Abstract The purpose of this study was to isolate Toxoplasma gondii from tissues of free-range chickens in the southwestern region of Goiás, to detect and molecularly characterize the genetic material of the parasite, and to determine the seroprevalence of the protozoan parasite in these animals. A seroprevalence of T. gondii antibodies of 76% (19/25) was found among the chickens, while genetic material from their tissues was detected in 56% (14/25). A total of 14 isolates was obtained in the bioassay, ten of which were considered acute, eight were considered isolates of high virulence lethal to mice, and four of low virulence, considered non-lethal but with the ability to chronify the infection. Seven of the ten isolates showed significant morphometric differences from the RH strain, in terms of nucleus-complex-apical distance, length and width. Genotyping of the acute isolates was performed by RFLP-PCR, using 11 genetic markers: SAG1, SAG2 (3’SAG2 and 5’SAG2), alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and APICO. The results were compared and classified according to the genotypes listed on the ToxoDB Platform, where different profiles were observed indicating the presence of two known genotypes (#7 and #63) and five new genotypes (NEW 3, NEW4, NEW5, NEW6, NEW 7). The results showed high seroprevalence, isolation rate, molecular detection and genotypic variations of T. gondii in free-range chickens in the southwestern region of Goiás.

Resumo O objetivo deste estudo foi isolar Toxoplasma gondii de tecidos de galinhas caipiras da região sudoeste de Goiás, detectar e caracterizar molecularmente o material genético do parasito e determinar a soroprevalência do protozoário nestes animais. A soropositividade para anticorpos anti- T. gondii, nas galinhas caipiras, foi de 76% (19/25), enquanto a detecção do material genético dos tecidos foi de 56% (14/25). Por meio do bioensaio foi obtido um total de 14 isolados, sendo 10 agudos, dos quais oito foram considerados isolados de elevada virulência, sendo letais para camundongos; e quatro de baixa virulência, com capacidade de cronificar a infecção, considerados não letais. Em sete dos dez isolados foram identificadas diferenças morfométricas significativas em relação à cepa RH, quanto à distância núcleo-complexo apical, comprimento e largura. A genotipagem dos isolados agudos por RFLP-PCR foi realizada, utilizando-se 11 marcadores genéticos SAG1, SAG2 (3´SAG2 e 5´SAG2), alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, APICO. Os resultados foram comparados e classificados de acordo com os genótipos presentes na Plataforma ToxoDB, nos quais diferentes perfis foram observados indicando a presença de dois genótipos conhecidos (#7 e #63) e cinco genótipos novos (NEW 3, NEW4, NEW5, NEW6, NEW 7). Os resultados demonstraram elevada soroprevalência, taxa de isolamento, detecção molecular e variações genotípicas de T. gondii em galinhas caipiras da região sudoeste de Goiás.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar as características genotípicas de Toxoplasma gondii isolados de galinhas caipiras da Região Metropolitana de Goiânia, Goiás, Região Centro Oeste do Brasil. A soroprevalência foi de 96% dos animais, determinada por hemaglutinação indireta. As amostras de cérebro e coração foram processadas através da digestão péptica para o bioensaio em camundongos. Os tecidos foram homogeneizados, e as amostras resultantes foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR), que possibilitou a detecção do DNA do parasito em 64% deles. Por meio do bioensaio em camundongos, foi possível detectar 15 isolados, 8 deles apresentando taquizoítos na lavagem peritoneal e 7 apresentando cistos cerebrais. A determinação dos genótipos de T. gondii foi realizada por PCR-RFLP com os seguintes marcadores: SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, alt. SAG2, Apico e CS3. Foi possível definir 3 genótipos, incluindo o ToxoDB # 65 e dois deles ainda não foram descritos na literatura. Portanto, conclui-se que os isolados obtidos na região metropolitana de Goiânia apresentaram diversidade genética relativamente baixa.

Abstract The aim of this study was to evaluate the genotypic characteristics of Toxoplasma gondii isolated from free-range chickens in the metropolitan area of Goiânia, Goiás, in Brazil’s central-west region. The seroprevalence rate was found to be 96%, according to an indirect hemagglutination assay. Brain and heart samples were processed by peptic digestion for a mice bioassay. The tissues were homogenized and the resulting samples were subjected to polymerase chain reaction (PCR), which revealed that 64% of them contained the parasite's DNA. The mice bioassay revealed 15 isolates, 8 of them tachyzoites isolates from the peritoneal lavage and 7 from brain cysts. T. gondii genotypes were determined through PCR-RFLP, using the following markers: SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, alt. SAG2, Apico and CS3. Three genotypes were identified, inclued ToxoDB #65, and the other two are not yet described in the literature. Hence, we conclude that the isolates obtained from the metropolitan area of Goiânia showed relatively low genetic diversity.

ABSTRACT Toxoplasmosis is caused by Toxoplasma gondii and the probability of this infection occurring in the first months of life is usually low because its transmission is related to eating habits. A 6-month-old nursing infant was diagnosed with acute toxoplasmosis, which was identified through anti- T. gondii IgA, IgM and low-avidity IgG serologic assays, polymerase chain reaction (PCR) and mouse bioassay test although its mother was seronegative. This serological divergence between mother and child led us to interview the mother regarding epidemiological factors. During this interview, she reported that she had given her 2-month-old baby a piece of undercooked beef to suck on. After some time, the baby presented fever and cervical lymphadenitis. This report emphasizes the importance of serological surveys of toxoplasmosis in nursing infants presenting with fever and lymphadenitis, in view of the possible acquisition of toxoplasmosis in the first months of life.

Resumo A avaliação da acurácia das técnicas parasitológicas de Willis, Hoffman-Pons-Janer ou Lutz (HPJL), Sheather e Faust foram realizadas em amostras fecais de gatos capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses em Goiânia, Goiás. Essas quatro técnicas foram utilizadas separadamente para análise de 154 amostras fecais. A análise de acurácia foi empregada, avaliando-se a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e índice kappa, sendo a técnica de Willis eleita como padrão-ouro. Das amostras analisadas 74,68% (115/154) foram positivas para enteroparasitos. A análise de frequência de positividade demonstrou que a técnica HPJL detectou 86,1% dos positivos, aproximando-se do padrão-ouro. A avaliação da acurácia foi realizada pela análise dos parasitos mais prevalentes, sendo que, para Ancilostomídeos, a técnica de Sheather apresentou melhor acurácia; para Cystoisospora spp., as técnicas de Sheather e HPJL foram semelhantes e para Toxoplasma gondii, a técnica de Faust apresentou melhor acurácia comparada ao padrão ouro. Este estudo demonstra a importância da associação de técnicas parasitológicas para o diagnóstico de enteroparasitos em gatos.

Abstract The accuracy of the parasitological techniques of Willis, Hoffman-Pons-Janer or Lutz (HPLJ), Sheather and Faust was evaluated in fecal samples from stray cats caught by the Zoonosis Control Center in Goiânia, Goiás, Brazil. These four techniques were applied separately to analyze 154 fecal samples, and their accuracy was analyzed based on an evaluation of their sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, and Kappa index, resulting in the selection of the Willis technique as the nominal gold standard. Of the 154 samples, 115 (74.68%) tested positive for intestinal parasites. The analysis of the frequency of positivity indicated that the HPLJ technique detected 86.1% of the positive samples and was the closest to the gold standard. The analysis of the accuracy of the techniques was evaluated using the most prevalent parasites. The Sheather technique showed the highest accuracy in the detection of Ancylostomatidae, while the Sheather and HPLJ techniques showed similar accuracies in the detection of Cystoisospora spp. when compared to the gold standard. Lastly, the Faust technique showed the highest accuracy in the detection of Toxoplasma gondii when compared to the gold standard. This study underscores the importance of combining parasitological techniques in the diagnosis of intestinal parasites in cats.