RESUMO: Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.

ABSTRACT: A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.

Resumo: O presente estudo teve como objetivo descrever a ocorrência de otite parasitária causada por Rhabditis blumi em bovinos leiteiros de raça Gir de uma fazenda da região Norte do Brasil. Foram coletadas amostras de 42 bovinos por swab e lavado dos condutos auditivos externos (CAE). Ao exame clínico, 9,5% (4/42) dos bovinos apresentavam sintomatologia nervosa, como leve a moderada rotação da cabeça, apatia, flacidez dos lábios e ptose palpebral unilateral, alopecia das regiões da cabeça e cupim, causados pelo desconforto e prurido da região auricular, alteração na mastigação e acúmulo de alimento na cavidade oral. Adicionalmente, 71,4% (30/42) dos abovinos mostraram a presença do parasita no cerúmen dos condutos auditivos. À análise microscópica do material do saco conjuntival foi observado presença do parasita em 90% (9/10) dos bovinos avaliados. Os 30 bovinos positivos para Rhabditis spp. foram distribuídos aleatoriamente em três grupos de 10 animais: (G1) Bovinos controle, (G2) Bovinos tratados com ivermectina 1% pour on e (G3) Bovinos submetidos a lavado dos condutos auditivos externos (CAE). Cada tratamento foi repetido três vezes com intervalo de sete dias. No G1 os 10 bovinos mantiveram-se infectados durante todo o estudo. No G2 20% dos bovinos foram negativos após os dois primeiros tratamentos, porém, mostraram-se positivos na terceira avaliação. No G3 todos os bovinos mantiveram-se positivos, sendo observada apenas diminuição da carga parasitária. A identificação por análise molecular por meio de fragmentos amplificados da expansão D2/D3 do 28S rDNA confirmou a presença apenas da espécie Rhabditis blumi nos animais. Baseado nas observações clínicas, morfológicas e moleculares pode-se relatar o primeiro caso de R. blumi em bovinos da raça Gir no Estado do Pará, através da compra de animais oriundos de áreas onde a otite parasitária tem sido diagnosticada, principalmente de Minas Gerais, para formar animais mestiços (Gir x Holandês). Desta forma ressalta-se a importância do exame clínico prévio dos animais a serem transferidos para outras propriedades ou regiões. Este relato também parece ser o primeiro sobre a presença de R. blumi no saco conjuntival de bovinos. O tratamento com ivermectina no G2 não surtiu melhora clínica dos bovinos.

Abstract: This study aimed to describe the occurrence of parasitic otitis caused by Rhabditis blumi in dairy cattle of the Gir race from a farm in northern Brazil. Forty-two samples were collected from cattle by swab washed from the external auditory canal (EAC). On clinical examination, in 71.4% (30/42) of the cattle the parasite was found in the cerumen of the ear canal, along with alopecia of head and hump caused by discomfort and itching of the auricular region. At microscopic analysis of material from the conjunctival sac the parasite was found in 90% (9/10) of the evaluated cattle. In addition, 9.5% (4/42) of the cattle showed nervous symptoms, such as mild to moderate rotation of the head, apathy, flaccid lips and unilateral ptosis, change in chewing and food accumulation in the oral cavity. Thirty cattle positive for Rhabditis spp. were randomly divided into three groups of 10 animals each: (G1) Cattle Control, (G2) Cattle treated with ivermectin 1% pour-on, and (G3) Cattle undergoing wash of the external auditory canal (EAC). Each treatment was repeated three times with intervals of seven days. In G1, 10 cattle remained infected throughout the study. In G2, 20% of the cattle were negative after the first two treatments, however were positive at the third evaluation. In G3, all cattle remained positive, but with decrease in parasite load. Identification by molecular analysis of amplified fragments through the expansion D2/D3 28S rDNA confirmed the presence of only Rhabditis blumi. Based on clinical, morphologic and molecular examination, it appears to be the first report of the occurrence of R. blumi infection in Gir cattle in the State of Pará, due to the purchase of cattle from areas where parasitic otitis has been diagnosed, as from Minas Gerais, to produce crossbred animals (Gir x Holstein). This emphasizes the importance of prior clinical examination by the veterinary service in order to transfer only healthy animals to other properties or regions. This appears also to be the first report on R. blumi infection of the conjunctival sac in cattle. Treatment with ivermectin in G2 did not produce clinical improvement.

Clostridium perfringenstipo A tem sido considerado agente etiológico da síndrome do jejuno hemorrágico (SJH), que é uma doença que afeta comumente os rebanhos de gado. Embora este microrganismo seja considerado um importante enteropatógeno, a patogênese da SJH ainda não foi elucidada, e não havia sido reportada no Brasil até então. O alvo deste estudo foi descrever pela primeira vez a ocorrência da SJH causadapor C. perfringenstipo A, carreador do gene da toxina beta-2, em um zebuíno no Brasil.

Clostridium perfringenstype A has been incriminated as the etiologic agent in jejunal hemorrhage syndrome (JHS), which is a disease that affects dairy cattle. Although this microorganism is considered an important enteropathogen the pathogenesis of JHS is still not clear, and there have been no reports of its occurrence in Brazil so far. The aim of this study was to describe the occurrence of JHS by infection with a C. perfringenstype A strain carrying the beta-2 toxin gene in a zebu cow in Brazil, for the first time.

O presente estudo descreve a ocorrência de intoxicação por chumbo em bovinos e galinhas no Pará, Brasil. Em um lote composto de 80 bezerros de um rebanho leiteiro, 10 animais ficaram doentes e nove morreram, e um animal se recuperou após ser removido do piquete. Após a inspeção deste piquete, foi observada a presença de baterias de caminhões usados para armazenar a energia captada por painéis solares. Os sinais clínicos observados nos bezerros incluíam dificuldade respiratória, corrimento nasal, salivação excessiva, opacidade da córnea, pressão da cabeça contra objetos e decúbito. As galinhas tinham diminuída oviposição e os ovos produzidos eram com cascas malformadas ou tinham a casca mais fina. Os achados de necropsia e as alterações histopatológicas observadas nos bovinos eram de pouco significado, com exceção de um animal que mostrou leve astrocitose no córtex cerebral. Em uma das galinhas, na histopatologia renal observou-se leve necrose tubular aguda multifocal. As concentrações de chumbo médios nos fígados e rins dos bovinos eram 93,91mg/kg e 209,76mg/kg, respectivamente, e a concentração média no fígado de galinhas foi 105,02mg/ kg. Concluiu-se que a fonte de contaminação por chumbo nesses bezerros e galinhas eram placas de bateria de caminhão, aos quais os animais tiveram acesso na pastagem.

The present study describes the occurrence of lead poisoning in cattle and chickens in Pará, Brazil. In a lot composed of 80 calves from a dairy herd, 10 animals became sick and nine died, but one animal recovered after being removed from the paddock. Upon inspection of this paddock, the presence of truck batteries used to store energy captured by solar panels was found. The clinical signs observed in calves included difficult breathing, nasal discharge, excessive salivation, corneal opacity, pushing of the head against objects and recumbency. The chickens had decreased oviposition and produced eggs with thin or malformed shells. The necropsy findings of the cattle, as well as the histopathological changes observed, were of little significance except for one animal that showed mild astrocytosis histopathology in the cerebral cortex. In one of the chickens, renal histopathology showed mild multifocal acute tubular necrosis. The mean lead concentrations in the livers and kidneys of the cattle were 93.91mg/kg and 209.76mg/kg, respectively, and the mean concentration detected in chicken livers was 105.02mg/kg. It was concluded that the source of lead poisoning in these calves and chickens were the truck battery plates, which were within reach of the animals.

O objetivo do presente trabalho foi padronizar um modelo de infecção por Clostridium difficile (ICD) em hamsters sírios (Mesocricetus auratus). Para seleção dos isolados capazes de causar letalidade, cinco animais por grupo receberam uma dose de clindamicina (30mg kg-1) por gavagem. Após 48 horas, administraram-se 107 unidades formadoras de colônia (UFC), por animal, de quatro diferentes isolados toxigênicos de C. difficile. Selecinou-se um dos isolados capazes de causar diarreia e letalidade e administrou-se 4x102; 4x104; 4x106; 4x108UFC por animal, novamente com cinco hamsters por grupo. Em todas as diluições testadas, foi possível observar a ocorrência de diarreia e morte. A maior concentração testada (4x108UFC por animal) causou óbito de 100% dos hamsters do grupo. Todos os animais que vieram a óbito apresentaram tiflite hemorrágica, foram positivos para as toxinas A/B e foi possível isolar C. difficile do conteúdo intestinal, confirmando a reprodução experimental da doença. A dose letal para 50% da população foi estabelecida em 6,3x104UFC por animal. O modelo de indução de ICD em hamsters descritos no presente estudo passa a ser uma ferramenta valiosa para estudos relativos à patogenia, tratamento e controle dessa doença.

The aim of this study was to standardize a model of Clostridium difficile infection (CDI) in Syrian hamsters (Mesocricetus auratus). In order to evaluate strains capable of causing lethality, five hamsters per group received clindamycin (30mg kg-1) by gavage. After 48 hours, 107 colony forming units (CFU) of spores' solution of four strains were administered per animal. One strain capable of causing diarrhea and death was selected and administered at the following concentrations: 4x102; 4x104; 4x106; 4x108 CFU per animal. All dilutions tested were able to cause diarrhea and death. The highest concentration showed 100% of mortality. Post mortem evaluation revealed hemorrhagic typhlitis in all death animals. In addition, all intestinal contents were positive for A/B toxins, and toxigenic C. difficile strains were isolated, confirming the induction of infection by this microorganism. The dose lethal to 50% of the population was calculated: 6.3x104 CFU per animal. The standardized model of CDI in hamster is now available for studies on pathogenesis, treatment and control of this disease.

The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined for 13 antibiotics against Clostridium perfringens isolated from Brazilian piglets. The collection of isolates was performed in June to October 2010. All isolates were susceptible to amoxicillin and ceftiofur, whereas most were resistant to tetracycline and lincomycin. Avilamycin and narasin were more effective against isolates from non-diarrheic than from diarrheic piglets. The other antimicrobials were less active in need of high concentrations to inhibit the growth of the C. perfringens type A. These results suggest the need for further studies evaluating molecular factors related to the antimicrobial resistance of C. perfringens.

Clostridium difficile tem sido relatado como o principal causador de colite neonatal em suínos. Apesar da crescente importância deste agente, não há dados sobre infecções causadas por C. difficile em suínos no Brasil. O objetivo do presente estudo foi detectar as toxinas A/B e isolar C. difficile a partir de 60 amostras de fezes de leitões diarreicos ou apararentemente saudáveis, com no máximo sete dias de vida, e oriundos de 15 granjas diferentes. As toxinas A/B foram detectadas por ELISA e uma PCR multiplex foi utilizada para detecção dos genes responsáveis pela codificação das toxinas A, B e toxina binária. As toxinas A/B de C. difficile foram detectadas em dez amostras de fezes (16.7%). Dessas, sete eram de animais diarreicos e três de leitões aparentemente saudáveis. Foi possível isolar C. difficile em 12 das 60 (20%) amostras trabalhadas. Dessas, três estirpes eram não-toxigênicas (A-B-) e nove eram toxigênicas, sendo quatro caracterizadas como A+B+ e cinco como A-B+. O gene responsável pela codificação da toxina binária foi encontrado em 50% das estirpes isoladas, proporção superior ao relatado em estudos anteriores. Todas as estirpes não toxigênicas foram isoladas de animais não diarreicos. Os resultados encontrados sugerem a ocorrência de diarreia por C. difficile em granjas no Brasil.

Clostridium difficile has emerged as a major cause of neonatal colitis in piglets, displacing classic bacterial pathogens. However, there is no information regarding the distribution of this microorganism in pig farms in Brazil. In the present study, the presence of toxins A/B and of C. difficile strains in stool samples from 60 diarrheic or non-diarrheic newborn piglets (one to seven days old), from 15 different farms, was studied. The presence of toxins A/B was detected by ELISA and PCR was used to identify toxin A, toxin B and binary toxin gene in each isolated strain. C. difficile A/B toxins were detected in ten samples (16.7%). Of these, seven were from diarrheic and three were from non-diarrheic piglets. C. difficile was recovered from 12 out of 60 (20%) fecal samples. Of those, three strains were non-toxigenic (A-B-) and nine were toxigenic. Of the nine toxigenic strains, four were A+B+ strains and five were A-B+ strains. The presence of binary toxin observed in the present study was much higher (50%) than in previously reported studies. All three non-toxigenic strains were isolated from otherwise healthy piglets. The results suggest the occurrence of neonatal diarrhea by C. difficile in farms in Brazil.

Enterotoxemia, também chamada de doença do rim pulposo, doença que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela ação da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detecção e classificação dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutralização em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detecção e titulação dessa toxina in vitro e compará-lo ao fenômeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determinação da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titulação in vitro de diluições de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equação matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fenômeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equação matemática que apresenta uma correlação de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.

Enterotoxemia (also called pulpy kidney disease) is an enteric disease, that affect ruminants, produced by epsilon toxin from Clostridium perfringens type D, an anaerobic commonly isolated from soil and feces of healthy animals. The diagnostic is based on detection of this exotoxin in the intestinal content by soroneutralization in mice. Therefore, this study aimed to standardize a test for detection and titration of the toxin in vitro, and compare it with the phenomenon in vivo. A volume of epsilon toxin was titrated in mice and in some cell lines. After concluding the most sensitive cell line, were held in vitro titrations of dilutions from a toxin wich one had in vivo titer known. The results were grouped and a mathematical equation was developed. MDCK cell line showed that the phenomenon observed in vitro can be expressed by a mathematical equation wich shows a correlation of 98.33% with a minimum lethal dose determined in vivo. Therefore, the soroneutralization using MDCK allows a specific, sensitive, practical, fast, and doesn't requere use of animal titration of epsilon toxin.

Clostridium perfringens tipo D é o agente etiológico da enterotoxemia em ruminantes, causada pela toxina épsilon e caracterizada por edema cardíaco, pulmonar, renal e cerebral. Anticorpos monoclonais contra toxina épsilon de C. perfringens tipo D foram produzidos a partir da fusão da linhagen de mieloma P3-X63-Ag8 653 com células do baço de camundongos Balb/c imunizados com o toxóide épsilon. Seis linhagens de híbridos secretores de anticorpos monoclonais das classes e IgM e IgG foram estabelecidas.

Clostridium perfringens type D is the aetiological agent of enterotoxemia in ruminants. The disease is caused by epsilon toxin characterized by cardiac, pulmonary, kidney and brain edema. Monoclonal antibodies were produced by using myeloma cell line P3-X63-Ag8 653 fused with spleen cells from Balb/c mice, immunized with epsilon toxoid of C. perfringens type D. Six hybrids were established secreting monoclonal antibodies of the IgM class and IgG3 subclass.

O botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves e é caracterizado por um quadro de paralisia flácida. Neste trabalho, é descrito um surto de botulismo em perus, ocorrido no município de Santa Luzia, região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais. Os animais apresentavam incoordenação motora, paralisia flácida das patas, asas e pescoço. Em um intervalo de 24 horas, todos os 29 animais do plantel vieram a óbito. Na necropsia, observou-se a presença de larvas de mosca no inglúvio. Nos soros coletados, foi identificada a toxina botulínica tipo C pelo teste de soroneutralização em camundongos.

Botulism is an intoxication caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum. It affects mammals and birds, and is characterized by flaccid paralysis of the limbs. This report describes an outbreak of botulism in turkeys of various ages in the city of Santa Luzia, state of Minas Gerais, Brazil. The animals showed incoordination followed by flaccid paralysis involving the muscles of the legs, wings and neck. Within 24 hours, all 29 (100%) turkeys died. The post-mortem examination revealed the presence of fly larvae in the crop and the C. botulinum type C toxin was demonstrated in the sera of two affected animals by serum neutralization test.

Botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves. Neste trabalho é descrito um surto de botulismo em ruminantes, ocorrido em duas propriedades localizadas no município de Patos, no Estado da Paraíba, Brasil. Em uma das propriedades, de um total de 88 bovinos, 85 (96,6%) vieram a óbito. Na segunda, morreram 145 ovinos (96,7%), 233 caprinos (57,8%) e 30 bovinos (96,8%). Os animais acometidos apresentavam paralisia progressiva, dificuldade de locomoção, sialorréia e dispnéia. A morte ocorreu entre 24 e 48 horas após o início dos sinais, por parada cardio-respiratória. Nenhuma alteração significativa foi observada no exame post-mortem. O diagnóstico de botulismo foi confirmado pela demonstração das toxinas C e D no conteúdo intestinal e na cama-de-frango utilizada na alimentação dos animais, pela técnica de soroneutralização em camundongos.

Botulism is a poisoning caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum, that infects mammals and birds. This article reports an outbreak of botulism in two different flocks of ruminants at Paraíba, Brazil. In one, 85 out of 88 (96.6%) cattles died. In the other, 145 (96.7%) sheeps, 233 (57.8%) goats and 30 (96.8%) cattles died. Clinical signs were progressive paralysis, difficulties in moving, sialorrhoe and dyspnoe. Death occurred 24 to 48 hours after the beginning of clinic signs and at post-mortem examination no noteable changes were observed. Type C and D toxins were demonstrated in the intestinal contents and poultry litter by neutralization test in mice.

Botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves, caracterizando-se por um quadro de paralisia flácida. Neste trabalho, é descrito um caso de botulismo em ganso, ocorrido no município de Santa Luzia, região metropolitana de Belo Horizonte, no Estado de Minas Gerais. Ao exame clínico, o animal apresentava-se com um quadro de paralisia flácida dos músculos do pescoço, das pernas e asas, além de apresentar ainda desprendimento de penas. A necropsia não revelou lesões significativas. Foi colhido o soro do animal e submetido ao teste de soroneutralização em camundongo, que identificou a toxina de C. botulinum tipo C.

Botulism is an intoxication caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum, that affects mammals and birds, characterized by a flaceid paralysis. This report describes a case of botulism in a goose in Santa Luzia, Minas Gerais State, Brazil. Clinical examinations showed dropping feathers and flaccid paralysis involving the muscles of the wings, legs and neck. post-mortem examination showed no significant gross or macroscopic lesions C. botulinum type C toxin was demonstrated in the serum of the affected animal through serum neutralization test in mice.