RESUMEN Pimelodus grosskopfii, es un Siluriforme importante en la pesca continental en Colombia y de interés en la acuicultura. La presente investigación tuvo como objetivo clonar y determinar las secuencias codificantes de las subunidades GP-α y LHβ de la gonadotropina luteinizante de esta especie. Para lograr lo anterior, el ARN total de glándulas pituitarias fue extraído y se realizó síntesis de cDNA. Los productos de PCR purificados de GP-α y LHβ fueron ligados en pJET1.2/blunt® seguido de la transformación de Escherichia coli DH5α® y posterior secuenciación de fragm&os de interés. El marco abierto de lectura de las subunidades GP-α y LHβ fue de 351 pb (116 aminoácidos) y 423 pb (140 aminoácidos), respectivam&e. Se encontró una alta homología (aminoácidos) en la subunidad GP-α con otras familias de Siluriformes (87-99%) y menor homología con órdenes como Perciformes, Salmoniformes y Cypriniformes (66-90%). De igual manera para la subunidad LHβ, la homología (aminoácidos) fue alta al interior del orden Siluriformes (91-97%) y menor con otros ordenes (65-86%). Los resultados obtenidos en el presnte estudio ofrecen información básica sobre las secuencias de las gonadotropinas en bagres neotropicales y pueden ser utilizados para el desarrollo de hormonas recombinantes para optimizar el control reproductivo en P. grosskopfii.

ABSTRACT Pimelodus grosskopfii is an important catfish in inland fisheries in Colombia as well as an attractive species for aquaculture. The aim of this study was to clone and determine the coding sequence of the GP-α and LHβ subunits of the luteinizing gonadotropin of this species. Total RNA from pituitary glands was extracted and cDNA was synthesized. GP-α and LHβ purified PCR products were linked to pJET1.2/blunt® followed by Escherichia coli DH5α® transformation. The extracted plasmids of the positive clones were sequenced. The open reading frame of GP-α and LHβ subunits was 351 bp (116 amino acids) and 423 bp (140 amino acids) respectively. The GP-α subunit showed high degrees of homology (amino acids) with GP-α subunit from different families of Siluriformes (87-99%) and lower homology with teleost orders such as Perciformes, Salmoniformes and Cypriniformes (66-90%). Similarly, the homology (amino acids) of LHβ subunit was high within siluriformes (91-97%) and lower with other orders (65-86%). The results obtained in the pres& study, provide basic information on the sequence of gonadotropins in neotropical catfishes and can be used for the developm& of recombinant hormones to optimize reproductive control in P. grosskopfii.

RESUMO Pimelodus grosskopfii é um peixe importante nas pescarias de agua doce da Colômbia, além de ser uma espécie potencial para a aquicultura. O objetivo deste estudo foi clonar e determinar a sequência de codificação das subunidades GP-α e LHβ da gonadotrofina luteinizante de P grosskopfii. O RNA total das glândulas pituitárias foi extraído e o cDNA foi sintetizado. Os produtos de PCR purificados de GP-α e LHp foram ligados a pJET1.2 / blunt®, seguido pela transformação de Escherichia coli DH5α® e sequenciameto dos plasmídeos extraídos dos clones positivos. A grelha de leitura aberta das subunidades GP-α e LHβ foi de 351 pb (116 aminoácidos) e 423 pb (140 aminoácidos), respectivam&e. A subunidade GP-α apres&ou altos graus de homologia (aminoácidos) com a subunidade GP-α de difer&es famílias de Siluriformes (87-99%) e menor homologia com ordens de teleósteos, como Perciformes, Salmoniformes e Cypriniformes (66-90%). Da mesma forma, a homologia (aminoácidos) da subunidade LHβ foi alta com os Siluriformes (91-97%) e menor com outras ordens (65-86%). Os resultados obtidos no pres&e estudo fornecem informações básicas sobre a sequência das gonadotrofinas em bagres neotropicais e podem ser utilizados para o desenvolvimnto de hormônios recombinantes para otimizar o controle reprodutivo em P. grosskopfii.

The economic, ecological and medical significance of passion fruits has encouraged the development of multidisciplinary research in this group. In vitro culture, non-zygotic embryogenesis represents an alternative for plant regeneration; however, this technique has presented difficulties in the reproducibility of protocols as well as the development of certain embryos and abnormal plantlets in some species. We assessed in Passiflora maliformis L the morphogenic capacity in the mature zygotic embryos (MZE) to develop nonzygotic embryos (NZE), and subsequent plantlets regeneration. We tested an induction stage with 12 treatments in MS + VitB5 medium supplemented with 2,4-D, KIN and BA added alone or combined and, another with a MS, MS with Activated Charcoal (AC) or MS with growth regulators (GR) in 1/10 concentrations reduced to 1/10 of those added in the induction stage. We obtained high percentages, 70%, of regenerants in the medium supplemented with 1 mgL-1 BA and transferred to the MS expression medium, as well as in the medium with 1 mgL-1 BA + 3 mgL-1 2,4-D, and transferred to the expression medium with AC, 60%. 70% of the regenerated seedlings were successfully grown in the greenhouse. This is the first research that addresses the expression of the MZE embryogenic potential in P. maliformis, inducing a successfully embryogenic non-zygotic responses through direct and indirect routes; the obtained results are relevant to the knowledge of non-zygotic embryogenesis in other passion fruits, for breeding and commercial uses.

La importancia económica, ecológica y medicinal de las pasifloras ha fomentado el desarrollo de investigaciones multidisciplinarias en estas plantas. En cultivo in vitro, la embriogénesis no zigótica representa una alternativa para regeneración de plantas; no obstante, esta técnica ha presentado dificultades en la reproducibilidad de los protocolos, así como formación de ciertos embriones y plántulas anormales en algunas especies. En este estudio se evaluó la capacidad morfogénica de embriones zigóticos maduros (EZM) de Passiflora maliformis L para desarrollar embriones no zigóticos (ENZ), y posterior regeneración de plántulas. Se ensayó una etapa de inducción en la que se probaron 12 tratamientos en medio MS+VitB5 suplementado con 2,4-D, KIN y BA adicionados solos o combinados y, otra, de expresión en MS, MS con Carbón activado (CA) o MS con reguladores de crecimiento (RC) en concentraciones reducidas a 1/10 parte de las adicionadas en la etapa inducción. Altos porcentajes, 70%, de regenerantes fueron obtenidos en el medio suplementado con 1 mgL-1 BA y transferidos a medio de expresión MS, así como en el medio con 1 mgL-1 BA + 3 mgL-1 2,4-D, y transferidos a medio de expresión con CA, 60%. El 70% de las plántulas regeneradas se desarrollaron exitosamente en invernadero. Este trabajo es el primero que aborda la expresión del potencial embriogénico de EZM de P. maliformis induciendo exitosamente respuestas embriogénicas no zigóticas a través de rutas directas e indirectas; los resultados obtenidos son aplicables al conocimiento de la embriogénesis no zigótica en otras pasifloras, con fines de mejoramiento y uso comercial.

Ruminal degradation of enzymes produced by fungi Trametes sp. EUM1, Pleurotus ostreatus IE8, and from a commercial product (Fibrozyme®) was determined trough ammonia nitrogen (N-NH3) released. For each enzyme results were analyzed as a factorial experiment (3x2x2); factors were: substrate (xylan, carboximethycellulose and no substrate), protein level of enzyme (1 or 2) and times of contact enzyme-substrate previous incubation (0 or 1 h). The NH3-N concentration in ruminal fluid was different (p<0.05) between substrates on all studied enzymes. The protein level of enzyme had effect (p<0.05) on NH3-N concentration from Trametes sp. or P. ostreatus enzymes, but not from Fibrozyme. The substrate by protein level had effect (p<0.05) in the NH3-N concentration in the Trametes sp. and P. ostreatus enzymes. The time of contact enzyme-substrate effect was not significant for any of studied enzymes. Because minor N-NH3 concentration was observed when enzymes were incubated with a substrate, this indicates that degradation of enzymes in ruminal liquid was reduced in presence of a substrate; therefore substrate is important in the stability of studied enzymes.

Se determinó la degradación en líquido ruminal de las enzimas producidas por los hongos Trametes sp. EUM1, P. ostreatus IE8 y de las presentes en un producto fibrolítico comercial (Fibrozyme®) mediante la medición del nitrógeno amoniacal (N-NH3) liberado. Para cada enzima los resultados se analizaron como un experimento factorial (3x2x2) con los factores: sustrato (xilano, carboximeticelulosa y sin sustrato), nivel de proteína de la enzima (1 ó 2) y el tiempo de contacto de la enzima con el sustrato previo a la incubación (0 ó 1 h). La concentración de N-NH3 en líquido ruminal fue diferente (p<0,05) entre sustratos en todos las enzimas estudiadas. El nivel de proteína de la enzima tuvo efecto (p<0,05) sobre la concentración de N-NH3 en el líquido ruminal con enzimas de Trametes sp. y P. ostreatus, pero no en el incubado con Fibrozyme. La interacción sustrato por nivel de proteína tuvo efecto (p<0,05) en la concentración de N-NH3 en las enzimas de Trametes sp. y P. ostreatus. Se observaron menores concentraciones de N-NH3 al incubar las enzimas con un sustrato, por lo que se considera un factor importante en la estabilidad de las enzimas estudiadas.

In North America, the indigenous groups have been identified as a population with increased risk of pneumococcal colonization and pneumococcal invasive disease. However, little information is available from South American natives. In the present study we evaluated the nasopharyngeal carriage and serotype distribution of Streptococcus pneumoniae in mothers and children of the Panare people from Venezuela. In May 2008, in 8 distinct geographically isolated communities, 148 nasopharyngeal samples were obtained from 64 healthy mothers and 84 healthy Panare children under 5 years of age. S. pneumoniae was isolated and identified by standard techniques. Strains were typified by multiplex PCR and resistance patterns were determined by the disk diffusion method. A total of 65 strains were isolated; 11% of the mothers and 69% of the children carried S. pneumoniae. Serotypes 6B (48%), 33F (21,5%), 6A (6%), 19A (3,1%) and 23F (1,5%) were the most predominant. Of the 6 colonized mother-child pairs, 3 pairs (2 with 6B), were colonized with the same serotype. All strains were sensitive to penicillin and 13,7% were resistant to macrolides. The high colonization rates in the Panare people suggest that the children are at increased risk of pneumococcal invasive disease and could benefit from vaccination. Four conjugate vaccine serotypes (6B, 6A, 19A and 23F) representing 58 % of all strains were present in the population at the moment of sampling. Resistance to antibiotics is (still) not a problem.

En América del Norte, los grupos indígenas se han identificado como una población con un riesgo elevado de ser portadora de Streptococcus pneumoniae, así como de desarrollar enfermedad neumocócica invasora. Sin embargo, hay poca información con respecto a los indígenas de Latinoamérica. En el presente estudio se evaluó el estado de portador nasofaríngeo y la distribución de los serotipos de S. pneumoniae en madres e hijos de la población panare de Venezuela. Durante el mes de mayo de 2008 se obtuvieron 148 muestras nasofaríngeas de 64 madres y 84 niños menores de 5 años pertenecientes a 8 comunidades panare. Mediante procedimientos estándares se identificaron 65 cepas de S. pneumoniae. Dichas cepas fueron tipificadas por PCR múltiple, y sus patrones de sensibilidad a los antimicrobianos se determinaron por el método de difusión con discos. El 11% de las madres y el 69% de los niños eran portadores de S. pneumoniae. Los serotipos 6B (49%), 33F (21,5%), 6A (6%), 19A (3,1%) y 23F (1,5%) fueron los más frecuentes. El mismo serotipo se identificó en 3 de los 6 grupos madre-hijo/s colonizados. Todas las cepas fueron sensibles a la penicilina y el 13,7% fue resistente a los macrólidos. La elevada tasa de colonización en la población panare sugiere que los niños presentan un alto riesgo de desarrollar enfermedad invasora por S. pneumoniae; por lo tanto podrían beneficiarse de la vacunación. Cuatro serotipos de la vacuna conjugada (6B, 6A, 19A y 23F), que representaron el 58% de las cepas aisladas, estaban presentes en la población al momento del estudio. La resistencia a los antibióticos no se presenta como un problema dentro de esta población.

Burkholderia cepacia, es un bacilo Gram negativo, no fermentador, reconocido como causal de infecciones oportunistas; además de producir compuestos con actividad antimicrobiana. En el presente estudio se evaluó el antagonismo de nueve (9) aislados nosocomiales de B. cepacia contra hongos filamentosos, levaduras y bacterias de ambientes hospitalarios. La detección antibacteriana y antifúngica, se determinó según la técnica de la doble capa y de los cortes cilíndricos en agar, respectivamente. Cuatro aislados de B. cepacia (CVCM: 626,1328, 1331 y 1332) inhibieron los diferentes géneros bacterianos analizados. B. cepacia CVCM 1332, inhibió a cinco (5) de las seis (6) especies de bacterias indicadoras, con halos de inhibición entre 11 y 22 mm; a excepción de P. fluorescens. Tres (3) aislados de B. cepacia no presentaron actividad antibacteriana. Dos aislados de B. cepacia inhibieron los hongos estudiados (Fusarium solani, Penicillium citrinum, Penicillium frequentans, Aspergillus niger, Aspergillus ochoraceus, Penicillium echinulatum, Candida tropicalis, Candida famata). Las cepas CVCM 626, 1328 y 1331 presentaron tanto actividad antibacteriana como antifúngica. Se comprobó el antagonismo de aislados nosocomiales de B. cepacia contra bacterias y hongos de ambientes hospitalarios, representando un factor importante en la colonización de áreas críticas, facilitando la aparición de cuadros infecciosos en pacientes allí recluidos.

Burkholderia cepacia is a Gram-negative and non-fermenter bacilli, known as a causal agent of opportunistic infections, as well as producer of compounds with antimicrobial activities. In the present study, the antagonism of nine (9) nosocomial isolates of B. cepacia against filamentous fungi, yeast and bacteria from hospital environments was evaluated. The antibacterial and antifungal detection was determined according to the double layer technique and cylindrical sections in agar, respectively. Four B. cepacia isolates (CVCM: 626, 1328, 1331 and 1332) inhibited the different bacterial species analyzed. B. cepacia CVCM 1332 inhibited five (5) of the six (6) indicators of bacterial species, with inhibition halos between 11 and 22 mm, with the exception of P. fluoresecens. Three (3) B. cepacia isolates did not show antibacterial activity. Two B. cepacia isolates inhibited the studied fungi (Fusarium solani, Penicillium citrinum, Penicillium frequentans, Aspergillus niger, Aspergillus ochoraceus, Penicillium echinulatum, Candida tropicalis, Candida famata). The species CVCM 626, 1328 and 1331 showed both antibacterial and antifungal activities. The antagonism of nosocomial B. cepacia isolates against bacteria and fungi from hospital environments was demonstrated, representing an important factor in the colonization of critical areas, facilitating the appearance of infectious symptoms in hospitalized patients.

Se estudió la actividad de enzimática (UI·g-1·MS) y la actividad específica (UI·mg-1 proteína) de xilanasas, celulasas y lacasas de Trametes sp. EUM1, Pleurotus ostreatus IE8 y Aspergillus niger AD96.4, a los 14 y 19 días de fermentación sólida en bagazo de caña de azúcar. Las xilanasas y celulasas producidas por Trametes sp. EUM1 mostraron la mayor actividad (P<0,01) expresando 141,77UI·g-1 MS y 1073,8UI·mg-1 proteína las primeras, y 9,04UI·g-1 MS y 69,16UI·mg-1 proteína las celulasas, sin diferencias significativas entre 14 y 19 días. La actividad de estas enzimas de P. ostreatus y A. niger fue menor (P<0,01) que Trametes sp., pero similar entre ellos y en ambos tiempos de fermentación. La mayor (P<0,01) actividad de lacasas fue expresada por P. ostreatus con promedios de 15,54UI·g-1 MS y 128,75UI·mg-1 proteína a los 14 días de fermentación, mayores (P<0,01) que a los 19 días (11,75UI·g-1 MS y 102,88UI·mg-1 proteína). En Trametes sp., la actividad de lacasas fue menor (P<0,01) que en P. ostreatus y similar en ambos tiempos de fermentación. En A. niger la actividad de lacasas fue menor (P<0,01) con respecto a Trametes sp. y P. ostreatus. La actividad de las enzimas fibrolíticas del Trametes sp. muestra potencial para su posible utilización en aplicaciones biotecnológicas.

The enzymatic activity (UI·g-1·dry matter) and specific activity (UI·mg-1 protein) of xylanases, celullases and laccases from the fungi Trametes sp. EUM1, Pleurotus ostreatus IE8 and Aspergillus niger AD96.4 was studied at 14 and 19 days of solid fermentation in sugar cane bagasse. The highest activity of xylanases and celullases (P<0,01) was expressed by Trametes sp., with averages of 141.77UI·g-1 DM and 1073.8UI·mg-1 protein for xylanases, and 9.04UI·g-1 DM and 69.16UI·mg-1 protein for cellulases, without significant differences at 14 and 19 days. P. ostreatus and A. niger showed lower activities of these enzymes than Trametes sp., but they were similar among them and in both fermentation periods. The higher (P<0.01) laccasse activity was expressed by P. ostreatus with averages of 15.54UI·g-1 DM and 128.75UI·mg-1 protein at 14 days, higher (P<0.01) than at 19 days (11.75 UI·g-1 DM and 102.88UI·mg-1 protein). In Trametes sp. the laccasse activity was lower than in P. ostreatus and similar in both fermentation times. In A. niger the laccasse activity was lower (P<0.01) than Trametes sp. and P. ostreatus. The activity of fibrolytic enzymes in Trametes sp. EUM1 indicates a potential use for biotechnological applications.

Estudou-se a atividade enzimática (UI·g-1·MS) e a atividade específica (UI·mg-1 proteína) de xilanases, celulases e lacases de Trametes sp. EUM1, Pleurotus ostreatus IE8 e Aspergillus niger AD96.4, aos 14 e 19 dias de fermentação sólida em bagaço de cana de açúcar. As xilanases e celulases produzidas por Trametes sp. EUM1 mostraram a maior atividade (P<0,01) expressando 141,77UI·g-1 MS e 1073,8UI·mg-1 proteína as primeiras, e 9,04UI·g-1 MS e 69,16UI·mg-1 proteína as celulases, sem diferenças significativas entre 14 e 19 dias. A atividade destas enzimas de P. ostreatus e A. niger foi menor (P<0,01) que Trametes sp., mas similar entre elas e em ambos tempos de fermentação. A maior (P<0,01) atividade de lacases foi expressada por P. ostreatus com médias de 15,54UI·g-1 MS e 128,75UI·mg-1 proteína aos 14 dias de fermentação, maiores (P<0,01) que aos 19 dias (11,75UI·g-1 MS e 102,88UI·mg-1 proteína). Em Trametes sp., a atividade de lacases foi menor (P<0,01) que em P. ostreatus e similar em ambos tempos de fermentação. Em A. niger a atividade de lacases foi menor (P<0,01) em relação à Trametes sp. e P. ostreatus. A atividade das enzimas fibrolíticas do Trametes sp. mostra potencial para sua possível utilização em aplicações biotecnológicas.

Two decades ago, reports of alterations in the reproductive function of some wild animal species and clear evidence of human and animal exposure to chemical substances with hormonal activity agonist and antagonist generated what is known now as the hypothesis of endocrine disruption. This is an emerging environmental health problem that has challenged some of the paradigms on which the control and regulation of the use of chemical compounds is based. The need to include in routine toxicology tests new research objectives that specifically refer to the development and growth of species and to the homeostasis and functionality of hormonal systems, has served to complicate both the evaluation of new compounds and the re-evaluation of existing ones. The repercussions on regulation and international trade have not taken long to be felt. On both sides of the Atlantic, screening systems for endocrine disrupters have been designed and established, and research programmes have been launched to characterise and quantify adverse effects on human and animal health and to develop preventive measures.

La descripción de alteraciones en la función reproductora de algunas especies de animales salvajes, junto a la demostración de la exposición humana y animal a sustancias químicas con actividad hormonal agonista y antagonista generó, hace dos décadas, lo que se conoce hoy día como hipótesis de disrupción endocrina. Se trata de un problema emergente de salud medioambiental que ha cuestionado algunos de los paradigmas en que se fundamenta el control y la regulación de uso de los compuestos químicos. La necesidad de incluir en los tests toxicológicos habituales nuevos objetivos de investigación, que se refieren específicamente al desarrollo y crecimiento de las especies y a la homeostasis y funcionalidad de los sistemas hormonales, ha venido a complicar tanto la evaluación de los nuevos compuestos químicos como la revaluación de los existentes. Sus repercusiones sobre la reglamentación y el comercio internacional no se han hecho esperar y a ambos lados del Atlántico se han diseñado y establecido sistemas de cribado de disruptores endocrinos y se han desarrollado programas de investigación con objeto de cualificar y cuantificar los efectos adversos sobre la salud humana y animal y poder actuar con medidas de prevención.

Two decades ago, reports of alterations in the reproductive function of some wild animal species and clear evidence of human and animal exposure to chemical substances with hormonal activity agonist and antagonist generated what is known now as the hypothesis of endocrine disruption. This is an emerging environmental health problem that has challenged some of the paradigms on which the control and regulation of the use of chemical compounds is based. The need to include in routine toxicology tests new research objectives that specifically refer to the development and growth of species and to the homeostasis and functionality of hormonal systems, has served to complicate both the evaluation of new compounds and the re-evaluation of existing ones. The repercussions on regulation and international trade have not taken long to be felt. On both sides of the Atlantic, screening systems for endocrine disrupters have been designed and established, and research programmes have been launched to characterise and quantify adverse effects on human and animal health and to develop preventive measures.

La descripción de alteraciones en la función reproductora de algunas especies de animales salvajes, junto a la demostración de la exposición humana y animal a sustancias químicas con actividad hormonal agonista y antagonista generó, hace dos décadas, lo que se conoce hoy día como hipótesis de disrupción endocrina. Se trata de un problema emergente de salud medioambiental que ha cuestionado algunos de los paradigmas en que se fundamenta el control y la regulación de uso de los compuestos químicos. La necesidad de incluir en los tests toxicológicos habituales nuevos objetivos de investigación, que se refieren específicamente al desarrollo y crecimiento de las especies y a la homeostasis y funcionalidad de los sistemas hormonales, ha venido a complicar tanto la evaluación de los nuevos compuestos químicos como la revaluación de los existentes. Sus repercusiones sobre la reglamentación y el comercio internacional no se han hecho esperar y a ambos lados del Atlántico se han diseñado y establecido sistemas de cribado de disruptores endocrinos y se han desarrollado programas de investigación con objeto de cualificar y cuantificar los efectos adversos sobre la salud humana y animal y poder actuar con medidas de prevención.