Abstract Introduction: The use of technological resources to support processes in health systems has generated robust, interoperable, and dynamic platforms. In the case of institutions working with neglected tropical diseases, there is a need for specific customizations of these diseases. Objectives: To establish a medical record platform specialized in neglected tropical diseases which could facilitate the analysis of treatment evolution in patients, as well as generate more accurate data about various clinical aspects. Materials and methods: A set of requirements to develop state of the art forms, concepts, and functionalities to include neglected tropical diseases were compiled. An OpenMRS distribution (version 2.3) was used as reference to build the platform, following the recommended guidelines and shared-community modules. Results: All the customized information was developed in a platform called NTD Health, which is web-based and can be upgraded and improved by users without technological barriers. Conclusions: The electronic medical record system can become a useful tool for other institutions to improve their health practices as well as the quality of life for neglected tropical disease patients, simplifying the customization of healthcare systems able to interoperate with other platforms.

Resumen Introducción. El uso de recursos tecnológicos destinados a apoyar procesos en los sistemas de salud ha generado plataformas sólidas, interoperables y dinámicas. En el caso de las instituciones que trabajan con enfermedades tropicales desatendidas, existe la necesidad de personalizaciones específicas en las herramientas de uso médico. Objetivos. Establecer una plataforma para historias clínicas especializada en enfermedades tropicales desatendidas, con el fin de facilitar el análisis de la evolución del tratamiento de los pacientes, además de generar datos más precisos sobre diversos aspectos clínicos. Materiales y métodos. Se compiló un conjunto de requisitos para implementar formularios, conceptos y funcionalidades que permitan incluir enfermedades tropicales desatendidas. Se utilizó una distribución de OpenMRS (versión 2.3) como referencia para construir la plataforma, siguiendo las pautas recomendadas y módulos compartidos por la comunidad. Resultados. Toda la información personalizada se implementó en una plataforma llamada NTD Health, la cual se encuentra almacenada en la web y los usuarios pueden actualizarla y mejorarla sin barreras tecnológicas. Conclusiones. El sistema de historias clínicas electrónicas puede convertirse en una herramienta útil para que otras instituciones mejoren sus prácticas en salud, así como la calidad de vida de los pacientes con enfermedades tropicales desatendidas, simplificando la personalización de los sistemas de salud capaces de interoperar con otras plataformas.

Resumen Ante la necesidad de desarrollar nuevos medicamentos para el tratamiento de la leishmaniasis cutánea que sean efectivos, seguros, de mayor aceptación entre los pacientes, fáciles de administrar en los entornos rurales y más económicos, en el presente estudio se evaluó in vitro e in vivo el potencial terapéutico y el perfil de citotoxicidad de un extracto etanólico y un extracto glicólico de las ramas de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze y sus respectivas formulaciones: loción y emulsión. Asimismo, se validó la utilidad de las dos formulaciones como tratamiento tópico en diez pacientes con leishmaniasis cutánea no complicada. Ambos extractos fueron activos contra Leishmania braziliensis en concentraciones de menos de 22 μg/mL, tuvieron baja toxicidad en las células U-937 y HL60 cuando se administraron en forma pura y en las células Hep G2 y Detroit 551 cuando se administraron en concentraciones de menos de 20 %. Ni los extractos ni las formulaciones fueron irritantes o corrosivos y no causaron ningún otro tipo de toxicidad dérmica. La exposición de fibroblastos al extracto glicólico y a las formulaciones favoreció su migración y la reparación de la monocapa luego de 16 horas de contacto, permitiendo cierres de la brecha entre 33,9 y 70,9 %. Tanto los extractos como las formulaciones favorecieron la curación completa de los hámsteres con leishmaniasis cutánea en porcentajes mayores al 80 %. La loción y la emulsión se absorben y penetran en la piel después de su aplicación y, aunque se alcanzan a detectar en plasma hasta las 24 h (la loción) o las 6 h (la emulsión) de la aplicación, la mayor parte queda retenida en la piel. Por último, el tratamiento de los diez pacientes con la loción y la emulsión logró la curación completa de las lesiones con la reparación de la piel dañada y sin efectos adversos. En conclusión, los resultados demostraron las propiedades leishmanicidas y cicatrizantes de C. spinosa, lo que le permitiría ser una alternativa segura para el tratamiento local de la leishmaniasis cutánea. Es necesario validar estos resultados en ensayos clínicos controlados y determinar la eficacia y la seguridad del tratamiento con los productos fitoterapéuticos de C. spinosa.

Abstract Given the need to develop new drugs for the treatment of cutaneous leishmaniasis, not only effective and safe, but also more widely accepted by patients, easily administered in rural settings and cheaper, in the present study the in vitro and in vivo therapeutic potential and cytotoxicity profile of an ethanolic and a glycolic extracts obtained from the branches of Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze and their respective formulations (lotion and emulsion) were evaluated. Finally, the usefulness of the two formulations as topical treatment was validated in 10 patients with uncomplicated CL. Both extracts were active against L. braziliensis at concentrations <22 μg / mL, with low toxicity in U-937 and HL60 cells when administered pure and for Hep G2 and Detroit 551 cells when administered at concentrations <20%. Neither the extracts nor the formulations were irritating or did not cause any corrosive or any other sign of dermal toxicity. The exposure of fibroblasts to the glycolic extract and to the formulations favored the migration of fibroblasts and repair of the monolayer after 16 h of contact, allowing the closing of the gap between 33.9% and 70.9%. Both the extracts and the formulations favored the complete cure of the hamsters with cutaneous leishmaniasis in percentages greater than 80%. After being applied to the skin, lotion and emulsion are absorbed, penetrate, and although they can be detected in plasma up to 24 hours (the lotion) or 6 hours (the emulsion) after application, most of the products it is retained in the skin. Lastly, the treatment of 10 patients with the lotion and the emulsion showed the complete healing of the lesions with the repair of the damaged skin and without adverse effects. In conclusion, the results demonstrate leishmanicidal and healing properties for C. spinosa that give it the potential to become a safe alternative for the local treatment of cutaneous leishmaniasis. It is necessary to validate these results in controlled clinical trials and determine the efficacy and safety of treatment with C. spinosa phytotherapeutic products.

ABSTRACT A description is provided for the first time of a series of nine cases with a clinical examination suggestive of leptospirosis in the municipality of Puerto Nariño, Department of Amazonas, Colombia. Serological evidence is presented of exposure to Rickettsia, spotted fever group. The cases were clinically considered as febrile syndrome of unknown origin. Infection with dengue or malaria was ruled out. Diagnosis of leptospirosis was achieved by real-time polymerase chain reaction. Additionally, indirect immunofluorescence detected the presence of antibodies against rickettsia, spotted fever group. Finally, a review was conducted about the topic.

RESUMEN Se describe por primera vez una serie de nueve casos con clínica indicativa de leptospirosis en el municipio Puerto Nariño en el departamento Amazonas, Colombia. Se muestran evidencias serológicas de exposición con Rickettsia del grupo de las fiebres manchadas. Los casos fueron clínicamente considerados como síndrome febril de origen desconocido. Se descartó infección por dengue y malaria. El diagnóstico de Leptospira se realizó mediante el método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Igualmente, se detectó la presencia de anticuerpos contra rickettsias del grupo de las fiebres manchadas por inmunofluorescencia Indirecta. Finalmente, se realiza revisión del tema.

Resumen Introducción. El ADN mitocondrial ha demostrado su utilidad para el estudio de la evolución en los insectos. Existen algunos genes mitocondriales como el citocromo b (Cytb) y el gen de transferencia para el aminoácido serina (SertRNA) que pueden usarse en el diagnóstico de especies estrechamente relacionadas. Objetivo. Explorar la utilidad filogenética de la región Cytb-SertRNA-IG1-ND1 para detectar posibles especies crípticas en Anopheles neivai. Materiales y métodos. Se recolectaron especímenes en Colombia, Guatemala y en la localidad tipo en Panamá, los cuales se secuenciaron y se compararon mediante el polimorfismo de ADN en toda la región y mediante la simulación de estructuras secundarias del gen SertRNA. Resultados. Se obtuvieron las secuencias de especímenes de A. neivai (34) y A. pholidotus (2). Conclusiones. Se detectaron algunos polimorfismos para la regiónCytb-SertRNA-IG1-ND1 en A. neivai, pero no así especies crípticas.

Abstract Introduction: Mitochondrial DNA has proven its utility for the study of insect evolution. Genes such as cytochrome b (Cytb) and the transfer gene for serine (SertRNA) can be used to compare closely related organisms. Objective: The phylogenetic utility of Cytb-SertRNA-IG1-ND1 was tested for polymorphisms, and secondary structure modeling in SertRNA was done to detect possible cryptic species in Anopheles neivai. Materials and methods: Specimens from Colombia, Guatemala, and the type locality in Panamá were collected and sequenced for specimen comparison based on DNA polymorphisms, and secondary structure modeling for the SertRNA gene. Results: Thirty-six sequences for A. neivai and A. pholidotus were obtained. Conclusions: Polymorphic variants were detected in A. neivai for Cytb-SertRNA-IG1- ND1. Despite this variation in A. neivai, cryptic species could not be detected.

Resumen Introducción. Los departamentos de Chocó y Antioquia en Colombia presentan condiciones climáticas y de vegetación que favorecen el establecimiento de especies de vectores del género Lutzomyia y la transmisión de Leishmania spp. a poblaciones humanas que ingresan a ambientes selváticos conservados. Objetivo. Reportar las especies de flebotomíneos presentes en tres reservas naturales de las regiones del Darién y del Pacífico en Colombia. Materiales y métodos. Los flebotomíneos se recolectaron en las reservas naturales El Aguacate (Acandí, Chocó), Nabugá (Bahía Solano, Chocó) y Tulenapa (Carepa, Antioquia). La recolección se hizo con trampas de luz CDC, mediante búsqueda activa en sitios de reposo y con trampas Shannon. La determinación taxonómica de especies se basó en las claves taxonómicas. En algunas especies de interés taxonómico, se evaluó el uso de secuencias parciales de la región 5’ del gen COI. Resultados. Se recolectaron 611 flebotomíneos adultos: 531 en Acandí, 45 en Carepa y 35 en Bahía Solano. Se identificaron 17 especies del género Lutzomyia, tres del género Brumptomyia y una del género Warileya. Las distancias genéticas (K2P) y los soportes de agrupación (>99 %) en el dendrograma de neighbor joining correspondieron a la mayoría de unidades taxonómicas operacionales moleculares (Molecular Operational Taxonomic Units, MOTU) establecidas para el grupo Aragaoi y confirmaron claramente la identidad de Lu. coutinhoi. Conclusión. Se identificaron especies que tienen importancia en la transmisión de la leishmaniasis en Acandí, Bahía Solano y Carepa. Se confirmó la presencia de Lu. coutinhoi en Colombia.

Abstract Introduction: The departments of Chocó and Antioquia in Colombia show climatic and vegetation conditions favoring the establishment of vector species of the genus Lutzomyia and the transmission of Leishmania spp. to human populations entering conserved forest environments. Objective: To report the species of Phlebotomine sandflies present in three natural reserves in the Darien and Pacific regions of Colombia. Materials and methods: Sand flies were collected specifically in the natural reserves El Aguacate (Acandí, Chocó), Nabugá (Bahía Solano, Chocó) and Tulenapa (Carepa, Antioquia). Sand flies were collected with CDC light traps, active search in resting places and Shannon traps. The taxonomic determination of species was based on taxonomic keys. For some species of taxonomic interest, we evaluated the partial sequences of the 5’ region of COI gene. Results: A total of 611 adult sand flies were collected: 531 in Acandí, 45 in Carepa and 35 in Bahía Solano. Seventeen species of the genus Lutzomyia, three of the genus Brumptomyia and one of the genus Warileya were identified. The genetic distances (K2P) and grouping supported (>99%) in the neighbor joining dendrogram were consistent for most established molecular operational taxonomic units (MOTU) of the Aragaoi group and clearly confirmed the identity of Lu. coutinhoi. Conclusion: Species that have importance in the transmission of leishmaniasis in Acandí, Bahía Solano and Carepa were identified. The presence of Lu. coutinhoi was confirmed and consolidated in Colombia.

ABSTRACT INTRODUCTION: Cutaneous leishmaniasis (CL) is a tropical disease that affects millions of individuals worldwide. The current drugs for CL may be effective but have serious side effects; hence, alternatives are urgently needed. Although plant-derived materials are used for the treatment of various diseases in 80% of the global population, the validation of these products is essential. Gelatin capsules containing dried Artemisia annua leaf powder were recently developed as a new herbal formulation (totum) for the oral treatment of malaria and other parasitic diseases. Here, we aimed to determine the usefulness of A. annua gel capsules in CL. METHODS: The antileishmanial activity and cytotoxicity of A. annua L. capsules was determined via in vitro and in vivo studies. Moreover, a preliminary evaluation of its therapeutic potential as antileishmanial treatment in humans was conducted in 2 patients with uncomplicated CL. RESULTS: Artemisia annua capsules showed moderate in vitro activity in amastigotes of Leishmania (Viannia) panamensis; no cytotoxicity in U-937 macrophages or genotoxicity in human lymphocytes was observed. Five of 6 (83.3%) hamsters treated with A. annua capsules (500mg/kg/day) for 30 days were cured, and the 2 examined patients were cured 45 days after initiation of treatment with 30g of A. annua capsules, without any adverse reactions. Both patients remained disease-free 26 and 24 months after treatment completion. CONCLUSION: Capsules of A. annua L. represent an effective treatment for uncomplicated CL, although further randomized controlled trials are needed to validate its efficacy and safety.

El objetivo de la investigación fue determinar la prevalencia de anticuerpos anti-Leishmania en perros del departamento de Sucre, Colombia. Se analizaron 122 perros del área rural de los municipios de Ovejas, Sampués y Sincelejo, mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Anticuerpos anti-Leishmania fueron detectados en el 69,6 % (IC95 % = 61,1 - 78,2) de la población canina estudiada. En el municipio de Sincelejo la seropositividad fue del 72 % (IC95 % = 61,1 - 82,8), en el municipio de Sampués del 68,4 % (IC95 % = 52,3 - 84,5) y en el municipio de Ovejas del 55,5 % (IC95 % = 21,2 - 86,3). Los animales seropositivos fueron principalmente caninos jóvenes y adultos. El 17,6 % de los perros seropositivos mostró signos clínicos compatibles con leishmaniasis canina, entre los cuales la onicogrifosis, alopecia y caquexia fueron los más comunes. La alta frecuencia de caninos con anticuerpos a Leishmania detectada en el presente estudio, pone de manifiesto la hiperendemicidad de la leishmaniasis canina en esta zona del país, así como el alto riesgo de brotes epidémicos de la enfermedad.

The aim of this survey wasto determine prevalence of antibodies against Leishmania in dogs from Sucre, Colombia. We analyzed 122 dogs in rural areas from municipalities of Sampués, Ovejas and Sincelejo, by indirect immunofluorescence (IFA). Anti-Leishmania antibodies were detected in 69.6 % (95 % CI = 61.1 to 78.2) of the selected canine population. In the municipality of Sincelejo, Sampues and Ovejas, the seropositivities were 72 % (95 % CI = 61.1 to 82.8), 68.4 % (95 % CI = 52.3 to 84.5) and 55.5 % (95 % CI = 21.2 to 86.3) respectively. Seropositive animals were mainly young and adult dogs. The 17.6 % of seropositive dogs showed clinical signs compatible with canine leishmaniasis; onychogryphosis, alopecia and cachexia were the most common ones. The detected high frequency of canines with antibodies against Leishmania in the present study, highlights the hyperendemicity status of canine leishmaniasis in this area of the country and the high risk of disease outbreaks.

Se presenta una lista actualizada de especies de flebotomíneos en zonas cafeteras de la región andina colombiana. Con base en la revisión y verificación taxonómica, se registraron 53 especies presentes en 12 departamentos. Además de los registros obtenidos con base en un muestreo intensivo en cinco departamentos, se recopilaron los datos existentes en trabajos publicados y en la revision taxonómica de los especímenes de la zona pertenecientes a la colección entomológica del Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET). El listado comprende los géneros Brumptomyia (2 especies), Lutzomyia (50 especies) y Warileya (1 especie). Con base en este trabajo se confirmaron 11 nuevos registros de especies en la región cafetera colombiana, entre los cuales es relevante Lutzomyia panamensis , especie de importancia médica no registrada previamente en esta zona. En total, 18 especies de las registradas poseen hábitos antropofílicos o están relacionadas con la transmisión de Leishmania spp.

An updated list of phlebotomine sand flies species in coffee growing areas in the Colombian Andean region is presented. Fifty three species were reported from 12 departments. In addition, species distribution in the region was derived from specimens obtained during intensive field work in five departments, from previously published studies and from the taxonomic revision of specimens in the entomological collection of the Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET). The list includes the genera Brumptomyia (2 species), Lutzomyia (50 species) and Warileya (1 species). The updated list contains eleven new records in the region under study, including Lutzomyia panamensis , a species of medical importance not recorded previously in this zone. Eighteen of the species are considered to be anthropophilic, and many of them have been implicated in the transmission of leishmaniasis.

The physics of flotation in Manta birostris was analysed and the swimming of this species was compared with the flight cycle of the common pigeon Columba livia, in order to find similarities and differences in their locomotion patterns and the laws of physics driving them. It was showed that the cycle of M. birostris has three of the main four stages of pigeon’s flying cycle. A “Parachute effect” was also demonstrated, which give an advantage on ray´s locomotion. Moreover, it was described how torque concept is applied to turn of this species

Se analizó la física de la flotación en la mantarraya Manta birostris y se comparó el nado con el ciclo de vuelo de la paloma doméstica Columba livia, con la finalidad de encontrar similitudes y diferencias en las locomociones y las leyes físicas que intervienen. Se demostró que uno de los dos ciclos de nado estudiados de esta especie posee tres de las cuatro fases principales del ciclo de vuelo de la paloma doméstica. También se demostró un “efecto paracaídas” en M. birostris, el cual le ofrece una ventaja en su locomoción. Adicionalmente, se describió cómo el concepto físico de torque se aplica al giro de esta especie

In Colombia, pentavalent antimonials and miltefosine are the drugs of choice for the treatment of cutaneous leishmaniasis; however, their toxicity, treatment duration, (treatment adherence problems), cost, and decreased parasite sensitivity make the search for alternative treatments of American cutaneous leishmaniasis necessary. Based on the results found in a controlled, open, randomized, phase III clinical trial, the efficacy and safety of miltefosine was compared to that of thermotherapy for the treatment of cutaneous leishmaniasis in Colombia. Adult patients from the Colombian army participated in the study; they received either 50 mg of miltefosine three times per day for 28 days by the oral route (n = 145) or a thermotherapy (Thermomed®) application of 50 °C for 30 seconds over the lesion and surrounding area (n = 149). Both groups were comparable with respect to their sociodemographic, clinical, and parasitological characteristics. The efficacy of miltefosine by protocol and by intention to treat was 70% (85/122 patients) and 69% (85/145 patients), respectively. The adverse effects were primarily gastrointestinal for miltefosine and pain at the lesion site after treatment for thermotherapy. No statistically significant difference was found in the efficacy analysis (intention to treat and protocol) between the two treatments. ClinicalTrials.gov: NCT00471705.

En Colombia antimoniales pentavalentes y miltefosina son los medicamentos de primera elección para el tratamiento de la leishmaniosis cutánea; sin embargo, su toxicidad, duración (que lleva a problemas de adherencia), costo y la disminución de la sensibilidad de los parásitos a los mismos, hacen necesaria la búsqueda de nuevas alternativas de tratamiento para la leishmaniosis cutánea americana. A partir de resultados derivados de un ensayo clínico controlado abierto, aleatorizado, fase III, se comparó la eficacia y seguridad de la miltefosina con la de la termoterapia, para el tratamiento de la leishmaniosis cutánea en Colombia. Adultos pertenecientes al Ejército de Colombia participaron el estudio. Miltefosina, una cápsula de 50 mg tres veces día durante 28 días, vía oral (n = 145). Termoterapia (Thermomed®) aplicación de 50 °C/30" sobre la lesión y el área circundante (n = 149). Ambos grupos fueron comparables en características sociodemográficas, clínicas y parasitológicas. Eficacia de la miltefosina por protocolo 70% (85/122 pacientes) y 69% (85/145 pacientes) por intención a tratar. Termoterapia eficacia por protocolo 64% (86/134 pacientes) y 58% (86/149 pacientes) por intención a tratar. En miltefosina los eventos adversos fueron principalmente de tipo gastrointestinal y en termoterapia se encontró dolor en el sitio de la lesión luego del tratamiento. En el análisis de eficacia (intención a tratar y protocolo) no se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los tratamientos evaluados. ClinicalTrials.gov: NCT00471705.

Introducción. En Colombia, la diversidad de flebotomíneos es alta, con 162 especies registradas que incluyen especies vectoras de Leishmania spp. Objetivo. Identificar las especies de flebotomíneos de importancia médica dentro del área de influencia del Proyecto Hidroeléctrico del río Amoyá, Colombia. Materiales y métodos. Los flebotomíneos fueron recolectados con trampas de luz de tipo CDC,Shannon y adhesivas, en 15 veredas del municipio de Chaparral, departamento de Tolima. Resultados. Un total de 1.077 especímenes adultos de flebotomíneos fueron recolectados e identificados como pertenecientes a 13 especies del género Lutzomyia França, 1924 y una especie del género Warileya Hertig, 1948. Entre las especies del género Lutzomyia recolectadas, Lu. longiflocosa (Morales, Osorno y Muñoz, 1970), Lu. columbiana (Ristorcelli y Van Ty, 1941)yLu. nuneztovari (Ortiz, 1954) son importantes por sus historiales epidemiológicos. Se resalta por primera vez la presencia de Lu. suapiensis (Le Pont, Torrez-Espejo y Dujardin, 1997) en Colombia y de Warileyarotundipennis (Fairchild y Herting, 1951) en el departamento de Tolima. Conclusión. Este estudio contribuye al conocimiento de la distribución geográfica de la subfamilia Phlebotominae en Colombia y favorece localmente a la comprensión de la riqueza y taxonomía de estos insectos, para un mejor entendimiento de la transmisión de la leishmaniasis en el municipio de Chaparral.

Introduction. In Colombia, the diversity of phlebotomine sand flies is high, with 162 recorded species, and which include vectors of Leishmania spp. Objective. To identify the sand fly species of medically importancein the area of influence from Amoyá River Hydroelectric Project, Colombia. Materials and methods. Sand flies were collected with CDC lighttraps, Shannon traps and sticky traps, from 15 villages in Chaparral County,Tolima. Results. A total of 1,077 adult sand fly specimens were collected. Thirteen species were found in the genus Lutzomyiaand one species in the genusWarileya.Among the Lutzomyia species, three species--Lutzomyia longiflocosa, Lutzomyia columbianaandLutzomyia nuneztovari--are important for their epidemiological history.Lutzomyiasuapiensiswas a new record for Colombia, and Warileya rotundipennis was recorded for the first time in Tolima. Conclusions. This study contributed to an increased knowledge of Colombian sand flies in terms of (1) expanding the geographical distribution of members of the subfamily Phlebotominae, (2) gaining estimates of species-richness and species associations in central Colombia, and (3) providing a better understanding of epidemiology of leishmaniasis in theChaparral area.

Lutzomyia longipalpis, es el principal vector de leishmaniasis visceral en el Neotropico y su identificación taxonómica es relevante en el contexto de la epidemiología y control de la enfermedad. La evidencia de un complejo de especies morfológicamente indistinguibles y la similitud morfológica de las hembras con otras especies del subgénero Lutzomyia y con la serie longipalpis, dificultan la identificación taxonómica cuando no se dispone de machos. En el presente estudio usamos la secuencia propuesta a nivel mundial como código de barras genético para diferenciar especies animales, para caracterizar especímenes pertenecientes a L. longipalpis de tres localidades de Colombia y evaluar su utilidad para separarlos de especies cercanas como L. gomezi, L. cruciata y L. bifoliata. El fragmento amplificado y secuenciado exhibió una longitud de 548 pb encontrándose 26 haplotipos para 33 individuos de L. longipalpis, un haplotipo para L. gomezi, un haplotipo para L. cruciata y dos haplotipos para L. bifoliata. Las distancias genéticas (K2P) entre haplotipos de L. longipalpis (0,05-0,07) y las agrupaciones en un dendrograma de NJ, separaron adecuadamente los individuos de L. longipalpis de los individuos de especies cercanas. Los individuos de L. longipalpis se separaron en dos grupos, uno que relaciona los haplotipos de Neiva y El Callejón, y otro para Girón. Las distancias genéticas entre los dos grupos de L. longipalpis fueron superiores a las registradas a nivel intraespecífico para especies previamente estudiadas con base en la secuencia código de barras como L. trinidadensis (0,042) y L. panamensis (0,02).

Lutzomyia longipalpis, is the main vector of visceral leishmaniasis in the Neotropic and the taxonomic identification is relevant for epidemiologic studies and for the disease control. The evidence supporting the existence of a L. longipalpis species complex morphologically indistinguishable besides similarity with females belonging the Lutzomyia subgenus and longipalpis series, difficult taxonomical identification when there are not available males. In this study, we used the sequence proposed worldwide as DNA barcode to distinguish animal species to characterize specimens belonging to L. longipalpis from three Colombian localities (Neiva, El Callejón, Girón) and evaluate their usefulness in separating them from closely related species such as L. gomezi, L. cruciata and L. bifoliata. The amplified and sequenced fragment exhibited a length of 548 bp and 26 haplotypes for 33 individuals of L. longipalpis, one haplotype for L.gomezi, one haplotype for L. cruciata and two haplotypes for L. bifoliata were found. Genetic distances (K2P) between L. longipalpis haplotypes (0.05-0.07) and clusters in a NJ dendrogram, effectively separated L. longipalpis from individuals belonging to closely related species. Individuals of L. longipalpis were separated in two groups, one included haplotypes from Neiva and El Callejón, and the other from Girón. The genetic distance found between the two groups of L. longipalpis were significantly higher than those found at the intraspecific level for species previously studied on the basis of the barcode sequence as L. trinidadensis (0.042) and L.panamensis (0.02).

Introducción. El tratamiento de la enfermedad de Chagas está basado en sólo dos medicamentos de eficacia limitada y con importantes efectos colaterales. La gran biodiversidad de la flora colombiana hace de la bioprospección una alternativa potencial en la búsqueda de nuevos antiparasitarios. Objetivo. Evaluar in vitro el potencial tripanocida y la citotoxicidad de extractos obtenidos de 23 plantas colombianas. Materiales y métodos. Se obtuvieron extractos de hojas, de tallos o de la planta entera, en solventes de diferente polaridad. La actividad contra epimastigotes y la citotoxicidad se evaluaron por el micrométodo enzimático con MTT. Los extractos activos contra epimastigotes y con baja citotoxicidad se evaluaron también en tripomastigotes y amastigotes intracelulares. Resultados. Se reporta la actividad tripanocida de 13 plantas colombianas y se confirma el efecto biológico de cuatro especies previamente evaluadas. Cuatro extractos activos en epimastigotes también fueron activos en tripomastigotes y, uno de ellos, en amastigotes. Este extracto fue aislado de la planta Hieronyma antioquensis, y presentó CI50 de 3,125, 11,48 y 2,85 µg/ml, e índices de selectividad de 25,7 y 27, para epimastigotes, tripomastigotes y amastigotes, respectivamente. Los resultados sugieren que este extracto es un candidato promisorio para el tratamiento de la enfermedad de Chagas. Conclusión. La flora colombiana es una fuente potencial de nuevas sustancias para la quimioterapia contra la enfermedad de Chagas. El micrométodo enzimático con MTT es una herramienta útil para la tamización de la actividad biológica en epimastigotes y posterior selección para ensayos con otros estadios del parásito.

Introduction. The treatment of Chagas disease is based on only two drugs with limited efficacy and significant side effects. The rich biodiversity of the Colombian flora makes bio-prospecting a potential alternative in the search for new antiparasitic drugs. Objective. Potential trypanocidal activity and cytotoxicity was assessed in extracts from 23 Colombian plants. Materials and methods. Extracts of leaves, stems, or of the whole plants were obtained in solvents of a range of polarities. The activity against Trypanosoma cruzi epimastigotes and the cytotoxicity were evaluated by the MTT enzymatic micro-method. Extracts active against epimastigotes and with lowcytotoxicity were also tested on trypomastigotes and intracellular amastigotes. Results. Among the extracts, biological activity was confirmed in 4 species. The extracts were active on epimastigotes and trypomastigotes; one was active also against amastigotes. The latter extract was isolated from the plant Hieronyma antioquensis and presented IC50 of 3.1 mg/ml for epimastigotes, 11.5mg/ml for trypomastigotes and 2.9 mg/ml for amastigotes. The selectivity indexes were 25, 7, and 27 respectively. Conclusions. The extract from H. antioquensis proved a promising candidate for Chagas disease treatment. Futhermore, the MTT enzymatic micromethod was a useful tool for screening biological activity on epimastigotes and other stages of the parasite for further extract trials.

En este trabajo identificamos una nueva secuencia de DNA de 500 pb (β500-DNA) en Leishmania del subgénero Leishmania (Viannia), localizada en la región intergénica de uno de los loci de la familia de los genes de la β tubulina. El análisis de secuencia mostró que β500 no tiene homología con ninguna otra secuencia previamente descrita, incluido el gen de la β tubulina. Nosotros implementamos un ensayo de PCR específico para β500, β500-PCR, que genera un producto de PCR de 375 pb a partir del DNA genómico de cepas de Leishmania pertenecientes al subgénero L. (Viannia). No hubo amplificación alguna cuando se utilizó el DNA genómico de especies del subgénero L. (Leishmania) o el de otros organismos. En las condiciones establecidas, utilizando DNA purificado del clon pLgβ4, que contiene una copia de la secuencia de DNA de β500, el límite de detección más bajo fue de 1 fentogramo. El ensayo β500-PCR confirmó el diagnóstico preliminar de leishmaniasis cutánea en muestras clínicas de pacientes positivas a la prueba de Montenegro y negativas en el cultivo de parásitos. La especificidad y sensibilidad analítica del ensayo de PCR proporciona una herramienta para estudios epidemiológicos de la enfermedad.

We have identified a novel DNA sequence of 500 bp (β500-DNA) on the Leishmania (Viannia) subgenus, located in the intergenic region of one of the loci of the β-tubulin gene family. The sequence analysis showed that this sequence has no homology to any other sequence described so far, including the β-tubulin gene. We improved a specific β500-PCR assay, which generated a PCR product of 375 bp for total genomic DNA from Leishmania strains belonging to the L. (Viannia) subgenus. In contrast, no amplification was found when using genomic DNA from species of L. (Leishmania) subgenus or other organisms. Under our PCR conditions, the lower detection limit was 1 fg when a purified DNA clone (pLgβ4), which contains one copy of the β500-DNA sequence, was used. The β500-DNA PCR assay confirmed the preliminary diagnosis of cutaneous leishmaniasis in clinical samples in which the Montenegro skin test was positive and parasite cultures were negative. The analytical specificity and the sensitivity of the PCR assay provide a tool for epidemiological studies of the disease.