RESUMO: Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. são parasitas detectados em tecidos de animais domésticos e selvagens. As aves são relevantes no ciclo de vida e epidemiologia dos protozoários devido à grande variedade de espécies de aves, hábitos alimentares e migratórios. O objetivo deste estudo foi a detecção molecular de T. gondii, N. caninum e Sarcocystis spp. em diversas espécies de aves naturalmente infectadas. Portanto, amostras de tecido de cérebro e coração foram coletados de aves recebidas e necropsiadas no Laboratório Central de Diagnóstico de Patologias Aviárias (LCDPA), sendo submetidas a extração de DNA e amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 18S rRNA para Sarcocystis spp., gene NC5 para N. caninum e gene repetitivo 529 pares de bases para T. gondii. N. caninum foi detectado em duas aves (02/65; 3,07%), em amostra de cérebro de Rupornis magnisrostris (número acesso: ON182081, 267pb) e em amostras de cérebro e coração de Dendrocygna bicolor (número acesso: ON211312, 267pb). DNA do genero Sarcocystis spp. foi detectado em três aves (03/65; 4,62%), sendo que no sequenciamento genético foram identificados Sarcocystis spp. (número acesso: MW463929) em cérebro de Nymphicus hollandicus e Sarcocystis speeri (número acesso: MW464125) em cérebro e coração de Amazona aestiva. A análise filogenética revelou que Sarcocystis spp. formou um clado com Sarcocystis spp. que utilizam gambá (Didelphis aurita) como hospedeiro definitivo e S. falcatula que utilizam Lóris-molucano (Trichoglossus moluccanus) como hospedeiro intermediário. S. speeri formou um clado com S. speeri que utilizou Mus musculus como hospedeiro intermediário experimental e formou um clado com Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti e Sarcocystis sp. que afetam espécies de aves. O DNA de T. gondii não foi detectado em nenhum tecido. Este é o primeiro relato de detecção de DNA de N. caninum, Sarcocystis spp. e S. speeri em amostras de tecido para essas espécies de aves estendendo a lista de hospedeiros intermediários.

ABSTRACT: Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. are parasites detected in tissues of domestic and wild animals. Birds are relevant in the life cycle and epidemiology of protozoa due to the wide variety of bird species, feeding and migratory habits. The aim of this study was the molecular detection of T. gondii, N. caninum and Sarcocystis spp. in several species of naturally infected birds. Therefore, samples of brain and heart tissue were collected from birds received and necropsied at the Central Laboratory for the Diagnosis of Avian Pathologies (LCDPA), undergoing DNA extraction and amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of the 18S rRNA gene to Sarcocystis spp., NC5 gene for N. caninum and repetitive gene 529 base pairs for T. gondii. N. caninum was detected in two birds (02/65, 3.07%), in a brain sample of Rupornis magnisrostris (accession number: ON182081, 267pb) and in a brain and heart sample of Dendrocygna bicolor (accession number: ON211312, 267pb). DNA of the genus Sarcocystis was detected in three birds (03/65, 4.62%), and in the genetic sequencing Sarcocystis spp. (accession number: MW463929) in brain of Nymphicus hollandicus and Sarcocystis speeri (accession number: MW464125) in brain and heart of Amazona aestiva. Phylogenetic analysis revealed that Sarcocystis spp. formed a clade with Sarcocystis spp. that use skunk (Didelphis aurita) as definitive host and Sarcocystis falcatula that use Moluccan loris (Trichoglossus moluccanus) as intermediate host. S. speeri formed a clade with S. speeri that used Mus musculus as an experimental intermediate host and formed a clade with Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti and Sarcocystis sp. that affect bird species. T. gondii DNA was not detected in any tissue. This is the first report of DNA detection of N. caninum, Sarcocystis spp. and S. speeri in tissue samples for these bird species extending the list of intermediate hosts.

RESUMO: As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.

ABSTRACT: Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.

RESUMO: Toxoplasma gondii é um protozoário apicomplexa que infecta animais de sangue quente, podendo ser considerado um dos principais parasitas capazes de infectar os seres humanos. Galinhas domésticas podem ser facilmente infectadas por protozoários, uma vez que estas podem ingerir oocistos encontrados no solo, sendo consideradas boas indicadoras de contaminação ambiental por T. gondii. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-T. gondii em galinhas domésticas criadas extensivamente e avaliar os fatores de risco associados ao protozoário, na zona rural de Santa Maria, RS, Brasil. No período de março de 2013 a fevereiro 2014 foram coletadas 597 amostras de sangue de galinhas domésticas em 74 propriedades, oriundas de nove estratos que representam cada distrito da zona rural. Para avaliar os fatores de risco, nessas propriedades foi aplicado um questionário epidemiológico aos moradores. As amostras de soro foram testadas por imunofluorescência indireta, e 49,2% (294/597) foram positivas para anticorpos anti-T. gondii, com títulos variando de 16 a 4096. Das 74 propriedades analisadas, em 63 (85,1%) houve relatos que os gatos têm acesso ao deposito de alimentos, com associação significativa quando associado à presença de galinhas positivas (p=0,04) e o OR de 4,07. A variável “abate de animais” (aves e bovinos), em 51 (68,9%) das propriedades foi relatado o abate de bovinos e aves na propriedade, com valor de p significativo (p=0,05). A maioria das propriedades 59 (79,7%) foi relatada a presença de gatos domésticos, o que poderia estar associada com a alta soroprevalência encontrada em galinhas e a taxa de contaminação ambiental. A elevada prevalência de anticorpos encontrada neste estudo, além da alta frequência de propriedades com casos positivos, sugere uma grande contaminação ambiental nos distritos pesquisados, sendo assim um risco potencial para a saúde humana e animal.

ABSTRACT: Toxoplasma gondii is an apicomplex protozoan that infects warm-blooded animals and can be considered a major parasite capable of infecting humans. Domestic chickens can be easily infected by protozoa, since they can ingest oocysts found in the soil and are considered good indicators of environmental contamination by T. gondii. The aim of this study was to determine the presence of anti-T. gondii antibodies in free range chickens and to evaluate the risks factors associated with the protozoan in rural area of Santa Maria, RS, Brazil. From March 2013 to February 2014, 597 blood samples from domestic chickens were collected from 74 farms, from nine layers representing each district in the rural area. To evaluate the risk factors, in these farms an epidemiological questionnaire was applied to the residents. Serum samples were tested by indirect immunofluorescence and 49.2% (294/597) were positive for anti-T.gondii antibodies, with titres varying from 16 to 4096. Of the 74 analyzed farms, 63 (85.1%) reported that cats had access to food deposits, with a significant association when positive chickens were present (p = 0.04) and the OR of 4.07. The variable “slaughter of animals” (poultry and cattle) in 51 (68.9%) of the farms was reported the slaughter of cattle and birds in the farm, with significant p value (p = 0.05). Most farms 59 (79.7%) reported the presence of domestic cats, which could be associated with the high seroprevalence found in chickens and the rate of environmental contamination. The high prevalence of antibodies found in this study, in addition to the high frequency of farms with positive cases, suggests a great environmental contamination in the studied districts, thus being a potential risk to human and animal health.

RESUMO: O protozoário Toxoplasma gondii possui a capacidade de infectar diversas espécies animais, geralmente causando distúrbios reprodutivos. Quatro diferentes isolados de T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) e Santa Flora #306 (SF306) - foram avaliados, após prévia genotipagem. A capacidade de multiplicação e virulência destes isolados foi analisada in vitro (células Vero) e in vivo (camundongos), sendo realizadas 3 passagens para cada isolado em cada modo avaliado, sendo sempre inoculada a dose de 1x104 taquizoítos em todas as passagens. Os camundongos eram observados diariamente, quanto à presença de sinais clínicos e ocorrência de mortalidade após inoculação dos taquizoítos. Os isolados SF1 e SF306, foram os que apresentaram maior multiplicação média do número total de taquizoítos em cada uma das 3 diferentes passagens realizadas para cada um dos isolados tanto in vitro quanto in vivo. Os primeiros sinais clínicos observados nos camundongos ocorreram entre os dias 5 a 11, após inoculação, com mortalidade acontecendo entre os dias 6 a 15, após inoculação. Assim, a multiplicação parasitária in vitro é semelhante à multiplicação in vivo destes isolados de T. gondii; diferentes isolados com o mesmo genótipo apresentam comportamento de virulência semelhante, caracterizando o isolado SF1 como mais virulento para camundongos.

ABSTRACT: The protozoan Toxoplasma gondii has the ability to infect several animal species, usually causing reproductive disorders. Four different isolates of T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) and Santa Flora #306 (SF306) were evaluated with prior genotyping. Their virulence and multiplication capacity were analyzed in vitro (Vero cells) and in vivo (mice). For each isolate, three passages were performed with dose inoculation 1x104 tachyzoites at each passage. The mice were daily observed to verify of clinical signs and occurrence of mortality after tachyzoites inoculation. The SF1 isolate and SF306 isolate, presented the highest multiplication of the total tachyzoites number in each of the 3 different passages performed in vitro and in vivo. The initial clinical signs in mice were observed between 5 and 11 days, and occurring mortality between 6 and 15 days, after inoculation. Thus, the parasitic multiplication of theses isolates is similar in vitro and in vivo; different isolates within the same genotype have a similar virulence and the SF1 isolate is the most virulent for mice.

RESUMO: A sarcocistose é uma doença distribuída mundialmente, podendo acometer aves, répteis e diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença de Sarcocystis spp. e caracterizar as espécies encontradas em 375 amostras de produtos cárneos (filé mignon bovino, carne moída bovina e salame colonial). Para isso, foi realizada a detecção do parasita através da técnica de PCR para amplificação parcial do gene 18S rRNA e sua caracterização molecular utilizando o polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP) com as enzimas de restrição Bcl I, Rsa I e Alu I. A ocorrência de Sarcocystis spp. foi de 17% (64/375) do total de amostras testadas pelo PCR. Entre os produtos cárneos avaliados, 5,6% (7/125) das amostras de filé mignon, 12,8% (16/125) de carne moída e 32,8% (41/125) de embutido colonial, foram positivas para presença do DNA do Sarcocystis spp. Entre estas amostras positivas, as espécies caracterizadas foram Sarcocystis hirsuta e Sarcocystis hominis com prevalências de 93,7% (60/64) e 6,3% (4/64), respectivamente. Considerando à relevância da sarcocistose na área da saúde pública, a ocorrência de S. hominis encontrado neste estudo, pode ser um fator de risco para a contaminação humana. Porém, a presença do DNA deste protozoário não significa necessariamente potencial de infecção aos humanos, pois cuidados nos processos de fabricação podem reduzir a viabilidade dos cistos.

ABSTRACT: The sarcocystosis is a worldwide spread disease and can affect birds, reptiles and many mammals, including man. The aim of this study was to detect the presence of Sarcocystis spp. and characterize the species found in 375 samples of meat products (filet mignon, ground beef and colonial salami). For this, we carried out the detection of the parasite by PCR for the amplification of the partial 18S rRNA gene and molecular characterization using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) with restriction enzymes Bcl I, Alu I and Rsa I. The occurrence of Sarcocystis spp. was 17% (64/375) of all samples. Among the meat products evaluated, the filet mignon samples were positive in 5.6% (7/125), the ground beef in 12.8% (16/125) and the colonial salami in 32.8% (41/125). Of the positive samples, Sarcocystis hirsuta and Sarcocystis hominis were detected, with prevalence of 93.7% (60/64) and 6.3% (4/64), respectively. Considering the relevance of sarcocystosis in public health, the occurrence of S. hominis found may be a risk factor to human contamination. However, the presence of DNA of this parasite does not necessarily mean potential of infection to humans, because good practices in the manufacturing processes can reduce the viability of the cysts.

RESUMO: Devido aos numerosos relatos de resistência anti-helmíntica de nematódeos gastrintestinais de ovinos a diferentes compostos, este estudo objetivou avaliar o status da resistência de nematódeos gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados ao monepantel no estado do Rio Grande do Sul. Quatro fazendas que apresentam sistema extensivo de criação e ausência de tratamento anti-helmíntico por 60 dias foram selecionados para o estudo. Animais que apresentassem as contagens de ovos por grama de fezes (OPG) ≥200 (sensibilidade de 50 OPG) um dia (D-1) antes do tratamento foram selecionados para o estudo e separados em dois grupos, um grupo controle e um grupo experimental tratado com monepantel. Fezes foram coletadas nove dias após o tratamento (D + 9) para realização do OPG e cultura fecal. O monepantel foi 100% eficaz apenas na propriedade 2. A eficácia encontrada nas propriedades 1, 3 e 4 foi 2,82%, 25,8% e 78,4%, respectivamente. Não houveram larvas viáveis após o tratamento nas propriedades 2, porém os gêneros Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia e Strongyloides demonstraram resistência a este nas demais propriedades. Este estudo mostra a presença de parasitas resistentes ao tratamento com monepantel, apontando para a importância de monitorar a sua eficácia em rebanhos de ovinos do Rio Grande do Sul, Brasil.

ABSTRACT: Given the numerous reports of anthelminthic resistance of sheep nematodes to different anthelmintic compounds, this study aimed to evaluate the resistance status of gastrointestinal nematodes from naturally infected sheep to monepantel in the state of Rio Grande do Sul. Four farms that present extensive raising system and absence of anthelmintic treatment for 60 days were selected for the study. Lambs that present counts of eggs per gram of feces (EPG) ≥200 (sensitivity of 50 EPG) one day (D-1) before the treatment were select for the study and randomly separated into two groups, a control group and an experimental group treated with monepantel. Feces were collected 9 days after the treatment (D+9) for EPG counts and fecal culture. The monepantel was 100% effective only on 2. The efficacy found on farm 1, 3, and 4 were 2.82%, 25.8%, and 78.4%, respectably. There were no viable larvae post-treatment at farm 2, but the genera Haemonchus, Trichostrongylus, Cooperia, and Strongyloides were resistant to it at the other farms. This study shows the presence of parasites resistant to the treatment with monepantel, pointing to the importance of monitoring its efficacy in sheep flocks of Rio Grande do Sul, Brazil.

RESUMO: A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.

ABSTRACT: Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.