INTRODUÇÃO: As hemoglobinopatias resultam de alterações hereditárias, sendo prevalentes em muitas regiões do mundo, mas atingem a população brasileira de forma significativa. Elas são decorrentes de alterações em genes estruturais responsáveis pelo aparecimento das hemoglobinas variantes e/ou em genes reguladores, resultando nas talassemias. A identificação dessas patologias tem sido rotineiramente realizada por procedimentos eletroforéticos, contudo nossa experiência laboratorial evidencia que as mesmas nem sempre apresentam resoluções suficientes para a correta caracterização da mutação. CASUÍSTICAS E MÉTODOS: O propósito deste trabalho foi estabelecer uma metodologia válida para a caracterização das hemoglobinas S, C e D em homozigose ou heterozigose, e suas possíveis interações, baseada na amplificação gênica alelo-específica (PCR-AE) com a utilização de primers sense, antisense e primers que se acoplam na posição do alelo mutante e na respectiva posição do alelo normal. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados evidenciaram a validade dessa metodologia na caracterização das mutações, sendo esse procedimento de fácil realização, reprodutível e possível de ser aplicado em um significativo número de amostras.

BRACKGROUND: The hemoglobinopathies are a group of hereditary hemoglobin disorders in worldwide distribution, affecting Brazilian population significantly; they are decurrent of alterations in structural genes, responsible for hemoglobin variants, and/or in regulatory genes, resulting the thalassemia. These disorders have been identified in most cases by electrophoretics procedures, and our laboratory experience points out that sometimes they do not obtain enough resolution for a right characterization of mutation. MATERIAL AND METHOD: The objective of this study was to establish a valid laboratory methodology for the characterization of hemoglobins S, C and D in homozygous or heterozygous and possible interactions, based on the allele-specific genic amplification (PCR-AE) with the use in parallel two primers that differ at their 3’ extremities and are complementary to the normal or mutated sequences. RESULTS AND DISCUSSION: The results make evident the validation of this methodology in the characterization of these mutations, once this procedure is easy to execute,to reproduce, as well as it is possible to be applied to a significative number of samples.

INTRODUÇÃO: Considerando a significativa freqüência das hemoglobinopatias na população brasileira e a necessidade do estabelecimento de metodologia confiável, rápida, reprodutível e possível de ser aplicada a um grande número de amostras, foi objetivo desse trabalho analisar as diferenças observadas pelas metodologias eletroforéticas em acetato de celulose e em ágar amido em comparação com a focalização isoelétrica (IEF) e o estabelecimento de um padrão amostral apresentando as principais posições das hemoglobinas anormais, com enfoque nas observadas na população brasileira. CASUÍSTICA E MÉTODOS: O material de estudo foi constituído por amostras de sangue de pacientes laboratoriais e doadores pertencentes à região central do estado de São Paulo, Brasil, e nelas aplicamos os testes de rotina laboratorial. Para efeito de comparação e validade das provas laboratoriais, correlacionamos os resultados dos testes com a técnica de focalização isoelétrica. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados observados em cada procedimento, somados aos dados de literatura, permitiram estabelecer padrões de migração para cada sistema eletroforético das hemoglobinas observadas na população brasileira. Dessa forma foram estruturados quadros com a possibilidade do uso dos mesmos evidenciando a facilidade e a viabilidade dessa técnica por diferentes laboratórios.

BACKGROUND: Considering the significant frequency of hemoglobinopathies in the Brazilian population and the necessity of establishing a reliable methodology, quick, reproductive and possible to be applied in a large number of samples, it was the objective of this work to analyze the differences on electrophoretic procedures with cellulose acetate and acid agar compared with isoelectric focusing (IEF), and to establish a standard of migration, presenting main positions of abnormal hemoglobin, based on Brazilian population hemoglobin. MATERIAL AND METHOD: The studied material was formed by blood samples from laboratory patients and blood donors of São Paulo state central area, Brazil, and applied laboratory routines tests. For a reasonable comparison and validation of laboratory tests, we related the results with isoelectric focusing. RESULTS AND DISCUSSION: These observations added to literature accounts allowed the establishment of standards of migration all over hemoglobinopathies observed in the Brazilian population. In this way, charts were developed to demonstrate the simplicity and viability of this techinique by different laboratories.

CONTEXTO: Estudos epidemiológicos evidenciaram alta freqüência do tipo O e do fenótipo não-secretor dos antígenos ABH em pacientes com úlceras pépticas. Desde que o Helicobacter pylori foi estabelecido como o principal agente etiológico destas doenças, controvérsias sobre as associações dos grupos sangüíneos ABO, Lewis e dos fenótipos secretor e não-secretor com a suscetibilidade à infecção por esse bacilo foram apresentadas. OBJETIVO: Verificar as freqüências dos fenótipos ABO, Lewis, secretor e não-secretor em pacientes infectados ou não infectados pelo H. pylori. TIPO DE ESTUDO: Estudo transversal. LOCAL: Ambulatório de Gastroenterologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e Laboratório de Imunogenética Molecular do Hemocentro de São José do Rio Preto. PARTICIPANTES: Foram avaliados 120 pacientes com sintomas de dispepsia submetidos a endoscopia digestiva alta. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Fenótipos eritrocitários ABO e Lewis determinados pelos métodos de hemaglutinação padronizados e fenótipos secretor e não-secretor pelo método de inibição de hemaglutinação. RESULTADOS: O diagnóstico de infecção e não-infecção, realizado pelos testes respiratório e da urease, e confirmado pelo método da reação de polimerase em cadeia (PCR) em fragmentos de biópsias gástricas demonstrou a presença do H. pylori em 61,7% dos pacientes e ausência em 38,3%. As diferenças nas freqüências dos grupos sangüíneos ABO entre os pacientes infectados (A 27,0%; B 12,2%; AB 4,0%; O 56,8%) e não-infectados (A 58,7%; B 13,0%; AB 4,3%; O 24,0%) foram significantes. Os tipos sangüíneos Lewis e os fenótipos secretor e não-secretor mostraram distribuição semelhante entre os grupos de pacientes analisados. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que a infecção pelo H. pylori parece ser influenciada pelos fenótipos ABO, mas não pelos fenótipos Lewis, secretor e não-secretor.

CONTEXT: Epidemiological studies have demonstrated higher frequencies of the O blood group and the non-secretor phenotype of ABH antigens among patients suffering from peptic ulcers. Since Helicobacter pylori has been established as the main etiological factor in this disease, controversies about the associations of the ABO and Lewis blood group phenotypes and secretor and non-secretor phenotypes in relation to susceptibility towards infection by this bacillus have been presented. OBJECTIVE: To verify the frequencies of ABO, Lewis blood group phenotypes, secretor and non-secretor phenotypes in patients infected or uninfected by H. pylori. DESIGN: Cross-sectional study. SETTING: Outpatient clinic. PARTICIPANTS: One hundred and twenty patients with dyspeptic symptoms who underwent endoscopy.MAIN MEASUREMENTS: ABO and Lewis blood group phenotypes were determined by a standard hemagglutination test and the secretor and non-secretor phenotypes were evaluated by saliva samples using the inhibitor hemagglutination test. RESULTS: The diagnosis of infection, made via breath and urea tests and confirmed using polymerase chain reaction (PCR) in gastric biopsy fragments, showed the presence of H. pylori in 61.7% of the patients and absence in 38.3%. The differences between the frequencies of the ABO blood group phenotypes among infected (A 27.0%; B 12.2%; AB 4.0% and O 56.8%) and uninfected patients (A 58.7%; B 13.0%; AB 4.3% and O 24.0%) were significant. The Lewis blood type, secretor and non-secretor phenotypes showed homogeneous distribution between the groups of patients analyzed. CONCLUSIONS: Our results suggest that the infection of H. pylori can be related to ABO blood groups but not to the Lewis blood group nor to secretor and non-secretor phenotypes.