Abstract The objective of this investigation was to detect positive cases of 3 species of hemopathogens, from the records of 300 dog samples, without distinction of breed, sex and age from the metropolitan area of Asunción, using the conventional PCR (cPCR) technique. for the detection of Ehrlichia spp. and Anaplasma platys from whole blood and Leishmania spp. in whole blood and spinal aspirate; in addition to blood serum for the detection of antibodies to Leishmania spp. and Ehrlichia spp. using immunochromatographic tests, processed by the Biotechnology Laboratory Division of the Faculty of Veterinary Sciences of the National University of Asunción during the first semester of 2021. Out of the 300 records analyzed, 66 were positive for at least one hemoparasite. The detection of positive cases, according to the type of microorganism identified, was for Leishmania spp. 13%, Ehrlichia spp. 9% and Anaplasma platys 0%. Regarding the type of samples analyzed, using cPCR or immunochromatography interchangeably, positive cases were mostly through whole blood 15%, followed by blood serum 6% and finally bone marrow aspirate 3%. Finally, 27 breeds were recorded, of which the mixed breed had the highest number of positive results for hemoparasites (40/66). The findings from this study provide relevant data for understanding the presence and distribution of hemoparasites in canines in the metropolitan area.

Resumen La presente investigación tuvo como objetivo detectar casos positivos de 3 especies de hemopatógenos, a partir de los registros de 300 muestras de perros, sin distinción de raza, sexo y edad procedentes del área metropolitana de Asunción, empleando la técnica PCR convencional (cPCR), para la detección de Ehrlichia spp. y Anaplasma platys a partir de sangre entera y Leishmania spp. en sangre entera y aspirado medular; además de suero sanguíneo para la detección de anticuerpos para Leishmania spp. y Ehrlichia spp. utilizando test inmunocromatográfico, procesadas por la División Laboratorio de Biotecnología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Asunción durante el primer semestre del 2021. De las 300 muestras analizadas, 66 fueron positivas para al menos un hemopatógeno. La detección de casos positivos, según tipo de microorganismo identificado fue, para Leishmania spp. del 13 %, Ehrlichia spp. del 9 % y Anaplasma platys del 0 %. En cuanto al tipo de muestras analizada, empleando cPCR o inmunocromatografía indistintamente, los casos positivos fueron mayoritariamente a través de sangre entera 15 %, seguida por suero sanguíneo 6 % y finalmente aspirado medular 3 %. Por último, fueron registradas 27 razas, de las cuales la mestiza presentó mayor número de positivos a hemoparásitos (40/66). Los hallazgos encontrados a partir del presente trabajo aportan datos relevantes para el conocimiento de la presencia de hemoparásitos en caninos del área metropolitana y su distribución.

Abstract The main objective of the research work was the identification of Rickettsias sp. and hemoparasites in ticks of the genus Rhipicephalus sanguineus in dogs. A total of 62 adult ticks carried by 62 dogs from the Concepción neighborhood (urban area) of the city of San Juan Bautista, department of Misiones, Paraguay, in 2017, were analyzed (regardless of age, race and sex). A direct smear of the tick hemolymph extracted from the canines and stained with Wright staining was performed. The results revealed that 13% of the ticks were positive for Rickettsias sp. and hemoparasites. In detail, 6.5% showed the presence of elemental bodies of Ehrlichia spp., while another 6.5% presented vermiform bodies of Babesia spp. The remaining 87% of the samples were negative for Rickettsias sp. and hemoparasites. Regarding the canines whose ticks tested positive for Rickettsias sp. and hemoparasites, 4 canines that represent 50 % were male, while 4 canines corresponded to the female sex that represented 50 %. Regarding the age range of the canines sampled, 25 % represented canines under 1 year, 50 % canines between 1 and 5 years old, and 25 % canines older than 5 years. Regarding the breed of canines whose ticks were positive for Rickettsias sp. and hemoparasites, 37,5 % of the canines were purebred and 62,5 % were mixed breed.

Resumen El objetivo principal de esta investigación fue identificar la presencia de Rickettsias sp. y hemoparásitos en garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus en perros. Se analizaron un total de 62 garrapatas adultas cargadas recolectadas de 62 perros del barrio Concepción, zona urbana de la ciudad de San Juan Bautista, en el departamento de Misiones, Paraguay, durante el año 2017. La muestra incluyó perros de diversas edades, razas y sexos. Para el análisis, se realizó un frotis directo de la hemolinfa de las garrapatas extraídas de los caninos, y posterior tinción Wright. Los resultados revelaron que el 13% de las garrapatas resultaron positivas para Rickettsias sp. y hemoparásitos. En detalle, el 6,5% mostró la presencia de cuerpos elementales de Ehrlichia spp., mientras que otro 6,5% presentó cuerpos vermiformes de Babesia spp. El 87% restante de las muestras resultaron negativas para Rickettsias sp. y hemoparásitos. En cuanto a los perros cuyas garrapatas dieron positivo para Rickettsias sp. y hemoparásitos, el 50% eran machos, y el otro 50% eran hembras. En cuanto a la edad de los perros muestreados, el 25% tenían menos de 1 año, el 50% tenían entre 1 y 5 años, y el 25% restante tenían más de 5 años. Con relación a la raza de los perros cuyas garrapatas resultaron positivas para Rickettsias sp. y hemoparásitos, el 37,5% eran de raza pura y el 62,5% eran de raza mestiza

Resumen Introducción: Los tripanosomas son hemoparásitos que pueden observarse circulando en la sangre periférica de las aves. Los estudios parasitológicos en aves en el medio natural son escasos, pero son importantes para la investigación relacionada con la transmisión, el mantenimiento del ciclo biológico y la abundancia, entre otros aspectos parasitológicos. Objetivo: Describir infecciones por Trypanosoma sp. en aves de la Amazonia brasileña, así como la prevalencia, características morfológicas y morfométricas de este hemoparásito. Métodos: En la Floresta Nacional de Tapajós, capturamos un total de 125 aves, la mayoría del orden Passeriformes. Obtuvimos muestras de sangre por punción de la vena cubital del ala con agujas estériles de insulina. Con un tubo capilar microhematocrito, obtuvimos alícuotas de sangre. Realizamos frotis de sangre por triplicado y teñimos con el método de Giemsa. Visualizamos los morfotipos de Trypanosoma sp. al microscopio óptico con lentes objetivos de 40 X y 100 X. Para determinar las características morfométricas de Trypanosomatidae, usamos el paquete informático Zen Blue Edition 2. Resultados: Observamos la presencia de hemoparásitos en la forma tripomastigote en ejemplares de la familia de aves Thamnophilidae, Dendrocolaptidae y Conopophagidae, con baja prevalencia. Solo detectamos un morfotipo de Trypanosoma sp. Conclusión: Reportamos la infección por Trypanosoma sp. en especies de importancia ecológica, como Phlegopsis nigromaculata en peligro de extinción en Brasil. La morfología y morfometría del morfotipo encontrado puede contribuir con descripciones más detalladas de estos hemoparásitos.

Abstract Introduction: Trypanosomes are hemoparasites that can be observed circulating in the peripheral blood of birds. Parasitological studies in birds in their natural environment are neglected, but are important for research relating to transmission, maintenance of the biological cycle, and abundance, among other parasitological aspects. Objective: To describe infections by Trypanosoma sp. in birds in the Brazilian Amazon, as well as the prevalence, morphological and morphometric characteristics of this hemoparasite. Methods: In the Tapajós National Forest, we captured a total of 125 birds, mostly from the order Passeriformes. We obtained blood samples from the ulnar vein using sterile insulin needles, and aliquots of blood using a microhematocrit capillary tube. We made blood smears in triplicate and stained with the Giemsa method. We viewd the morphotypes of the Trypanosoma sp. under the light microscope with objective lenses of 40 X and 100 X. To determine the morphometric characteristics of Trypanosomatidae, we used the Zen Blue Edition 2 software package. Results: We observed the presence of hemoparasites in the trypomastigote form in specimens of Thamnophilidae, Dendrocolaptidae and Conopophagidae, with low prevalence. Only one morphotype of Trypanosoma sp. was detected and measurement. Conclusions: We report the infection by Trypanosoma sp. in species of ecological importance, such as Phlegopsis nigromaculata, endangered in Brazil. The morphology and morphometry of the morphotype found could contribute to more detailed descriptions of these hemoparasites.

Abstract: The aim of this study was to evaluate the hematocrit and body temperature values of bovines that tested positive and negative to Babesia spp from two livestock establishments. For this purpose, the blood of 79 bovines with no distinction of sex or breed, older than 2 years of age was evaluated by the blood smear and Giemsa staining; 24 of which resulted positive to Babesia spp and 55 resulted negative. Once the blood samples were obtained, they were sent refrigerated in sterile tubes with anticoagulant EDTA for the hemoparasites observation and hematocrit medition in the Parasitology laboratory of the Faculty of Veterinary Sciences, from the Universidad Nacional de Asuncion. The following results were obtained: the hematocrit means were found within the reference interval in both positive and negative subjects, with no significant differences being found when comparing both groups (p= 0,27), with the hematocrit value resulting higher in positives than in negatives. On the other hand, the temperature means were found above the reference interval in both positive and negative subjects, with significant differences being found when comparing both groups (p= 0,04), with the temperature resulting higher in negatives than in positives.

Resumen: El objetivo del presente trabajo fue evaluar los valores de hematocrito y temperatura corporal en bovinos positivos y negativos a Babesia spp de dos establecimientos ganaderos. Fueron evaluados 79 animales de la especie bovina, sin distinción de sexo y raza, mayores a 2 años de edad; de los cuales 24 presentaron un diagnóstico positivo a Babesia spp por el método de frotis sanguíneo y tinción con Giemsa y 55 presentaron un diagnóstico negativo. Para ello se obtuvieron muestras de sangre, que fueron remitidas refrigeradas en tubos estériles con anticoagulante ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) para la observación de los hemoparásitos y médición del valor hematocrito al laboratorio de Parasitología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Asunción. Obteniéndose los siguientes resultados: las medias del hematocrito se encontraron dentro del intervalo de referencia tanto en positivos como en negativos, no habiendo diferencias significativas al comparar ambos grupos (p= 0,27), resultando el valor hematocrito mayor en positivos que en negativos. Por su parte, las medias de la temperatura se encontraron sobre el intervalo de referencia tanto en positivos como en negativos, habiendo diferencias significativas al comparar ambos grupos (p= 0,04), resultando la temperatura mayor en negativos que en positivos.

Abstract Trachemys dorbigni is the most abundant freshwater turtle species in Rio Grande do Sul, southern Brazil. Chelonians are known to host a wide variety of pathogens, including viruses, bacteria, hemoparasites and helminths. Among these, nine genera of polystomatid flatworms (Monogenoidea; Polystomatidae) infect freshwater turtles: Apaloneotrema, Aussietrema, Fornixtrema, Manotrema, Pleurodirotrema, Polystomoidella, Polystomoides, Uropolystomoides and Uteropolystomoides. However, little is known about the biology of these parasites in the Neotropical Realm. Through investigative cystoscopy, specimens of Polystomatidae were located inside the urinary bladder of the host T. dorbigni. Retrieved specimens were fixed and stained whole mounts prepared for taxonomic identification. In the present paper, a new species of Polystomoides (Monogenoidea: Polystomatidae) parasitizing the urinary bladder of a freshwater turtle of the species T. dorbigni in Brazil is described. Polystomoides santamariensis n. sp. differs from the congeneric species on the length of the genital spines, which are longer. Given the enormous diversity of freshwater turtles around the world, it is likely that a large number of chelonian polystomatids are still unknown. Sul pathogens viruses bacteria helminths Monogenoidea (Monogenoidea Apaloneotrema Aussietrema Fornixtrema Manotrema Pleurodirotrema Polystomoidella Uteropolystomoides However Realm cystoscopy T identification paper described n sp spines longer world unknown

Resumo Trachemys dorbigni é a espécie de tartaruga de água doce mais abundante do Rio Grande do Sul, no Sul do Brasil. Sabe-se que os quelônios são hospedeiros de uma grande variedade de patógenos, incluindo vírus, bactérias, hemoparasitos e helmintos. Dentre estes, oito gêneros de Polystomatidae (Platyhelminthes: Monogenoidea) infectam tartarugas de água doce: Apaloneotrema, Aussietrema, Fornixtrema, Manotrema, Pleurodirotrema, Polystomoidella, Polystomoides, Uropolystomoides e Uteropolystomoides. No entanto, pouco ainda se sabe sobre a biologia destes parasitos na Região Neotropical. Durante uma citoscopia investigativa, foram observados espécimes de Polystomatidae localizados no interior da bexiga urinária de T. dorbigni. Os espécimes coletados foram fixados e corados para identificação taxonômica. No presente artigo, uma nova espécie de Polystomoides (Monogenoidea: Polystomatidae) parasitando a bexiga urinária de tartaruga de água doce da espécie T. dorbigni no Brasil é descrita. Polystomoides santamariensis n. sp. difere das demais espécies no tamanho dos espinhos genitais, que são maiores. Devido a enorme diversidade de tartarugas de água doce ao redor do mundo, é provável que um grande número de polistomatídeos de quelônios ainda seja desconhecido. Sabese Sabe patógenos vírus bactérias helmintos estes Platyhelminthes (Platyhelminthes Monogenoidea Apaloneotrema Aussietrema Fornixtrema Manotrema Pleurodirotrema Polystomoidella Uteropolystomoides entanto Neotropical investigativa T taxonômica artigo (Monogenoidea descrita n sp genitais maiores mundo desconhecido

Resumen El parasitismo sanguíneo en aves de México es un fenómeno poco estudiado y su presencia en muchas especies de aves es desconocida. En este estudio, se compararon la prevalencia y parasitemia de hemosporidios en la época reproductiva (húmeda) y no reproductiva (seca) de las palomas turcas (Streptopelia decaocto) y huilotas (Zenaida macroura) del norte de México. Se analizó la sangre de 40 aves de cada especie, colectadas entre 2013 y 2014. El diagnóstico de hemoparásitos se realizó mediante técnicas de microscopía y reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La prevalencia de hemoparásitos fue de 87.5 % (IC 95%=78.3-93.3). La parasitemia promedio fue de 7.03 (IC 95 %= 5.68-9.04) hemoparásitos por cada 10,000 eritrocitos infectados. La prevalencia y parasitemia fueron mayores para Haemoproteus sp. que en Plasmodium sp y microfilarias. Las tasas de prevalencia no variaron entre especies de aves, ni entre épocas del año. No obstante, la estacionalidad parece ser un factor importante en la parasitemia. La especie que obtuvo mayores tasas de parasitemia fue Z. macoura. Se necesitan más estudios para comprender los mecanismos que asocian la parasitemia de esta especie con respecto a otras especies de columbiformes.

Abstract Blood parasitism in Mexican birds is an impoverished-studied phenomenon, and its presence in many species of birds is unknown. In this study, the prevalence and parasitaemia of hemosporidia were compared in the breeding (wet) and non-breeding (dry) seasons in the Eurasian collared doves (Streptopelia decaocto) and Mourning ones (Zenaida macroura) in northern Mexico. The blood of 40 birds of each species collected between 2013 and 2014, was analyzed. The diagnosis of hemoparasites was made by microscopy and Polymerase Chain Reaction (PCR) techniques. The prevalence of hemoparasites was 87.5% (CI 95% = 78.3-93.3). The mean parasitaemia was 7.03 (CI 95% = 5.68- 9.04) hemoparasites per 10,000 infected erythrocytes. The prevalence and parasitaemia were higher for Haemoproteus sp. than for Plasmodium sp and microfilariae. The prevalence rates did not vary between bird species, nor between times of the year. However, seasonality seems to be an important factor in parasitaemia. The species that obtained the highest rates of parasitaemia was Z. macoura. More studies are needed to understand the mechanisms that associate parasitaemia in this species with respect to other columbiform species.

Abstract Bovine anaplasmosis, babesiosis and trypanosomiasis are diseases of economic importance caused by Anaplasma marginale, Babesia bovis and/or Babesia bigemina, and Trypanosoma vivax, respectively. In this work, protocols received during 2012-2019 in the laboratory of hemoparasites of the EEA Rafaela with a presumptive diagnosis of one of these three diseases were analyzed. The confirmatory diagnosis was made by microscopic observation of the causal agent. Clinical signs and results of serological and molecular tests were used as complementary information. Association between cases of anaplasmosis (dependent variable), the season of the year and area with or without the presence of Rhipicephalus microplus (independent variables) was analyzed with a generalized linear model using a binomial distribution. 50% of the protocols came from Santa Fe. Confirmatory diagnosis was achieved in 48% (213/441) of the protocols, of which 73% were positive for anaplasmosis, 16% for babesiosis and 11% for trypanosomiasis. In the R. microplus free area, 55 cases of anaplasmosis were recorded. The proportion of anaplasmosis cases was significantly higher in autumn compared to summer (p<0.05). No significant differences were observed when anaplasmosis cases, the season of the year and area were analyzed together. The occurrence of anaplasmosis cases in areas considered naturally free of the disease confirms its expansion. Outbreaks of bovine babesiosis occurred in areas with R. microplus. Bovine trypanosomiasis is also an expanding disease and should be considered in the differential diagnosis of hemoparasitic diseases.

Resumen Anaplasmosis, babesiosis y tripanosomiasis de los bovinos son enfermedades de importancia económica provocadas por Anaplasma marginale, Babesia bovis y/o Babesia bigemina, y Trypanosoma vivax, respectivamente. En este trabajo se analizaron los protocolos recibidos durante 2012-2019 en el laboratorio de hemoparásitos de la EEA Rafaela con diagnóstico presuntivo de alguna de estas tres enfermedades. Se realizó diagnóstico etiológico de los casos mediante la observación microscópica del agente causal. Signos clínicos y resultados de pruebas serológicas y moleculares se consideraron como información complementaria. Se analizó la relación entre casos de anaplasmosis (variable dependiente), estación del año y zona con o sin presencia de Rhipicephalus microplus (variables independientes) mediante modelo lineal generalizado utilizando distribución binomial. El 50% de los protocolos provino de la Provincia de Santa Fe. Se arribó a un diagnóstico etiológico en el 48% (213/441) de los protocolos, de los cuales un 73% resultó positivo a anaplasmosis, 16% a babesiosis y 11% a tripanosomiasis. En zona libre de R. microplus se registraron 55 casos de anaplasmosis. La proporción de casos de anaplasmosis resultó significativamente mayor en otoño respecto a verano (p<0,05). El análisis conjunto de casos de anaplasmosis, estación del año y zona, no resultó significativo. La ocurrencia de casos de anaplasmosis en zonas consideradas naturalmente libres de la enfermedad confirma su estatus en expansión. Los brotes de babesiosis bovina continúan circunscriptos a las regiones con R. microplus. La tripanosomiasis bovina también es una enfermedad en expansión y debe ser considerada en el diagnóstico diferencial de enfermedades anemizantes.

Abstract Bovine babesiosis is a hemoparasitic disease caused by protozoa of the genus Babesia, the most important are Babesia bovis and B. bigemina, both transmitted by the common bovine tick, Rhipicephalus microplus. In combination with anaplasmosis, they form the Bovine Tristeza Complex, one of the main limiting factors for productive development in tropical and subtropical areas of the world. Currently, for the prophylaxis of bovine babesiosis in Argentina, only live vaccines are available in fresh and deep-frozen presentations. In the present work, we evaluated the immunogenicity of erythrocytes parasitized with Babesia sp, dehydrated and incorporated into a new adjuvant, formulated for use in humans, as a new immuno prophylactic alternative. With this aim, parasitized erythrocytes obtained from in vitro cultures were dehydrated by spray-drying techniques and assembled with an adjuvant. Twelve calves negative for blood parasites were used, which were divided into 4 groups of 3 animals each one. Control group: without inoculation; Treated Group 1: inoculated with adjuvant; Treated Group 2: adjuvant + erythrocytes parasitized with B. bovis and Treated Group 3: adjuvant + erythrocytes parasitized with B. bigemina. Two subcutaneous inoculations were performed, on 0 and 15 days. During 60 days, rectal temperature, hematocrit and parasitaemia control were performed, in turn, samples for serology were taken on 30- and 60-days post inoculation. The animals remained negative throughout the trial, except on day 60, where 33% of Treated Group 3 presented specific antibody titers against the inoculated agent, B. bigemina. Although the response rate is low, the fact that there is no effective killed vaccine for the prophylaxis of this disease encourages us to continue adjusting the inoculant dose.

Resumen La babesiosis bovina es una enfermedad hemoparasitaria causada por protozoarios del género Babesia, siendo los de mayor importancia Babesia bovis y B. bigemina, ambos transmitidos por la garrapata común del bovino, Rhipicephalus microplus. Junto con la anaplasmosis, forman el complejo tristeza bovina, uno de los principales factores limitantes para el desarrollo productivo en zonas tropicales y subtropicales del mundo. Actualmente, para la profilaxis de la babesiosis bovina en Argentina solo se dispone de vacunas vivas en las presentaciones, fresca y ultra congelada. En el presente trabajo, se evaluó la inmunogenicidad de eritrocitos parasitados con Babesia sp y deshidratados, incorporados a un nuevo adyuvante, formulado para uso en humanos, como una nueva alternativa inmuno profiláctica. Con tal fin, eritrocitos parasitados obtenidos a partir de cultivos in vitro, fueron deshidratados por técnicas de secado por aspersión y ensamblados con un adyuvante. Se utilizaron 12 terneros negativos a hemoparásitos que fueron distribuidos en 4 grupos de 3 animales cada uno. Grupo Control: sin inocular; Grupo Tratado 1: inoculado con adyuvante; Grupo Tratado 2: adyuvante + eritrocitos parasitados con B. bovis y Grupo Tratado 3: adyuvante + eritrocitos parasitados con B. bigemina. Se realizaron dos inoculaciones subcutáneas, los días 0 y 15. Durante 60 días, se realizó el control de temperatura rectal, hematocrito y parasitemia, así como el muestreo para serología a los 30 y 60 días post-inoculación. Los animales se mantuvieron negativos durante todo el ensayo, excepto al día 60, donde el 33% del Grupo Tratado 3 presentó titulación de anticuerpos contra el agente inoculado, B. bigemina. Si bien el porcentaje de respuesta es bajo, el hecho de no contar a nivel mundial con una vacuna muerta eficaz para la profilaxis de esta enfermedad, nos alienta a continuar ajustando la dosis inoculante.

ABSTRACT Immunoprophylaxis for bovine babesiosis has two presentations of a live attenuated vaccine (fresh and deep-frozen). Despite being effective, their durability, as well as the conditions necessary for their transfer and handling, make them impractical. The incorporation of a third presentation, using dehydrated merozoites as immunogens, constitutes an innovative alternative, which combines practicality and stability over time. The objective of this work was to test dehydration processes and cryopreservative and rehydrating substances. For this, erythrocytes highly parasitized with Babesia bovis and B. bigemina were subjected to two dehydration techniques: lyophilization and spray drying. In turn, for the lyophilization process, several lyoprotectants were tested: Dimethylsulfoxide, Glycerol, Dextrose and Polyvinylpyrrolidone (PVP). The only one that achieved a properly dehydrated powder, crystalline in appearance and brittle to the touch was the PVP. Subsequently, the erythrocytes obtained by both techniques were reconstituted with sucrose solutions (0.25, 0.5, 1 M), 0.9% saline solution, Vega y Martínez solution, phosphate buffer and distilled water. Optical microscopy with an immersion objective showed that the best reconstituent for both lyophilized and spray-dried red blood cells was the 0.25 M sucrose solution, showing a high number of lyophilized and reconstituted red blood cells with preserved morphology. Extrapolating these results to the haemoparasites under study, their application as immunogens would be promising.

RESUMEN La inmunoprofilaxis de la babesiosis bovina cuenta con dos presentaciones de una vacuna viva atenuada (fresca y ultracongelada). Pese a ser efectivas, su durabilidad, así como las condiciones necesarias para su traslado y manipulación, las hacen poco prácticas. La incorporación de una tercera presentación, utilizando merozoitos deshidratados como inmunógenos, constituye una innovadora alternativa, que combina practicidad y estabilidad en el tiempo. El objetivo del presente trabajo fue ensayar procesos de deshidratación y sustancias criopreservadoras y rehidratantes. Con este fin, eritrocitos alta- mente parasitados con Babesia bovis y B. bigemina fueron sometidos a dos técnicas de deshidratación: liofilización y secado por aspersión. A su vez, para el proceso de liofilización se ensayaron varios lioprotectores: Dimetilsulfóxido, Glicerol, Dextrosa y Polivinilpirrolidona (PVP). El único que logró un polvo adecuadamente deshidratado, de aspecto cristalino y quebradizo al tacto fue la PVP. Posteriormente, los eritrocitos obtenidos por ambas técnicas fueron reconstituidos con soluciones de sacarosa (0.25, 0.5, 1 M), solución salina 0.9%, solución Vega y Martínez, buffer fosfato y agua destilada. La microscopía óptica con objetivo de inmersión evidenció que el mejor reconstituyente tanto para los glóbulos rojos liofilizados como para los secados por aspersión fue la solución de sacarosa 0.25 M, pudiéndose apreciar un alto número de glóbulos rojos liofilizados y reconstituidos con morfología conservada. Extrapolando este comporta- miento a los hemoparásitos en estudio, resultaría promisoria su aplicación como inmunógenos.

RESUMO: O puma (Puma concolor Linnaeus, 1771) tem a maior distribuição entre os felídeos das Américas e é encontrado em todos os biomas do Brasil. No entanto, poucos estudos têm se concentrado nos hemoparasitos nesta espécie. Cytauxzoon felis, um hemoparasito que pode infectar gatos domésticos, também foi descrito em felídeos selvagens no Brasil. A saber, este estudo é o primeiro diagnóstico de infecção natural e detecção molecular de C. felis em um P. concolor do estado de Goiás. Este animal apresentou anemia arregenerativa e inclusão de piroplasmídeos nos glóbulos vermelhos. A amplificação do fragmento de 551 pb da sequência parcial do gene Piroplasmorida 18S rRNA foi 100% idêntica a sequências correspondentes de C. felis disponíveis no GenBank. Nenhum tratamento específico para citauxzoonose foi administrado e, após a reabilitação, o animal foi reintroduzido na natureza. Essa descoberta fornece algumas evidências de que P. concolor pode atuar como um hospedeiro natural do parasito. A epidemiologia, vetor e patogenicidade deste hemoparasito em gatos selvagens e domésticos no Brasil merecem uma investigação mais aprofundada.

ABSTRACT: The puma (Puma concolor Linnaeus, 1771), the most widely distributed felid species in the Americas, can be found in all Brazilian biomes. Nevertheless, few studies have focused on hemoparasites in this species. Cytauxzoon felis, a hemoparasite that can infect domestic cats, has also been described in wild felids in Brazil. To the best of our knowledge, this study is the first to diagnose the natural infection and molecular detection of C. felis in a P. concolor in the state of Goiás. This animal presented non-regenerative anemia and inclusion suggestive of piroplasmids within red blood cells. The amplified 551 bp fragment of partial Piroplasmida 18S rRNA gene sequence was 100% identical to corresponding sequences of C. felis available in GenBank. No specific treatment for cytauxzoonosis was administered, and after rehabilitation, the animal was reintroduced into the wild. This finding provides some evidence that P. concolor may act as a natural host of the parasite. The epidemiology, vector and pathogenicity of this hemoparasite in wild and domestic cats in Brazil deserves further investigation.

RESUMEN Los hemosporidios aviares forman un grupo diverso de parásitos transmitidos por vectores que pueden perjudicar a sus hospederos y amenazar la conservación de especies susceptibles. Evaluamos la prevalencia y parasitemia de hemosporidios en aves silvestres de la Reserva de la Biósfera Sierra de Huautla, Morelos, al sur de México. Las aves se capturaron usando redes de niebla en tres tipos de hábitat (conservado, perturbado y agrícola) y durante dos temporadas (lluvias y secas). Se realizaron frotis de capa fina para su análisis microscópico. Capturamos 142 aves pertenecientes a 17 especies. Los parásitos presentes fueron Haemoproteus spp., Plasmodium spp., y microfilarias. La prevalencia fue similar entre tipos de uso de suelo (conservado (26.3 %), perturbado (36.4 %) y agrícola (29.9 %)) y temporadas (lluvias (29.7 %) y secas (29.3 %)), pero varió por género y grupo de parásito (Haemoproteus spp. (28.2%), Plasmodium spp. (2.1 %), coinfecciones (5.6 %), y microfilarias (4.9 %)). La mayoría de las aves presentó una parasitemia baja (< 0.1% de eritrocitos infectados) y solo una, con apariencia malsana, presentó alta parasitemia (> 0.5 %). Reportamos por primera vez la infección de hemoparásitos en 12 especies de aves y 16 nuevas asociaciones parásito-hospedero. Este es el primer estudio de hemoparásitos en esta región y proporciona información fundamental para investigaciones futuras.

ABSTRACT Avian haemosporidians form a diverse group of vector-borne parasites that can cause detrimental effects on their hosts and threaten the conservation of susceptible species. We explored the prevalence and parasitemia of haemosporidians infecting wild birds from Sierra de Huautla Biosphere Reserve in Morelos, southern Mexico. Birds were caught using mist nets in three habitat conditions (conserved, disturbed, and agricultural) and during two seasons (rainy and dry). Thin blood smears were prepared from blood samples for microscopic analysis. We captured 142 birds belonging to 17 species. We identified Haemoproteus spp., Plasmodium spp., and microfilaria. Prevalence was similar among land-use types (conserved (26.3%), disturbed (36.4%) and agricultural (29.9%)), and between seasons (rainy (29.7%) and dry (29.3%)), but varied per parasite genus and group (Haemoproteus spp. (28.2%), Plasmodium spp. (2.1%), coinfections (5.6%), and microfilaria (4.9%)). Parasitemia was low in most birds (< 0.1% erythrocytes infected), and only one, with an unhealthy appearance, presented high parasitemia (> 0.5%). We reported for the first time 12 species of birds infected with haemosporidian parasites and 16 new host-parasite associations in total. This is the first study of blood parasites in this region and provides fundamental information for future research.

Resumo O presente estudo foi enfocado na incidência de carrapatos e doenças transmitidas por carrapatos (TTBD) em bovinos mestiços (Friesian x Sahiwal) de duas fazendas (n = 2.548) no distrito de Lahore, Paquistão. Foram coletados 572 carrapatos (adultos e ninfas) e amostras de sangue (10 ml) para microscopia, ou seja, esfregaço sanguíneo - coloração de Giemsa (BST) e análise molecular; Reverse Line Blot-General Primer-PCR (RLB-PCR) e Specific Primer PCR (SP-PCR) -, de bovinos infestados (n = 100) nos meses de abril a setembro. Resultados: A espécie de carrapato identificada em ambas as fazendas foi Rhipicephalus microplus, com diferença significativa na taxa de infestação nos dois locais (p < 0,0001). Os bovinos mestiços Friesian, com maior proporção de sangue, e Sahiwal, com menor proporção de sangue, foram principalmente infestados por carrapatos (p < 0,0458) e hemoparasitos (p < 0,474), e vice-versa. O SP-PCR mostrou maior número de infecção por hemoparasitos do que a BST, revelando 16% de Theileria annulata (p < 0,0001; k valor 0,485; 0,0001), 51% de Babesia bigemina (p < 0,0001; k valor 0,485; 0,0001) e 15% de Anaplasma marginale (p < 0,001; valor de k 0,207; 0,001). A infecção única com B. bigemina foi de 34% (n = 34/100), e com A. marginale, de 6% (n = 6/100). A dupla infecção com T. annulata/B. bigemina foi de 8% (n = 8/100), e com B. bigemina/A. marginale, de 1% (n = 1/100). Já a tripla infecção com T. annulata/B. bigemina/A. marginale foi de 8% (n = 8/100). O estudo filogenético da sequência isolada de T. annulata revelou estreita homologia com isolados do Irã (87%), de B. bigemina com isolados de Cuba (94 a 100%) e de A. marginale com isolados do Paquistão (98 a 99%).

Abstract The present study was focused on the incidence of ticks and tick-borne diseases (TTBD) in cross-bred cattle (Friesian x Sahiwal) of two farms (n = 2548) in district Lahore, Pakistan. We collected total of 572 ticks (adults and nymphs) and blood samples (10 ml) for microscopic i.e., blood smear test - Giemsa Stain (BST) and molecular analysis; Reverse Line Blot-General Primer-PCR (RLB-PCR) and Specie Specific Primer PCR (SP-PCR) from infested cattle (n = 100) from months of April to September. Results: The tick specie identified was Rhipicephalus microplus at both farms, with significant difference in infestations rate amongst both farms (p< 0.0001). The cross-bred cattle having higher ratio of Friesian blood and lower ratio of Sahiwal blood were mostly infested by ticks (p < 0.0458) and haemoparasites (p <0.474) and vice versa. The SP-PCR showed higher number of haemoparasites infection than BST, which revealed 16% T. annulata (p < 0.0001 and k value 0.485, 0.0001), 51% B. bigemina (p < 0.0001 and k value 0.485, 0.0001) and 15% A. marginale (p < 0.001 and k value 0.207, 0.001), respectively. The single infection with B. bigemina was 34% (n = 34/100) and A. marginale 6% (n = 6/100). The double infection with T. annulata/B. bigemina was 8% (n = 8/100) and B. bigemina/A. marginale 1% (n = 1/100). Whereas the triple infection with T. annulata/B. bigemina/A .marginale was 8% (n = 8/100). The phylogenetic study of isolated sequence of T. annulata revealed close homology to isolates from Iran (87%), B. bigemina to isolates from Cuba (94 to 100%) and A. marginale with isolates from Pakistan (99 to 98%).

ABSTRACT: Ehrlichiosis and anaplasmosis are tick-borne diseases caused by bacteria of the genera Ehrlichia and Anaplasma. Since clinical manifestations are varied and nonspecific, the diagnosis in clinical practice, remains a challenge for veterinarians. Furthermore, the distribution of these infections includes areas where its tick vector, Rhipicephalus sanguineus is present. This study was designed to evaluate the prevalence and factors associated with the presence of Ehrlichia canis and Anaplasma phagocytophilum in dogs from the central area of Tamaulipas. PCR screened 384 canine blood samples obtained from different veterinary clinics and a shelter. The data were analyzed using the Chi-square test (P level <0.05 for statistical significance). The results showed that 103 (26.8%) out of 384 samples were positive for E. canis, while A. phagocytophilum was not detected. Statistical analysis did not show relationship between E. canis and variables like gender, breed, and origin (P˃0.05). Nonetheless, there was a statistically significant difference between infected adult dogs (15-84 months) compared to other age groups evaluated (p<0.05). Regarding hematocrit, platelets count, plasma protein, total and differential white blood cells counts, none of these parameters were significantly different (P>0.05).

RESUMEN: Las ehrlichiosis y anaplasmosis canina son enfermedades transmitidas por garrapatas, provocadas por bacterias del género Ehrlichia y Anaplasma. Debido a sus múltiples manifestaciones clínicas, su diagnóstico es un reto para el veterinario. La distribución de estos hemoparásitos incluye áreas donde su principal vector, Rhipicephalus sanguineus está presente. Este estudio fue diseñado para determinar la presencia Ehrlichia canis y Anaplasma phagocytophilum, así como los factores asociados y hallazgos hematológicos comunes en perros de la zona centro de Tamaulipas. Se evaluaron, a través de PCR, 384 muestras de sangre provenientes de animales de diferentes clínicas veterinarias y un refugio. El análisis de datos se realizó con la prueba Chi cuadrada con un nivel de significancia de 0.05. Los resultados muestran que, del total de muestras 103 (26.8%) resultaron positivas a E. canis, mientras que para A. phagocytophilum no se detectó ningún caso. No se observó asociación significativa con relación al sexo, raza, ni lugar de procedencia (p>0.05), a diferencia de la edad, donde se encontró mayor prevalencia de E. canis para adultos (15-84 meses) (p<0.05). En relación con el hematocrito, conteo de plaquetas, proteínas plasmáticas totales, conteo y diferencial leucocitario, no existió diferencias significativas (p>0.05).

Resumen Introducción: En anfibios, la sangre puede actuar como un tejido hematopoyético. Sin embargo, el conocimiento acerca de las características hematológicas es escaso y no hay información que permita un análisis acerca de las posibles explicaciones a este rasgo fisiológico. Objetivo: La intención de este estudio fue evaluar la relación entre la presencia de eritroblastos, mitosis de glóbulos rojos (GRs) y la infección por hemoparásito en sangre periférica de anfibios. Métodos: Se muestrearon 116 anfibios (31 especies) en seis localidades de Colombia. Se tomaron muestras de sangre mediante punción cardiaca o punción a la vena maxilar. Se prepararon extendidos sanguíneos, se fijaron y tiñeron con Giemsa para su posterior análisis por microscopía. Se analizaron variables como porcentaje de GRs inmaduros, células mitóticas en sangre periférica e infección por hemoparásitos. Los datos fueron analizados mediante el test de rango de Willcoxon y el test exacto de Fisher. Resultados: sesenta y dos individuos evidenciaron mitosis en sangre periférica y dichas mitosis compartían características morfológicas con GRs inmaduros. La prevalencia general de parásitos fue del 30.1 %, distribuido de la siguiente forma: Trypanosoma (24.1 %), Hepatozoon-like (6 %), Dactylosoma (4.3 %), Karyolysus-like (0.9 %), y Filarioidea (2. 6 %). Hay una asociación positiva entre el porcentaje de GRs inmaduros y la presencia de células mitóticas, también se encontró una relación entre la infección por hemoparásitos y el porcentaje de GRs inmaduros. Conclusiones: En este estudio encontramos que la presencia de parásitos sanguíneos, GRs inmaduros y mitosis de GRs son eventos frecuentes en sangre periférica de anfibios, y nuestros resultados sugieren una asociación entre dichas características. Por tanto, la liberación de GRs inmaduros y la mitosis de estas células en sangre periférica podría ser una respuesta fisiológica a infecciones parasitarias. Posteriores estudios que caractericen la hematología en anfibios y en vida silvestre en general, son deseables.

Abstract Introduction: In amphibians, blood may act as a hematopoietic tissue. However, the knowledge concerning hematological features is scarce, there is not much information that allows an analysis about the possible explanations of this physiological feature. Objective: This study aimed to evaluate the relationship between immature red blood cells (RBCs) mitosis and the presence of blood parasites in amphibians. Methods: We sampled 116 amphibians (31 species) in six Colombian localities. Blood was taken by cardiac puncture or maxillary vein puncture. Smears were prepared, fixed, and Giemsa stained for microscopical analysis. The variables analyzed were the percentage of immature RBCs, mitotic cells in peripheral blood, and blood parasite infection. Data were analyzed using Wilcoxon’s rank test and exact Fisher statistical tests. Results: Sixty-two individuals showed mitosis in peripheral blood, and these mitotic RBCs shared morphological features with immature RBCs. Overall, parasite prevalence was 30.1 %, distributed as follows: Trypanosoma (24.1 %), Hepatozoon-like (6 %), Dactylosoma (4.3 %), Karyolysus-like (0.9 %), and Filarioidea (2.6 %). A positive association between the percentage of immature RBCs and the presence of mitotic RBCs was found, and also between the blood parasite infection and the percentage of immature RBCs. Conclusions: In this study, we found that the presence of blood parasites, immature RBCs, and RBCs mitosis are frequent events in amphibians’ peripheral blood, and our analysis suggests an association between those features. Thus, the release of immature RBCs and the mitosis of those cells in peripheral blood may be a physiological response to blood parasite infection. Further studies characterizing hematology in amphibians and wildlife, in general, are desirable.

Abstract Aims. The goal of the current study was to determine the prevalence of Plasmodium in the population of Phoenicopterus ruber kept under human care at Zoofari Conservation Center, Morelos, Mexico Settings and Design. Avian malaria vectors belonging to the family Culicidae has been reported at different Mexican States. Malaria infections compromise different host ranges including Phoenicopteriformes (Phoeniconaias minor, Phoenicopterus chilensis). The singled population housed in Zoofari, Conservation Center may harbor subclinical malaria (Plasmodium) infections. Methods and Material A descriptive crosssectional study in a singled population of American flamingos (Phoenicopterus ruber). We compared and contrasted two diagnostic techniques, microscopy and polymerase chain reaction (PCR) for avian haemosporidia. In this study 80 blood smears stained in a Romanowsky stain were examined by microscopy, also molecular analysis were conducted, PCR was performed with the use of primers that amplifies parasite mtDNA from species of Haemoproteus, Plasmodium, Leucocytozoon. Results. A total of 80 Phoenicopterus ruber birds were examined for malarial parasites using both microscopy and PCR diagnostic methods, none of them were positives. Conclusions. Our study corresponds to the first of its kind in the region. After implementing two different diagnostic methods for avian malaria, no evidence was obtained of the presence of hemoparasites in the Phoenicopterus ruber population. This type of research allows us to understand the dynamics and identify emerging diseases that can affect animals and man in a certain geographic region.

Resumen Objetivos. Establecer la prevalencia de Plasmodium en la población de Phoenicopterus ruber mantenidos bajo cuidado humano en el Centro de Conservación Zoofari, Morelos, México. Configuración y Diseño Se han presentado reportes de vectores de malaria aviar pertenecientes a la familia Culicidae en estado de Morelos, México. La malaria aviar puede afectar diversas especies de aves incluyendo Phoenicopteriformes (Phoeniconaias minor, Phoenicopterus chilensis) la población de interés podría ser portadora subclínica de Plasmodium. Materiales y Métodos se realizó un estudio exploratorio en el total de la población de Phoenicopterus ruber. En la investigación se implementaron dos técnicas de diagnóstico de hemoparásitos, la primera corresponde a análisis de frotis sanguíneos teñidos con una tinción rápida tipo Romanowsky los cuales fueron evaluados mediante microscopía óptica convencional y la segunda concierne la realización de la PCR utilizando iniciadores para amplificar ADN mitocondrial de tres especies de hemoparásitos (Haemoproteus, Plasmodium, Leucocytozoon). Análisis Estadístico utilizado. los resultados negativos del estudio no permiten realizar análisis estadístico Resultados. En la evaluación mediante microscopía convencional no se evidenció en ningún frotis sanguíneo, presencia de merogonias o gránulos de hemozoína, obteniendo una totalidad de 80 muestras negativas. Las PCR realizadas bajo las condiciones utilizadas no demostraron amplificación exitosa de ADN parasitario. Conclusiones. Nuestro estudio corresponde al primero de este tipo en la región. Después de implementar dos técnicas diferentes de diagnóstico para malaria aviar no se obtiene evidencia de la presencia de hemoparásitos en la población de Phoenicopterus ruber. Este tipo de investigaciones permite entender la dinámica e identificar enfermedades emergentes que puedan afectar a los animales y al hombre en una determinada región geográfica.