SUMMARY: The aim of this study was to evaluate the effects of stretching and therapeutic ultrasound (TUS) on desmin and laminin contents of rat muscle after contusion. Male Wistar rats (n = 35, 8-9 weeks of age, 271 ± 14g body weight) were divided into five groups: Control group (CG) (n= 03); Injured group (IG) (n= 8); Injured + ultrasound group (IUSG) (n= 8); Injured+stretching group (ISG) (n= 8); Injured +ultrasound + stretching group (IUSSG) (n= 8). The application of ultrasound started 72 hours after the contusion, using the 50 % pulsed mode, 0.5 W/cm2, 5 min, once a day, for five consecutive days. Passive manual stretching was started on the tenth day after injury, with four repetitions of 30 s each and 30 s rest between repetitions, once a day, five times per week, for a total of ten applications. After 22 days, the rats were euthanazied and the gastrocnemius of both limbs removed for desmin and laminin immunohistochemistry morphometric measurement. Analysis was conducted using ANOVA one way post-hoc Tukey to parametric data and Kruskall-Wallis for non-parametric data. The IUSSG animals showed a larger area of desmin than ISG (p<0.05). It was found a decrease in laminin comparing IUSG to IG. However, laminin area was higher in ISG than all groups (p<0.05). UST isolated or in combination with stretching influenced gastrocnemius regeneration in different manners. While stretching applied isolated enhanced gastrocnemius regeneration noticed by the increase in laminin area, in combination with TUS strengthened the muscle healing rising desmin area.

RESUMEN: El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos del estiramiento y la ecografía en los contenidos de desmina y laminina del músculo de rata después de la lesión. Ratas Wistar macho (n = 35, 8-9 semanas de edad, 271 ± 14 g de peso corporal) se dividieron en cinco grupos: grupo de control (CG) (n = 03); Grupo lesionado (GL) (n = 8); Lesionado + grupo de ultrasonido (LGU) (n= 8); Lesionado + grupo de estiramiento (LGE) (n = 8); Lesionado + ultrasonido + grupo de estiramiento (LUGE) (n = 8). La aplicación de ultrasonido comenzó 72 horas después de la lesión, usando el modo pulsado al 50 %, 0,5W / cm2, 5 min, una vez al día, durante cinco días consecutivos. El estiramiento manual pasivo se inició el décimo día después de la lesión, con cuatro repeticiones de 30 seg cada una y 30 seg de descanso entre repeticiones, una vez al día, cinco veces por semana, para un total de diez aplicaciones. Las ratas fueron sacrificadas después de 22 días, y se extrajo el músculo gastrocnemio de ambos miembros para la medición morfométrica de desmina y laminina a través de inmunohistoquímica. El análisis se realizó utilizando ANOVA unidireccional Tukey post-hoc para datos paramétricos y Kruskall-Wallis para datos no paramétricos. Los animales LUGE mostraron un área mayor de desmina que LGE (p <0,05). Se encontró una disminución en la laminina comparando LGU con GL. Sin embargo, el área de laminina fue mayor en LGE que en todos los grupos (p <0,05). El tratamiento con ultrasonido aislado o en combinación con estiramiento influyó en la regeneración del músculo gastrocnemio de diferentes maneras. Si bien el estiramiento aplicado, en combinación con tratamiento de ultrasonido, fortaleció el área de desmina, la regeneración del músculo gastrocnemio mejoró por el aumento en el área de laminina aumentando la curación muscular.

Resumo Introdução: O envelhecimento é responsável por alterações estruturais, com declínio de todas as variáveis fisiológicas, incluindo amplitude de movimento e função muscular esquelética. Objetivo: O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos do alongamento na morfometria muscular de ratas ovariectomizadas. Método: Assim, 21 ratas Wistar (12 semanas, 218 ± 22 g) foram divididas em 4 grupos: Controle (CONTROL, n = 3) intacto; Ovariectomizadas e histerectomizadas (OH, n = 6); Alongamento (ALONG, n = 6); Ovariectomizadas e histerectomizadas e Alongamento (OHA, n = 6). As ratas foram submetidas a ovariectomia e histerectomia. O alongamento do músculo sóleo foi composto de 10 repetições de 1 minuto com intervalo de 45s entre cada repetição, realizado 3 vezes por semana, durante 3 semanas. Após 3 semanas, as ratas foram pesadas e os músculos sóleos de ambas as patas foram retirados, pesados e analisados: comprimento do músculo; número de sarcômeros em série; comprimento do sarcômero; área da seção transversal das fibras musculares (ASTFM) e porcentagem de tecido conjuntivo. Resultados: O peso corporal final aumentou em todos os grupos. O número de sarcômeros em série do ALONG foi maior que o OH. A área de secção transversa das fibras musculares do OHA foi superior ao CONTROL. Conclusão: Conclui-se que a ovariectomia e histerectomia impediram a sarcomerogênese mesmo quando realizado alongamento. Porém, o protocolo de alongamento incrementou o trofismo muscular em ratas ovarietomizadas e histerectomizadas. Sugere-se que o crescimento longitudinal (número sarcômeros em série) e radial (ASTFM) respondem diferentemente ao alongamento em músculo esquelético intacto e/ou com depleção estrogênio (ovarietomia e histerectomia).

Abstract Introduction: Ageing is responsible for structural alterations, declining of all physiological variables, including range of motion and skeletal muscle function, known as sarcopenia. Objective: The aim of the study was to evaluate the effects of stretching on muscle morphometry in ovariectomized rats. Method: 21 female Wistar rats (12 weeks, 218 ± 22 g) were divided into 4 groups: control (CONTROL, n = 3) intact; ovariectomized and hysterectomized (OH, n = 6); Stretching (STRET, n = 6); ovariectomized and hysterectomized and stretching (OHS, n = 6). The rats were subjected to ovariectomy and hysterectomy. The stretching protocol of the soleus muscle lasted 10 repetitions of 1 minute with 45s interval between each repetition performed 3 times a week for 3 weeks. After 3 weeks, the rats were weighed and the muscles of both hind limbs were removed weighed and analyzed at muscle length; serial sarcomere number; sarcomere length; muscle fiber cross-sectional area (MFCSA) and percentage of connective tissue. Results: The final body weight increased in all groups. The serial sarcomere number of STRET was greater than the OH. The muscle fibers’ cross-sectional area of OHS was higher than CONTROL. Conclusion: It can be concluded that ovariectomy and hysterectomy prevented sarcomerogenesis even when stretching was applied. However, the stretching protocol enhanced muscle trophismof ovariectomized and hysterectomized rats. It might be suggested that longitudinal growth (serial sarcomeres) and radial (ASTFM) are differently regulated by stretching in intact and/or estrogen depleted (ovariectomy and hysterectomy) skeletal muscle.

Resumen Introducción: El envejecimiento es responsable de cambios estructurales del organismo, con disminución de todas las variables fisiológicas, incluyendo la amplitud de movimiento y función muscular esquelética, conocida como sarcopenia. Objetivo: El objetivo del estudio fue evaluar los efectos de los ejercicios de estiramiento en la morfometria muscular de ratas ovarectomizadas. Método: Fueron seleccionadas 21 ratas Wistar (12 semanas, 218 ± 22g) que fueron divididas en 4 grupos: control (CONTROL, n = 3) intacto; ovarectomizadas y histerectomizadas (OH, n = 6); estiramiento (ALONG, n = 6); ovarectomizadas y histerectomizadas y estiramiento (OHA, n = 6). Las ratas han sido sometidas a ovariectomía y histerectomía. El protocolo de estiramiento del músculo sóleo fue realizado en 10 repeticiones de 1 minuto con intervalos de 45 segundos entre cada repetición, realizada 3 veces por semana, durante 3 semanas. Después de 3 semanas, las ratas fueron pesadas y los músculos de ambas patas fueron retirados para analizar el peso muscular; la longitud del músculo; número de sarcómera en serie; longitud de sarcómera; área de la sección transversal de las fibras musculares (ASTFM) y porcentaje del tejido conjuntivo. Resultado: El peso corporal final aumentó en todos los grupos. El número de sarcómera en serie de ALONG fue mayor que el OH. El área de la sección transversal de las fibras musculares del OHA fue superior al de CONTROL. Conclusión: En conclusión, ovariectomía y histerectomía impiedieron la sarcomerogénesis mismo cuando se realizó el estiramiento. Sin embago, el estiramiento aumentó el trofismo muscular de las ratas ovarectomizadas y histerectomizadas. Sugiere que el crescimiento longitudinal (número sarcômeros) y radial (área de sección transversal) responden diferentemente al estiramiento en músculo esqueletico intacto y/o con depleción estrógeno (ovariectomía y histerectomía).

RESUMO OBJETIVO: Avaliar os efeitos do ultrassom terapêutico e/ou alongamento, na morfologia após contusão muscular em ratos. MÉTODOS: Ratos Wistar machos (n = 35, 8-9 semanas, 271 ± 14 g) foram divididos em cinco grupos: Grupo Controle (GC = 3); Grupo Lesão (GL = 8); Grupo Lesão + Ultrassom (GLUS = 8); Grupo Lesão + Alongamento (GLA = 8); Grupo Lesão + Ultrassom + Alongamento (GLUSA = 8). A aplicação do ultrassom no GLUS e GLUSA foi feita do terceiro ao sétimo dia, pulsado 50%, 0,5 W/cm2, 5 min. Do décimo ao vigésimo primeiro dia foi feito o alongamento passivo no GLA e GLUSA, em quatro repetições de 30 s, com 30 s de intervalo, cada repetição. Após 22 dias, os ratos foram pesados e os músculos de ambas as patas foram retirados para análise do peso e comprimento muscular, número e comprimento dos sarcômeros, área de secção transversa e porcentagem de colágeno. RESULTADOS: O peso corporal final foi maior do que o inicial em todos os grupos. O número de sarcômeros foi maior no GLA em relação ao GLUS e no GLUSA em relação ao GLUS e ao GC; o comprimento dos sarcômeros foi maior no GLUS comparado com o GLA (p < 0,05). A área de secção transversa no GL foi maior do que no GLA e a porcentagem de colágeno foi maior no GL comparado com o GLA e o GC; no GLUS com o GLA e o GC; no GLUSA com o GC. CONCLUSÃO: O protocolo de alongamento passivo induziu a sarcomerogênese e apresentou efeito antifibrótico em músculos submetidos a contusão. O ultrassom, independentemente da associação com o alongamento, não foi suficiente para impedir a fibrose nos músculos lesados.

ABSTRACT OBJECTIVE: Evaluate the effects of ultrasound and stretching in morphology after rat muscle contusion. METHODS: Male Wistar rats (n = 35, 8-9 weeks, 271 ± 14 g) were divided into five groups: control group (CG = 3); lesion group (LG = 8); lesion + ultrasound group (LUG = 8); lesion + stretching group (LSG = 8); lesion + ultrasound + stretching group (LUSG = 8). The ultrasound was applied in LUG and LUSG from the third to the seventh day, the dose used was 50% pulsed, 0.5 W/cm2, 5 min. From the tenth until the twenty first day, passive stretching was performed, in four repetitions lasting 30 s each with 30 s of rest. Initial and final body weight, muscle weight and length, number and sarcomere length, muscle fiber cross-sectional area, and percentage of collagen were evaluated after 22 days. RESULTS: The final body weight was higher than the initial in all groups. The number of sarcomeres was statistically higher in LSG than LUG and higher in LUSG than LUS and CG; in sarcomere length was higher in LUG when compared with LSG (p < 0.05). The cross sectional area in LG was higher than LSG, and the percentage of collagen was higher in LG when compared with LSG and CG; in LUG when compared with LSG and CG; and in LUSG when compared with CG. CONCLUSION: The passive stretching protocol induced sarcomerogenesis and antifibrotic effect over the muscle submitted to contusion. Ultrasound, even in association with stretching, was not sufficient to prevent fibrosis in the injured muscle.

RESUMO O estudo analisou os efeitos do exercício resistido e/ou alongamento na morfologia muscular de ratas ovariectomizadas. Setenta e cinco ratas Wistar (218±22g) foram divididas em 8 grupos: Controle (CONTROLE, n=5); Ovariectomia/histerectomia (OH, n=10): foram submetidas à ovariectomia/histerectomia e aguardaram oito semanas para instalação de osteopenia; Alongamento (ALONG, n=10): alongamento manual do músculo sóleo (10 repetições de 60s), duas vezes por semana; Ovariectomia/histerectomia e Alongamento (OH+ALONG, n=10); Exercício Resistido (ER, n=10): 4 séries de 10 repetições, carga inicial de 50% do peso corporal, aumentando semanalmente até 70%, três vezes por semana; Exercício Resistido e Alongamento (ER+ALONG, n=10); Ovariectomia/histerectomia e Exercício Resistido (OH+PL, n=10); Ovariectomia/histerectomia, Exercício Resistido e Alongamento (OH+ER+Along, n=10). Alongamento e/ou Exercicio Resistido foram realizados durante 6 semanas. Após 14 semanas, as ratas foram submetidas à ortotanásia para remoção do sóleo. As seguintes variáveis foram avaliadas: peso corporal; peso e comprimento muscular; número e comprimento dos sarcômeros e área da secção transversa das fibras musculares (ASTFM). Comparação entre grupos foi realizada com ANOVA one way post hoc Tukey ou Kruskall-Wallis (p <0,05). O peso corporal e muscular das ratas submetidas aos exercícios foram maiores do que as intactas. O OH e OH+ER+ALONG aumentaram o comprimento e o número de sarcômeros. O OH apresentou menor ASTFM em comparação com todos os grupos. Ovariectomia/histerectomia induziu sarcopenia, mas os protocolos de exercícios foram suficientes para evitar a perda de ASTFM. O aumento do peso corporal associado ao exercício resistido e alongamento induziu sarcomerogenese nas ratas ovarectomizadas.

ABSTRACT This study analyzed the effects of resistive exercise and/or stretching in the muscle morphology of ovariectomized rats. Seventy-five female Wistar rats (218±22g) were divided into 8 groups: Control (CONTROL, n=5); Ovariectomy/Hysterectomy (OH, n=10): ovariectomized/hysterectomized and then waited 8 weeks for the onset of osteopenia. Stretching (STRET, n=10): manual stretching of the soleus muscle (10 repetitions of 60s), twice weekly; Ovariectomy/Hysterectomy and Stretching (OH+STRET, n=10); Progressive Loading (PL, n=10): 4 sets of 10 repetitions, initial load 50% of body weight, increasing weekly until 70%, three times a week. Progressive Loading and Stretching (PL+STRET, n=10); Ovariectomy/Hysterectomy and Progressive loading exercise (OH+PL, n=10); Ovariectomy/Hysterectomy, Progressive Loading and Stretching (OH+PL+STRET, n=10). Stretching and/or progressive loading were performed for 6 weeks. After 14 weeks, the female rats were euthanized to remove the soleus muscle. The following variables were assessed: body weight; muscle weight and length; number and length of sarcomeres and the muscle fiber cross-sectional area (MFCSA). Comparisons between the groups were performed with ANOVA one-way post hoc Tukey or Kruskall-Wallis (p<0.05). The body and muscle weights of ovariectomized rats submitted to exercise were higher than the intact ones. The OH and OH+PL+STRET increased the muscle length and the serial sarcomere number. OH presented the smallest MFCSA compared to all groups. Ovariectomy/hysterectomy induced sarcopenia, but the exercise's protocols were enough to prevent the loss of MFCSA. The increase in body weight associated to resistive training and stretching enhanced sarcomerogenesis of ovariectomized rats.

RESUMEN El estudio analizó los efectos del ejercicio resistido y/o estiramiento en la morfología muscular de ratas ovarectomizadas. Se dividió setenta y cinco ratas Wistar (218±22g) en 8 grupos: Control (CONTROL, n=5); ovariectomía/histerectomía (OH, n=10): fueron sometidas a ovariectomía/histerectomía y esperaron ocho semanas para la instalación de osteopenia; Estiramiento (ESTIR, n=10): estiramiento manual del músculo sóleo (10 repeticiones de 60s), dos veces por semana; ovariectomía/histerectomía y estiramiento (OH + ESTIR, n=10), ejercicio resistido (ER, n=10): 4 series de 10 repeticiones, carga inicial de 50% del peso corporal, aumentando semanalmente hasta 70%, tres veces por semana; Ejercicio resistido y estiramiento (ER+ESTIR, n=10); ovariectomía/histerectomía y ejercicio resistido (OH + PL, n=10); ovariectomía/histerectomía, ejercicio resistido y estiramiento (OH + ER + ESTIR, n=10). Se realizó estiramiento y/o ejercicio resistido durante 6 semanas. Después de 14 semanas, las ratas fueron sometidas a ortotanasia para la remoción del sóleo. Las siguientes variables fueron evaluadas: peso corporal; peso y longitud muscular; número y longitud de los sarcómeros y área de la sección trasversa de las fibras musculares (ASTFM). Se realizó una comparación entre grupos con ANOVA one way post hoc Tukey o Kruskall-Wallis (p <0,05). El peso corporal y muscular de las ratas sometidas a los ejercicios fue mayor que el de las intactas. El OH y OH+ER+ESTIR aumentaron la longitud y el número de los sarcómeros. El OH presentó menor ASTFM en comparación con todos los grupos. Ovariectomía/histerectomía indujo sarcopenia, más los protocolos de ejercicios fueron suficientes para evitar la pérdida de ASTFM. El aumento del peso corporal asociado al ejercicio resistido y estiramiento indujo sarcomerogénesis en las ratas sometidas a ovariectomía.

O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos agudos do alongamento após contusão do gastrocnêmio de ratos. Foram selecionados 33 ratos Wistar machos (8 semanas, 219±35 g), que foram divididos em 4 grupos: Controle (GC, n=3) - intacto; Lesão (GL, n=10); Alongamento (GA, n=10); Lesão e Alongamento (GLA, n=10). O gastrocnêmio direito (GD) foi submetido à contusão. O alongamento do GD foi realizado manualmente, 4 repetições de 30 segundos, durante 5 dias, iniciado 72 horas após a lesão. Após uma semana, os ratos foram pesados, e os músculos de ambas as patas foram retirados para análise do peso e comprimento muscular, número e comprimento dos sarcômeros. O peso corporal final aumentou em todos os grupos. O peso, comprimento muscular e número de sarcômeros em série (NSS) do GL foram maiores que o GA. Porém, o NSS do GLA foi superior ao GA. O comprimento dos sarcômeros do GA foi maior que os demais grupos. Conclui-se que a contusão e o alongamento não interferiram no ganho de peso corporal. O alongamento induziu sarcomerogênese em músculos lesados, porém não modificou o músculo hígido.

The aim of this study was to evaluate the acute effects of stretching after gastrocnemius contusion in rats. Thirty-three male Wistar rats were selected (8 weeks, 219±35 g) and divided into 4 groups: Control (CG, n=3) - intact; Lesion (LG, n=10); Stretching (SG, n=10): Lesion and Stretching (LSG, n=10). The right gastrocnemius (RG) was submitted to contusion. Stretching on RG was performed manually, with 4 repetitions of 30 seconds each day, for 5 consecutive days, beginning 72 hour after contusion. One week later, rats were weighed and both paws were removed for investigation of muscle length, serial sarcomere number and sarcomere length. The final body weight increased in all groups. The muscle weight and length, as well as the serial sarcomere number (SSN) of LG, were higher than SG. However, the SSN of LSG was higher than SG. The sarcomere length of SG was the highest among all groups. It was concluded that the contusion and stretching did not affect body weight gain. The stretching induced sarcomerogenesis in injured muscle, but did not modify the healthy muscle.

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos agudos del estiramiento después de la contusión del gastrocnemio de ratones. Fueron seleccionados 33 ratos Wistar machos (8 semanas, 219±35 g), divididos en 4 grupos: Control (GC, n=3) - intacto; Lesión (GL, n=10); Estiramiento (GE, n=10); Lesiones y Estiramiento (GLE, n=10). El gastrocnemio derecho (GD) fue sometido a contusión. El estiramiento del GD se realizó manualmente, 4 repeticiones de 30 segundos durante 5 días comenzando 72 horas después de la lesión. Luego de una semana, las ratas fueron pesadas y se eliminaron los músculos de las patas para el análisis de peso y longitud muscular, número y longitud de los sarcómeros. El peso corporal final aumentó en todos los grupos. El peso, la longitud muscular y el número de sarcómeros en serie (NSS) del GL fueron superiores al GE. Sin embargo, el NSS del GLE fue superior al GE. La longitud del sarcómero del GE fue más alta que la de los otros grupos. Se concluye que la contusión y el estiramiento no afectaron a la ganancia de peso corporal. El estiramiento generó sarcomerogenesis en músculos lesionados, pero no modificó el músculo sano.