samples. Our findings underscore the utility of synthetic biology in crafting Dengue-specific multiepitope proteins and hold promise for precise clinical diagnosis and monitoring responses to emerging Dengue vaccines. crossreactivity cross reactivity flaviviruses immunodiagnostics threedimensional three dimensional structure rDMEC rDME C rDMEBR. rDMEBR BR. BR linker carboxyterminal carboxy terminal histidine tag 1683 16 83 16.8 1680 80 respectively 635 35 6.35 proteome 200 2019 testing 1 µgmL µg mL 3 rDMEC, C, 150 50 1:5 1100. 1100 100. 100 1:100 patients inhouse house 773 77 77. 826 82 82. 894 89 4 89. 714 71 71. rDEMBR rDEM Zikainfected COVID19 COVID 19 COVID-1 samples Denguespecific specific vaccines 168 8 16. 63 6.3 20 201 15 5 1: 110 1:10 7 COVID1 COVID- 6. 2 11 1:1

Abstract Among the hive products of stingless bees (SB), honey is distinguished because it has different physicochemical properties than the honey produced by Apis mellifera. Its taste is more acidic and less sweet, and it naturally contains a higher percentage of water. Honey is one of the most frequently adulterated products marketed. Therefore, this work aimed to verify if the qualitative tests performed for A. mellifera honey are also valid for SB honey from Tetragonisca angustula, Melipona quadrifasciata, and Tetragona elongata and if they can detect the most common adulterations. Adulterations of SB honey with corn syrup, inverted sugar, and A. mellifera honey were simulated and tested with Lugol, Fiehe, and Lund reactions. For these three analyses, sample volume reduction was also tested. The Lund test did not work well with honey samples from SB because they have a higher water content, and reliable results could not be obtained. For the other two tests, the sample volume reduction used was efficient. The Fiehe test detected adulteration with corn syrup only. The Lugol test detected corn syrup and inverted sugar adulterations in all dilutions for all three SB species. No adulteration by added water or honey from A. mellifera was detected in any test. Therefore, using the qualitative Lugol’s reaction test to evaluate SB honey quality is reasonably affordable. Since it is a rapid and inexpensive test, it allows the development of production chains for SB honey. Thus, detecting inauthentic honey can be done by combining qualitative tests as the first screening, followed by quantitative tests if necessary. SB, , (SB) sweet marketed Therefore A angustula quadrifasciata reactions analyses content obtained efficient only species Lugols s affordable Thus screening necessary (SB

Resumo Entre os produtos da colmeia de abelhas sem ferrão, o mel se destaca por possuir propriedades físico-químicas diferentes do mel produzido pela abelha Apis mellifera. Seu sabor é mais ácido e menos doce, além de naturalmente conter maior porcentagem de água. O mel é um dos produtos mais frequentemente adulterados comercialmente. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo verificar se os testes qualitativos realizados para o mel de A. mellifera também são válidos para o mel de abelhas sem ferrão das espécies Tetragonisca angustula, Melipona quadrifasciata e Tetragona elongata, e se é possível identificar suas adulterações mais comuns: adulterações do mel de abelhas sem ferrão com xarope de milho, açúcar invertido e mel de A. mellifera foram simuladas e testadas com as reações de Lugol, Fiehe e Lund. Para essas três análises, também foi testada a redução do volume da amostra. O teste de Lund não foi efetivo com as amostras de mel das abelhas sem ferrão, pois elas apresentam um maior teor de água, e resultados confiáveis não puderam ser obtidos. Para os outros dois testes, a redução do volume da amostra utilizada foi eficiente. O teste de Fiehe detectou adulteração apenas com xarope de milho. O teste de Lugol detectou adulterações com xarope de milho e açúcar invertido em todas as diluições utilizadas e para todas as três espécies de abelhas sem ferrão. As adulterações por adição de água ou mel de A. mellifera não foram detectadas em nenhum dos testes. Portanto, é possível utilizar o teste qualitativo da reação de Lugol para uma avaliação inicial da qualidade do mel. Como é um teste rápido e de baixo custo, ele permite o desenvolvimento de cadeias produtivas para o mel de abelhas sem ferrão. Assim, a detecção de mel inautêntico pode ser feita por uma abordagem combinada de testes qualitativos como triagem inicial, seguida de testes quantitativos, se necessário. físicoquímicas físico químicas doce comercialmente forma A angustula elongata comuns análises obtidos eficiente Portanto custo Assim quantitativos necessário