OBJECTIVE: The preservation of Streptococcus pneumoniae by standard freezing methods for subsequent tests - such as serotyping and antibiotic susceptibility - is not possible or is difficult in many developing countries because of the high cost of equipment, inadequate equipment maintenance, and irregular power supply. We evaluated alternative low-cost methods, by comparing different culture media and storage temperatures. METHODS: Clinical isolates of five capsular types (1, 5, 7, 19, and 23) of S. pneumoniae were preserved in rabbit blood, sheep blood, skimmed milk, or glycerol-chocolate broth, and stored at -20 ºC or -70 ºC. The cultures were also preserved by lyophilization or sand desiccation, followed by storage at room temperature and 4 ºC. The viability of the preserved cultures was determined by making serial colony counts on day 0 and after 1 week, 4 weeks, 4 months and 16 months. The viability of cultures preserved by sand desiccation and storage at 4 ºC was also determined every 6 months for up to 68 months. FINDINGS: Irrespective of the media used, cultures maintained at -20 ºC became nonviable by the fourth month, while those maintained at -70 ºC were still viable at 16 months. Cultures preserved by lyophilization or sand desiccation lost their viability by the fourth month when maintained at local room temperature (30-42 ºC), but remained viable when stored at 4 ºC for up to 68 months. CONCLUSION: Our results confirm that freezing at -70 ºC, or lyophilization and storage at 4 ºC are the ideal methods for the preservation of S. pneumoniae. In laboratories where lyophilization is not feasible, sand desiccation and storage at 4 ºC offers an alternative low-cost method for the long-term preservation of S. pneumoniae.
OBJETIVO: La conservación de Streptococcus pneumoniae mediante los métodos estándar de congelación con miras a ulteriores análisis - como las pruebas de serotipificación y de sensibilidad a antibióticos - resulta ardua o imposible en muchos países en desarrollo debido al alto costo del equipo, a las dificultades para mantenerlo y a la irregularidad del suministro eléctrico. Hemos evaluado diversos métodos de bajo costo alternativos, comparando diferentes medios de cultivo y temperaturas de almacenamiento. MÉTODOS: Los aislamientos clínicos de cinco tipos capsulares (1, 5, 7, 19 y 23) de S. pneumoniae fueron conservados en sangre de conejo, sangre de carnero, leche desnatada o caldo de glicerol-chocolate, y almacenados a -20 ºC o -70 ºC. Los cultivos se conservaron asimismo mediante liofilización o por desecación con arena, seguida de su almacenamiento a temperatura ambiente y a 4 ºC. La viabilidad de los cultivos se determinó mediante recuentos sucesivos del número de colonias, el día 0 y al cabo de 1 semana, 4 semanas, 4 meses y 16 meses. La viabilidad de los cultivos conservados mediante desecación con arena y su posterior almacenamiento a 4 ºC se determinó también cada 6 meses, por espacio de hasta 68 meses. RESULTADOS: Independientemente de los medios utilizados, los cultivos mantenidos a -20 ºC dejaron de ser viables al cuarto mes, mientras que los mantenidos a -70 ºC eran todavía viables al cabo de 16 meses. Los cultivos conservados mediante liofilización o desecación con arena dejaron de ser viables al cuarto mes cuando se mantuvieron a la temperatura ambiente local (30-42 ºC), pero almacenados a 4 ºC su viabilidad no decayó por espacio de hasta 68 meses. CONCLUSIÓNES: Nuestros resultados confirman que la congelación a -70 ºC y la liofilización y el posterior almacenamiento a 4 ºC son los métodos ideales para la conservación de S. pneumoniae. En los laboratorios donde no es posible liofilizar las muestras, la desecación con arena y el almacenamiento a 4 ºC constituye un método alternativo de bajo costo para la conservación a largo plazo de S. pneumoniae.
OBJECTIF: La conservation de Streptococcus pneumoniae par les techniques classiques de congélation en vue de tests ultérieurs tels que sérotypage et antibiogramme est difficile voire impossible dans de nombreux pays en développement en raison du coût élevé de l’équipement, de l’insuffisance de la maintenance et de l’irrégularité de l’alimentation électrique. Nous avons évalué des méthodes de remplacement peu coûteuses en comparant différents milieux de culture et températures de stockage. MÉTHODES: Des isolements cliniques appartenant à cinq types capsulaires (1, 5, 7, 19 et 23) de S. pneumoniae ont été conservés dans du sang de lapin, du sang de mouton, du lait écrémé ou du bouillon chocolat glycérolé et stockés à -20 ºC ou -70 ºC. Des cultures ont aussi été conservées par lyophilisation et par dessiccation sur sable et stockées à température ambiante ou à 4 ºC. La viabilité des cultures conservées a été déterminée par numération des colonies le jour 0 et au bout de 1 semaine, 4 semaines, 4 mois et 16 mois. La viabilité des cultures desséchées sur sable et stockées à 4 ºC a également été déterminée tous les 6 mois jusqu’à 68 mois. RÉSULTATS: Quels que soient les milieux utilisés, les cultures stockées à -20 ºC perdaient leur viabilité au bout de 4 mois tandis que celles stockées à -70 ºC étaient encore viables au bout de 16 mois. Les cultures conservées par lyophilisation et par dessiccation sur sable perdaient leur viabilité au bout de 4 mois lorsqu’elles étaient stockées à température ambiante (30-42 ºC) mais restaient viables jusqu’à 68 mois après stockage à 4 ºC. CONCLUSION: Nos résultats confirment que la congélation à -70 ºC et la lyophilisation suivie d’un stockage à 4 ºC sont les méthodes idéales de conservation de S. pneumoniae.Dans les laboratoires non équipés pour la lyophilisation, la dessiccation sur sable suivie d’un stockage à 4 ºC constitue une alternative peu coûteuse pour la conservation prolongée de ce micro-organisme.
