RESUMO: Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático competitivo (cELISA) in house para a determinação das concentrações plasmáticas do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) total para a espécie bovina, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase. O IGF-I foi extraído das proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGFBP), utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método com incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I e outro sem incubação prévia (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método sem incubação prévia, com a sensibilização da placa com 0,25μg/poço de anti-IgG de coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou um limite inferior de detecção de 50ng/mL, uma correlação de 0,945 entre doses quando comparado a uma metodologia comercial. Os coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I.

ABSTRACT: This study aimed to standardize an in house competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) to determine plasma concentrations of total insulin-like growth factor I (IGF-I) for the bovine specie using the amplification biotin-streptavidin peroxidase system. The IGF-I was extracted from insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) using the acidified glycine buffer followed by the pH neutralization with sodium hydroxide. The microplates were coated with anti-rabbit IgG, thereafter the measurements were carried out using two approaches, one with a prior incubation of samples with the anti-h-IGF-I antibody and another without previous incubation (simultaneous addition of IGF-I and biotinylated sample). The best results were obtained using the method without the prior incubation, using the following combination of reagents: microplates were coated with 0.25μg/well of anti-rabbit IgG, the specific antibody at a dilution of 1:250,000 and 0.06ng/well of biotinylated IGF-I. The in house methodology showed sensitivity of 50ng/ml, a correlation between doses of 0.945 when compared to a commercial method. In addition, after 33 assays (quantification of 1114 samples) the proposed methodology presented a good precision, with inter-assay variation coefficients of 12.94% and 20.71% for the high and low controls, respectively. Finally, we concluded that ELISA method for the quantification of total IGF-I using the system biotin-streptavidin-peroxidase amplification in a competitive assay is established and is presented as a useful tool for studies aimed at monitoring the IGF-I concentrations.

The incidence of estrus in nulliparous Santa Inês (n = 16), Texel (n = 16) and Ile de France (n = 15) ewes fed two levels of crude protein (CP, 12 or 16%) was monitored from July 2005 to December 2006, and seasonality in the Santa Inês breed in the south of Brazil was characterized. The solar radiation data were recorded daily, and samples of blood were collected biweekly for determination of the plasma concentration of progesterone in Santa Inês lambs at, on average, 11±1 months of age. The female Santa Inês lambs, in the experimental period, stayed among teaser rams with a powdered-dye-ink mixture placed on their chest to mark the females that accepted to be mounted. Santa Inês ewes did not manifest estrus in the first fortnight of November and in December 2005, nor in the last fortnight of December 2006. Estrus activity was not observed on any of the three breeds in October 2006. Breeds differed at the level of 12% CP. Santa Inês and Ile de France females did not differ as for the probability estrus manifestation and both presented higher probabilities then Texel. When the effect of 12 or 16% CP on each breed was evaluated separately, it was verified that levels of 12 or 16% of crude protein did not change the probability of estrus manifestation in any of the studied breeds. The concentration of plasma progesterone in Santa Inês ewes during the spring of 2005 and 2006 indicated that there is difference between 12% CP (0.68±1.32 ng/mL) and 16% CP (1.28±1.99 ng/mL) and between the years 2005 (0.39±0.78 ng/mL) and 2006 (1.47±2.08 ng/mL), demonstrating the anestrous seasonality of Santa Inês in South Brazil.

Exercício pode ser definido como um "estressor normal" estimulando as funções corpóreas. Alguns trabalhos sugerem o lactato como estimulador da secreção de cortisol , enquanto que a creatinina varia em função da quantidade de tecido muscular. No presente estudo é investigada a relação entre creatinina, lactato e cortisol séricos em cavalos em treinamento. Vinte e três potras Puro Sangue Inglês foram utilizadas, divididas em 3 grupos de acordo com a idade e protocolo de treinamento: G1, 1-2 anos de idade (n=7) mantidas a pasto, G2, 2-3 anos (n=9) começando a ser montadas e G3, 3-4 anos (n=7) competindo no Jockey Club. Amostras de sangue foram colhidas semanalmente durante 6 meses próximo às 13 h, enquanto os animais descansavam. O cortisol foi quantificado através de kits comerciais (Coat-a Count®) e a creatinina sérica e o lactato foram avaliados através de um auto-analyzer, usando reagentes comerciais. Os resultados foram avaliados utilizando testes estatísticos não-paramétricos com nível de significância P<0,05. As concentrações de cortisol foram 149ª + 7, 126b + 6, e 101c + 5 nmol/l, as concentrações de lactato foram 2,1ª + 0,1, 2,0ª + 0,1, e 1,75b + 0,1 mmol/l, e as concentrações de creatinina foram 125ª + 2, 132ª + 2 145b + 3 mimol/l nos grupos G1, G2 e G3, respectivamente. Somente o G2 apresentou uma pequena, mas significante correlação positiva do cortisol com o lactato e correlação negativa do cortisol com a concentração de creatinina. Foi possível concluir que o cortisol, lactato e a creatinina variaram em função da idade e do condicionamento físico. A diminuição do cortisol observada nos animais do G2, reflete o melhor condicionamento físico adquirido durante o treinamento, que pode ser inferido através do aumento da concentração de creatinina, relacionada a quantidade de massa muscular. A diminuição do cortisol observada nos animais do G3 pode também ser conseqüência do aumento da massa muscular em função do condicionamento, que repercutiu no aumento da creatinina, ou mudanças nos tipos de fibras musculares durante o treinamento.

Exercise can be defined as "normal stress" stimulating body functions. Some reports suggest lactate as a stimulator of cortisol levels, while creatinine varies according to the amount of muscle tissue. In the present study we investigated the relationship between creatinine, serum lactate concentration and cortisol levels in training horses. Twenty-three Thoroughbred fillies were used, divided into 3 groups according to age and training protocol: G1, 1-2 years of age (N=7) on pasture, G2, 2-3 years (N=9) starting to be mounted, and G3, 3-4 years (N=7) racing at the Jockey Club. Blood samples were collected weekly during a six-month period at about 1:00 p.m. while the animals were resting. Cortisol was quantified with a commercial kit (Coat-a Count®) and serum creatinine and lactate were evaluated with an autoanalyzer with commercial reagents. Data were evaluated using non-parametric statistical tests, with the level of significance set at P< 0.05. Cortisol concentrations were 149ª + 7, 126b + 6, and 101c + 5 nmol/l, lactate concentrations were 2.1ª + 0.1, 2.0ª + 0.1, and 1.75b + 0.1 mmol/l, and creatinine concentrations were 125ª + 2, 132ª + 2 145b + 3 mumol/l in G1, G2 and G3, respectively. Only G2 showed a low but significant positive correlation of cortisol with lactate and a negative correlation of cortisol with creatinine levels. It was possible to conclude that cortisol, lactate and creatinine varied during horse aging and physical conditioning. The decrease of cortisol concentration (G2) suggests that the better physical condition acquired during training led to the increase of creatinine concentration, possibly related to muscle mass. The lower cortisol and lactate concentrations observed in G3 animals may have been due to greater muscle mass inducing an increase in creatinine concentrations or changes in muscle fiber type during training.

O tapir ou anta, descrito como o maior mamífero terrestre brasileiro, pertence à ordem Perissodactila, subordem Hippomorfa, superfamília Tapiroidea e família Tapiridae. Na floresta úmida está envolvido com a dispersão de sementes em função das características do tubo digestivo. O acompanhamento do ciclo estral permite avaliar e compreender a atividade reprodutiva nas espécies animais. Nos animais silvestres, o estresse da contenção pode interferir na própria ciclicidade gonadal, uma das alternativas é o acompanhamento dos hormônios gonadais nas excretas. Buscamos neste trabalho o acompanhamento periódico da atividade gonadal através da quantificação de progesterona no leite. Utilizamos uma fêmea recém-parida no Zoológico de Araçatuba, da qual colhemos leite, esfregaço vaginal e temperatura retal. A progesterona foi quantificada por radioimunoensaio de fase sólida (Coat-a-Count, DPC®) com curva padrão fornecida pela F.A.O. O ensaio mostrou sensibilidade de 1,25 nmol/l com coeficiente de variação intra-ensaio de 15,36%. Durante a fase de lactação, a fêmea não apresentou níveis detectáveis de progesterona por 158 dias (de novembro a abril). O primeiro pico de produção foi de 2,3 nmol/l e apresentou duração de 5 dias. O segundo pico de 3,54 nmol/l teve uma duração de 23 dias. Setenta e quatro dias após o aparecimento da progesterona no leite a lactação cessou. Podemos concluir que a fêmea de tapir apresentou um período de anestro lactacional de aproximadamente 5 meses e voltou a ciclar no outono (abril) sugerindo pouca influência do fotoperíodo. A quantificação da progesterona no leite mostrou-se útil para o acompanhamento do ciclo estral na espécie, porém a variação da citologia vaginal e temperatura retal não apresentaram correlação com os níveis hormonais.

The lowland tapir is the biggest Brazilian terrestrial mammal, which belongs to the order Perissodactyla, suborder Hippomorpha, superfamily Tapiroidea and a member of the family Tapiridae. At tropical forest the tapir is involved with seed dispersal. The knowledge of this wild animal reproductive cycle is one way to help its preservation. The stress due to restrain of captive or free-ranging wild animal in order to sample collection limits endocrine study once it can be hazard for the estrous cycle. One possibility is to quantify gonadal hormones at the excreta. Progesterone milk levels were studied in a tapir housed at the Araçatuba Zoo, in São Paulo, Brazil. Milk samples, vaginal cytology and rectal temperature were collected during lactation. The progesterone was quantified by radioimmunoassay solid phase (Coat-a-Count, DPC®). The standard was supplied by CENA-FAO and the assay showed sensitivity of 1.25 nmol/L with intra-assay variation of 15.36%. During most of the lactation (November to June) the female showed no detectable levels of progesterone. After 158 days (from November to April) it was detected the first progesterone peak with 2.3 nmol/L that lasted for 5 days. The second progesterone peak of 3.54 nmol/L lasted for 23 days. The lactation ceased 74 days after the first milk progesterone surge. This animal showed a prolonged lactational anestrous period (nearly 5 months) and the return of gonadal cycle by fall suggested no positive photo-period influence. The milk progesterone quantification showed to be useful for reproductive cycle evaluation of this animal, although vaginal cytology and temperature fluctuation had no relationship with hormonal levels.

A maturação sexual envolve a supressão da atividade gonadal entre o nascimento e a puberdade, enquanto o desenvolvimento somático prossegue. A esteroidogênese na gônada fetal é muito importante para a manutenção da prenhez e para o parto das éguas. O presente trabalho foi conduzido para avaliar os níveis séricos de esteróides gonadais em potras após o nascimento. Cinco potras nascidas no Haras Equília, Avaré, São Paulo, foram estudadas. Procedeu-se à colheita de sangue diariamente pela manhã, durante a primeira semana de vida. Os níveis de progesterona foram medidos por meio de um kit comercial de radioimunoensaio (RIA), enquanto os níveis de estradiol o foram por um RIA sensibilizado não-comercial. Ao nascimento, tanto os níveis de progesterona quanto os de estradiol mostraram-se altos (13,46 ± 5,5 nmol/L e 7,95 ± 1,5 nmol/L), diminuindo a níveis não detectáveis no fim da primeira semana de vida. Uma correlação negativa foi detectada entre a idade das potras e a concentração de esteróides das gônadas. Os resultados mostram que a atividade secretora da gonada fetal persiste até o nascimento, diminuindo gradativamente durante a primeira semana de vida, demonstrada pela variação na concentração sérica de esteróides.

Sexual maturation involves restraint of gonadal activity from birth to puberty, while somatic development continues. Fetal gonadal steroidogenesis is very important for the maintenance of pregnancy and foaling in mares. The present study was conducted to evaluate gonadal steroid serum levels in foals after birth. Five fillies born at Equília Stud Farm, Avaré, SP, Brazil, were studied. Blood samples were collected daily in the morning during the first week of life. Progesterone serum levels were measured by a commercial radioimmunoassay (RIA) kit and estradiol serum levels with a sensitized non-commercial RIA. At birth, both progesterone and estradiol serum levels were high (13.46 ± 5.5 nmol/l and 7.95 ± 1.5 nmol/l) and decreased to undetectable levels at the end of the first week of life. A negative correlation was found between fillie age and gonadal serum steroid concentration. Results show that fetal gonadal activity persists until birth, and decreases gradual and slowly during the first week of life, as reflected by steroid concentrations in the blood.