ABSTRACT Neospora caninum is an important worldwide parasite responsible for causing abortion in animals. Due to limited information on the occurrence of infection by this parasite in the state of Rondônia, Brazil, this study aimed to determine the seroprevalence and identify the risk factors associated with the infection in slaughtered cattle, from 19 municipalities distributed in seven microregions of the state. A total of 494 samples were obtained and subjected to anti-N. caninum antibodies, using the Indirect Immunofluorescence Reaction technique. Antibodies were detected in 5.06% (25/494) of the samples, in 30.30% (10/33) of farms, in nine municipalities located in four microregions of Rondônia. Of all the animals analyzed, 4.81% of the females (20/416) and 6.41% of the males (05/78) were seropositive for the parasite, with “abortion in the last 12 months” being considered an important risk factor for the occurrence of infection (OR = 9.54; p = 0.01). The present study points out the prevalence of anti-N. caninum antibodies in 5.06% of slaughtered animals and abortion as the main risk factor associated with infection by N. caninum, thus contributing to the elucidation of the epidemiology of this protozoan in Rondônia, Brazil.

RESUMO Neospora caninum é um importante parasito, responsável por causar aborto em animais e distribuído mundialmente. Devido às informações limitadas sobre a ocorrência da infecção por esse parasito no estado de Rondônia, Brasil, este estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção em bovinos abatidos, oriundos de 19 municípios, distribuídos em sete microrregiões do estado. Um total de 494 amostras foi obtido e submetido à pesquisa de anticorpos anti-N. caninum, por meio da técnica de reação de imunofluorescência indireta. Os anticorpos foram detectados em 5,06% (25/494) das amostras, em 30,30% (10/33) das propriedades rurais, de nove municípios, localizados em quatro microrregiões de Rondônia. De todos os animais analisados, 4,81% das fêmeas (20/416) e 6,41% dos machos (05/78) foram soropositivos para o parasito, sendo o “aborto nos últimos 12 meses” considerado um importante fator de risco para a ocorrência da infecção (OR = 9,54; P = 0,01). O presente estudo aponta a prevalência de anticorpos anti-N. caninum em 5,06% dos animais abatidos e o aborto como o principal fator de risco associado à infecção por N. caninum, contribuindo assim para a elucidação da epidemiologia desse protozoário em Rondônia, Brasil.

Abstract The aim of this study was to determine the presence of deoxyribonucleic acid (DNA) from Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. and Neospora caninum, in tissues of wild boars slaughtered in southern Brazil. A total of 156 samples were collected from different organs of 25 wild boars, and DNA from at least one of the protozoa investigated was detected in 79 samples. To differentiate between infectious agents, restriction fragment length polymorphism was performed using the restriction enzymes DdeI and HpaII. For N. caninum, conventional PCR was performed with specific primers. The DNA of at least one of the studied pathogens was detected in each animal: 26.58% for T. gondii, 68.36% for Sarcocystis spp. and 5.06% for N. caninum. Coinfection between T. gondii and Sarcocystis spp. occurred in 14 animals, between T. gondii and N. caninum in only one male animal, between Sarcocystis spp. and N. caninum in a female, while co-infection with the three agents was equally observed in only one male animal. Considering the high frequency of detection and its zoonotic risk, especially T. gondii, it appears that wild boars can be potential sources of transmission of infectious agents and the adoption of monitoring measures in these populations should be prioritized.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a presença de ácido desoxirribonucléico (DNA) de Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. e Neospora caninum, em tecidos de javalis abatidos no sul do Brasil. Foram coletadas 156 amostras de diferentes órgãos de 25 javalis, sendo detectado o DNA de pelo menos um dos protozoários pesquisados em 79 amostras. Para diferenciar entre os agentes infecciosos, o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição, foi realizado usando-se as enzimas de restrição DdeI e HpaII. Para N. caninum, a PCR convencional foi realizada com "primers" específicos. O DNA de pelo menos um dos patógenos estudados foi detectado em cada animal: 26,58% para T. gondii, 68,36% para Sarcocystis spp. e 5,06% para N. caninum. Coinfecção entre T. gondii e Sarcocystis spp. ocorreu em 14 animais; entre T. gondii e N. caninum em apenas um animal macho; entre Sarcocystis spp. e N. caninum em uma fêmea, enquanto a coinfecção com os três agentes foi observada igualmente em apenas um animal macho. Considerando-se a alta frequência de detecção e seu risco zoonótico, especialmente T. gondii, constata-se que os javalis podem ser potenciais fontes de transmissão de agentes infecciosos, e a adoção de medidas de monitoramento nessas populações devem ser priorizadas.

Abstract The objective was to describe the seroprevalence of anti-Neospora caninum antibodies in goats and sheep slaughtered in the state of Paraíba and to identify possible associated factors with the infections. Two hundred twenty-nine samples from goats and two hundred five from sheep were analyzed by Indirect Immunofluorescence Reaction (IFAT) using a cutoff point of 1:50. The presence of anti-N. caninum antibodies was identified in 28.4% (65/ 229; 95% Confidence Interval: 22.6-34.2) of the goat samples and in 12.7% (26/ 205; 95% CI: 8.2 – 17.2) of the sheep samples. Contact between goats and dogs (Odds ratio 4.81; CI 1.13 – 2.67; p = 0.041) and cattle (OR. 1.87; CI 1.13 – 2.67; p = 0.002) was identified as a risk factor for goats and contact between sheep and dogs (OR 2.32; CI 1.58 – 3.14; p = 0.026) and history of abortion (OR 1.94; CI 1.28 – 2.90; p = 0.001) was considered a risk factor for sheep. The study revealed a high seroprevalence of anti-N. caninum antibodies in slaughtered goats and sheep in Paraíba. Risk factors such as contact with dogs/cattle and abortion history underscore the need for preventive measures to control infection and enhance animal health management.

Resumo O objetivo deste estudo foi descrever a soroprevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em caprinos e ovinos abatidos em abatedouros públicos do Estado da Paraíba, e identificar os possíveis fatores associados às infecções. Foram analisadas 229 amostras de soro de caprinos e 205 de ovinos pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-se ponto de corte de 1:50. A presença de anticorpos anti-Neospora caninum foi identificada em 28,4% (65/229; Intervalo de confiança 95%: 22,6-34,2) das amostras de caprinos e em 12,7% (26/205; IC 95%: 8,2-17,2%) das amostras de ovinos. O contato de caprinos com cães (Odds ratio 4,81; IC 2,07-8,87; p = 0,041) e bovinos (OR. 1,87; IC 1,13 – 2,67; p = 0,002) foram identificados como fatores de risco para caprinos; e o contato de ovinos com cães (OR. 2,32; IC 1,58-3,14; p = 0,026) e o histórico de aborto (OR. 1,94; IC 1,28-2,90; p = 0,001) foram considerados fatores de risco para ovinos. O estudo revelou alta soroprevalência de anticorpos anti-N. caninum em caprinos e ovinos abatidos na Paraíba. Fatores de risco, como contato com cães/bovinos e histórico de aborto, destacam a necessidade de medidas preventivas para conter a infecção e melhorar o manejo da saúde animal.

Resumo A bartonelose é uma zoonose transmitida por vetores, com distribuição mundial, que infecta várias espécies de mamíferos. Apesar dos estudos conduzidos no Brasil, informações sobre Bartonella em cães são escassas. Portanto, foi realizado um estudo retrospectivo para investigar a exposição a Bartonella sp. em cães cães, utilizando-se o ensaio de imunofluorescência indireta (IFA). Trezentas e trinta e cinco amostras de soro de cães, previamente testadas para patógenos transmitidos pelos vetores, Toxoplasma gondii e Neospora caninum foram avaliadas quanto à presença de anticorpos IgG contra Bartonella sp. Todos os cães eram oriundos da região metropolitana de Ribeirão Preto, Nordeste do Estado de São Paulo. Vinte e oito amostras (8,3%) foram positivas para Bartonella sp. no ponto de corte de 64. Entre as 28 amostras positivas, 16 (57,1%) também foram positivas para Ehrlichia canis, 12 (42,8%) para Babesia vogeli, cinco (17,8%) para T. gondii e três (10,7%) para L. infantum e N. caninum. Os resultados demonstraram que os cães amostrados foram expostos a Bartonella sp. Como os animais eram de proprietários particulares, nossos achados demonstram que as pessoas também podem ter sido expostas a Bartonella sp. São necessários estudos para avaliar se a infecção por B. canis ou E. canis constitui fator de risco para infecção por Bartonella em cães.

Abstract Bartonellosis is a vector-borne zoonotic disease with worldwide distribution that infect a broad spectrum of mammalian species. Despite the recent studies carried out in Brazil, information regarding Bartonella in dogs are scarce. Therefore, we performed a retrospective study to investigate the exposure to Bartonella sp. in dogs by indirect immunofluorescence assay (IFA). Three hundred and thirty-five archived serum samples from dogs previously tested for vector-borne pathogens, Toxoplasma gondii, and Neospora caninum were screened for the presence of IgG antibodies to Bartonella sp. All dogs originated from the Metropolitan region of Ribeirão Preto, northeast of the State of São Paulo. Twenty-eight samples (8.3%) were positive for Bartonella sp. at the cut-off of 64. Among the 28 seropositive samples for Bartonella sp., 16 (57.1%) were also seropositive for Ehrlichia canis, 12 (42.8%) for Babesia vogeli, five (17.8%) for T. gondii and three (10.7%) for L. infantum and N. caninum. Our results demonstrated that dogs sampled were exposed to Bartonella sp. Since all the animals sampled in the present study were from private owners, our findings demonstrate that these people may also be exposed to Bartonella sp. Further studies designed to assess whether the infection by other arthropod-borne pathogens such as B. vogeli and E. canis are risk factors for Bartonella infection are needed.

Resumen Neospora caninum es un parásito del filo Apicomplexa que genera grandes pérdidas económicas para la ganadería a nivel mundial. A pesar de su importancia, la información sobre la prevalencia de infección en áreas endémicas de Colombia es escasa. Estudios previos han reportado una alta seroprevalencia en ganado lechero de Boyacá, que sugiere un factor de riesgo significativo para la transmisión activa de la neosporosis. Sin embargo, no hay datos disponibles sobre el estado de infección o la presencia del parásito en la sangre periférica del ganado lechero. En este estudio, se realizó la detección genética de N. caninum por PCR anidada del marcador Nc-5 en muestras de sangre periférica de vacas lecheras de los municipios de Paipa, Toca y Tuta. Se secuenciaron cuatro muestras positivas por el método de Sanger, que se editaron, alinearon y compararon con secuencias disponibles en la base de datos GenBank. Se detectó el ADN del parásito en 23 de las 170 muestras de sangre analizadas. Se estimó un límite cualitativo de detección en las muestras (~64 parásitos por volumen de sangre muestreada). Este es el primer reporte de detección del ADN de N. caninum por PCR en sangre de ganado lechero colombiano. Por lo tanto, futuros trabajos sobre la detección molecular y la genética poblacional de N. caninum en sangre periférica de ganado podrían ser muy útiles para el diagnóstico temprano de la neosporosis y la creación de estrategias más efectivas de vigilancia epidemiológica.

Abstract Neospora caninum is a parasite of the phylum Apicomplexa that causes significant economic losses for cattle husbandry worldwide. Despite its relevance, information regarding infection prevalence in endemic areas of Colombia is scarce. Previous studies have reported a high seroprevalence in dairy cattle from Boyacá, which suggests a significant risk factor for active transmission of neosporosis. However, there is no available data concerning the infection stage or the presence of said parasite in the peripheral blood of dairy cattle. In this study, genetic detection of N. caninum was carried out using a nested PCR with an Nc-5 marker on peripheral blood samples from dairy cows in the municipalities of Paipa, Toca, and Tuta. Four positive samples were sequenced through the Sanger method, which were then edited, aligned, and compared to sequences available in the GenBank database. The parasite’s DNA was detected in 23 out of 170 analyzed blood samples. A qualitative detection limit was estimated (~64 parasites per volume of blood sampled). This is the first report of DNA detection of N. caninum through PCR in blood from Colombian dairy cattle. Thereupon, further studies about N. caninum molecular detection and population genetics in cattle peripheral blood could be very useful for the early diagnosis of neosporosis and creating more effective epidemiological surveillance strategies.

Resumo Neospora caninum é um parasita do filo Apicomplexa que causa perdas econômicas significativas para o gado em todo o mundo. Apesar de sua relevância, as informações sobre a prevalência de infecções na Colômbia em áreas endêmicas são escassas. Estudos anteriores relataram uma alta seroprevalência no gado leiteiro de Boyacá, o que sugere um fator de risco significativo para a transmissão ativa da neosporose bovina. Entretanto, não há dados disponíveis sobre o estágio de infecção ou a presença do referido parasita no sangue periférico do gado leiteiro. Neste estudo, realizou-se a detecção genética de N. caninum por meio uma PCR aninhada com um marcador Nc-5 em amostras de sangue periférico de vacas leiteiras nos municípios de Paipa, Toca e Tuta. Quatro amostras positivas foram sequenciadas através do método Sanger, que foram então editadas, alinhadas e comparadas com as sequências disponíveis no banco de dados do GenBank. O DNA do parasita foi detectado em 23 das 170 amostras de sangue analisadas. Foi estimado um limite de detecção qualitativa (~64 parasitas por volume de sangue amostrado). Este é o primeiro relatório de detecção de DNA de N. caninum através de PCR em sangue de gado leiteiro colombiano. A partir dessas evidências, estudos adicionais sobre a detecção molecular de N. caninum e genética populacional no sangue periférico do gado poderiam ser muito úteis para o diagnóstico precoce da neosporose e para a criação de estratégias de vigilância epidemiológica mais eficazes.

Resumo A pecuária na Amazônia tem crescido significativamente e, embora a neosporose em bovinos tenha sido relatada em todo o mundo, não há informações sobre N. caninum nos sistemas de produção no estado do Amazonas. Objetivou-se determinar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos, sua distribuição espacial e os fatores de risco associados à infecção por N. caninum no estado do Amazonas. Questionários foram aplicados aos fazendeiros, para avaliar fatores de risco associados à infecção por N. caninum. Amostras de sangue foram coletadas de 1.073 animais em 47 fazendas, em 33 municípios das quatro subpopulações amazonenses. Anticorpos IgG anti-N.caninum foram detectados pelo teste de imunofluorescência indireta, com prevalência geral de 30,2%, com soropositividade em 43 fazendas (91,5%), com prevalência variando de 2,2% a 69,2%. O maior número de pontos de alta densidade foi encontrado na subpopulação 3 (município de Apuí e demais municípios do rio Madeira e afluentes). Concluiu-se que N. caninum está presente com altos valores de soroprevalência, quando comparado a outros estados produtores de gado na região amazônica do Brasil. Os fatores identificados podem ser usados como indicadores de risco, para que medidas de controle possam ser implementadas para prevenir a infecção por N. caninum nesses rebanhos.

Abstract Livestock in the Amazon has grown significantly and, although neosporosis in cattle has been reported worldwide, there is no information about N. caninum in production systems in the state of Amazonas. The objective of this study was to determine the prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle, their spatial distribution and the risk factors associated with N. caninum infection in the state of Amazonas. Questionnaires were applied to farmers to assess risk factors associated with N. caninum infection. Blood samples were collected from 1,073 animals on 47 farms in 33 municipalities in the four Amazonian subpopulations. IgG anti-N.caninum antibodies were detected by the indirect fluorescence test, with a general prevalence of 30.2%, being seropositive in 43 farms (91.5%), with prevalence ranging from 2.2% to 69.2%. The highest number of high density points was found in subpopulation 3 (municipality of Apuí and other municipalities on the Madeira River and affluent). It was concluded that N. caninum is present with high seroprevalence values, when compared to other cattle producing states in the Amazon region of Brazil. The identified factors can be used as risk indicators so that control measures can be implemented to prevent infection by N. caninum in these herds.

Resumo A infecção por Neospora caninum é considerada uma das principais causas de aborto entre bovinos. Esta pesquisa foi realizada no município de Rolim de Moura, estado de Rondônia, Brasil. Um questionário que investiga os aspectos epidemiológicos da neosporose foi utilizado na análise dos fatores de risco associados à prevalência em animais e em rebanhos. Um total de 416 amostras de sangue bovino foi colhido em 30 fazendas, e os níveis de anticorpos de N. caninum foram mensurados pela reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A análise das amostras mostrou prevalência de anticorpos contra N. caninum de 47,36% (n = 197). Os fatores de risco associados à infecção por N. caninum foram o sistema de manejo e os locais de acesso dos cães. Os resultados da presente pesquisa indicam que a infecção de bovinos leiteiros com N. caninum está disseminada na região estudada da Amazônia Ocidental, o que tem implicações para a prevenção e controle da neosporose nessa região. Portanto, estratégias e medidas de controle integrado são recomendadas para prevenir e controlar a infecção por N. caninum em gado leiteiro. Além disso, o contato íntimo entre gado leiteiro, cães e animais selvagens, pode influenciar a epidemiologia da neosporose e deve ser investigada mais detalhadamente.

Abstract Neospora caninum is considered to be one of the main causes of abortion among cattle. The present survey was conducted in the municipality of Rolim de Moura, Rondônia State, Brazil. A questionnaire that investigates the epidemiological aspects of neosporosis was used in the analysis of risk factors associated with the animal-level and herd-level prevalence in dairy cattle. A total of 416 bovine blood samples were collected from 30 farms, and N. caninum antibody levels were measured by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT). Analysis of dairy cattle serum samples revealed the presence of anti-N. caninum antibodies to be 47.36% (n = 197). Risk factors associated with N. caninum infection were the management system and access locations of dogs. The results of the present survey indicated that infection of dairy cattle with N. caninum is widespread in the studied region of Western Amazon, which has implications for prevention and control of neosporosis in this region. Therefore, integrated control strategies and measures are recommended to prevent and control N. caninum infection in dairy cattle. In addition, direct contact between dairy cattle, dogs and wild animals, which can influence the epidemiology of neosporosis, should be investigated further.

RESUMO: Toxoplasmose, neosporose e leishmaniose são importantes doenças de distribuição mundial e podem afetar tanto os animais de companhia quanto os humanos. Os cães de caça têm sido treinados para caçar animais domésticos e selvagens, o que torna esses animais mais expostos a infecções parasitárias. O presente estudo teve como objetivo avaliar a soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. em cães de caça de área rural do Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de soro de 39 cães da raça Foxhound-americano e as variáveis sexo e idade foram registradas. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção dos anticorpos. A soroprevalência foi de 35,9%, 15,4% e 2,6% para Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectivamente. Não foi observado diferença estatística entre os sexos para todas as doenças (P>0.05). Os resultados demonstram circulação desses protozoários em cães de caça de uma área rural do estado do Mato Grosso do Sul, o que pode contribuir para a epidemiologia dessas doenças.

ABSTRACT: Toxoplasmosis, neosporosis, and leishmaniasis are important diseases of worldwide distribution and can affect both pets and humans. Hunting dogs have been trained to hunt domestic and wild animals, which makes them more exposed to parasitic infections. The present study aimed to evaluate the seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp. in hunting dogs from a rural area in Mato Grosso do Sul, Brazil. Serum samples were collected from 39 American Foxhound dogs, and the sex and age variables were recorded. Serum samples were subjected to an indirect fluorescent antibody test (IFAT) to detect antibodies. Seroprevalence was 35.9%, 15.4%, and 2.6% for Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectively. There was no statistical difference between genders for these diseases (P>0.05). Results demonstrated a circulation of these protozoa in hunting dogs in a rural area of the state of Mato Grosso do Sul, which can contribute to the epidemiology of these diseases.

Resumo Objetivou-se avaliar a ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum em ovelhas naturalmente infectadas e monitorar a cinética de anticorpos para esse protozoário nos cordeiros. Portanto, foram selecionadas 48 matrizes prenhes, provenientes de cinco propriedades, e estas foram divididas em dois grupos: G1- 19 matrizes positivas para anticorpos anti-N. caninum antes da prenhez; e G2 – 29 matrizes soronegativas. Foram realizadas colheitas sanguíneas nas mães e cordeiros, no G1 e G2, imediatamente após a parição, antes da ingestão do colostro. Também foi possível realizar colheitas de sangue com 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após o nascimento. A pesquisa de anticorpos séricos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Das 19 matrizes soropositivas, seis (31,6%) pariram cordeiros soropositivos antes da ingestão do colostro, os quais mantiveram-se positivos até o final do experimento (56 dias). Apenas um dos cordeiros, filho de uma ovelha com título de anticorpos 200, soroconverteu após ingestão do colostro. Todos os cordeiros, filhos de mães negativas, mantiveram-se negativos durante todo o período experimental. Conclui-se que a transmissão transplacentária é uma importante forma de difusão do N. caninum nos rebanhos estudados e que os descendentes infectados, durante a gestação, mantiveram anticorpos circulantes durante o período analisado.

Abstract Aimed with this study to evaluate vertical transmission of Neospora caninum in naturally infected sheep and to monitor the kinetics of antibodies against this protozoon in their lambs. Therefore, 48 pregnant ewes, from five herds, were divided into two groups: G1 - positive for anti-N. caninum antibodies, with 19 animals; and G2 - seronegative, with 29 animals. Blood samples were taken from the ewes and their lambs, immediately after birth, before ingesting colostrum, and 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days after birth. Analysis on serum antibodies was performed using the indirect immunofluorescent antibody test. Among the 19 seropositive mothers, six (31.6%) gave birth to lambs seropositive before ingesting colostrum and it was found that these lambs remained positive until the end of the study (56 days). Only one of the lambs, from a ewe that presented an antibody titer of 200, seroconverted after ingestion of colostrum. All the lambs that had been born from negative mothers remained negative throughout the experimental period. It was concluded that transplacental transmission was an important form of diffusion of N. caninum in the herds studied and that seropositive lambs maintained circulating antibodies during the period analyzed.

Resumo Um surto de abortamento com 75 abortos ocorreu em um rebanho fechado de vacas leiteiras da região centro Leste do Paraná entre dezembro e abril de 2017. Para chegar ao diagnóstico, fragmentos de órgãos foram coletados de um feto abortado e submetidos para histopatologia; e amostras de sangue foram coletadas de 1 natimorto, de 4 fetos abortados e de 9 cães da propriedade, para detecção de anticorpos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram encontradas encefalite multifocal não supurativa, hepatite periportal e miocardite linfoplasmocitária multifocal. Anticorpos anti-Neospora foram detectados em todos os fetos abortados e em 5 dos 9 cães. DNA de N. caninum foi detectado no tecido cerebral de um dos fetos abortados. Amostras sanguíneas de 340 vacas e 146 novilhas mostraram uma soropositividade para N. caninum de 33,5% e 30,8%, respectivamente. Nesse rebanho fechado, o parasita foi introduzido possivelmente pelas fezes de cães domésticos ou selvagens infectados que habitam a propriedade.

Abstract Between December 2016 and April 2017, a spate of abortions occurred in a closed dairy herd from the central eastern region of Paraná, Brazil, in which 75 cows aborted. To identify its cause, organ fragments were collected from an aborted fetus for histopathology, and the blood samples from a stillborn, 4 aborted fetuses, and 9 farm dogs for indirect fluorescent antibody technique (IFAT). These tests found multifocal non-suppurative encephalitis, periportal hepatitis, and multifocal lymphoplasmacytic myocarditis, and detected anti-Neospora antibodies in all aborted fetuses, and in 5 of the 9 dogs. DNA of Neospora caninum was detected in the brain tissue of an aborted fetus. Blood samples of 340 cows and 146 heifers showed 33.5% and 30.8% seropositivity, respectively. In this closed herd, the parasite was probably introduced by infected domesticated or wild carnivores inhabiting the farm, through the infective oocysts present in their stool.

RESUMO: O protozoário Neospora caninum é conhecido mundialmente como uma das principais causas de aborto em bovinos. Durante a infecção, as proteínas rhoptry presentes no complexo apical do parasita desempenham papel importante na adesão e formação de vacúolos parasitóforos. O uso de ROP2 de N. caninum em vacinas experimentais tem mostrado resultados de proteção promissores. Em nosso estudo, realizamos a clonagem e expressão em Escherichia coli de uma porção antigênica de N. caninum ROP2. A proteína recombinante (rROP2) foi obtida na forma insolúvel, e a proteína purificada apresentou tamanho aproximado de 18kDa. Mesmo sendo uma pequena região truncada de NcROP2, foi possível conservar os epítopos antigênicos que foram reconhecidos pelo soro de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. A vacinação com rROP2 adsorvida no adjuvante de hidróxido de alumínio induziu altos níveis de anticorpos IgG anti-rROP2, capazes de reconhecer a proteína nativa em lisados de taquizoítos. Em conclusão, nossas abordagens foram eficazes na obtenção da proteína rROP2, que induziu resposta imune específica em camundongos e também foi reconhecida por soros de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. Estes resultados sugerem que rROP2 é um antígeno promissor para o desenvolvimento de vacinas de subunidades de neosporose, bem como um antígeno adequado para uso em imunodiagnóstico.

ABSTRACT: The protozoan Neospora caninum is known worldwide as one of the main causes of abortion in cattle. During infection, rhoptry proteins present in the apical complex of the parasite play important roles in adhesion and parasitophorous vacuole formation. The use of N. caninum ROP2 in experimental vaccines has shown promising protective results. In our study we performed cloning and expression in Escherichia coli of an antigenic portion of N. caninum ROP2. The recombinant protein (rROP2) was obtained in insoluble form, and the purified protein showed a size of approximately 18kDa. Even being a small truncate NcROP2 region, it was possible to conserve the antigenic epitopes which were recognized by bovine serum naturally infected with N. caninum. Vaccination with rROP2 on aluminum hydroxide adjuvant induced high levels of rROP2-specific IgG antibodies capable of recognizing native protein in tachyzoite lysates. In conclusion, our approaches were effective in obtaining the rROP2 protein, which induced specific mouse immune response and was also recognized by sera from N. caninum naturally infected cattle. These results suggest that it is a promising antigen for the development of neosporosis subunit vaccines as well as a suitable antigen for use in immunodiagnosis.

RESUMO O objetivo deste estudo foi investigar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em vacas Girolando, avaliando-se a associação entre a soropositividade e os distúrbios reprodutivos. Foram coletadas amostras de sangue da veia epigástrica superficial cranial de 40 vacas leiteiras em fase reprodutiva, sendo as amostras testadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum. A partir dos resultados sorológicos, foi realizada a verificação de associação, ou não, com a manifestação de distúrbios reprodutivos, coletados nos registros de histórico reprodutivo entre 2017 e 2018 e observações do rebanho no transcorrer do estudo. O teste exato de Fisher foi utilizado para verificar a existência de associação entre a sorologia e os distúrbios reprodutivos, adotando-se nível de confiança de 95%. O resultado do estudo demonstrou uma soroprevalência no rebanho de 27,5% para N. caninum, contudo, após análise estatística, não foi confirmada a associação entre soropositividade e distúrbios reprodutivos no rebanho avaliado. Apesar de a população estudada estar infectada com o Neospora caninum, pode-se inferir que anticorpos anti-Neospora caninum presentes em vacas leiteiras Girolando do Setor de Bovinocultura de Leite da UFRRJ não estão associados à ocorrência de distúrbios reprodutivos.

ABSTRACT The aim of this study was to investigate the presence of anti-Neospora caninum antibodies in Girolando cows, in order to evaluate the association between seropositivity and reproductive disorders. Blood samples were collected from 40 dairy cows in their reproductive phase from the cranial superficial epigastric vein. The blood samples were tested using the Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) to detect anti-N.caninum antibodies. The serological results were used to verify whether there was any association with the manifestation of reproductive disorders based on data from the records of reproductive history from 2017 to 2018 as well as the clinical observations of the herd throughout this study. The Fisher exact test was used to verify the existence of an association between the serology and reproductive disorders, adopting a 95% confidence level. The serological results showed a 27.5% seroprevalence in the herd for N. caninum, however, after statistical analysis, no association between seropositivity and reproductive disorders was found in the evaluated herd. Although the studied population is infected with Neospora caninum, we can infer that anti-Neospora caninum antibodies present in Girolando dairy cows at the UFRRJ Dairy Cattle Facility are not associated with the occurrence of reproductive disorders.

RESUMO Neospora caninum é o principal agente etiológico da neosporose em animais domésticos, e sua patogênese compreende duas fases características: aguda e crônica. Roedores são usados como modelos experimentais para simular neosporose bovina aguda e crônica. Neste estudo, foi inoculado um total de 27 gerbilos, fêmeas, com diferentes doses de taquizoítos de N. caninum, visando induzir doença crônica. O DNA foi extraído de diferentes órgãos de cada animal após a morte espontânea ou a eutanásia. Os tecidos encefálicos foram submetidos à PCR em tempo real de alta sensibilidade para detecção de animais com infecção crônica. Todas as outras amostras foram submetidas à PCR padrão. Um total de 11 gerbilos morreu devido à neosporose aguda, como confirmado pela detecção de DNA de N. caninum nos órgãos. A dosagem de antígeno que pode induzir infecção crônica foi de 5x103 taquizoítos/mL de N. caninum. Em seções do encéfalo de alguns animais, que apresentaram sinais clínicos de infecção persistente, encontraram-se 70% de positividade para a seção do encéfalo anterior, sugerindo essa área como preferencial para a formação de cisto. Assim, foram determinadas,, em gerbilos, as dosagens de taquizoítos capazes de induzir infecção crônica ou aguda, bem como foram detectados tecidos positivos, preferencialmente, em órgãos sistêmicos, na fase aguda, e no encéfalo, na crônica.

ABSTRACT Neospora caninum is the main etiologic agent of neosporosis in domestic animals and its pathogenesis comprises two characteristic phases: acute and chronic. Rodents are used as experimental models to mimic acute and chronic bovine neosporosis. In this study, we inoculated a total of 27 female gerbils, with different doses of N. caninum tachyzoites aiming to induce chronic disease. DNA was extracted from different organs of each animal after spontaneous death or euthanasia. Encephalic tissues were submitted to a highly sensitive real time PCR aiming to detect chronically infected animals. All the other samples were submitted to standard PCR. A total of 11 gerbils died due to acute neosporosis, as confirmed by N. caninum DNA detection in organs. 5x103 tachyzoites/mL of N. caninum was the dosage of antigen that can induce chronic infection in gerbils. In the encephalon sections of some animals that showed clinical signs of persistent infection, we found 70% positive for the anterior encephalon section, suggesting this area as preferential for cyst formation. Therefore, we determined the doses of tachyzoites that cause acute or chronic infection and detection of positive tissues, preferably, systemic organs during acute and encephalon in chronic phases.

RESUMO O abortamento na espécie equina é responsável por grandes perdas econômicas e, entre as possíveis causas, está a neosporose, uma enfermidade que nem sempre é investigada como provável diagnóstico. Assim, o objetivo deste trabalho foi relatar um caso de aborto equino aos 129 dias de gestação, resultante da infecção por Neospora spp.. Amostras sanguíneas da égua e do feto abortado foram enviadas para um laboratório especializado. À necrópsia, constatou-se edema gelatinoso e hemorrágico em subcutâneo, fígado ictérico e friável com autólise de alguns órgãos, como baço, rins e glândulas adrenais. Fragmentos dos órgãos coletados na necrópsia foram submetidos à histopatologia e à pesquisa de agentes infecciosos, em que se identificou hepatite e epicardite não purulentas e onfalite purulenta, bem como exame positivo para Neospora spp. pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional e Nested. O soro sanguíneo obtido da égua foi submetido à pesquisa de Neospora spp. pela técnica de imunofluorescência indireta, de herpesvírus por soroneutralização em cultura de células e de Leptospira sp. por PCR, todas com resultados negativos. Dessa forma, é importante considerar a neosporose como diagnóstico diferencial em casos de abortamento e natimortalidade, uma vez que a presença de cães nas propriedades é extremamente comum, representando uma importante fonte de infecção.

ABSTRACT Abortion in the equine species is responsible for major economic losses, and among the possible causes is neosporosis, a disease that is not always investigated as a probable diagnosis. Thus, the objective of this study was to report an abortion at 129 days of gestation resulting from Neospora spp. Blood samples from the mare and the aborted fetus were sent to a specialized laboratory. Under necropsy, gelatinous and hemorrhagic edema was detected in subcutaneous tissue, friable and jaundiced liver with autolysis in spleen, kidneys and adrenal glands. Fragments of the organs collected at necropsy were submitted to histopathology and infectious agent tests, which identified non-purulent hepatitis and epicarditis and purulent omphalitis. Also, a positive result for Neospora spp. by the conventional and nested Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. Blood serum obtained from the mare was subjected to analyses to Neospora spp. by indirect immunofluorescence technique, herpesvirus by serum neutralization in cell culture and Leptospira sp. by PCR, all with negative results. Thus, it is important to consider neosporosis as a differential diagnosis in cases of abortion and stillbirth, since the presence of dogs in the properties is extremely common and represent an important source of infection.

Resumo Os cães são hospedeiros dos protozoários Toxoplasma gondii, que causam uma importante doença para a saúde pública, e Neospora caninum. Estudos que avaliam a toxoplasmose e a neosporose por períodos prolongados em populações caninas são raros. Foi analisada a infecção por esses dois parasitas em uma população de cães domésticos e domiciliados por três anos consecutivos, no Estado de São Paulo, Brasil. Nos 1º, 2º e 3º anos de coletas, 181, 193 e 172 domicílios foram visitados, nos quais foram coletadas amostras de sangue de 331, 371 e 348 cães para sorologia, respectivamente. A soroprevalência de T. gondii em cada ano foi de 27,2%, 22,5% e 43,9%, respectivamente; e a de N. caninum foi de 7,8%, 4,8% e 6,8%, respectivamente. As taxas de incidência para T. gondii, nas 2ª e 3ª coletas, foram de 13,2% e 30,0%, respectivamente; e para N. caninum, 3,3% e 4,4%, respectivamente. As conversões sorológicas positivas e negativas para ambos os agentes ocorreram em alta frequência durante o período analisado. Este estudo revela o perfil sorológico da população canina e demonstra sua constante exposição aos patógenos investigados, o que requer medidas de prevenção e controle na região.

Abstract Dogs are hosts of the protozoans Toxoplasma gondii, which causes an important public health disease, and Neospora caninum. Studies that have evaluated toxoplasmosis and neosporosis for prolonged periods in dog populations are rare. We analyzed infection by both parasites in a domestic dog population over three consecutive years in São Paulo state, Brazil. In the 1st, 2nd and 3rd years of collection, 181, 193 and 172 domiciles were visited, and blood samples of 331, 371 and 348 dogs were collected for antibody serology, respectively. The seroprevalence of T. gondii in each year was 27.2%, 22.5% and 43.9%, respectively, and that of N. caninum was 7.8%, 4.8% and 6.8%, respectively. The incidence rates for T. gondii in the 2nd and 3rd collections were 13.2% and 30.0%, and those for N. caninum were 3.3% and 4.4%, respectively. Positive and negative serological conversions for both agents occurred at high frequencies during the study period. This study reveals the canine population’s serological profile and demonstrates the constant exposure of dogs to the investigated pathogens, indicating the need for prevention and control measures in the region.