Resumo Cycnoches haagii é uma orquídea epífita alvo de muitos coletores, mas nenhuma referência foi encontrada na literatura sobre sua biologia reprodutiva. Assim, o objetivo deste estudo foi obter informações preliminares sobre os tipos de polinização e sua influência na viabilidade das sementes desta orquídea nativa do Cerrado brasileiro, a fim de viabilizar futuros programas de multiplicação e preservação. Foram realizadas polinizações entre flores da mesma planta (geitonogamia) ou plantas diferentes (xenogamia). As sementes obtidas das cápsulas foram semeadas em meio B&G, com concentração total e parcial de sais. Sementes de geitonogamia resultaram em 25% dos protocormos albinos e consequentemente em plântulas albinas. Este fenômeno não ocorreu em sementes oriundas de polinização xenogâmica. A análise de pigmentos mostrou que mesmo as plântulas albinas apresentaram clorofilas e carotenoides, porém em concentrações significativamente menores, 16% e 37% respectivamente, em relação às plântulas pigmentadas. A polinização geitonogâmica deve ser evitada em programas de propagação da orquídea C. haagii devido à origem de plântulas albinas. Além disso, a polinização xenogâmica mostrou-se um método muito interessante para a obtenção de mudas com fenótipo albino, material vegetal muito intrigante para futuras investigações.

Abstract Cycnoches haagii Barb. Rodr. is an epiphytic orchid very targeted by collectors, but no reference was found in the literature about its reproductive biology. Thus, the purpose of this study was to obtain initial information regarding pollination types and its influence on seed viability of this native orchid of the Brazilian Cerrado, in order to enable future propagation and preservation programs. Pollination among flowers of the same plant (geitonogamy) or different plants (xenogamy) were carried out. Seeds extracted from the capsules were sown in B&G medium, with full and half strength. Seeds from geitonogamic resulted in 25% of albino protocorms and consequently in albino seedlings. This phenomenon did not occur in seedlings derived from xenogamic pollination. Pigment analysis showed that even the albino seedlings presented chlorophylls and carotenoids, however, in significantly minor concentrations, 16% and 37% respectively, in relation to green seedlings. Geitonogamic and xenogamic pollinations resulted in C. haagii viable seeds with high germination percentage (90%) under in vitro conditions. The germination of seeds from xenogamic pollination resulted in chlorophyll or normal seedlings only, and can be recommended at conservation programs. On the other hand, although geitonogamic pollination should be avoided at conservation programs of this orchid species as it leads to albino seedlings, it showed a very interesting system to obtain seedlings with this phenotype, an interesting plant material to future investigation.

RESUMO Cycnoches haagii é uma Orchidaceae epífita encontrada no Cerrado brasileiro, que possui grande potencial ornamental. Objetivando desenvolver um protocolo completo de propagação seminal de C. haagii, bem como testar a influência da presença de fungos micorrízicos no processo, sementes maduras foram germinadas in vitro na presença ou ausência de dois isolados fúngicos do gênero Tulasnella (FCH e FHC3E), em três meios de cultura (B&G, Knudson e OMA). Avaliou-se a porcentagem de sementes germinadas, e os protocormos dos quatro meios com maiores porcentagens foram transferidos para meios novos, visando à conversão em plântulas. As plântulas foram avaliadas quanto ao comprimento da parte aérea, número de folhas, comprimento da maior raiz, número de raízes e massa fresca total. O meio B&G proporcionou germinação superior a 60 % e maior crescimento das plântulas, contribuindo para 100 % de sobrevivência na fase de aclimatização, independentemente da presença de fungos micorrízicos. No entanto, apenas plântulas oriundas do meio B&G inoculadas com o isolado FCH apresentaram desenvolvimento acelerado quando aclimatizadas, e floresceram ao final do primeiro ano de aclimatização. Assim, a presença do fungo micorrízico FCH no meio B&G, durante a fase de germinação, é adequado para a propagação de C. haagii, pois acelera o desenvolvimento e antecipa a floração ex vitro.

ABSTRACT Cycnoches haagii is an epiphytic Orchidaceae found in the Brazilian Savannah that presents a great ornamental potential. Aiming at developing a complete seminal propagation protocol of C. haagii, as well as testing the influence of the mycorrhizal fungi presence in the process, mature seeds were germinated in vitro in the presence or absence of two fungal isolates, both belonging to the Tulasnella genus (FCH and FHC3E), in three culture media (B&G, Knudson and OMA). The percentage of germinated seeds was evaluated, and the protocorms of the four media with higher percentages were transferred to a new media, aiming at the conversion into plantlets. The seedlings were evaluated for shoot length, number of leaves, length of the largest root, number of roots and total fresh matter. The B&G medium provided a germination rate higher than 60 %, besides a higher seedling growth, contributing to 100 % of survival in the acclimatization stage, independently of the mycorrhizal fungi presence. However, only the seedlings from the B&G medium inoculated with the isolated FHC presented a fast growth when acclimatized, and flowering at the end of the first year of acclimatization. Therefore, the presence of the mycorrhizal fungus FHC on the B&G medium, during the germination phase, is adequate for the propagation of C. haagii, because it accelerates its development and anticipates the ex vitro flowering.

Visando à obtenção de grande quantidade de mudas para programas de reintrodução, bem como viabilizar sua exploração comercial, sementes de Cyrtopodium saintlegerianum foram incubadas em meio Knudson. Após a germinação, os protocormos foram inoculados em meio Knudson suplementado com 6-benzilaminopurina (BA) e ácido α-naftalenoacético (ANA) para indução de brotações, que foram posteriormente individualizadas e inoculadas em meio Knudson acrescido com ácido giberélico (AG3), para promover alongamento. As plantas resultantes do processo in vitro foram avaliadas e transplantadas para bandejas contendo Plantmax(r) e casca de Acurí triturada. A relação auxina citocinina influencia na propagação in vitro de C. saintlegerianum, induzindo um incremento no número de brotações quando o meio de cultura foi acrescido de 2,0 mg L-1 de BA, na ausência ou presença de 0,5 mg L-1 de ANA. A espécie demonstrou-se promissora na multiplicação massal in vitro. O uso do ácido giberélico favoreceu o alongamento das brotações in vitro, mas contribuiu negativamente na aclimatização das plantas, tornando desnecessária a utilização deste fitorregulador na produção de mudas de C. saintlegerianum.

In order to enable production of large quantities of plantlets for reintroduction programs, as well as economic exploration, Cyrtopodium saintlegerianum seeds were sown on Knudson culture medium. After seed germination, the protocorms were inoculated on Knudson culture medium supplemented with 6-benzyladenine (BA) and α-naphthaleneacetic acid (NAA). The obtained shoots were individually inoculated in Knudson supplemented with gibberellic acid (GA3) in order to promote elongation. Seedlings were evaluated and then transplanted into trays containing commercial substrate Plantmax(r)-HT, or crushed Acuri leaf sheath. Auxin/cytokinin ratio influenced in vitro propagation of C. saintlegerianum, resulting in increased shoot number when 2.0 mg L-1 BA was added to the culture medium in the absence or presence of 0.5 mg L-1 NAA. This species proved to be promising for massal in vitro multiplication. Despite having incremented in vitro shoots elongation, the use of GA3 is unnecessary since it contributed negatively in the acclimatization of plants.

A orquídea Aspasia variegata ocorre naturalmente no Cerrado Sul-Matogrossense, e tem sido bastante coletada de seu habitat, devido à beleza de suas flores. Adicionalmente, sua área de ocorrência tem sido bastante reduzida e pouco ou nenhum estudo visando a sua multiplicação tem sido realizado. Objetivando estabelecer protocolo para obtenção de mudas de A. variegata, diferentes composições de meio de cultivo foram testadas para observar aquela que propicia melhores condições para crescimento e desenvolvimento dos protocormos in vitro e ainda a influência desses meios na fase de aclimatização das mudas. Para tal, foram utilizadas cápsulas maduras para obtenção das sementes, as quais foram inoculadas em meio de cultivo básico Knudson por 120 dias até o desenvolvimento de protocormos. Estes foram então transferidos para diferentes formulações dos meios de cultivo MS e Knudson, variando a concentração de sais e de carvão ativado (0; 3,0 e 6,0g L-1). Após 180 dias da inoculação dos protocormos, foram realizadas avaliações referentes ao comprimento da maior raiz e da parte aérea, número de raízes e folhas, e quantificados os teores de clorofila. Em seguida, as mudas foram transferidas para bandejas contendo uma mistura de Plantmax® e Fibra de Coco (1:1) para aclimatização. Melhores resultados para o crescimento in vitro de A. variegata foram obtidos com a utilização do meio de cultura MS, acrescido de 6,0g L-1 de carvão ativado. No entanto, os maiores níveis de clorofila foram obtidos nos tratamentos contendo sais MS desprovidos de carvão ativado, e os menores nos meios contendo sais Knudson providos com carvão ativado. As plantas oriundas dos tratamentos com maiores teores de clorofila total durante a fase in vitro obtiveram as maiores taxas de sobrevivência e melhor desenvolvimento na fase de aclimatização.

Aspasia variegata occurs naturally in the savanna of the Mato Grosso do Sul State, Brazil and it has been widely collected for its beautiful flowers. Additionally, its habitat has been greatly reduced and little or no investigation of its spread has been performed. Aiming to establish a protocol to obtain seedlings of the orchid A. variegata, different compositions of culture medium were tested to identify which one provided better in vitro growth and development and to assess the influence of these media in seedling acclimatisation. Thus, seeds obtained from mature capsules were inoculated in Knudson culture medium for 120 days until the protocorm stage. They were transferred to different culture media formulations, including MS and Knudson with half or full formulation, and 3.0 and 6.0g L-1 activated charcoal were added to them or not. After 180 days of protocorm inoculation, seedlings were evaluated for length of roots and shoots, number of roots and leaves, and chlorophyll contents. After that, seedlings were transferred to trays containing a mixture of Plantmax® and coconut fibre (1:1) for acclimatisation. Best results for the in vitro growth of A. variegata were obtained with the use of MS medium supplemented with 6.0g L-1 activated charcoal. Higher levels of chlorophyll were obtained, however, in treatments containing MS salts without activated charcoal presence, and lower levels in media containing Knudson salts with the presence of activated charcoal. The seedlings originated by higher chlorophyll levels during in vitro cultivation presented the highest survival rates and better development in the acclimatisation phase.