ABSTRACT: Lymph node status is considered an important clinical prognostic factor in canine mammary carcinomas and women’s breast neoplasms. However, occult isolated tumor cells (ITCs) can be missed during hematoxylin and eosin (HE) analyses. Immunohistochemistry (IHC) for cytokeratin can be used to detect carcinomatous occult ITCs in mammary drainage lymph nodes. However, brown pigments, such as hemosiderin and ceroid in lymph nodes, may hinder the search for occult metastases by IHC utilizing DAB (3,3′-diaminobenzidine) as the chromogen. The aim of this study was to identify ITCs in canine lymph nodes of cases in which it was not detectable by routine HE evaluation through IHC for cytokeratin (AE1/AE3) combined with histochemistry techniques, such as Perls’ Prussian blue and periodic acid-Schiff (PAS), to improve the detection of occult metastases when hemosiderin and ceroid were present in these lymph nodes. For this, 25 tubulopapillary mammary carcinomas with their respective submitted 29 regional lymph nodes, previously given as free of tumor cells by HE analyses, were selected. Mammary tumors were graduated, and vascular invasion was investigated in these tumors. The submitted lymph nodes were reevaluated in HE, looking for occult metastases. IHC for cytokeratin (AE1/AE3) was used to detect occult metastases in mammary lymph nodes. Subsequently, a combined technique of IHC with Perl’s Prussian blue (for hemosiderin) or PAS (for ceroid) was performed to optimize the detection of ITCs by IHC, distinguishing them from pigments. Occult metastases were classified by their microanatomical location in subcapsular, cortical and medullary. Hemosiderin and ceroid were searched in lymph nodes and quantified as low, moderate, or high. The amount of pigments with a percentage of ITCs was also compared. Isolated tumor cells were found in 24.1% (7/29) of mammary lymph nodes. These ITCs were located mainly in subcapsular sinuses (4/7; 57.1%), followed by cortical (2/7; 28.5%) and medullary sinuses (1/7; 14.3%). There were concomitant lymph nodes with ITCs in 33.4% (2/6) of cases with vascular invasion. Hemosiderin and ceroid were present in about 90% of the 29 lymph nodes analyzed. In 42.8% (3/7) of lymph nodes with ITCs, hemosiderin and/or ceroid were in the same location as ITCs. It was found that lymph nodes in which ITCs were detected also present high amounts of hemosiderin (3/7; 42.9%) and low amounts of ceroid (5/7; 71.4%). In this study, IHC for cytokeratin (AE1/AE3) was an efficient method to detect occult tumor cells. IHC combined with Perls’ Prussian blue or with PAS proved to be a helpful way to investigate the presence of occult metastases in the lymph nodes of mammary canine tumors. It allowed distinguishing hemosiderin and ceroid, respectively, from ITCs in the same slide of IHC (immunostained by DAB), favoring a more accurate analysis by pathologists, which can be useful for the oncological staging of these patients. ABSTRACT womens women s neoplasms However (ITCs (HE analyses (IHC 3,3′diaminobenzidine 33diaminobenzidine diaminobenzidine 3,3′ 3 (3,3′-diaminobenzidine chromogen AE1/AE3 AE1AE3 AEAE AE1 AE3 AE (AE1/AE3 techniques Perls acidSchiff acid Schiff PAS, , (PAS) 2 selected graduated Subsequently Perl moderate compared 241 24 1 24.1 7/29 729 7 (7/29 4/7 47 4 (4/7 57.1%, 571 57.1% 57 57.1%) 2/7 27 (2/7 28.5% 285 28 5 1/7 17 (1/7 14.3%. 143 14.3% . 14 14.3%) 334 33 33.4 2/6 26 6 (2/6 90 analyzed 428 42 8 42.8 3/7 37 (3/7 andor 42.9% 429 9 5/7 (5/7 71.4%. 714 71.4% 71 71.4%) respectively immunostained DAB, DAB) pathologists patients 3,3 AE1/AE AE1AE (AE1/AE (PAS 24. 7/2 72 (7/2 4/ (4/ 57.1 2/ (2/ 28.5 1/ (1/ 14.3 33. 42. 3/ (3/ 42.9 5/ (5/ 71.4 3, 7/ (7/ (4 57. (2 28. (1 14. (3 (5 71. (7 (
RESUMO: O status nodal é considerado um importante fator prognóstico clínico em cães com carcinomas mamários e em mulheres com neoplasmas mamários. No entanto, durante a análise histopatológica convencional (coloração de hematoxilina e eosina - HE), células neoplásicas podem permanecer ocultas no linfonodo. Imuno-histoquímica (IHQ) para citoqueratina pode ser utilizada para detectar células carcinomatosas isoladas ocultas em linfonodos de drenagem mamária. Entretanto, a presença de pigmentos marrons, como a hemossiderina e o ceroide em linfonodos, pode dificultar a procura por metástases ocultas durante a análise por IHQ utilizando o DAB (3,3′-diaminobenzidina) como cromógeno. O objetivo deste estudo foi identificar células tumorais isoladas (CTIs), não detectadas pela avaliação de rotina (HE), em linfonodos de cães, através de IHQ para citoqueratina (AE1/AE3) combinada com técnicas histoquímicas, como azul da Prússia e ácido periódico Schiff (PAS), para otimizar a detecção de metástases ocultas, quando os pigmentos hemossiderina e ceroide estavam presentes nos linfonodos. Para esta finalidade, 25 carcinomas mamários túbulo-papilares com seus respectivos 29 linfonodos regionais remetidos, previamente diagnosticados como livres de células neoplásicas pelo HE foram selecionados. Os tumores mamários foram graduados e a presença de invasão vascular foi investigada nestes tumores. Os linfonodos submetidos foram reavaliados histologicamente no HE, à procura de metástases ocultas. IHQ para citoqueratina (AE1/A3) foi utilizada para detectar metástases ocultas nos linfonodos mamários. Subsequentemente, técnicas combinadas de IHQ com azul da Prússia (para hemossiderina) ou PAS (para ceroide) foram realizadas para otimizar a detecção de CTIs através da IHQ, distinguindo-as dos pigmentos. As metástases ocultas foram classificadas pela sua região microanatômica nodal em subcapsular, cortical e medular. Hemossiderina e ceroide foram identificados no linfonodo e classificados de acordo com sua quantidade em baixa, moderada e alta. Também foram comparadas a quantidade de pigmentos com a porcentagem de CTIs. Foram encontradas CTIs em 24,1% (7/29) dos linfonodos mamários. Estas CTIs estavam localizadas principalmente em seios subcapsulares (4/7; 57,1%), seguido pela cortical (2/7; 28,5%) e seios medulares (1/7; 14,3%). Em 33,4% (2/6) dos casos com invasão vascular havia, concomitantemente, linfonodos de drenagem com CTIs. Hemossiderina e ceroide estavam presentes em cerca de 90% dos 29 linfonodos analisados. Em 42,8% (3/7) dos linfonodos com CTIs, hemossiderina e/ou ceroide estavam na mesma localização das CTIs. Os linfonodos que apresentaram CTIs também apresentavam grande quantidade de hemossiderina (3/7; 42,9%) e pequena quantidade de ceroide (5/7; 71,4%). Neste estudo, IHQ para citoqueratina (AE1/AE3) foi um método eficiente para detecção de células tumorais ocultas. A técnica combinada de IHQ com azul da Prússia ou com o ácido periódico de Schiff (PAS) mostrou ser uma maneira útil de investigar a presença de metástases ocultas em linfonodos de cães com tumores mamários caninos, distinguindo a hemossiderina e o ceroide, respectivamente, de CTIs na mesma lâmina de IHQ (imunomarcadas por DAB), favorecendo uma análise mais acurada pelos patologistas, o que pode ser útil no estadiamento oncológico destes pacientes. RESUMO entanto coloração , HE) Imunohistoquímica Imuno histoquímica (IHQ mamária Entretanto marrons 3,3′diaminobenzidina 33diaminobenzidina diaminobenzidina 3,3′ 3 (3,3′-diaminobenzidina cromógeno (CTIs) (HE) AE1/AE3 AE1AE3 AEAE AE1 AE3 AE (AE1/AE3 histoquímicas PAS, finalidade 2 túbulopapilares túbulo papilares remetidos selecionados AE1/A3 AE1A3 AEA A3 (AE1/A3 Subsequentemente distinguindoas as subcapsular medular baixa alta 241 24 1 24,1 7/29 729 7 (7/29 4/7 47 4 (4/7 57,1%, 571 57,1% 57 57,1%) 2/7 27 (2/7 28,5% 285 28 5 1/7 17 (1/7 14,3%. 143 14,3% . 14 14,3%) 334 33 33,4 2/6 26 6 (2/6 havia concomitantemente 90 analisados 428 42 8 42,8 3/7 37 (3/7 eou 42,9% 429 9 5/7 (5/7 71,4%. 714 71,4% 71 71,4%) (PAS caninos respectivamente imunomarcadas DAB, DAB) patologistas pacientes 3,3 (CTIs (HE AE1/AE AE1AE (AE1/AE AE1/A AE1A (AE1/A 24, 7/2 72 (7/2 4/ (4/ 57,1 2/ (2/ 28,5 1/ (1/ 14,3 33, 42, 3/ (3/ 42,9 5/ (5/ 71,4 3, 7/ (7/ (4 57, (2 28, (1 14, (3 (5 71, (7 (