Resumo O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

Abstract The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.

Metrodorea nigra St. Hill. (Rutaceae) apresenta flores perfeitas que ocorrem em panícula. O pico de florescimento acontece em agosto e setembro. A antese é diurna e a espécie apresenta flores protândricas. As sépalas verdes e as pétalas vermelhas apresentam epiderme papilosa contendo estômatos e mesofilo parenquimático. A antera tetrasporangiada também apresenta uma epiderme papilosa, células do endotécio com espessamento parietal secundário, duas camadas médias e tapetum binucleado. O único pistilo apresenta a parede do ovário com tecido nectarífero e uma epiderme ventral meristemática, um estilete sólido e um estigma imperceptível. Os óvulos são anátropos, bitegumentados e crassinucelados e apresentam um obturator de origem funicular e placentária. O nectário, em forma de disco, circunda a base do ovário e em seu ápice há várias protuberâncias pilosas.

Studies on the morphology and anatomy of the flower and anthesis of Metrodorea nigra St. Hill. (Rutaceae) showed perfect flowers, which occurred in panicle. The peak of the flowering was August and September. The anthesis was diurnal and the species presented protandrous flowers. The green sepals and the red petals presented papillose epidermis with stomata and parenchymatic mesophyll. The tetrasporangiate anther presented a papillose epidermis too, endothecium cells with secondary parietal thickenings, two middle layers and binucleate tapetum. The only pistil presented an ovary wall with nectariferous tissue and a meristematic ventral epidermis, a solid style and an inconspicuous stigma. The ovules were anatropous, bitegmic and crassinucelate and presented an obturator of funicular and placentic origin. The nectaries occurred around the ovary as a disk-like structure and in its apex as a number of pillose protuberances.

Plantas de Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) com três meses de idade e cultivadas em casa de vegetação, foram submetidas a 56 dias alagamento e à aplicação de "Ethrel" e de nitrato de prata. Objetivou-se verificar qual a capacidade desta espécie apresentar modificações morfológicas e fisiológicas para sobreviver durante períodos de inundação e em que grau tais respostas podem estar relacionadas com alterações nos níveis de etileno. O alagamento e a aplicação de "Ethrel" provocaram redução do crescimento e epinastia em T. avellanedae e a aplicação de nitrato prata amenizou em certos aspectos estes efeitos. Alguns sintomas apresentados por esta espécie durante a inundação e sua capacidade de desenvolver estruturas que amenizam os efeitosda hipoxia, como rachaduras corticaise hipertrofia de lenticelas nas raízes (modificações que possibilitaram a adaptação a curtos períodos de inundação) podem estar relacionados a aumentos na concentração de etileno nos tecidos da planta.

Three-month-old Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) plants cultivated in the greenhouse were submitted to 56 days of flooding and to "Ethrel" and silver nitrate applications to find out it’s capacity for morphological and physiological modifications to survive under flooding conditions and at which degree such responses were correlated with alterations in the ethylene level. Flooding and the "Ethrel" application caused growth reduction and epinasty in T. avellanedae and the application of silver nitrate lessened some these symptoms. Certain symptoms shown during flooding by this species and its ability to develop structures which lessen hypoxia effects, such as stem fissures and hypertrophied lenticels in the roots, modifications which enable the species to adapt to short flooding periods, could be related to increases in the ethylene concentration in the plant tissues.

Foram estudadas as modificações morfo-anatômicas e ecofisiológicas que o alagamento provoca em Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae), correlacionando-as com sua capacidade de tolerar o excesso de água no solo. Plantas com três meses de idade, crescendo em casa de vegetação, foram submetidas a 56 dias de alagamento e a um período de pós-alagamento. A taxa fotossintética e o crescimento de T. avellanedae decresceram conforme aumentou o tempo de alagamento, mas mesmo não sendo altamente tolerante, a espécie foi capaz de se adaptar a curtos períodos de alagamento. Esta relativa tolerância provavelmente se deve à capacidade apresentada por T. avellanedae de desenvolver estruturas que amenizam os efeitos do alagamento, promovendo a difusão interna de oxigênio da parte aérea para as raízes, tais como rachaduras caulinares, raízes superficiais e lenticelas hipertrofiadas nas raízes. Como não houve acentuada variação na anatomia interna de folhas e raízes de T. avellanedae, alterações metabólicas provavelmente auxiliaram na sobrevivência da espécie durante o alagamento.

Morphological, anatomical and ecophysiological modifications caused by flooding in the growth and development of Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) were studied and correlated with tolerance to the excess of water in the soil. Three-month-old plants, grown in a greenhouse, underwent a period of 56 days of flooding and a post-flooding period. Photosynthesis rate and growth decreased in T. avellanedae when flooding duration increased. Though not much tolerant, plant adapted itself to short flooding periods. This relative tolerance was probably due to the capacity of T. avellanedae in developing structures which lessened flooding effects and promoted internal diffusion of oxygen from the aerial part to the roots, such as stem fissures, superficial roots and hypertrophied lenticels in the roots. As there was no great variation in the internal anatomy of T. avellanedae leaves and roots, metabolic alterations might have helped in the survival of the species during flooding.

As características morfológicas e anatômicas das flores de Trichilia catigua A. Juss., T. elegans A. Juss. e T. pallida Sw. (Meliaceae) são descritas no presente trabalho, visando subsidiar futuros estudos sobre reprodução e preservação destas espécies nativas. A antese ocorreu de abril a agosto em T. catigua, de janeiro a maio em T. pallida e setembro a janeiro em T. elegans. As sépalas e pétalas apresentavam epiderme papilosa e pilosa e mesofilo parenquimático. As flores masculinas possuiam pistilódio com óvulos abortivos e tubo estaminal com número variável de anteras tetrasporangiadas, cuja parede apresentava epiderme papilosa, endotécio, duas camadas médias e tapete secretor. As flores femininas apresentavam anteródios e pistilo bi ou tricarpelar, com ovário de estrutura simples, estilete oco ou sólido com tecido transmissor central e estigma com pêlos uni ou bicelulares. Os óvulos eram anátropos e bitegumentados. Não foram encontrados no ambiente de estudo exemplares das espécies estritamente dióicos, sendo todos em maior ou menor grau monóicos.

Morphological and structural features of flowers of Trichilia catigua A. Juss., T. elegans A. Juss. and T. pallida Sw. (Meliaceae) are presented here with the purpose to stimulate future reproductive and preservation studies of these brazilian native species. Anthesis occurred from April to August in T. catigua, January to May in T. pallida and September to January in T. elegans. Sepals and petals presented a papillose and pilose epidermis and a parenchymatous mesophyll. Male flowers presented pistillodes with abortive ovules and a staminal tube with tetrasporangiate anthers. Anther wall had a papilose epidermis, a fibrous endothecium, two middle layers and a secretory tapetum. Female flowers presented antherodes and bi - or tricarpellate syncarpous pistils. Ovary had a simple structure with anatropous, bitegmic ovules. Style was hollow or solid and the stigma was constituted by uni - or bicelullar trichomes. Strictly dioecious specimens were not found in the study area.