Os exossomos sao microvesiculas derivadas apos exocitose que sao liberadas no espaco extracelular. As funcoes dos exossomos dependem, em grande medida, da celula da qual provem. Os exossomos derivados de celulas-tronco mesenquimais (Mesenchymal Stem Cells, MSCs), tal como as celulas de origem, possuem enorme potencial terapeutico, favorecendo a regeneracao ou reparo tissular e reduzindo a inflamacao,. Os promissores resultados pre-clinicos, utilizando estes exossomos, abriram as portas para a futura aplicacao clinica destas vesiculas. A criacao de novos protocolos que permitam o isolamento de exossomos para a sua aplicacao clinica e uma necessidade actual, levando em consideracao o enorme interesse surgido em torno dos resultados promissores em ensaios pre-clinicos. O objetivo deste trabalho foi comparar, em termos de rendimento, tamanho e pureza, diferentes metodos de isolamento de exossomos a partir de MSCs humanas. Os resultados obtidos demonstram que o uso de filtros concentradores para sobrenadantes de culturas poderia ser uma alternativa aos protocolos convencionais baseados na ultracentrifugacao. Os resultados deste trabalho fornecem uma orientacao na criacao de protocolos para a obtencao de exossomos derivados de MSCs em grau clinico.

Exosomes are small membranous vesicles secreted to the extracellular space by most cell types through an exocytic process. Exosomes’ functions vary depending on cell source. Mesenchymal stem-cell (MSCs) derived exosomes, as MSCs, present a huge therapeutic potential, as they can be used in tissue regeneration and modulating inflammatory processes. The promising results obtained with these exosomes in different preclinical trials have opened the door to the future clinical application of these microvesicles. The design of new protocols for the isolation of exosomes is currently a need. The aim of this work was to compare -in terms of efficiency, size and purity- different isolation protocols for human MSCs-derived exosomes. These results demonstrate that the use of concentrator filters for MSCs supernatants could be an alternative to conventional protocols based on ultracentrifugation. The results of this work will be used to guide in the design of protocols to be applied on a clinical-grade production of exosomes.

Los exosomas son microvesículas derivadas de la exocitosis que son liberados al espacio extracelular. Las funciones de los exosomas dependen en gran medida de la célula de la cual provienen. Los exosomas derivados de células madre mesenquimales (Mesenchymal Stem Cells, MSCs), al igual que las células de origen, poseen un enorme potencial terapéutico que favorece la regeneración tisular y reduce la inflamación. Los prometedores resultados preclínicos que emplean estos exosomas han abierto las puertas a la futura aplicación clínica de estas vesículas. El diseño de nuevos protocolos que permitan el aislamiento de exosomas para su aplicación clínica es una necesidad actual teniendo en cuenta el enorme interés que ha surgido a raíz de los prometedores resultados en ensayos preclínicos. El objetivo de este trabajo ha sido comparar, en términos de rendimiento, tamaño y pureza, diferentes métodos de aislamiento de exosomas a partir de MSCs humanas. Los resultados obtenidos demuestran que el uso de filtros concentradores para sobrenadantes de cultivos podría ser una alternativa a los protocolos convencionales basados en la ultracentrifugación. Los resultados de este trabajo permiten orientar en el diseño de protocolos para la obtención de exosomas derivados de MSCs en grado clínico.

CONTEXTO: A fibrose hepática ocorre em resposta a diversos agentes agressores e é um fator predisponente da cirrose. Fatores hepatotróficos são conhecidos por estimular o crescimento hepático e restaurar a arquitetura histológica do fígado. Promovem, também, melhora na função hepática e aceleram a reversão da fibrose antes de sua progressão para cirrose. OBJETIVO: Testar os efeitos de uma solução de fatores hepatotróficos, composta por aminoácidos, vitaminas, glicose, insulina, glugacon e triiodotironina na fibrose hepática em ratos. MéTODOS: No presente estudo, a fibrose foi induzida em ratos pela administração de dimetilnitrosamina (10 mg/kg) durante 5 semanas. Após a biopsia do fígado, os ratos receberam a solução de fatores hepatotróficos (40 mg/kg/dia) ou solução salina por injeção intraperitonial, durante 10 dias. Amostras sanguíneas e fragmentos do fígado foram coletados para análise da função hepática, avaliação do critério histopatológico e quantificação morfométrica do colágeno. RESULTADOS: Os ratos do grupo fatores hepatotróficos demonstraram diminuição dos componentes histopatológicos da fibrose e aumento de massa hepática (12,2%). Não houve o desenvolvimento de lesões neoplásicas em ambos os grupos. Comparado com o grupo de salina, no grupo fatores hepatotróficos também houve diminuição nos níveis dos marcadores sanguíneos de lesão hepática (AST e ALT), e diminuição da quantidade de colágeno nos espaços porta (31,6%) e espaços perissinusoidais (42,3%), assim como ao redor das veias terminais hepáticas (57,7%). Assim, a administração de fatores hepatotróficos no sangue portal promoveu resposta regenerativa hepática, com redução da densidade volumétrica de colágeno, melhora na função hepática e melhora geral nos aspectos histopatológicos da fibrose. CONCLUSÃO: Juntos, estes resultados sugerem o potencial uso terapêutico desta solução de fatores hepatotróficos para tratar doenças hepáticas crônicas.

CONTEXT: Hepatic fibrosis occurs in response to several aggressive agents and is a predisposing factor in cirrhosis. Hepatotrophic factors were shown to stimulate liver growth and to restore the histological architecture of the liver. They also cause an improvement in liver function and accelerate the reversion of fibrosis before it progresses to cirrhosis. OBJECTIVE: To test the effects of hepatic fibrosis solution composed by amino acids, vitamins, glucose, insulin, glucagon and triiodothyronine on hepatic fibrosis in rats. METHODS: Fibrosis was induced in rats by gastric administration of dimethylnitrosamine (10 mg/kg) for 5 weeks. After liver biopsy, the rats received either hepatotrophic factors solution (40 mg/kg/day) or saline solution for 10 days by intraperitoneal injection. Blood samples and liver fragments were collected for hepatic function analysis, standard histopathology evaluation, and morphometric collagen quantification. RESULTS: Rats in the hepatotrophic factors group showed a decrease of the histopathological components of fibrosis and an increase of their hepatic mass (12.2%). There was no development of neoplasic lesions in both groups. Compared with the saline group, the hepatotrophic factors group also had a decrease of blood levels of hepatic-lesion markers (AST, ALT) and a decrease of collagen content in the portal spaces (31.6%) and perisinusoidal spaces (42.3%), as well as around the hepatic terminal vein (57.7%). Thus, hepatotrophic factors administration in the portal blood promoted a regenerative hepatic response, with an overall reduction of the volumetric density of collagen, improved hepatic function, and a general improvement in the histopathological aspects of fibrosis. CONCLUSION: Taken together, these results suggest the potential therapeutic use of this hepatotrophic factors solution to treat chronic liver diseases.