Resumen (Objetivo) Tryapanosoma cruzi, un agente causal de la enfermedad de Chagas, es un parásito que presenta una alternancia en su ciclo de vida entre un hospedador invertebrado (triatomino) y uno vertebrado (mamífero). Varios estudios han demostrado que en T. cruzi, HSP83 (homólogo de HSP90) es esencial para la división celular y el control de la respuesta al estrés térmico. Esta investigación se concentró en el estudio de la clonación, la caracterización bioinformática y la expresión del gen de la proteína de choque térmico HSP83 de T. cruzi para estudios posteriores sobre señalización. (Metodología) El ARN fue extraído de epimagostigotes T. cruci (clon EPm6/MOHM/VE/2007/ 6c), utilizando un kit comercial. El ADNc que codifica HSP83 se obtuvo utilizando RT-PCR, a partir del ARNm extraído, para lo cual se diseñaron los cebadores con base en la secuencia HSP83 de la cepa T. cruzi CL Brener. La clonación se realizó usando pGEM®T-Easy y se subclonó en el vector de expresión pQE30. Se efectuó la caracterización bioinformática y de secuencias. El gen se expresó y la proteína recombinante se purificó por cromatografía de afinidad, igual que se identificó por inmunotransferencia. (Resultados) El análisis de secuencia mostró similitud con el gen HSP83 de Trypanosoma cruzi y se observaron dominios HSP, así como epítopos B en la secuencia. Después de 3 horas de inducción con IPTG, se obtuvo una proteína recombinante con un peso aproximado de 83 kDa. La reacción de inmunotransferencia con suero hiperinmune anti-epimastigote de T. cruzi permitió la detección de una sola banda con un peso molecular de aproximadamente 83 kDa. (Conclusiones) Todos los resultados indican que se logró la clonación y caracterización de HSP83 de Trypanosoma cruzi.

Resumo (Objetivo) O Tryapanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas, é um parasita que apresenta uma alternância em seu ciclo de vida entre um hospedeiro invertebrado triatomíneo) e um vertebrado(mamífero). Vários estudos demonstraram que, no T. cruzi, a HSP83 (homóloga da HSP90) é essencial para a divisão celular e o controle da resposta ao estresse térmico. Esta pesquisa concentrou-se no estudo da clonagem, caracterização bioinformática e expressão do gene da proteína de choque térmico HSP83 do T. cruzi para estudos adicionais de sinalização. (Metodologia) O RNA foi extraído de epimastigotas de T. cruzi (clone EPm6/MOHM/VE/2007/ 6c) usando um kit comercial. O cDNA que codifica a HSP83 foi obtido por meio de RT-PCR a partir do mRNA extraído, para o qual os primers foram projetados com base na sequência da HSP83 da cepa T. cruzi CL Brener. A clonagem foi realizada com o pGEM®T-Easy e subclonada no vetor de expressão pQE30. Foi realizada a caracterização bioinformática e de sequência. O gene foi expresso e a proteína recombinante foi purificada por cromatografia de afinidade e identificada por imunotransferência. (Resultados) A análise da sequência mostrou similaridade com o gene HSP83 do Trypanosoma cruzi e os domínios HSP, bem como os epítopos B, foram observados na sequência. Após 3 horas de indução com IPTG, foi obtida uma proteína recombinante com peso aproximado de 83 kDa. A imunotransferência com soro hiperimune antiepimastigota de T. cruzi permitiu a detecção de uma única banda com peso molecular de aproximadamente 83 kDa. (Conclusões) Todos os resultados indicam que a clonagem e a caracterização da HSP83 do Trypanosoma cruzi foram alcançadas.

Abstract (Objective) Trypanosoma cruzi, a causal agent of Chagas’ disease, is a parasite whose life cycle alternates between an invertebrate (triatomine) and a vertebrate (mammal) host. Various studies have shown that in T. cruzi, HSP83 (a homolog of HSP90) is essential for cell division and control of the response to thermal stress. This investigation focused on studying the cloning, bioinformatic characterization, and expression of the heat shock protein HSP83 T. cruzi gene for further cell signaling studies. (Methodology) RNA was extracted from T. cruzi epimastigotes (EPm6 clone, MHOM/VE/2007/ 6c) using a commercial kit. The cDNA encoding HSP83 was determined using RT-PCR on extracted mRNA, for which the primers were designed based on the HSP83 sequence of T. cruzi strain CL Brener. Cloning was performed using pGEM®T-Easy and subcloned into the expression vector pQE30. Sequence and bioinformatic characterization were performed. The gene was expressed, and the recombinant protein was purified using affinity chromatography and identified through immunoblotting. (Results) Sequence analysis showed similarity to the gene encoding HSP83 from Trypanosoma cruzi, and HSP domains and B epitopes in the sequence were also observed. After 3 hours of induction with IPTG, a recombinant protein with an approximate weight of 83 kDa was obtained. The immunoblotting reaction with hyperimmune anti-T. cruzi epimastigote serum helped detect a single band with a molecular weight of nearly 83 kDa. (Conclusions) All results indicate that the cloning and characterization of HSP83 from Trypanosoma cruzi was achieved.

Abstract The progress in genetic material sequencing enhanced diverse research opportunities related to genomics, transcriptomics and other -omics areas. A need in the development of more accessible and efficient techniques resulted in the second- (NGS) and third-generation technologies (TGS). In this paper we aimed to characterize the main sequencing methods of second- and third-generation. NGS technology is based on the sequencing by biosynthesis of short fragments with high quality and precision, while TGS are specialized in long fragment sequencing by nanopores and single-molecule, real-time technologies. Illumina and PacBio have more precise and high-quality data, compared to Oxford Nanopore Technologies (ONT). However, nanopores long reads address errors in genome assembly, commonly associated with small lectures. All analyzed technologies have production-scale sequencers, but only ONT and Illumina developed benchtop products. ONT also presents portable sequencers for small projects. Latinoamerican countries have less coverage and technical support of sequencing technologies, and only Illumina is sited in this region. Each sequencing technology have advantages and limitations regarding their techniques and their coupled use is promoted to make a deeper analysis of the data, therefore the development of new bioinformatics programs remain as one of the principal obstacles to overcome to enhance the application of these technologies.

Resumen El avance en la secuenciación de material genético ha favorecido el estudio de nuevas áreas de investigación relacionadas a la genómica, transcriptómica y demás ciencias -ómicas. Esto creó la necesidad de desarrollar nuevas tecnologías más accesibles y eficientes, como las tecnologías de segunda y tercera generación. Por ello, esta revisión caracterizó las principales metodologías de secuenciación de segunda y tercera generación. Las tecnologías de segunda generación se ven representadas por la secuenciación por síntesis fragmentos cortos con alta calidad y precisión. En la tercera generación se especializan en lecturas largas secuenciadas por nanoporos y secuenciación de una sola molécula en tiempo real. Las empresas Illumina y PacBio poseen una mayor calidad y precisión en las lecturas, en comparación a Oxford Nanopore Technologies (ONT). Sin embargo, las lecturas de ONT solucionan problemas del ensamblaje genómico propios de lecturas cortas. Todas las tecnologías analizadas poseen secuenciadores para proyectos de producción a escala; Illumina y ONT también poseen secuenciadores sobremesa, y solamente la última presenta dispositivos portátiles. Con respecto a la accesibilidad, los países centroamericanos poseen poca cobertura por parte de estas empresas, siendo Illumina la única con una distribuidora radicada en la región. Cada tecnología de secuenciación posee ventajas y desventajas asociadas, lo cual impulsa a su uso en conjunto, lo que permite análisis más convenientes y completos. Por lo cual el desarrollo de nuevos programas bioinformáticos para la mejora del análisis corresponde a consideraciones que deben ser abordadas con la intención de fortalecer el uso de las técnicas de secuenciación.

Resumen El cáncer gástrico es un proceso fatal cuyos factores de riesgo incluyen la infección por Helicobacter pylori, la anemia perniciosa, la ingesta de compuestos nitrosos, el abuso de alcohol, el tabaquismo y el sexo masculino. El seguimiento endoscópico ha definido la progresión histológica de lesiones premalignas a lesiones malignas. Sin embargo, los tumores gástricos exhiben diferentes y muy variadas variaciones histológicas, comportamientos clínicos y respuestas a tratamiento. Esta gran heterogeneidad intrapaciente e interpaciente ha obligado a la búsqueda de principios reguladores que gobiernen la evolución del cáncer gástrico. Los programas avanzados de bioinformática, la tecnología de microarreglos de ADN y la genómica funcional han ayudado a integrar la estructura, función y dinámica de moléculas biológicas expresadas o secretadas por las células epiteliales cancerosas que han modificado la clasificación del cáncer gástrico.

Abstract Gastric cancer is a fatal process whose risk factors include infection by Helicobacter pylori, pernicious anemia, nitroso compounds, alcohol abuse, cigarette smoking, and male gender. Endoscopic surveillance has defined the histological progression of premalignant to malignant lesions. Nevertheless, gastric tumors exhibit distinct histologic variations, clinical behaviors, and treatment responses. This “intra and interpatient heterogeneity” has obliged us to search for key principles governing gastric cancer evolution. Advanced bioinformatics programs, DNA microarray technology, and functional genomics have helped to integrate the structure, function, and dynamics of biological molecules expressed or secreted by cancer epithelial cells that have modified the classification of gastric cancer.

Resumen: El gel de Aloe vera es considerado una fuente natural de múltiples beneficios, originados por la acción combinada de vitaminas, aminoácidos, compuestos fenólicos, enzimas, minerales, ácidos orgánicos, lípidos y carbohidratos, que se relacionan con la mejora de enfermedades neuro-degenerativas como Alzheimer. Los ensayos in vitro e in silico permiten confirmar e identificar posibles beneficios de esta planta y sus compuestos en enfermedades. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la actividad antioxidante del gel de A. vera y mediante análisis in silico, establecer el potencial terapéutico de sus compuestos bioactivos en la enfermedad de Alzheimer. Se obtuvieron hojas de A. vera, de las que se extrajo el gel, retirando el exocarpio, se liofilizó y almacenó hasta su uso. Se caracterizó la capacidad antioxidante, se cuantificaron los compuestos fenólicos y flavonoides y se analizó la relación que existe entre los parámetros mediante correlación de Pearson. Mediante análisis in silico se evaluó el potencial de interacción de 8 compuestos del gel con la proteína gamma secretasa. El gel de A. vera obtuvo alta capacidad antioxidante por ABTS, DPPH, radical OH y poder reductor, usando bajas concentraciones para inhibir el 50 % de los radicales, y correlaciones positivas con fenoles totales y flavonoides. En el estudio in silico el compuesto que presentó mejor unión con gamma secretasa fue aloe-emodina, con menor energía libre de unión y menor concentración de constante de inhibición, sugiriendo su potencial uso como coadyuvante en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

Abstract: Aloe vera gel is considered a natural source of multiple benefits, originated by the combined action of vitamins, amino acids, phenolic compounds, enzymes, minerals, organic acids, lipids and carbohydrates, which are related to the improvement of neuro-degenerative diseases such as Alzheimer’s. In vitro and in silico tests allow us to confirm and identify possible benefits of this plant and its compounds in diseases. The objective of the present study was to evaluate the antioxidant activity of A. vera gel and, through in silico analysis, to establish the therapeutic potential of its bioactive compounds in Alzheimer’s disease. A. vera leaves were obtained, from which the gel was extracted, removing the exocarp, lyophilized and stored until use. The antioxidant capacity was characterized, the phenolic compounds and flavonoids were quantified, and the relationship between the parameters was analyzed using Pearson correlation. The interaction potential of 8 compounds in the gel with the gamma secretase protein was evaluated through in silico analysis. The A. vera gel obtained high antioxidant capacity due to ABTS, DPPH, OH radical and reducing power, using low concentrations to inhibit 50 % of the radicals, and positive correlations with total phenols and flavonoids. In the in silico study, the compound that showed the best binding with gamma secretase was aloe-emodin, with lower binding free energy and lower inhibition constant concentration, suggesting its potential use as an adjuvant in the treatment of Alzheimer’s disease.

Resumen Las displasias esqueléticas son alteraciones del crecimiento óseo y cartilaginoso con amplio espectro clínico y radiológico, cuya prevalencia es 2 a 5 casos por 10 000 recién nacidos. Se presenta el caso de un paciente masculino de 9 años con talla baja asimétrica, neurodesarrollo normal, sin deformidades osteomusculares y familiares con talla baja no estudiada. Se diagnosticó displasia esquelética, sin embargo, ante estudios paraclínicos normales, se indicó estudio molecular que reveló una nueva variante de significancia incierta en el gen TRVP4. Posteriormente, con el uso de bases de datos y de bioinformática, se reclasifica a probablemente patogénica. En valoraciones ulteriores se determinó que no cuenta con manejo dirigido y, ante la ausencia de complicaciones susceptibles de terapia, se indicó seguimiento clínico. Se resalta la importancia del reanálisis de estudios moleculares y del fortalecimiento bioinformático que facilite el diagnóstico oportuno, permitiendo la aplicación de estrategias de detección, seguimiento y tratamiento.

Abstract Skeletal dysplasias are alterations in bone and cartilage growth with a wide clinical and radiological spectrum, whose prevalence is 2 to 5 cases per 10 000 newborns. The case of a 9-year-old male patient with asymmetrical short stature, normal neurodevelopment, without musculoskeletal deformities and relatives with unexplored short stature is presented. Skeletal dysplasia was diagnosed; however, in the presence of normal paraclinical studies, a molecular study was indicated that revealed a new variant of uncertain significance in the TRVP4 gene. Subsequently, with the use of databases and bioinformatics, it was reclassified as likely pathogenic. In subsequent assessments, it was determined that there was no specific management and, given the absence of complications amenable to therapy, clinical follow-up was indicated. The importance of reanalysis of molecular studies and bioinformatic strengthening that facilitates timely diagnosis is highlighted, allowing the application of detection, monitoring and treatment strategies.

Abstract Biological sequence analysis is essential in bioinformatics, but the diversity of available tools presents significant challenges. This article proposes a web application that unifies useful functionalities in biological sequence analysis. Developed in Python and Django, it integrates features from BioPython, BioPandas, 3Dmol.js, and BLAST, among others, making it usable for users without programming knowledge. The tool covers the analysis of DNA and protein sequences, transcription, alignment, sequence search, and more. Its most notable features are efficiency, precision in obtaining quantitative data from the running process, and ease of use, supported by validation and results from the components used. Its modular architecture ensures scalability and adaptability. It is concluded that the tool represents a significant advance in simplifying and improving the processes of biological sequence analysis, promising to enhance efficiency and effectiveness in bioinformatics.

Resumen El análisis de secuencias biológicas es esencial en bioinformática, pero la diversidad de herramientas disponibles presenta desafíos significativos. Este artículo propone una aplicación web que unifica diferentes funcionalidades útiles en el análisis de secuencias biológicas. Desarrollada en Python y Django, integra funcionalidades de BioPython, BioPandas, 3Dmol.js y BLAST, entre otras, que además posibilita su uso a usuarios sin conocimientos de programación. La herramienta abarca el análisis de secuencias de ADN y proteínas, transcripción, alineación, búsqueda de secuencias y más. Dentro de las características más destacables está la eficiencia, precisión al obtener datos cuantitativos del proceso que se está ejecutando y la facilidad de uso.

Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is the most common genetic disease worldwide. There are countries with massive public health programs for early detection of this condition. In the literature, several specific haplotypes or single-base polymorphic variants (SNPs) have been associated with the SCA prognosis. Objective: To demonstrate the significant correlation of SNPs relevant to the diagnosis and prognosis of SCA among different ethnic groups. Methodology: we analyzed population frequencies and correlations of several SNPs related to the prognosis of SCA (i.e., baseline fetal hemoglobin levels), response to hydroxyurea treatment, and response to other drugs used in the SCA treatment, collected from validated genomic databases among different ethnic groups. Results: The calculation of the Hardy-Weinberg equilibrium and the logistic regression was successful in classifying the ethnic groups as African (0 = 0.78, 1 = 0.89), and with a lower efficiency as American (AMR) (0 = 0.88, 1 = 0.00), East Asian (EAS) (0 = 0.80, 1 = 0.00), European (EUR) (0 = 0.79, 1 = 0.00), and South Asian (SAS) (0 = 0.80, 1 = 0.00). Conclusions: The results extend those from previous reports and show that the profile of most of the SNPs studied presented statistically significant distributions among general ethnic groups, pointing to the need to carry out massive early screening of relevant SNPs for SCA in patients diagnosed with this disease. It is concluded that the application of a broad mutation detection program will lead to a more personalized and efficient response in the treatment of SCA.

Resumen: La anemia falciforme (AF) es la enfermedad genética más frecuente del mundo. Hay países con programas de salud pública masivos para la detección temprana esta condición. Varios haplotipos específicos y polimorfismos de una sola base (SNPs) se han asociado en la literatura con la prognosis de AF. Objetivo: Demostrar la correlación significativa de SNPS relevantes para el diagnóstico y prognosis de AF entre diferentes grupos étnicos. Metodología: se analizaron las frecuencias poblacionales y correlaciones entre varios SNPs relevantes para la prognosis de AF (ej: niveles basales de hemoglobina fetal), respuesta a tratamiento con hydroxiurea y respuesta a otras drogas utilizadas en el tratamiento de AF. Los datos fueron obtenidos de bases de datos genómicos validadas entre diferentes grupos étnicos. Resultados: Los cálculos del equilibrio de Hardy-Weinberg y la regresión logística fue exitosa en clasificar los grupos étnicos, Africano (0 = 0,78, 1 = 0,89), y con menor eficiencia; Americano (AMR) (0 = 0,88, 1 = 0,00), Asia del Este (EAS) (0 = 0,80, 1 = 0,00), Europeo (EUR) (0 = 0,79, 1 = 0,00), y Sud-Asiático (SAS) (0 = 0,80, 1 = 0,00). Conclusiones: Estos resultados, extienden los trabajos previos y muestran que el perfil de mutaciones de la mayoría de los SNPs analizados, presenta distribuciones estadísticamente significativas entre grupos étnicos generales, apuntando a la necesidad de realizar programas de testeo masivo de SNPs para AF en pacientes diagnosticados con esta patología. Se concluye que la aplicación de un programa amplio de genotipificación de mutación generara una respuesta más eficiente y personalizada en el tratamiento de AF.

Resumen: La anemia falciforme (AF) es la enfermedad genética más frecuente del mundo. Hay países con programas de salud pública masivos para la detección temprana esta condición. Varios haplotipos específicos y polimorfismos de una sola base (SNPs) se han asociado en la literatura con la prognosis de AF. Objetivo: Demostrar la correlación significativa de SNPS relevantes para el diagnóstico y prognosis de AF entre diferentes grupos étnicos. Metodología: se analizaron las frecuencias poblacionales y correlaciones entre varios SNPs relevantes para la prognosis de AF (ej: niveles basales de hemoglobina fetal), respuesta a tratamiento con hydroxiurea y respuesta a otras drogas utilizadas en el tratamiento de AF. Los datos fueron obtenidos de bases de datos genómicos validadas entre diferentes grupos étnicos. Resultados: Los cálculos del equilibrio de Hardy-Weinberg y la regresión logística fue exitosa en clasificar los grupos étnicos, Africano (0 = 0,78, 1 = 0,89), y con menor eficiencia; Americano (AMR) (0 = 0,88, 1 = 0,00), Asia del Este (EAS) (0 = 0,80, 1 = 0,00), Europeo (EUR) (0 = 0,79, 1 = 0,00), y Sud-Asiático (SAS) (0 = 0,80, 1 = 0,00). Conclusiones: Estos resultados, extienden los trabajos previos y muestran que el perfil de mutaciones de la mayoría de los SNPs analizados, presenta distribuciones estadísticamente significativas entre grupos étnicos generales, apuntando a la necesidad de realizar programas de testeo masivo de SNPs para AF en pacientes diagnosticados con esta patología. Se concluye que la aplicación de un programa amplio de genotipificación de mutación generara una respuesta más eficiente y personalizada en el tratamiento de AF.

Abstract: Sickle cell anemia (SCA) is the most common genetic disease worldwide. There are countries with massive public health programs for early detection of this condition. In the literature, several specific haplotypes or single-base polymorphic variants (SNPs) have been associated with the SCA prognosis. Objective: To demonstrate the significant correlation of SNPs relevant to the diagnosis and prognosis of SCA among different ethnic groups. Methodology: we analyzed population frequencies and correlations of several SNPs related to the prognosis of SCA (i.e., baseline fetal hemoglobin levels), response to hydroxyurea treatment, and response to other drugs used in the SCA treatment, collected from validated genomic databases among different ethnic groups. Results: The calculation of the Hardy-Weinberg equilibrium and the logistic regression was successful in classifying the ethnic groups as African (0 = 0.78, 1 = 0.89), and with a lower efficiency as American (AMR) (0 = 0.88, 1 = 0.00), East Asian (EAS) (0 = 0.80, 1 = 0.00), European (EUR) (0 = 0.79, 1 = 0.00), and South Asian (SAS) (0 = 0.80, 1 = 0.00). Conclusions: The results extend those from previous reports and show that the profile of most of the SNPs studied presented statistically significant distributions among general ethnic groups, pointing to the need to carry out massive early screening of relevant SNPs for SCA in patients diagnosed with this disease. It is concluded that the application of a broad mutation detection program will lead to a more personalized and efficient response in the treatment of SCA.

Resumo A salmonela é uma causa séria de problemas de saúde em humanos e animais em todo o mundo. Salmonella tem sido isolada de diferentes amostras biológicas e é considerada como o principal papel na indução da inflamação do trato gastrointestinal que por sua vez causa diarreia em diferentes espécies. Compreender melhor o envolvimento da Salmonella na contaminação e infecção de ovos frescos e carne de frango caipira. Este estudo teve como objetivo estabelecer as detecções microbiológicas e moleculares de Salmonella na cloaca da galinha caipira e identificar as funções biológicas previstas usando as vias da Enciclopédia de Gene e Genômica de Kyoto (KEGG) e interação proteína-proteína. Suabes cloacais foram coletados de galinhas criadas ao ar livre em fazenda local na cidade de Duhok. Os isolados foram cultivados e o teste bioquímico realizado com XLD e TSI, respectivamente. A detecção molecular e anotação funcional do gene invA foi realizada usando PCR convencional e abordagens de bioinformática. O presente estudo descobriu que Salmonella foi detectada em 36 das 86 amostras usando métodos microbiológicos. Para confirmar esses achados, o gene invA foi utilizado e 9 dos 36 isolados de Salmonella mostraram um sinal positivo de invA pelo gel de agarose. Além disso, a análise bioinformática revelou que o gene invA estava associado principalmente a processos de secreção bacteriana, assim como seus termos KEGG e interação proteína-proteína estavam envolvidos na invasão bacteriana e nas vias de secreção. Esses achados sugeriram que o gene invA desempenha um papel importante na regulação dos processos de colonização e invasão de Salmonella dentro do hospedeiro intestinal na galinha caipira.

Abstract Salmonella is a serious cause of the health issues in human and animal worldwide. Salmonella has been isolated from different biological samples and it considers as the key role in induction of inflammation of gastrointestinal tract which in turn cause diarrhoea in different species. To further understand the involvement of Salmonella in contaminating and infecting fresh eggs and meat of free-range chicken. This study aimed to establish the microbiological and molecular detections of Salmonella in the cloaca of the free-range chicken and to identify predicted biological functions using Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomic (KEGG) pathways and protein-protein interaction. Cloacal swabs were collected from free range chicken raised in the local farm in Duhok city. The isolates were cultured and biochemical test performed using XLD and TSI, respectively. Molecular detection and functional annotation of invA gene was carried out using Conventional PCR and bioinformatics approaches. The present study found that Salmonella was detected in 36 out of 86 samples using microbiological methods. To confirm these findings, invA gene was utilised and 9 out of 36 Salmonella isolates have shown a positive signal of invA by agarose gel. In addition, bioinformatic analysis revealed that invA gene was mainly associated with bacterial secretion processes as well as their KEGG terms and Protein-Protein Interaction were involved in bacterial invasion and secretion pathways. These findings suggested that invA gene plays important role in regulating colonization and invasion processes of Salmonella within the gut host in the free range chicken.

Resumo A pesquisa atual foi projetada para alcançar o potencial de produção de protease extracelular em diferentes cepas de Sordaria fimicola que foram previamente obtidas do Dr. Lamb (Imperial College, Londres) de North Facing Slope e South Facing Slope de Evolution Canyon. Após a triagem inicial e secundária, duas cepas hiperprodutoras S2 e N6 foram selecionadas para fermentação submersa e condições culturais, incluindo temperatura, pH, período de incubação, tamanho do inóculo, concentração de substrato, e diferentes fontes de carbono e nitrogênio foram otimizadas para produção de enzima. A cepa S2 apresentou produção máxima de protease de 3,291 U/mL após 14 dias de incubação a 30 °C com pH 7, concentração de substrato de 1% e inóculo de 1 mL, enquanto a cepa N6 apresentou produção máxima de protease de 1,929 U/mL em condições otimizadas de fermentação. Outro objetivo da presente pesquisa foi sustentar a biodiversidade da genética e modificações pós-tradicionais (PTMs) da protease DPAP (peptidil-aminopeptidase) em Sordaria fimicola. Cinco sítios polimórficos foram observados na sequência de aminoácidos de cepas de S. fimicola com referência a Neurospora crassa. A previsão de PTMs a partir de ferramentas de bioinformática previu 38 locais de fosforilação em resíduos de serina para protease peptidil-aminopeptidase na cepa S1 de S. fimicola, enquanto 45 locais de fosforilação em serina na cepa N7 e 47 modificações de fosforilação de serina foram previstas em N. crassa. A pesquisa atual deu uma ideia de que a mudança na composição genética afetou os PTMs que, em última análise, afetaram a produção da enzima protease em diferentes cepas do mesmo organismo (S. fimicola). A produção e os dados moleculares da pesquisa revelaram que o estresse ambiental tem fortes efeitos sobre genes específicos por meio de mutações que podem causar diversidade genética. S. fimicola é um fungo não patogênico e tem um ciclo de vida curto. Esse fungo pode ser escolhido para produzir enzima protease em escala comercial.

Abstract The current research was designed to reach extracellular protease production potential in different strains of Sordaria fimicola which were previously obtained from Dr. Lamb (Imperial College, London) from North Facing Slope and South Facing Slope of Evolution Canyon. After initial and secondary screening, two hyper-producers strains S2 and N6 were selected for submerged fermentation and cultural conditions including temperature, pH, incubation period, inoculum size, substrate concentration, and different carbon and nitrogen sources were optimized for enzyme production. S2 strain showed maximum protease production of 3.291 U/mL after 14 days of incubation at 30 °C with 7 pH, 1% substrate concentration and 1 mL inoculum, While N6 strain showed maximum protease production of 1.929 U/mL under fermentation optimized conditions. Another aim of the present research was to underpin the biodiversity of genetics and post-translational modifications (PTMs) of protease DPAP (peptidyl-aminopeptidase) in Sordaria fimicola. Five polymorphic sites were observed in amino acid sequence of S. fimicola strains with reference to Neurospora crassa. PTMs prediction from bioinformatics tools predicted 38 phosphorylation sites on serine residues for protease peptidyl-aminopeptidase in S1 strain of S. fimicola while 45 phosphorylation sites on serine in N7 strain and 47 serine phosphorylation modifications were predicted in N. crassa. Current research gave an insight that change in genetic makeup effected PTMs which ultimately affected the production of protease enzyme in different strains of same organism (S. fimicola). The production and molecular data of the research revealed that environmental stress has strong effects on the specific genes through mutations which may cause genetic diversity. S. fimicola is non- pathogenic fungus and has a short life cycle. This fungus can be chosen to produce protease enzyme on a commercial scale.

Resumo Os microRNAs (miRNAs) são reconhecidos como biomarcadores do diabetes mellitus tipo 2 (DM2), úteis para a compreensão do metabolismo da doença, e possuem grande potencial como alvos terapêuticos. O aumento da expressão de BDNF e IGF1 está altamente envolvido nos benefícios as vias de insulina e glicose, porém, são regulados negativamente em condições de resistência à insulina, enquanto seu aumento de expressão está correlacionado com a melhora do metabolismo da glicose e da insulina. Estudos sugerem a regulação desses genes por microRNA em vários contextos diferentes, proporcionando uma nova abordagem de investigação para compreender o metabolismo do DM2 e revelar potenciais alvos terapêuticos. No presente estudo, investigamos em diferentes modelos animais (humanos, ratos e camundongos) miRNAs que têm como alvo BDNF e IGF1 em tecido muscular esquelético com condições fisiológicas de DM2. As análises foram realizadas utilizando ferramentas de bioinformática e bancos de dados para predição de miRNA, homologia molecular, validação experimental de interações, expressão na condição fisiológica estudada e interação em rede. Os resultados mostraram três candidatos a miRNAs para IGF1 (miR-29a, miR-29b e miR-29c) e um para BDNF (miR-206). As avaliações experimentais e a busca pela expressão no músculo esquelético de indivíduos com DM2 confirmaram a interação prevista entre miRNA-mRNA para miR-29b e miR-206 através de modelos humanos, ratos e camundongos. Essa interação foi reafirmada em múltiplas análises de rede. Em conclusão, nossos resultados mostram a relação de regulação entre miR-29b e miR-206 com os genes investigados, em diversos tecidos, sugerindo um padrão de inibição. Contudo, esses dados mostram um grande número de possíveis processos fisiológicos de interação para perspectivas biotecnológicas.

Abstract microRNAs (miRNAs) are recognized as diabetes mellitus type 2 (T2DM) biomarkers useful for disease metabolism comprehension and have great potential as therapeutics targets. BDNF and IGF1 increased expression are highly involved in the benefits of insulin and glucose paths, however, they are down-regulated in insulin resistance conditions, while their expression increase is correlated to the improvement of glucose and insulin metabolism. Studies suggest the microRNA regulation of these genes in several different contexts, providing a novel investigation approach for comprehending T2DM metabolism and revealing potential therapeutic targets. In the present study, we investigate in different animal models (human, rat, and mouse) miRNAs that target BDNF and IGF1 in skeletal muscle tissue with T2DM physiological conditions. Bioinformatics tools and databases were used to miRNA prediction, molecular homology, experimental validation of interactions, expression in the studied physiological condition, and network interaction. The findings showed three miRNAs candidates for IGF1(miR-29a, miR-29b, and miR-29c) and one for BDNF (miR-206). The experimental evaluations and the search for the expression in skeletal muscle from T2DM subjects confirmed the predicted interaction between miRNA-mRNA for miR-29b and miR-206 through human, rat, and mouse models. This interaction was reaffirmed in multiple network analyses. In conclusion, our results show the regulation relationship between miR-29b and miR-206 with the investigated genes, in several tissues, suggesting an inhibition pattern. Nevertheless, these data show a large number of possible interaction physiological processes, for future biotechnological prospects.

Abstract Background ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI) is one of the leading causes of fatal cardiovascular diseases, which have been the prime cause of mortality worldwide. Diagnosis in the early phase would benefit clinical intervention and prognosis, but the exploration of the biomarkers of STEMI is still lacking. Objectives In this study, we conducted a bioinformatics analysis to identify potential crucial biomarkers in the progress of STEMI. Methods We obtained GSE59867 for STEMI and stable coronary artery disease (SCAD) patients. Differentially expressed genes (DEGs) were screened with the threshold of |log2fold change| > 0.5 and p <0.05. Based on these genes, we conducted enrichment analysis to explore the potential relevance between genes and to screen hub genes. Subsequently, hub genes were analyzed to detect related miRNAs and DAVID to detect transcription factors for further analysis. Finally, GSE62646 was utilized to assess DEGs specificity, with genes demonstrating AUC results exceeding 75%, indicating their potential as candidate biomarkers. Results 133 DEGs between SCAD and STEMI were obtained. Then, the PPI network of DEGs was constructed using String and Cytoscape, and further analysis determined hub genes and 6 molecular complexes. Functional enrichment analysis of the DEGs suggests that pathways related to inflammation, metabolism, and immunity play a pivotal role in the progression from SCAD to STEMI. Besides, related-miRNAs were predicted, has-miR-124, has-miR-130a/b, and has-miR-301a/b regulated the expression of the largest number of genes. Meanwhile, Transcription factors analysis indicate that EVI1, AML1, GATA1, and PPARG are the most enriched gene. Finally, ROC curves demonstrate that MS4A3, KLRC4, KLRD1, AQP9, and CD14 exhibit both high sensitivity and specificity in predicting STEMI. Conclusions This study revealed that immunity, metabolism, and inflammation are involved in the development of STEMI derived from SCAD, and 6 genes, including MS4A3, KLRC4, KLRD1, AQP9, CD14, and CCR1, could be employed as candidate biomarkers to STEMI. STsegment ST segment (STEMI diseases worldwide prognosis lacking GSE GSE5986 (SCAD patients (DEGs log2fold logfold log fold change 05 0 5 0. 005 <0.05 Subsequently Finally GSE6264 75 75% 13 Then Cytoscape complexes metabolism Besides relatedmiRNAs predicted hasmiR124, hasmiR124 hasmiR has miR 124, 124 has-miR-124 hasmiR130a/b, hasmiR130ab hasmiRab 130a/b, 130a b has-miR-130a/b hasmiR301a/b hasmiR301ab 301a/b 301a Meanwhile EVI1 EVI AML1 AML GATA1 GATA gene MS4A3 MSA MS A KLRC4 KLRC KLRD1 KLRD AQP9 AQP CD CD1 CCR1 CCR GSE598 00 <0.0 GSE626 7 1 hasmiR12 12 has-miR-12 hasmiR130a hasmiR130a/b ab 130ab 130a/b hasmiR301a 301ab MS4A GSE59 <0. GSE62 hasmiR1 has-miR-1 hasmiRa GSE5 <0 GSE6 has-miR- < has-miR

Resumo Fundamento O infarto do miocárdio com elevação do segmento ST (IAMCSST) é uma das principais causas de doenças cardiovasculares fatais, que têm sido a principal causa de mortalidade em todo o mundo. O diagnóstico na fase inicial beneficiaria a intervenção clínica e o prognóstico, mas ainda falta a exploração dos biomarcadores do IAMCSST. Objetivos Neste estudo, conduzimos uma análise bioinformática para identificar potenciais biomarcadores cruciais no progresso do IAMCSST. Métodos Obtivemos GSE59867 para pacientes com IAMCSST e doença arterial coronariana estável (DACE). Genes diferencialmente expressos (GDEs) foram selecionados com o limiar de |log2fold change| > 0,5 e p < 0,05. Com base nesses genes, conduzimos análises de enriquecimento para explorar a relevância potencial entre genes e para rastrear genes centrais. Posteriormente, os genes centrais foram analisados para detectar miRNAs relacionados e DAVID para detectar fatores de transcrição para análise posterior. Finalmente, o GSE62646 foi utilizado para avaliar a especificidade dos GDEs, com genes demonstrando resultados de AUC superiores a 75%, indicando seu potencial como candidatos a biomarcadores. Posteriormente, os genes centrais foram analisados para detectar miRNAs relacionados e DAVID para detectar fatores de transcrição para análise posterior. Finalmente, o GSE62646 foi utilizado para avaliar a especificidade dos GDEs, com genes demonstrando resultados de AUC superiores a 75%, indicando seu potencial como candidatos a biomarcadores. Resultados 133 GDEs entre DACE e IAMCSST foram obtidos. Em seguida, a rede PPI de GDEs foi construída usando String e Cytoscape, e análises posteriores determinaram genes centrais e 6 complexos moleculares. A análise de enriquecimento funcional dos GDEs sugere que as vias relacionadas à inflamação, metabolismo e imunidade desempenham um papel fundamental na progressão de DACE para IAMCSST. Além disso, foram previstos miRNAs relacionados, has-miR-124, has-miR-130a/b e has-miR-301a/b regularam a expressão do maior número de genes. Enquanto isso, a análise dos fatores de transcrição indica que EVI1, AML1, GATA1 e PPARG são os genes mais enriquecidos. Finalmente, as curvas ROC demonstram que MS4A3, KLRC4, KLRD1, AQP9 e CD14 exibem alta sensibilidade e especificidade na previsão de IAMCSST. Conclusões Este estudo revelou que imunidade, metabolismo e inflamação estão envolvidos no desenvolvimento de IAMCSST derivado de DACE, e 6 genes, incluindo MS4A3, KLRC4, KLRD1, AQP9, CD14 e CCR1, poderiam ser empregados como candidatos a biomarcadores para IAMCSST. (IAMCSST fatais mundo prognóstico GSE GSE5986 DACE. . (DACE) (GDEs log2fold logfold log fold change 05 0 5 0, 005 0,05 Posteriormente posterior Finalmente GSE6264 75 75% 13 obtidos seguida Cytoscape moleculares disso hasmiR124, hasmiR124 hasmiR has miR 124, 124 has-miR-124 hasmiR130a/b hasmiR130ab hasmiRab 130a/b 130a b hasmiR301a/b hasmiR301ab 301a/b 301a isso EVI1 EVI AML1 AML GATA enriquecidos MS4A3 MSA MS KLRC4 KLRC KLRD1 KLRD AQP CD CD1 CCR1 CCR GSE598 (DACE 00 0,0 GSE626 7 1 hasmiR12 12 has-miR-12 hasmiR130a ab 130ab hasmiR301a 301ab MS4A GSE59 GSE62 hasmiR1 has-miR-1 hasmiRa GSE5 GSE6 has-miR- has-miR

ABSTRACT Objectives: Osteoarthritis (OA) is a degenerative disease associated with chondrocyte injury. This study investigated the dysregulation of microRNA-650 (miR-650) in cartilage tissues of patients with OA. Its function and mechanism were also investigated in OA cell models. Methods: miR-650 levels were examined in 15 OA cartilage tissues and ten healthy cartilage tissues. SW1353 cells were used for cell function experiments and IL-1β was applied to the cells to mimic OA conditions in vitro. Cell functions such as proliferation, apoptosis, and inflammation were detected. The downstream target gene of miR-650 was identified and confirmed by bioinformatic analysis and luciferase activity assay. Rescue experiments were performed to verify the mechanism. Results: Suppressed expression of miR-650 was tested in patients with OA and cell models. Overexpression of miR-650 increased cell proliferation but suppressed apoptosis and inflammation of SW1353. As the target gene of miR-650, WNT1 overexpression counteracted the role of miR-650 in the function of SW1353. Conclusion: miR-650 can protect against articular cartilage injury in OA by targeting WNT1. Level of Evidence I, Experimental Study. Objectives (OA microRNA650 microRNA 650 microRNA-65 miR650 miR (miR-650 models Methods miR-65 1 SW SW135 IL1β ILβ IL 1β β vitro detected assay Results miR650, 650, WNT Conclusion I Study microRNA65 65 microRNA-6 miR65 (miR-65 miR-6 SW13 microRNA6 6 microRNA- miR6 (miR-6 miR- SW1 (miR- (miR

RESUMO Objetivos: A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa acompanhada de lesão dos condrócitos. Este estudo examinou a desregulação do microRNA-650 (miR-650) nos tecidos da cartilagem de doentes com OA. A sua função e mecanismo também foram explorados em modelos celulares de OA. Métodos: Os níveis de miR-650 foram examinados em 15 tecidos de cartilagem de OA e em 10 tecidos de cartilagem normal saudável. As células SW1353 foram utilizadas para experiências de função celular, e a IL-1β atua sobre as células para imitar as condições da OA in vitro. Foram detectadas funções celulares, incluindo a proliferação, a apoptose e a inflamação. O gene alvo a jusante do miR-650 foi reconhecido e confirmado por meio de análise bioinformática e ensaio de atividade da luciferase. Foram efetuadas experiências de recuperação para verificação do mecanismo. Resultados: Foi testada uma expressão oprimida do miR-650 tanto em doentes com OA como em modelos celulares. A sobreexpressão do miR-650 aumentou a proliferação celular, mas suprimiu a apoptose e a inflamação da SW1353. Como gene alvo do miR-650, a sobreexpressão do WNT1 contrariou o papel do miR-650 na função do SW1353. Conclusão: O miR-650 pode proteger contra a lesão da cartilagem articular na OA através da ação sobre o WNT1. Nível de Evidência I, Estudo de Experimental. Objetivos (OA condrócitos microRNA650 microRNA 650 microRNA-65 miR650 miR (miR-650 Métodos miR-65 1 saudável SW SW135 celular IL1β ILβ IL 1β β vitro luciferase Resultados miR650, 650, WNT Conclusão I Experimental microRNA65 65 microRNA-6 miR65 (miR-65 miR-6 SW13 microRNA6 6 microRNA- miR6 (miR-6 miR- SW1 (miR- (miR

Abstract Quantum computers use the properties of quantum physics to perform information storage and processing operations. The operation of these computers involves concepts such as entanglement and superposition, which endow them with a great processing power that even surpasses that of the most powerful current supercomputers, while consuming significantly lower amounts of energy. The different studies analyzed in this review article suggest that quantum computing will have a deep impact in areas such as finance, logistics, transportation, space and automotive technology, materials science, energy, pharmaceutical and healthcare industry, cybersecurity, and agriculture. In digital agriculture, several applications that could be executed more efficiently in quantum computers for data processing and understanding of biological processes were identified and exemplified. These applications are grouped here into the following four areas: bioinformatics, remote sensing, climate modeling, and smart farming. This article also explores the strategic importance of mastering quantum computing, highlights some advantages in relation to classical computing, and presents a mapping of the services already available, enabling institutions to undertake strategic planning for the incorporation of quantum computing into their development processes. Finally, the challenges for the implementation of quantum computing are highlighted, along with some ongoing initiatives aimed at furthering research at the forefront of knowledge in this area applied to digital agriculture. operations superposition supercomputers energy finance logistics transportation technology science industry cybersecurity agriculture exemplified bioinformatics sensing modeling farming available Finally highlighted

Resumo Os computadores quânticos usam as propriedades da física quântica para realizar operações de armazenamento e processamento de informações. A operação desses computadores envolve conceitos como emaranhamento e superposição, que os dotam de grande poder de processamento que supera até mesmo o dos mais poderosos supercomputadores atuais, consumindo quantidades significativamente menores de energia. Os diferentes estudos analisados neste artigo de revisão sugerem que a computação quântica terá impacto profundo em áreas como finanças, logística, transporte, tecnologia espacial e automotiva, ciência dos materiais, energia, indústria farmacêutica e de saúde, segurança cibernética e agricultura. Na agricultura digital, foram identificadas e exemplificadas várias aplicações que poderiam ser executadas de forma mais eficiente em computadores quânticos para processamento de dados e compreensão de processos biológicos. Essas aplicações são agrupadas aqui nas quatro seguintes áreas: bioinformática, sensoriamento remoto, modelagem climática e agricultura inteligente. Este artigo também explora a importância estratégica do domínio da computação quântica, destaca algumas vantagens em relação à computação clássica e apresenta um mapeamento dos serviços já disponíveis, o que permitirá que instituições empreendam um planejamento estratégico para incorporar a computação quântica em seus processos de desenvolvimento. Por fim, são destacados os desafios para a implementação da computação quântica, juntamente com algumas iniciativas em andamento que visam aprofundar a pesquisa na vanguarda do conhecimento nesta área aplicada à agricultura digital. informações superposição atuais energia finanças logística transporte automotiva materiais saúde digital biológicos bioinformática remoto inteligente disponíveis desenvolvimento fim

Abstract The technological development of tools that enable the spawning of different native species is paramount to enable ex situ conservation initiatives, as well as providing means for commercial hatchery of threatened fish which, in turn, relieve fisheries pressure over wild stocks. Neotropical migratory freshwater fish depend on hormonal induction for spawning in hatcheries, through expensive methods of limited efficiency. Salminus brasiliensis is one of the largest Neotropical freshwater fish, a piscivorous top-predator, prized in angling, highly valued in the market, and appreciated in gastronomy. Teleost fish have either, two or three GnRH paralogous genes: GnRH1, GnRH2 and the GnRH3. The expression products of these paralogous isoforms consist of a larger prepro-GnRH polypeptide, which undergoes post-translational proteolytic processing to yield the active decapeptide hormone. There is increasing interest in characterizing and understanding these neuropeptides, because of its practical application in hatchery spawning. We present the characterization of GnRH1’s coding sequence for the prepro-GnRH1 polypeptide of S. brasiliensis. An annotation from a genomic assembly was used for searching for GnRH paralogues, based on data from anonymous predicted transcripts. The sequence retrieved for GnRH1 was then used as a query for searching the uncharacterized GnRH paralogues from full genomes of Characiformes deposited at NCBI. The S. brasiliensis GnRH1 gene sequence retrieved was targeted for PCR and submitted to Sanger sequencing, allowing for its confirmation. It spans 423 bp (exon 1: 128 bp; intron: 161 bp; and exon 2: 1134 bp), with open reading frames coding for 264 and 88 amino acids, respectively. The different variants retrieved for the prepro-GnRH (1, 2 and 3) from Characiformes genomes and deposited sequences from NCBI grouped in three distinct clades in a neighbor joining tree, each forming a monophyletic branch and with the S. brasiliensis sequences nested within the expected groups. Here we observed a variation at a proteolytic site (GKR→GRR), reported as highly conserved in vertebrates up to now, that can potentially alter the cleavage site and modify the peptide topology. This work has characterized, for the first time, the sequence of the GnRH1 coding for its prepro-GnRH peptide, for a member of the Charaficormes order. This will help to promote research and development of tools for broodstock spawning and environmental management of S. brasiliensis and related migratory fish. initiatives turn stocks hatcheries efficiency toppredator, toppredator top predator, predator top-predator angling market gastronomy either genes GnRH3 preproGnRH prepro posttranslational post translational hormone neuropeptides GnRH1s GnRHs s preproGnRH1 S transcripts sequencing confirmation 42 1 12 intron 16 113 bp, , bp) 26 8 acids respectively 1, (1 3 tree groups GKR→GRR, GKRGRR GKR→GRR GKR GRR (GKR→GRR) now topology characterized time order 4 11 ( (GKR→GRR

Resumo O desenvolvimento tecnológico de ferramentas que possibilitem a reprodução de diferentes espécies nativas é fundamental para viabilizar iniciativas de conservação ex situ, bem como fornecer meios para produção comercial de peixes ameaçados que, por sua vez, aliviam a pressão pesqueira sobre os estoques selvagens. Peixes migratórios de água doce Neotropicais dependem de indução hormonal para desova em pisciculturas, com métodos caros e de eficiência limitada. Salminus brasiliensis é um dos maiores peixes de água doce Neotropicais, predador de topo piscívoro, admirado na pesca esportiva, muito valorizado no mercado e apreciado na gastronomia. O hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH) é uma molécula-chave na reprodução em todos os vertebrados. Os peixes teleósteos possuem dois ou três genes parálogos de GnRH: GnRH1, GnRH2 e GnRH3. Os produtos de expressão gênica dessas isoformas parálogas consistem em um polipeptídeo maior, pré-pró-GnRH, que sofre processamento proteolítico pós-traducional para produzir o hormônio decapeptídeo ativo. Há um interesse crescente na caracterização e compreensão desses neuropeptídeos, devido à sua aplicação prática na reprodução em pisciculturas. Aqui apresentamos a caracterização da sequência codificadora de GnRH1 para o polipeptídeo pré-pŕo-GnRH1 de S. brasiliensis. Uma anotação de montagem genômica foi usada para procurar parálogos de GnRH, com base em dados de transcritos anônimos preditos em um arquivo de anotação gênica. A sequência recuperada para GnRH1 foi então usada como argumento de busca para procura de parálogos não caracterizados de GnRH, a partir de genomas completos de Characiformes depositados no NCBI. A sequência recuperada de S. brasiliensis do gene GnRH1 foi alvo de PCR e submetida ao sequenciamento Sanger, permitindo a sua confirmação. Esta abrange 423 pb (éxon 1: 128 pb; íntron: 161 pb; éxon 2: 134 pb), com janelas abertas de leitura que codificam para 264 e 88 aminoácidos, respectivamente. As diferentes variantes do pré-pró-GnRH (1, 2 e 3) recuperadas dos genomas completos e sequências depositadas de Characiformes no NCBI agruparam-se em três clados distintos, numa árvore de neighbour joining, cada um formando um ramo monofilético e com as sequências de S. brasiliensis aninhadas dentro dos grupos esperados. Aqui observamos uma variação em um sítio proteolítico (GKR→GRR), até então relatado como altamente conservado em vertebrados, que pode potencialmente alterar o sítio de clivagem e modificar a topologia do peptídeo. Este trabalho caracteriza, pela primeira vez, a sequência do gene GnRH1 que codifica para o peptídeo pré-pró-GnRH1, para um membro da ordem Characiformes. Isto ajudará a promover a pesquisa e o desenvolvimento de ferramentas para a reprodução em piscicultura e a gestão ambiental de S. brasiliensis e outros peixes migratórios relacionados. situ vez selvagens pisciculturas limitada piscívoro esportiva gastronomia GnRH (GnRH moléculachave molécula chave vertebrados GnRH3 maior prépróGnRH, prépróGnRH pré pró póstraducional pós traducional ativo neuropeptídeos prépŕoGnRH1 prépŕoGnRH pŕo pré-pŕo-GnRH S Sanger confirmação 42 1 12 íntron 16 13 pb, , pb) 26 8 aminoácidos respectivamente 1, (1 3 agruparamse agruparam se distintos joining esperados GKR→GRR, GKRGRR GKR→GRR GKR GRR (GKR→GRR) caracteriza prépróGnRH1, prépróGnRH1 pré-pró-GnRH1 relacionados 4 ( (GKR→GRR