Resumo Este estudo teve por objetivo estimar parâmetros genéticos para características de Produção in vitro de Embriões - PIVE das raças Nelore e Senepol. Foram utilizados dados de 1.247 rodadas de fertilização in vitro (1.029 Nelore, 218 Senepol), no total de 148.311 oócitos (116.972 Nelore, 31.339 Senepol), 47.301 embriões (38.722 Nelore, 8.579 Senepol) e 6.323 prenhezes (5.534 Nelore e 789 Senepol). Foram analisadas as variáveis: porcentagem de oócitos viáveis (Pooc), porcentagem de embriões clivados (Pcliv); porcentagem de embriões produzidos (Pemb); porcentagem de prenhezes (Ppren) por rodada/touro; média de oócitos viáveis por doadora (MOD), média de embriões produzidos por doadora (MED) e média de prenhezes por doadora (MPD) de dados fornecidos por empresa parceira entre os anos de 2019 a 2022. Foi utilizado o programa SAS para análise dos efeitos fixos e Correlação Linear de Pearson. Os componentes de variância para cálculo das herdabilidades foram calculados por meio do programa MTDFREML Foram obtidos valores de MOD, MED e MPD para as raças Nelore de 29,94; 10,01; 2,53 e Senepol de 30,12; 8,17; 2,34. De modo geral, a raça Nelore proporcionou melhor produção de embriões em relação à raça Senepol. As estimativas de herdabilidades foram de baixa a média magnitude, sendo para Pcliv (0,16 e 0,04), Pemb (0,14 e 0,08), Ppren (0,02 e 0,15), MED (0,07 e 0,02) e MPD (0,05 e 0,00) para as raças Nelore e Senepol. Porém, indicando a presença de variabilidade genética e possibilidade de seleção. Conclui-se que há variabilidade genética para as características PIVE, para ambas as raças, indicando que podem ser utilizadas como critérios de seleção por serem herdáveis e que a raça Nelore apresenta melhor desempenho para as características de PIVE em relação à raça Senepol. 1247 1 247 1.24 1.029 1029 029 (1.02 21 Senepol, , 148311 148 311 148.31 116.972 116972 116 972 (116.97 31339 31 339 31.33 47301 47 301 47.30 38.722 38722 38 722 (38.72 8579 8 579 8.57 6323 6 323 6.32 5.534 5534 5 534 (5.53 78 . variáveis Pooc, Pooc (Pooc) (Pcliv) (Pemb) (Ppren rodada/touro rodadatouro rodada touro MOD (MOD) (MED (MPD 201 2022 Pearson 29,94 2994 29 94 10,01 1001 10 01 253 2 53 2,5 30,12 3012 30 12 8,17 817 17 234 34 2,34 geral magnitude 0,16 016 0 16 (0,1 0,04, 004 0,04 04 0,04) 0,14 014 14 0,08, 008 0,08 08 0,08) 0,02 002 02 (0,0 0,15, 015 0,15 15 0,15) 0,07 007 07 0,05 005 05 0,00 000 00 Porém Concluise Conclui se 124 24 1.2 1.02 102 (1.0 14831 148.3 116.97 11697 11 97 (116.9 3133 3 33 31.3 4730 4 47.3 38.72 3872 72 (38.7 857 57 8.5 632 32 6.3 5.53 553 (5.5 7 (Pooc (Pcliv (Pemb (MOD 20 202 29,9 299 9 10,0 100 25 2, 30,1 8,1 81 23 2,3 0,1 (0, 0,0 1. 1.0 (1. 1483 148. 116.9 1169 (116. 313 31. 473 47. 38.7 387 (38. 85 8. 63 6. 5.5 55 (5. 29, 10, 30, 8, 0, (0 (1 116. (116 38. (38 5. (5 ( (11 (3

Abstract This study aimed to estimate genetic parameters for traits of in vitro embryo production (IVEP) of Nellore and Senepol cattle. Data from 1,247 rounds of in vitro fertilization (1,029 Nellore, 218 Senepol) were used, totaling 148,311 oocytes (116,972 Nellore, 31,339 Senepol), 47,301 embryos (38,722 Nellore, 8,579 Senepol), and 6,323 pregnancies (5,534 Nellore, 789 Senepol). The variables percentage of viable oocytes (Pooc), percentage of cleaved embryos (Pcleav), percentage of produced embryos (Pemb), percentage of pregnancy (Ppreg) per round per bull, mean number of viable oocytes per donor (MOD), mean number of embryos produced per donor (MED), and mean number of pregnancies per donor (MPD) were analyzed from data provided by a partner company between the years 2019 and 2022. The SAS program was used to analyze fixed effects and Pearson linear correlation. The components of variance for heritabilities were calculated using the MTDFREML program. MOD, MED, and MPD values of 29.94, 10.01, and 2.53 were obtained for Nellore and 30.12, 8.17, and 2.34 for Senepol, respectively. In general, Nellore provided better embryo production compared to Senepol. Heritability estimates showed low to medium magnitude, with values Nellore and Senepol of 0.16 and 0.04 (Pcleav), 0.14 and 0.08 (Pemb), 0.02 and 0.15 (Ppreg), 0.07 and 0.02 (MED), and 0.05 and 0.00 (MPD), respectively. However, it indicates the presence of genetic variability and the possibility of selection. Therefore, there is genetic variability for IVEP traits in both breeds, indicating that they can be used as selection criteria because they are heritable and that Nellore presents better performance for IVEP traits compared to Senepol. (IVEP cattle 1247 1 247 1,24 1,029 1029 029 (1,02 21 148311 148 311 148,31 116,972 116972 116 972 (116,97 31339 31 339 31,33 , 47301 47 301 47,30 38,722 38722 38 722 (38,72 8579 8 579 8,57 6323 6 323 6,32 5,534 5534 5 534 (5,53 78 . Pooc, Pooc (Pooc) Pcleav, Pcleav (Pcleav) Pemb, Pemb (Pemb) Ppreg (Ppreg bull MOD (MOD) MED (MED) (MPD 201 2022 correlation 2994 29 94 29.94 1001 10 01 10.01 253 2 53 2.5 3012 30 12 30.12 817 17 8.17 234 34 2.3 respectively general magnitude 016 0 16 0.1 004 04 0.0 014 14 008 08 002 02 015 15 Ppreg, 007 07 005 05 000 00 MPD, However Therefore breeds 124 24 1,2 1,02 102 (1,0 14831 148,3 116,97 11697 11 97 (116,9 3133 3 33 31,3 4730 4 47,3 38,72 3872 72 (38,7 857 57 8,5 632 32 6,3 5,53 553 (5,5 7 (Pooc (Pcleav (Pemb (MOD (MED 20 202 299 9 29.9 100 10.0 25 2. 30.1 81 8.1 23 0. 1, 1,0 (1, 1483 148, 116,9 1169 (116, 313 31, 473 47, 38,7 387 (38, 85 8, 63 6, 5,5 55 (5, 29. 10. 30. 8. (1 116, (116 38, (38 5, (5 ( (11 (3

The objective of this study was to evaluate the effect of α-lipoic acid on in vitro maturation and of l-arginine on in vitro fertilization of oocytes for in vitro production of sheep embryos. Thus, the ovaries were collected at a local slaughterhouse and the oocytes collected by the method of follicular aspiration with a vacuum pump were divided equally into five maturation groups: CON, without addition of antioxidant; CIS group, with cysteamine as an antioxidant source; and the groups ALA5, ALA10 and ALA20, containing concentrations of 5.0, 10.0 and 20.0 µM of ALA. After 24h of maturation, the oocytes were evaluated concerning occurrence and degrees of expansion of the cumulus cells. The oocytes of the best IVM group were destinated for in vitro fertilization (IVF). The selected and capacitated sperm were included in five groups: CON, without addition of capacitator agent; HEP group, with heparin as a capacitator source; and ARG5, ARG10 and ARG20 groups, where IVF occurred in the same HEP medium, replacing heparin with 5 mM, 10 mM and 20 mM L-arginine, respectively. The results were expressed as a percentage and the variables of cumulus cell expansion and number of cleaved structures were compared using the chi-square test in Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P < 0.05. Regarding the expansion of cumulus cells all groups showed 100% expansion, on the total expansion category of COCs it was observed that ALA5 and ALA20 groups did not present the same proportion of COCs with total expansion as CIS group. After in vitro fertilization (IVF), there were no statistical differences in relation to the cleaved structures between CON, HEP, ARG5 and ARG10 groups. However, it was also observed that the use of 20.0 mM of L-arginine reduced the percentage of cleaved structures when compared to the ARG10 group (P<0.05).

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del ácido α-lipoico en la maduración in vitro y la l-arginina en la fecundación in vitro de ovocitos para la producción in vitro de embriones ovinos. Así, se recolectaron ovocitos de ovarios obtenidos de mataderos mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío, los cuales se dividieron en cinco grupos de maduración: CON, sin adición de antioxidante, grupo CIS, con cisteamina como fuente antioxidante y los grupos ALA5, ALA10 y ALA20, que contienen concentraciones de 5, 10 y 20 µM de ácido α-lipoico. Después de 24 h de maduración, se evaluó la aparición y el grado de expansión de las células del cúmulo en los ovocitos. Los ovocitos del mejor grupo MIV fueron destinados a fecundación in vitro (FIV), siendo por tanto incluidos en gotas con medio de fecundación in vitro, junto con los espermatozoides seleccionados y capacitados, resultando en los siguientes grupos: CON, sin adición de agente capacitador; grupo HEP, con heparina como fuente de condensadores; y los grupos ARG5, ARG10 y ARG20, donde se produjo la FIV en el mismo medio HEP, reemplazando la heparina por L-arginina 5, 10 y 20 mM, respectivamente. Los resultados se expresaron en porcentajes y las variables expansión celular del cúmulo y número de estructuras escindidas se compararon mediante la prueba chicuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En cuanto a la expansión de las células del cúmulo, todos los grupos mostraron 100% de expansión. Evaluando los grados de expansión de las células del cúmulo, en la categoría de expansión total, se observó que los grupos ALA5 y ALA20 presentaron la misma proporción de CCO con expansión total que el grupo CIS (Plt;0.05), sin embargo se observa que hay una tendencia a la baja de las estructuras con plena expansión cuando se utilizan antioxidantes. En cuanto a las estructuras escindidas, fue posible identificar que no hubo diferencias estadísticas en relación a las estructuras escindidas, entre los grupos CON, HEP, ARG5 y ARG10. Sin embargo, también se observó que el uso de Larginina 20 mM redujo el porcentaje de estructuras escindidas en comparación con el grupo ARG10 (Plt;0.05).

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido α-lipóico na maturação in vitro e da l-arginina na fertilização in vitro de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos. Desta forma, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro através do método de aspiração folicular com bomba de vácuo, que foram divididos em cinco grupos de maturação: CON, sem adição de antioxidante, grupo CIS, com cisteamina como fonte antioxidante e os grupos ALA5, ALA10 e ALA20, contendo as concentrações de 5, 10, e 20 µM de ácido α-lipóico. Após 24h de maturação, os oócitos foram avaliados quanto à ocorrência e grau de expansão das células do cumulus. Os oócitos do melhor grupo MIV foram destinados à fertilização in vitro (FIV), sendo, portanto, incluídos em gotas com meio de fertilização in vitro, juntamente com os espermatozoides selecionados e capacitados, resultando nos seguintes grupos: CON, sem adição de capacitador agente; grupo HEP, com heparina como fonte de capacitor; e grupos ARG5, ARG10 e ARG20, onde a FIV ocorreu no mesmo meio HEP, substituindo a heparina por L-arginina 5, 10 e 20 mM, respectivamente. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Avaliando os graus de expansão das células do cumulus, na categoria de expansão total observou-se que os grupos ALA5 e ALA20 apresentaram a mesma proporção de CCO com expansão total que o grupo CIS (Plt;0,05), porém se observa que há uma tendência de queda de estruturas com expansão total quando os antioxidantes foram utilizados. Em relação às estruturas clivadas, foi possível identificar que não houve diferenças estatísticas em relação às estruturas clivadas, entre os grupos CON, HEP, ARG5 e ARG10. Contudo, também foi observado que o uso de 20 mM de L-arginina reduziu o percentual de estruturas clivadas quando comparado ao grupo ARG10 (Plt;0,05).

Resumo Niedenzuella (Tetrapterys) multiglandulosa, uma videira encontrada no Brasil, tem sido correlacionada a surtos de intoxicações em bovinos e búfalos, gerando perdas econômicas relacionadas à morte por insuficiência cardíaca, aborto, natimorto e mortalidade neonatal. O objetivo deste estudo foi examinar o potencial embriotóxico do extrato vegetal aquoso em embriões bovinos in vitro. O estudo in vitro foi realizado em cinco repetições de cultura de embriões bovinos distribuídos em dois grupos: controle, meio de cultura de embriões in vitro sem o extrato aquoso da planta; grupo tratado, com adição de 2,7mg / mL de extrato vegetal aquoso (10%) à cultura do embrião no sexto dia de cultivo. A taxa de clivagem foi avaliada no dia 2 da cultura de células. Viabilidade, eclodibilidade e subdesenvolvimento de blastocistos no sétimo, oitavo e nono dia (D7, D8 e D9, respectivamente) de cultura foram avaliados em microscópio estereoscópico. No dia 7, os blastocistos foram submetidos ao ensaio TUNEL para determinar o índice apoptótico. Observamos redução significativa da produção de blastocisto / número de embriões clivados (60,6% vs 41,5%); redução da produção de blastocistos / número total de oócitos bovinos maturados (35,1% vs 21,3%); e taxas de eclosão embrionária (38,0% vs 10,0%). No entanto, nenhum efeito foi observado na taxa de apoptose. Em conclusão, o extrato aquoso das folhas de N. multiglandulosa reduz a viabilidade do embrião bovino in vitro, sugerindo possíveis efeitos prejudiciais no desenvolvimento embrionário.

Abstract Niedenzuella (Tetrapterys) multiglandulosa, a vine plant found in Brazil, has been correlated to outbreaks of poisoning in cattle and buffaloes, generating economic losses related to the death due to heart failure, miscarriage, abortion, stillbirth, and neonatal mortality. The aim of this study was to examine the embryotoxic potential of the aqueous plant extract on in vitro bovine embryos. In vitro study was performed in five replicates of bovine embryo culture assigned in two groups: control, in vitro embryo culture medium without the aqueous plant extract; treated group, with addition of 2.7mg/mL of aqueous plant extract (10%) to the embryo culture on the sixth day of culture. Cleavage rate was evaluated at day 2 of the cell culture. Viability, hatchability and underdevelopment of blastocysts on the seventh, eighth, and ninth days (D7, D8, and D9, respectively) of culture were assessed under stereoscopic microscope. On day 7, blastocysts were submitted to TUNEL assay to determine apoptotic index. In vitro exposure of bovine embryos to of N. multiglandulosa resulted in reduced embryo development and survival, evaluated by dark cytoplasm indicating poor morphology and poor quality with marked reduction of hatchability. We observed a significant reduction of blastocyst production/number of cleaved embryos (60.6% vs 41.5%); reduction of blastocysts production/total number of matured bovine oocytes (35.1% vs 21.3%); and embryonic hatching rates (38.0% vs 10.0%). However, no effects were observed on the apoptotic rate. In conclusion, aqueous extract of N. multiglandulosa leaves reduces bovine embryo viability in vitro, suggesting possible detrimental effects on embryo development.

RESUMO Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P<0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P<0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.

ABSTRACT The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P <0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P<0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.

Abstract: Three experiments assessed the effects of cold-shock induced triploidy on (1) the incidence of abnormal cell cleavage during embryogenesis, (2) hatching success and the proportion of live yolk-sac larvae in normally cleaved versus abnormally cleaved embryos, and (3) survival of triploid larvae of spotted sand bass (Paralabrax maculatofasciatus). All spawns were obtained by hormonal induction (LHRHa). Triploidy was induced by cold shock shortly after fertilization. In experiment 1, the percentage of abnormal cell cleavage was significantly higher (P < 0.05) in the cold-shocked group than in the control group, while the hatching rate and the proportion of live yolk-sac larvae were significantly lower (P < 0.05). In experiment 2, when normally and abnormally cleaved embryos from the control and cold-shocked groups were incubated separately, normal cleaved embryos in the cold-shocked group showed a significantly higher hatching rate and proportion of live yolk-sac larvae than abnormally cleaved embryos in the same group. No difference was observed in the control group. In experiment 3, a significant decrease (P < 0.05) in the triploidy count was observed throughout the larval period. Final survival was drastically lower for triploid larvae compared to cold-shocked diploids and untreated eggs. Low triploidy percentages at the end of the larval period would seriously hinder the development of triploid sand bass culture.

Resumen: Se realizaron 3 experimentos para evaluar los efectos de la triploidía inducida por choque frío sobre (1) la incidencia de división celular anormal durante la embriogénesis, (2) la tasa de eclosión y la proporción de larvas vitelinas vivas en los embriones con división celular normal contra los embriones con división anormal y (3) la supervivencia de larvas triploides de la cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus). Los desoves se obtuvieron por inducción hormonal (LHRHa). La triploidía se indujo por choque frío poco después de la fecundación. En el experimento 1, el porcentaje de embriones con división anormal fue significativamente más alto (P < 0.05) en las larvas tratadas con choque frío que en el grupo control, mientras que la tasa de eclosión y la proporción de larvas vitelinas vivas fueron significativamente más bajas (P < 0.05). En el experimento 2, cuando los embriones con divisiones normales y anormales de ambos grupos fueron incubados por separado, los embriones con divisiones celulares normales en el grupo de choque frío presentaron una tasa de eclosión y una proporción de larvas vitelinas vivas significativamente más altas que los embriones con división celular anormal del mismo grupo. No se observaron diferencias en el grupo control. En el experimento 3, se observó una disminución significativa (P < 0.05) en la cantidad de triploides a lo largo del periodo larvario. La supervivencia final fue drásticamente menor para las larvas triploides en comparación con las larvas que resultaron diploides después del choque frío o que no recibieron tratamiento. Los bajos porcentajes de triploides al final del periodo larvario limitan el desarrollo del cultivo de la cabrilla arenera triploide.

Antecedentes: genes candidatos y sus polimorfismos han sido asociados a características de interés económico en ganado, representando una excelente estrategia para el mejoramiento genético de características complejas. La proteína morfogénica ósea 4 (BMP4) es un miembro de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFβ); que controla innumerables eventos del desarrollo embrionario, fetal y de adultos en vertebrados. Objetivo: el objetivo de este estudio fue evaluar el grado de asociación entre un polimorfismo en el gen BMP4 (guanina por timina-G>T-, SNP rs109778173) y el desempeño de donantes de ovocitos de la raza Gyr, incluyendo la tasa de complejos cummulus-oophorus obtenidos en cada sesión de aspiración folicular (OPU), el desarrollo embrionario y la tasa de preñez. Métodos: el ADN fue extraído del folículo piloso de 50 vacas Gyr donantes de ovocitos, el genotipado fue realizado por la técnica de reacción en cadena de polimerasa-polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP). Datos de 212 sesiones de OPU-IVP fueron colectados y las características a seguir fueron asociadas con el polimorfismo en el gen BMP4 (SNP rs109778173): número y tasa de complejos de Cumulus-oophorus viables, de embriones clivados al día 4 de cultivo, de embriones transferibles al día 7 de cultivo, y de preñeces a los días 30 y 60 posterior a la transferencia de los embriones. Resultados: el polimorfismo fue significativamente asociado (p<0,01) con número y tasa de complejos Cumulus-oophorus viables y tasa de preñez al día 30. Conclusión: el genotipo GT (SNP rs109778173) fue asociado a resultados inferiores relacionados con características de OPU-IVP. Este resultado sugiere posibles efectos genéticos del gen BMP4 sobre el desempeño de donadoras de oocitos de la raza Gyr, siendo necesarios estudios del gen BMP4 en relación a las alteraciones en el desarrollo embrionario subsecuentes a la mutación citada.

Background: candidate genes and their polymorphisms have been associated with traits of economic interest in cattle, representing an important strategy for genetic improvement of complex traits. Bone morphogenetic protein 4 (BMP4) is a member of the transforming growth factor beta (TGFβ) superfamily, which is involved with several events of embryonic, fetal, and adult development in vertebrates. Objective: the aim of this study was to evaluate the degree of association between polymorphism in the BMP4 gene (guanine for thymine- G>T, SNP rs109778173) and the performance of Gyr oocyte donors, including the rate of Cumulus-oophorus complex obtained in each session of follicular aspiration (OPU), embryo development, and pregnancy rates. Methods: DNA was extracted from hair follicles from 50 oocyte donors and genotyping was performed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Data from 212 OPU-IVP sessions was collected, and the following traits were associated with BMP4 polymorphism (SNP rs109778173): number and ratio of viable Cumulus-oophorus complexes; number of cleaved embryos at day 4 of culture; number of transferable embryos at day 7 of culture, and pregnancies on days 30 and 60 after embryo transfer. Results: the studied BMP4 polymorphism was significantly associated (p<0.01) with the number and ratio of viable cumulus-oocyte complexes, and the ratio of pregnancies at 30 days. Conclusion: the GT genotype (SNP rs109778173) was associated with inferior performance regarding OPU-IVP traits. This finding suggests possible genetic effects of BMP4 on performance of Gyr oocyte donors. Studies are needed on the BMP4 gene regarding subsequent changes in embryonic development of said mutation.

Antecedentes: genes candidatos e seus polimorfismos têm sido associados a características de interesse econômico no gado bovino, representando uma importante estratégia para o melhoramento genético de características complexas. A proteína morfogênica óssea 4 (BMP4) é um membro da superfamília do fator de crescimento transformante beta (TGFβ); que controla diversos eventos do desenvolvimento embrionário, tanto fetal quanto adulto em vertebrados. Objetivo: avaliar o grau de associação entre um polimorfismo no gene BMP4 (guanina por timina-G>T-, SNP rs109778173) e o desempenho de doadoras de oócitos da raça Gyr, incluindo a taxa de complexos Cumulus-oophorus obtidos em cada sessão de aspiração folicular (OPU), o desenvolvimento embrionário e a taxa de prenhez dos embriões. Métodos: o DNA foi extraído do folículo piloso de 50 vacas Gyr doadoras de oócitos, e a genotipagem foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase-polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Dados de 212 sessões de OPU-IVP foram coletados, e as características a seguir foram associadas com o polimorfismo no gene BMP4 (SNP rs109778173): número e taxa de complexos Cumulus-oophorus viáveis dos embriões clivados no dia 4 de cultivo, dos embriões transferíveis no dia 7 de cultivo e de prenhezes no dia 30 e 60 após a transferência dos embriões. Resultados: o polimorfismo estudado foi significativamente associado (p<0,01) com o número e a taxa dos complexos Cumulus-oophorus viáveis e a taxa de prenhezes ao dia 30. Conclusão: o genótipo GT (SNP rs109778173) foi associado a resultados inferiores relacionados a características OPU-IVP. Este resultado sugere possíveis efeitos genéticos do gene BMP4 sobre o desempenho de doadoras de oócitos da raça Gyr, fazendo-se necessários estudos no gene BMP4 em relação às alterações no desenvolvimento embrionário subsequentes ao polimorfismo citado.

Do Trópico de Capricórnio ao Equador, sabe-se que a sazonalidade no gato domestico é ausente, i.e., estes animais são considerados reprodutores não sazonais nestas regiões. Nós hipotetizamos que esta particularidade possa ter alguma influência sobre a produção embrionária in vitro. O objetivo deste experimento foi determinar a porcentagem de clivagem e formação de mórulas e blastocistos produzidos a partir de oócitos recuperados de ovários de gatas em três condições - folicular, lútea ou inativa - durante duas estações reprodutivas pelas quais gatas passam na região sudeste do Brasil (22°53'09" S e 48°26'42" O) - estação não reprodutiva (ENR), que compreende os meses de janeiro a março; e estação reprodutiva (ER), agosto à outubro. Trinta gatas foram castradas. Os ovários foram classificados de acordo com sua condição e foram fatiados em PBS para liberação dos complexos cumulus oophorus (COC). COC grau I foram lavados três vezes em H-MEM suplementado com BSA, glutamina, piruvato sódico, cisteína, estreptomicina e penicilina. Os oócitos foram incubados em grupos de 20-30 em 400 µL de DMEM suplementado com FSH, LH, estradiol, IGF-I e fator de crescimento fibroblástico básico sob óleo mineral por 30 ou 36 horas em atmosfera úmida de 5% de O2, 5% CO2 e 90% N2 a 38°C. Os COC foram fertilizados em meio Ham's F-10 suplementado com BSA, cisteína, piruvato e estreptomicina/penicilina (meio de cultura) com sêmen fresco selecionado através da técnica de swim up. Dezoito horas depois, os presumíveis zigotos foram denudados, a porcentagem de clivagem foi determinada e cada 10 zigotos foram transferidos para gotas de 100 mL de meio de cultura para cultivo durante 3 dias. Após 72 horas de cultivo, a porcentagem de formação de mórulas foi avaliada e estas estruturas foram transferidas para gotas do mesmo meio de cultivo. No oitavo dia de cultivo a formação de blastocisto foi avaliada. Durante a ENR, de um total de 272 (inativo), 162 (lútea) e 134 (folicular) oócitos fertilizados, a porcentagem de clivagem de zigotos, formação de mórulas e de blastocistos derivados de ovários inativos foi 24,63, 16,54 e 8,09 respectivamente; para aqueles oriundos de ovários na condição lútea, a porcentagem foi de 21,6, 12,96 e 8,64, e para aqueles provenientes de ovários na fase folicular, foi de 24,62, 16,41 e 8,21. Considerando a ER, de um total de 102 (inativo), 198 (lútea) e 86 (folicular) oócitos fertilizados, a frequência relativa (%) de zigotos clivados, mórulas e blastocistos derivados de ovários na condição inativa foi de 64,7, 41,17 e 23,53 respectivamente; para aqueles oriundos de ovários na condição lútea, a porcentagem foi de 64,14, 40,41 e 23,73, e para aqueles provenientes de ovários na fase folicular, foi de 63,95, 39,54 e 24,41. Os resultados deste experimento demonstraram que não houve diferença estatística significante (P < 0.05) na frequência de embriões clivados e na formação de mórulas e blastocistos quando comparadas as três condições ovarianas dentro da mesma estação. Entretanto, a ER apresentou resultados melhores considerando as taxas de clivagem e formação de mórula e de blastocisto se comparada à ENR.

From the Tropic of Capricorn to Equator, the seasonality of domestic cat is known to be absent, i.e., these animals are considered non-seasonal breeders at these regions. We hypothesized that this particularity might have some influence on in vitro embryo production. The aim of this experiment was to determine the percentage of cleavage and morulae and blastocyst formation produced from oocytes recovered from queen ovaries of three distinct status - follicular, luteal or inactive - during two different reproductive seasons experienced by cats in southeast of Brazil (22°53'09" S and 48°26'42" W) - non breeding season (NBS), comprehending January to March; and breeding season (BS), August to October. Thirty queens were neutered. Ovaries were classified according to their status and were sliced in PBS for cumulus oocyte complex (COC) releasing. Grade I COC were washed three times in H-MEM supplemented with BSA, glutamine, sodium pyruvate, cysteine, streptomycin and penicillin. Oocytes were incubated in groups of 20-30 in 400µL of DMEM supplemented with FSH, LH, estradiol, IGF-I and basic fibroblast growth factor under mineral oil for 30 or 36 hours at 38°C in humidified environment of 5% de O2, 5% CO2 and 90% N2. COC were fertilized in Ham's F-10 medium supplemented with BSA, cysteine, pyruvate and streptomycin/penicillin (culture medium) with fresh semen selected through swim up technique. Eighteen hours later, the presumptive zygotes were denuded, the percentage of cleavage was determined and every 10 zygotes were transferred to 100mL drops of culture medium for culture during three days. After 72 hours of culture the percentage of morulae formation was evaluated and these structures were transferred to drops of the same culture medium. At the eighth day of culture blastocyst formation was analyzed. During NBS, from a total of 272 (inactive), 162 (luteal) and 134 (follicular) fertilized oocytes, the percentage of cleaved zygotes, morulae and blastocysts derived from inactive ovaries were 24.63, 16.54 and 8.09 respectively; for those derived from luteal ovaries, the percentage was 21.6, 12.96 and 8.64, and for those from follicular ovaries, they were 24.62, 16.41 and 8.21. Considering BS, from a total of 102 (inactive), 198 (luteal) and 86 (follicular) fertilized oocytes, the relative frequency (%) of cleaved zygotes, morulae and blastocysts derived from inactive ovaries were 64.7, 41.17 and 23.53 respectively; for those derived from luteal ovaries, the percentage was 64.14, 40.41 and 23.73, and for those from follicular ovaries, they were 63.95, 39.54 and 24.41. The results of this experiment demonstrate that no statistically significant difference (P<0.05) was verified in the frequency of cleaved embryos and morulae and blastocyst formation when comparing the three ovarian conditions in the same season. However the breeding season presented better results considering cleavage and morulae and blastocyst formation.

Objetivou-se avaliar a viabilidade de um programa de produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos cuja maturação oocitária e cultivo embrionário ocorreram parcialmente durante o transporte, a fertilização (FIV) foi realizada com sêmen convencional ou sexado e os embriões foram transferidos com diferentes idades de desenvolvimento. Para tanto, oócitos aspirados no estado da Bahia foram transportados para um laboratório comercial em São Paulo, onde realizaram-se as etapas de produção in vitro, sendo a FIV realizada com espermatozoides oriundos de sêmen convencional (grupo CONV) ou sexado (grupo SEX). No dia seis de cultivo, os embriões produzidos foram remetidos à Bahia e transferidos às receptoras com diferentes idades de desenvolvimento (6,5; 7,0 e 7,5 dias). As fêmeas tiveram média de 46,18±32,7 oócitos recuperados e 30,74±24,3 oócitos viáveis por aspiração. As taxas de embriões produzidos e de gestação foram de 32,85% e 33,12%, respectivamente. O tipo de sêmen não influenciou no número de oócitos clivados e nas taxas de gestação, entretanto, influenciou no número de embriões produzidos e a idade do embrião interferiu nas taxas de gestação. Os resultados encontrados demonstraram que o transporte de oócitos e de embriões foi eficiente em um programa de PIVE bovinos, podendo ser utilizado em larga escala.

This study aimed to evaluate the program of in vitro embryo production (IVEP) feasibility whose cattle oocyte maturation and embryo development occurred partly during the transport, fertilization (IVF) was performed with conventional or sexed semen and the embryos were transferred at different periods of development. Therefore, oocytes aspirated in the state of Bahia were transported to a commercial laboratory in São Paulo city, where the steps of in vitro production continued, the IVF was performed with sperm derived from conventional semen (CONV group) or sexed group (SEX group). On the sixth day of cultivation, the embryos produced were sent to Bahia and transferred to recipients at different periods of development (6.5, 7.0 and 7.5 days). The females had a mean of 46.18 ± 32.7 oocytes recovered, and 30.74 ± 24.3 viable oocytes by aspiration. The rates of embryos produced and pregnancy were 32.85% and 33.12%, respectively. The type of semen did not affect neither the number of cleaved oocytes nor the pregnancy rates, however, it affected the number of embryos produced, and the age of the embryo interfered in the pregnancy rates. The results demonstrated that the transport of oocytes and embryos was effective in cattle IVEP program, thus, it can be used in large scale.

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del estatus reproductivo (gestantes versus vacías) de hembras mestizas Cebú postmortem sobre el número de ovocitos recuperados, la tasa de división embrionaria y la tasa de producción de blastocitos. Los complejos cúmulo ovocito (CCO) recolectados a través del tasajeo de los ovarios, fueron seleccionados, contados y separados por grupo en: hembras gestantes (ovarios con o sin cuerpo lúteo [CL]) y hembras vacías (ovarios con o sin CL). El número de CCO recuperados fue analizado utilizando el procedimiento GENMOD, asumiendo una distribución de Poisson, mientras que los datos de división y producción de blastocitos fueron analizados utilizando una regresión logística asumiendo una distribución binomial. Se evaluó un total de 4658 CCO obtenidos de 437 ovarios, siendo significativamente mayor (p<0,03), el número de CCO obtenidos de ovarios procedentes de vacas gestantes (12,5±2,8), comparado con el número de CCO provenientes de ovarios de hembras vacías (9,4±2,5). La tasa de división embrionaria, fue significativamente mayor (p<0,006) para el grupo de hembras vacías (42,3±0,01%) con respecto a las gestantes (34,5±0,02); asimismo, la interacción estatus reproductivo por CL afectó (p<0,006) la tasa de división embrionaria: vacas gestantes con CL (Gest-CL) y vacas gestantes sin CL (Gest-NoCL; 31,1±0,02% [76/244] vs. 38,0±0,03% [98/258], respectivamente) y vacas vacías con CL (Va-CL) y vacas vacías sin CL (Va-NoCL; 46,7±0,03% [312/738] vs. 38,0±0,03% [143/376], respectivamente). No hubo diferencia significativa en la tasa de producción de blastocitos a partir de embriones divididos de hembras gestantes (10,7±0,02%; 17/160) comparado con el grupo de hembras vacías (10,0±0,02%; 30/312). Estos resultados indican que la selección de los CCO, con base en el estatus reproductivo de la hembra bovina, es un aspecto importante a tomar en cuenta para mejorar la producción de embriones in vitro.

In order to improve the oocyte selection for in vitro embryo production, the present work evaluated the effect of the reproductive status of postmortem Crossbred Zebu cows (pregnant [P] versus non-pregnant [NP]) on the number of recovered oocytes, the cleavage (number of cleaved embryos/number of recovered oocytes) and the blastocyst production (number of blastocyst/number of cleaved embryos) rates. Cumulus oocytes complexes (CCOs) were selected, counted and separated depending on the donor status: P cows with or without a corpus luteum (CL) and NP cows with (CL) or without (NoCL) a CL. Data for number of recovered oocytes was analyzed using the GENMOD procedure assuming a Poisson distribution, whereas data for cleavage and blastocyst production rates were analyzed using a logistic regression assuming a binomial distribution. The statistical model for all the analyses included the effects of the reproductive status (P vs. NP), presence or not of a CL (CL vs. NoCL) and the interaction of reproductive status x CL. A total of 4658 CCOs obtained from 437 ovaries was evaluated. The number of CCOs collected per ovary from P cows (12.5±2.8) was significantly higher (p<0.03) than from NP cows (9.4±2.5). On the other hand, the cleavage rate was significantly higher (p<0.006) in NoP cows (42.3+0.01%) than in P cows (34.5+0.02). Nevertheless, the interaction between reproductive status and CL affected (p<0.006) the cleavage rate: P-CL: 31.1+0.02% (76/244); P-NoCL: 38.0+0.03% (98/258); NoP-CL: 46.7+0.03% (312/738) and NoP-NoCL: 38.0+0.03% (143/376). There were not differences in blastocyst production rate from cleaved embryos for P cows (10.7+0.02%; 17/160) compared with NoP cows (10.0+0.02%; 30/312). These results show that the reproductive status of a cow should be taken into account for oocyte selection, in order to improve embryo production.

El objetivo de este estudio fue mejorar la producción de embriones bovinos con semen sexado bajo condiciones químicamente definidas mediante la suplementación del medio de fecundación con db-cAMP. Los complejos ovocitos cumulus (COCs) fueron madurados por 18 horas en TCM-199 suplementado y fueron fecundados con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (10 g/ml), db-cAMP (1 µM) o sin tratamiento alguno (control). Los presuntivos cigotos fueron cultivados por 54 horas en g-SOF. Desde las 72 a las 144 horas post-inseminación (hpi) los embriones se cultivaron en c-SOF+NEA y desde 144 a 192 hpi fueron colocados en medio de maduración pero sin hormonas. No se observaron diferencias entre tratamientos para los oocitos fecundados con espermatozoides Y cuando se compararon a los controles. Se observó una mejora significativa (P<0,01) en la proporción de ovocitos que se dividieron cuando fueron fecundados con espermatozoides X tratados con db-cAMP (70,83%) en comparación con los fecundados con espermatozoides Y tratados con db-cAMP (46,37%). El tratamiento con db-cAMP fue capaz de inducir una mayor (P<0,05) tasa de formación de blastocistos (19.29%) en comparación a los tratamientos control (8,47%) y heparina (10,44%). El tratamiento con db-cAMP incrementó (P<0,05) la tasa de embriones de cuatro células alcanzando el estadio de blastocisto cuando los oocitos fueron fecundados con espermatozoides X (30,77%) en comparación a cuando la fecundación se realizó con espermatozoides Y (9,68%) y en comparación a cuando se llevó a cabo con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (5,88% y 15,15%, respectivamente) o en el tratamiento control (9,68% y 7,14%, respectivamente). Estos resultados sugieren, que el db-cAMP puede ser un tratamiento efectivo para el semen sexado, a fin de incrementar la producción in vitro de embriones bovinos hembra bajo condiciones químicamente definidas.

The objective of this study was to improve sexed bovine embryo production with sorted sperm in chemically defined conditions by supplementing the IVF medium with db-cAMP. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured for 18 h in supplemented TCM-199 and fertilized with X- or Y-bearing sperm in the presence of heparin (10 µg/ml), db-cAMP (1 µM) or no treatment (control). Presumptive zygotes were cultured 54 h in g-SOF. From 72 to 144 h post- insemination (hpi) embryos were cultured in c-SOF+NEA and from 144 to 192 hpi embryos were placed in maturation medium without hormones. No significant differences were found among treatments for Y-sperm when compared to controls. A significant (P<0.01) improvement in the proportion of cleaved oocytes was found for X-sperm treated with db-cAMP (70.83%) compared to the Y-sperm inseminated oocytes treated wit db-cAMP (46.37%). Treatment with db-cAMP enabled a better (P<0.05) blastocyst formation rate (19.29%) compared to control (8.47%) and heparin (10.44%). Treatment of db-cAMP significantly increased the rate of blastocysts in X-sperm inseminated oocytes (30.77%) compared to Y-sperm inseminated oocytes treated the same (9.68%) and compared to X- and Y-sperm treated with heparin (5.88% and 15.15%, respectively) and not treated (9.68% and 7.14%, respectively, P<0.05). These results suggest that db-cAMP may prove to be an effective treatment of sorted sperm for in vitro production of female bovine embryos under chemically defined conditions.

Program at the San Borja Arriarán Clinical Hospital - University of Chile as a method of reducing the incidence of multiple pregnancies and providing an additional opportunity of embryo transfer, without requiring another hyperstimultaion ovarian cycle. Material and Methods: Five hundred and forty five Assisted Fertilization procedures have been performed between march 2000 and june 2003. Results: The PN cryopreservation program was approved by the Institutional Review Board in december 2001. Since then 51.3% of couples participating in our IVF program have asked for PN cryopreservation. The total number of PN (n= 623) that have been cryopreserved resulting in an average of 6.4 PN per couple. Presently, 166 PN have been unfrozen with a surviving rate of 80.7% (n= 134). Eighty five percent of the PN (n= 114) cleaved to four to six cells embryo. All of the have been transferred in 39 cycles with an average of 2.9 embryos per couple, originating 12 clinical pregnancies (30.7%) with 11.4% rate of implantation. The PN cryopreservation program has diminished in a significant manner the number of multiple pregnancies in twins (23% to 15.5%), as well as, triplets (7.6% o 2.2%). In addition we have not seen quadruples or more over the time agenda of the cryopreservation program

Objetivo: Determinar el rol de la criopreservación (CP) de pronúcleos (PN), como una herramienta para disminuir la incidencia de embarazos múltiples y dar otra oportunidad de transferencia embrionaria, sin requerir estimulación ovárica nuevamente, en parejas con infertilidad que requieren como tratamiento algún tipo de procedimiento de Fertilización Asistida (FA). Material y Método: Se analizaron los resultados de 545 procedimientos de FA entre marzo del 2000 y junio del 2003. Resultados: La incorporación de la CP se logra en diciembre del 2001, criopreservando hasta la fecha el 51,3% de las parejas que tiene más de 6 folículos a aspirar. Se han criopreservado 623 PN dando un promedio 6,4 PN por pareja. Se han descongelado 166 PN, sobreviviendo 134 PN, lo que implica un 80,7%. Ciento catorce PN clivaron a embrión de 4 células, equivalente a un 85,1%. Se han transferido 114 PN en 39 ciclos con un promedio de 2,9 embriones por pareja, dando origen a 12 embarazos clínicos (30,7%) con una tasa implantacional del 11,4%. Se observa una reducción del número de embarazos múltiples en dobles del 23% al 15,5%, en triples del 7,6% al 2,2% y la no ocurrencia de cuádruples o más, al comparar el período 2000-diciembre 2001 (sin CP de PN), con diciembre de 2001-junio del 2003