RESUMO Proposição: O objetivo deste trabalho foi avaliar o padrão de expressão do complexo principal de histocompatibilidade (CPH) classe II in vitro em células do epitélio pigmentado da retina (EPR) em humanos, em culturas de explantes tratados com gama interferon (IFN-γ) ein vivo em EPR de coelhos após injeção subretiniana de IFN-γ. Métodos: A Expressão da Classe 11 foi estudada no EPR por imunohistoquímica em culturas de explantes de 6 olhos humanos adultos (todos acima de 70 anos), 4 olhos humanos fetais, e em 12 olhos de coelho albino. Os explantes humanos foram estimulados com IFN-g(50 U/ml) por 72 horas, e em seguida submetidos a imunocoloração para classe II. Os olhos de coelhos, in vivo, foram submetidos à injeção subretiniana de 500U de IFN-γ e analisados por imunohistoquímica após 3 dias. Resultados: Obteve-se um padrão heterogêneo de expressão da classe II, presente no EPR estimulado com IFN-γ em ambos os experimentos in vivo e in vitro. Em olhos humanos idosos a porcentagem de célula s positivas classe II foi mais alta na periferia do que no polo posterior (região macular) (P<0,01), entretanto não foi observada tal diferença em olhos fetais. Diferenças regionais na Classe II foram observadas em olhos humanos idosos mas não em olhos humanos fetais. Conclusão: Este estudo estabelece evidência de heterogeneidade funcional do FPR e é sustentado por estudos prévios demonstrando heterogeneidade fenotípica.

SUMMARY Pupose: To evaluate the pattern of expression of MHC Class II in vitro in human retinal pigment epithelium (RPE) explant cultures treated with interferon-gamma (IFN-γ), and in vivo in rabbit RPE after subretinal injection of IFN-γ. Methods: Class II expression was studied on RPE by immunohistochemistry in explant cultures of 6 adult human eyes (all over 70 years), 4 fetal human eyes, and in 12 albino rabbit eyes. The human explants were stimulated with IFN-γ (50 U/ml) for 72 hours prior to immunostaining for Class II. The rabbit eyes were injected in vivo subretinally with 500 U of IFN-γ and analyzed immunohistochemically 3 days later. Results: A heterogeneous pattern of Class II expression was present on IFN-γ stimulated RPE in both in vivo and in vitro experiments. In aged human eyes the percent of Class-II positive cells was higher in the periphery than the posterior pole (macular region) (P<0.01), however there was no such difference in the fetal eyes. Conclusion: RPE cells are heterogeneous in their expression of HLA Class II after stimulation with IFN-γ in both in vitro and in vivo studies. Regional differences in Class II are seen in aged human eyes but not in fetal human eyes. This study provides evidence of functional heterogeneity of RPE and it is supportive of previous studies demonstrating phenotypic RPE heterogeneity.

RESUMO Proposição: Determinar o efeito do fator de necrose tumoral (TNF-α) e do fator de transformação do crescimento beta 2 (TGF-β2) na migração e proliferação do epitélio pigmentado da retina (EPR) em um sistema simplificado de cicatrização in vitro. Métodos: Culturas confluentes e subconfluentes de células do EPR humano foram desnudadas centralmente em 2 mm de largura com uma lâmina cortante. As culturas foram observadas na presença de TGF-β2 (10 ng/ml), TNF-α (10 ng/ml) ou meio de cultura para células (DMEM), após 24, 48, 72, e 96 horas. A migração foi acessada por contagem do número de células na região desnuda. A proliferação foi acessada pela contagem da porcentagem de células positivas por imunohistoquímica para o antígeno Ki-67 (relacionado à proliferação celular) na região desnuda e na margem da lesão. Resultados: As culturas controles apresentaram cicatrização após 72 horas em culturas confluentes e após 96 horas em culturas subconfluentes. O fechamento ocorreu principalmente por migração embora a proliferação estivesse aumentada após 24 horas nas células migrantes e na margem da lesão. O TNF-α estimulou a cicatrização da ferida primariamente pelo aumento da migração após 24 e 48 horas. O TGF-β2 inibiu a cicatrização por meio da inibição da migração e proliferação. O efeito do TNF-α foi mais intenso em culturas subconfluentes, e o efeito do TGF-β2 em culturas confluentes. Conclusão: A cicatrização da ferida ocorreu principalmente pela migração do EPR, embora a proliferação estivesse envolvida. A cicatrização da ferida foi estimulada pelo TNF-α e inibida pelo TGF-β2.

SUMMARY Purpose: To determine the effects of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and transforming growth factor beta2 (TGF-β2) on retinal pigment epithelium (RPE) migration and proliferation in a simplified wound healing system in vitro. Methods: Confluent and subconfluent human RPE cultures were centrally denuded and, the cultures were observed in the presence of TGF-β2 (10 ng/ml), TNF-α (10 ng/ml) or media alone (DMEM), after 24, 48, 72 and 96 hours. The migration was evaluated by counting the number of cells in the denuded area. The proliferation was assessed in situ by counting the percentage of positive cells by immunohistochemistry for the proliferation-related antigen Ki-67 in the denuded region and at the edge of the wound. Results: The control confluent cultures closed in approximately 72 hours, while the subconfluent cultures closed in approximately 96 hours. The closure occurred predominantly by migration although proliferation was increased at 24 hours both in the migrating cells and at the wound edge. TNF-α stimulated wound closure primarily by increasing migration in 24 and 48 hours. TGF-β2 decreased wound closure by inhibiting proliferation in 72 and 96 hours and migration in 48, 72 and 96 hours. The TNF-α effect was more intense in presence of subconfluent cultures, and the TGF-β2 effect was more intense in confluent cultures. Conclusion: Healing of a denuded zone in RPE cultures was related predominantly to cellular by RPE migration although proliferation was also involved. RPE wound closure was stimulated by TNF-α and inhibited by TGF-β2.

RESUMO Perfluorotributilamine (PFTA) é um importante adjunto na cirurgia vítrea. Alterações do eletrorretinograma em coelhos tem sido reportadas após PFTA ser deixado na cavidade vítrea por duas a quatro semanas. Neste estudo nós nos propusemos a determinar se estas alterações são reversíveis após a remoção do mesmo. Dezessete coelhos submeteram-se à vitrectomia e PFT A foi injetado em 13 olhos. Em oito olhos o PFT A foi removido após 12 dias (Grupo 1), em 5 olhos PFT A foi mantido intraocular até o dia da enucleação, que ocorreu 35 dias após a injeção (Grupo 2) e 4 olhos submeteram-se à cirurgia sem utilização de PFTA (Grupo 3). Nenhuma alteração clínica foi observada por oftalmoscopia indireta em nenhum coelho. Eletrorretinograma foi registrado em 12 coelhos antes da cirurgia (dia 0) e nos dias 9, 19, 25 e 35. Nós observamos uma diminuição da amplitude da onda b na estimulação escotópica 8x e 16x em todos os grupos, sendo mais severa no grupo 2. A remoção do PFTA resulta em recuperação da amplitude da onda b para valores próximos do valor préoperatório. Em coelhos, as alterações funcionais induzidas pela substituição temporária do PFTA mostraram ser reversíveis.

SUMMARY Intravitreal instillation of perfluorotributylamine (PFTA) is an import adjunct in vitrectomy surgery. Electroretinogram changes in rabbits have been reported after PFTA was left in the vitreous cavity for two to four weeks. ln the study described herein, we sought to determine whether these changes are reversible after PFTA is removed. Seventeen rabbits underwent vitrectomy after which PFTA was instilled in 13 eyes. ln 8 eyes the PFTA was removed after 12 days (Group J), and in 5 eyes the PFTA was left in place until enucleation (Group 2); four eyes underwent surgery without instillation of PFTA (Group 3). No clinical changes were observed by indirect Ophthalmoscopy in any of the rabbits. ERGs were serially recorded in 12 rabbits before surgery (day O) and on days 9, 19, 25 and 35. We observed a decreased amplitude of the b- wave in all groups, but this was greatest in the first Groups 1 and 2. The removal of PFTA resulted in a recovery of b- wave amplitude to near baseline levels. It thus appears that, the functional changes induced by temporary placement of PFTA within the vitreous are reversible.