O objetivo foi a investigação do local de aplicação do derivado proteico purificado (PPD) bovino, empregado no teste imunoalérgico da tuberculose, em 15 ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com Mycobacterium bovis AN5. A partir da melhor resposta obtida na fase de identificação da região corpórea, avaliou-se a dose de PPD bovino a ser aplicada. Decorridos 60 dias da sensibilização, o PPD bovino foi aplicado em cinco distintas regiões corpóreas (cervical média, torácica dorsal, abdominal dorsal, prega da cauda e face medial proximal do membro pélvico - face interna da coxa) com a mensuração da espessura da dobra de pele e da reação através de cutímetro de mola, nos momentos antes (0h) e após aplicação (12h, 24h, 48h, 72h e 96h). A análise dos resultados obtidos foi significante, em ordem decrescente, para as regiões: torácica dorsal, cervical média e abdominal dorsal às 48 e 72h após aplicação do PPD bovino. Elegeu-se a região torácica dorsal como melhor local de aplicação. Recomenda-se que a leitura da reação tuberculínica em ovinos deve ser efetuada às 72h da aplicação do PPD, utilizando-se a dose de 0,1 mL.

This study was aimed to investigate the best area for application of bovine purified protein derivative (PPD) for the imunoallergic test for tuberculosis, in 15 sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with Mycobacterium bovis AN5. Based on the best response obtained in the previous phase, the dose of bovine PPD to be applied was evaluated. After 60 days of sensitization, the bovine PPD was applied at 5 distinct body regions to measure the skinfold thickness and reaction, at moments before (0h) and after injection (12h, 24h, 48h, 72h and 96h), with skinfold calipers. Statistical analysis showed significance for the best site of application: the dorsal thoracic region, followed by the middle cervical and dorsal abdominal, at 48 and 72 hours after injection of bovine PPD. The thoracic region was chosen as the best site for application. It is recommended that the reading of the tuberculin response in sheep should be made 72h after the PPD application, using a dose of 0.1 mL.

RESUMO As formigas têm uma distribuição mundial e representam importante papel no ecossistema. Algumas espécies são consideradas pragas para a agricultura e um risco potencial à vida humana e à saúde pública veiculando mecanicamente agentes patogênicos. Formigas como Paratrechina longicornis e Camponotus spp. têm sido encontradas em ambientes hospitalares. O foco do presente estudo foi a identificação de micobactérias em 138 amostras de formigas (137 Paratrechina longicornis e apenas uma Camponotus sp.), que tiveram acesso a áreas de laboratórios de diagnóstico de tuberculose. Essas formigas foram suspensas em solução salina estéril que foi semeada em meios de Petragnani e Stonebrink, incubadas a 37º C por até 90 dias e as estirpes de micobactérias isoladas foram identificadas pelas técnicas clássicas como micobactérias ambientais (sendo 1 Mycobacterium smegmatis, 2 Mycobacterium fortuitum peregrinum e 1 Mycobacterium tuberculosis). Esses resultados mostram que as formigas podem também se constituir vetores de dispersão de micobactérias em ambientes de risco, reforçando sua importância em saúde pública.

ABSTRACT Ants are found worldwide playing an important environmental role. Some species are considered as agricultural pests and potential risk to human life and public health acting as pathogens carriers. Ants as Paratrechina longicornis and Camponotus spp. have been found inside hospitals. The aim of this study was the research of mycobacteria in 138 samples of ants (137 Paratrechina longicornis and only one Camponotus spp.) which got into the laboratories of tuberculosis diagnosis. These ants were suspended in sterile saline solution and inoculated into Petragnani and Stonebrink media, incubated at 37° C until 90 days and the isolates were identified as environmental mycobacteria (1 Mycobacterium fortuitum peregrinum, 1 Mycobacterium smegmatis) and 1 Mycobacterium tuberculosis complex. These results showed that ants should also act as mechanical vectors of mycobacteria dissemination in risk environments, reinforcing their significance in public health.

RESUMO A tuberculose bovina é uma doença crônica causada por Mycobacterium bovis, caracterizada por desordens respiratórias, emaciação e linfadenomegalia. Em raros casos, sinais neurológicos associados com lesões granulomatosas no sistema nervoso central são observados. O Brasil iniciou o Programa Nacional para Controle e Erradicação dessa doença em 2001, tornando a notificação compulsória. Um caso de meningomieloencefalite tuberculosa é relatado em uma bezerra leiteira com um ano de idade, que apresentou sinais neurológicos (irritabilidade e agressividade, fraqueza e tontura, decúbito) que progrediram para morte em três dias. A medula espinhal apresentou meningomielite granulomatosa, com células gigantes tipo Langhans nas meninges e manguito perivascular mononuclear na substância branca e cinzenta. Havia alguns granulomas no córtex cerebral, com área central de necrose circundada por infiltrado mononuclear. No neurópilo observou-se manguito perivascular mononuclear, satelitose, hiperemia e severa meningite granulomatosa com células gigantes tipo Langhans. Amostras de cérebro foram inoculadas nos meios de cultivo Petragnani e Stonebrink e M. bovis foi isolado e identificado por PCR com primers JB21-JB22. Considerando as 2.888 amostras de SNC bovino enviadas para a vigilância epidemiológica de síndrome neurológica e negativas para raiva, este foi o único caso (0,035%) de meningomieloencefalite tuberculosa diagnosticado pelo Laboratório de Anatomia Patológica do Instituto Biológico no período de 2004 a 2008. Embora a meningomieloencefalite tuberculosa não seja tão freqüente, é importante incluir a infecção por M. bovis no diagnóstico diferencial de lesões do sistema nervoso central de bovinos. De acordo com a legislação brasileira, medidas sanitárias no rebanho infectado (teste e abate) devem ser adotadas.

ABSTRACT Bovine tuberculosis is a chronic disease caused by Mycobacterium bovis, characterized by respiratory disorders, emaciation and lymphadenomegaly. Neurological signs associated with granulomatous lesions in the central nervous system are rarely seen. In Brazil, the National Program for Control and Eradication of bovine tuberculosis has begun in 2001, and notification of the disease is compulsory. A case of tuberculous meningomyeloencephalitis is reported in a dairy calf less than one year old presenting neurological signs (irritability, aggressiveness, weakness, dizziness and recumbency) which progressed to death in three days. Brain, spinal cord, and lung tissue samples were examined histopathologically. The spinal cord showed granulomatous meningomyelitis with Langhans giant cells in the meninges and perivascular mononuclear cuffing in the white and gray matter. There were a few granulomas in the cerebral cortex with a central area of necrosis surrounded by mononuclear infiltrate. Mononuclear perivascular cuffing, satellitosis, hyperemia, and severe granulomatous meningitis with Langhans giant cells were observed in the neuropile. Samples of brain were inoculated into Petragnani and Stonebrink media. M. bovis was isolated and identified by PCR with JB21-JB22 primers. Considering the 2,888 samples of bovine CNS sent for surveillance of neurological syndrome and negative for Rabies, this was the only case of tuberculous meningomyeloencephalitis (0,035%) diagnosed from 2004 to 2008 by the Laboratory of Anatomopathology of Instituto Biológico. Although tuberculous meningomyeloencephalitis is not so frequent, it’s important to diagnose M. bovis as a causative agent of bovine neurological disorders. In accordance with Brazilian regulations, sanitary measures in the infected herd (test-and-slaughter) should be adopted.

As estratégias de combate à brucelose bovina são bastante conhecidas e, até o momento, os resultados são divergentes. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) implementou, em 2001, o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose. Conhecer a situação epidemiológica da brucelose no início de um programa de controle permite: 1 - escolher as melhores estratégias de controle em função da frequência e padrão de distribuição da doença na população e 2 - acompanhar o programa com a finalidade de promover correções e evitar o desperdício de tempo e de recursos. Em razão disso, é necessário realizar estudos para dar suporte à escolha das melhores estratégias para os vários estados e regiões brasileiras e criar um mecanismo racional de verificação da efetividade das ações implementadas. Para tanto, o MAPA estabeleceu um Termo de Cooperação Técnica com a Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de São Paulo e envolveu também a Faculdade de Agronomia e Veterinária da Universidade de Brasília. Até o momento, foram concluídos os estudos de 15 unidades federativas, cujos resultados são apresentados nos artigos subsequentes. Além disso, há um 16º artigo que explora o impacto da vacinação de bezerras com a B19 na redução da prevalência da brucelose.

Although strategies for controlling and eradicating of bovine brucellosis are well known, the achievements vary widely. In 2001, the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock, and Food Supply (MAPA) started a new National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (NPCEBT). In the beginning of a brucellosis control program, it is of utmost importance to gain insights into the epidemiological status of the disease in order to: (1) determine the sanitary measures according to the frequency and distribution patterns of the disease in the population; (2) monitor the development of the program and decide when to make adjustments, avoiding the waist of time and resources. As the epidemiological status of bovine brucellosis is not adequately known in Brazil, there was a case for undertaking cross-sectional studies targeted at identifying the best strategies for each state and region, as well as providing a basis for future appraisal of the NPCEBT. For this purpose, MAPA established a collaborative project with FMVZ-Universidade de São Paulo, which also included FAV-Universidade de Brasília. So far, 15 states completed the survey, whose results are described in the following papers. In addition, it is presented a paper that deals with modeling the impact of vaccination of heifers with strain 19 upon the reduction of brucellosis prevalence.

RESUMO Uma cabra da raça Saanem, com 3 anos, foi atendida no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, com histórico de emagrecimento progressivo, com doença respiratória não responsiva a antibioticoterapia convencional. O animal apresentava perda de peso, aumento de linfonodo submandibular esquerdo e sintomas de broncopneumonia. Tendo sido considerado positivo no teste cervical comparativo foi sacrificado e à necropsia foram observadas lesões sugestivas de tuberculose nos linfonodos submandibulares e mesentéricos, pulmão e baço. Nos exames laboratoriais houve crescimento, aos 32 dias, de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR), no meio de cultura de Stonebrink, e a estirpe isolada foi identificada no PCR como sendo Mycobacterium bovis. A pesquisa de Corynebacterium sp. foi negativa. Na histopatologia, as lesões examinadas apresentavam características dos granulomas típicos. Usandose coloração para BAAR foi possível observação de bacilos no centro de um granuloma, sugestivo de Mycobacterium spp. Casos de tuberculose em caprinos têm sido considerados raros no Brasil.

ABSTRACT A 3-year-old Saanen-breed was examined at the Veterinary Hospital of the College of Veterinary Medicine and Animal Husbandry of the University of São Paulo, with a history of progressive emaciation and respiratory disease which did not respond to conventional antibiotic therapy. The animal was underweight, had swelling of the left submandibular lymph node and signs of bronchopneumonia. As it was reactor for comparative cervical test, the goat was slaughtered and at necropsy tuberculosis-like lesions were found in its submandibular and mesenteric lymph nodes, lungs and spleen. Acid-fast bacilli growth occurred within 32 days in Stonebrink media culture and the isolate was identified by PCR as M.bovis. Diagnostic test for Corynebacterium sp. was negative. Histopathologic examination showed characteristics of tuberculosis granulomas. When the acid-fast stain was employed in lesions smears, it was possible to observe bacilli in the middle of a granuloma, suggesting Mycobacterium spp. Tuberculosis cases in goats have been considered rare in Brazil.

RESUMO A tuberculose é uma das principais preocupações da Organização Mundial da Saúde, especialmente após o surgimento da AIDS e do aumento da multidroga resistência, sendo considerada a principal causa de morte por um único agente. Além do Mycobaterium tuberculosis, principal responsável pela doença em humanos, outra manifestação de importância epidemiológica é a infecção causada pelo Mycobaterium bovis, devido à transmissão ao homem, especialmente, pela ingestão de alimentos contaminados, e à escassez de dados relacionados a sua prevalência na população. Em várias partes do mundo existem programas de controle da doença nos bovinos, fundamentados na identificação por teste tuberculínico e na eliminação dos animais positivos. As lesões encontradas em exames post-mortem podem ser confirmadas através do isolamento e identificação do agente, porém esse procedimento pode demandar meses para a sua conclusão, razão pela qual, para reduzir o tempo de diagnóstico, novos métodos moleculares são propostos. Para proporcionar uma visão atualizada sobre os esforços no combate da tuberculose bovina, sobre os resultados das campanhas de controle e erradicação e sobre os métodos recentes disponíveis para diagnóstico da tuberculose bovina, como o PCR, neste trabalho é apresentada uma revisão bibliográfica, ressaltando as vantagens e dificuldades para o emprego dos ensaios para diagnóstico e a possibilidade de sua utilização em escala. Concluímos que apesar dos avanços alcançados, ainda não se tem disponível, para a rotina laboratorial, um ensaio sensível, reprodutível e rápido para o diagnóstico da tuberculose em bovinos, sendo essencial esforço e investimento em pesquisas para a solução desse ponto crítico no combate à enfermidade.

ABSTRACT Tuberculosis is major concern for WHO especially after the onset of the AIDS epidemic and the increase of multidrug resistance, and is considered the main cause of death by a single agent. In addition to Mycobaterium tuberculosis tuberculosis, the main cause of the disease in humans, the infection by Mycobaterium bovis is also of epidemiological importance, as it can be transmitted to humans, especially by ingestion of contaminated foods, and the risk is heightened due to the lack of information related to population prevalence. In several parts of world, there are programs to control the disease in cattle based on the identification of positive animals using tuberculin tests, followed by slaughtering. The lesions identified by post-mortem exams can be confirmed through isolation and identification of the agent, but it takes months to conclude. New molecular methods have been proposed to reduce the time needed for diagnosis down to a few days. With a view to providing a picture of these new diagnostic methodologies for bovine tuberculosis, such as the PCR assay, these authors reviewed the results of studies reporting their advantages and shortcomings as well as the prospects for their large-scale application. Despite the advances in the development of viable methods there is yet no sensitive, reproducible and rapid method and, therefore, it is necessary to undertake research to overcome these problems.

Relata-se, pela primeira vez no Brasil, um caso de dermatite decorrente de infecção por micobactéria atípica do complexo Mycobacterium fortuitum-peregrinum, em espécie felina, sem raça definida, fêmea, com cinco anos de idade. Há oito meses, evoluía com lesões maculares equimóticas, nodulares, erosadas, ulceradas, acompanhadas de fístulas exsudativas, com intenso prurido e algia. Evidenciou-se a presença de micobactéria do complexo Mycobacterium fortuitum-peregrinum (grupo IV de Runyon ) identificada após evidenciação histopatológica, cultivo bacteriano e por testes bioquímicos. Após dois meses de terapia sistêmica com enrofloxacina (5mg/kg/Bid/VO) e tópica (triclosan e rifamicina) houve involução das lesões, com efeitos colaterais discretos.

A case of dermatitis caused by atypical mycobateria of Mycobacterium fortuitum peregrinum complex was observed for the first time in Brazil. A five-year-old female mixed breed cat had a dermatitis process which had started eight months before. Lesions were characterized by macules, nodules, erosions, ulcers and exsudative fistulas, with intensive pruritus and pain. It had failed to respond to clinical treatment and surgical excision. The diagnosis was based on history, physical and dermatologic examination and complementary tests (cytologic, bacterioscopic, bacterial culture, histopathological, hemathological, ultrasonographic, radiographic and electrocardiographic). The presence of mycobacteria of Mycobacterium fortuitum-peregrinum complex (group IV of Runyon) was observed and identified after histopathological evidence, bacterial culture and biochemical tests. After two months of systemic therapy with enrofloxacin (5mg/kg, orally/twice a day) and topic treatment with triclosan and rifamicin, rapid improvement of the clinical appearance of the lesions were observed with low incidence of side-effects.

Diagnosis of the Mycobacterium tuberculosis complex by direct PCR of mediastinal lymphnode DNA and microbiological tests were compared in cattle suspicious of bearing tuberculous-like lesions detected during slaughter. The PCR procedure applied on DNA samples (n=54) obtained by adding alpha -casein into the thiocyanate extraction mix was positive in 70% of the samples. PCR confirmed the identification of 23 samples (100%) that grew in culture, 9 samples (60%) that failed to grow in culture, plus 6 (37.5%) samples that resulted in growth of bacterial contaminants. Genotyping by IS6110-RFLP and DR-spoligotyping analysis of seven samples revealed the presence of several polimorphisms. Seven of the isolates contained multiple copies of IS6110, thus defining the existence of five singular genotypes.