Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral.

Cell culture methods are used for studies of protein interactions in neural cells, helping to detect the interactome of proteins linked to generation of central nervous system diseases. For this reason, neural cells and neurospheres isolated from cortical chicken brain are a current model for studies of neurological diseases, such as epilepsy. Chicken brain has key characteristics on its proteome, with a differential expression of proteins linked to energy metabolism, some of them (VDAC 1 and VDAC 2) play an important role in understanding mechanism of refractory epilepsy. Using the methods described, we found neurospheres, in which cells grow in structures with the ideal diameter of 100-200µm within seven days after isolation. Neurospheres differentiation was obtained after adhesion of these cells to surfaces coated with poly-D-Lysine, detected by migration of fibers inside them. Unlike neurospheres, neurons extended neurites after 11 days of isolation. Here we describe a method to isolate and culture neurons and neurospheres from chicken cerebral cortex. Such "in vitro" model can be utilized on studies of neuronal protein differential expression and interaction. Cultures of isolated neurons represent an accessible model on studies of apoptosis and channel blockers of key proteins linked to brain metabolism.

Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito do número da passagem e do sexo das células doadoras de núcleo no desenvolvimento embrionário e fetal após transferência nuclear. Para isso, oócitos bovinos foram maturados, enucleados e reconstruídos com células somáticas de animal adulto. Após a fusão e ativação química, os zigotos reconstituídos foram cultivados em Charles Rosenkranz 2 (CR2) com monocamada de células da granulosa a 38,8ºC em atmosfera umidificada a 5% de CO2 em ar, durante sete dias, e transferidos para receptoras sincronizadas. As taxas de clivagem e desenvolvimento a blastocisto de embriões reconstruídos com células cultivadas por tempo maior foram inferiores às obtidas com os demais tempos de cultivo. Além disso, os blastocistos produzidos não resultaram no desenvolvimento de uma gestação a termo. Embora a taxa de clivagem em embriões fêmeas tenha sido maior, o número de embriões que atingiram o estádio de blastocisto foi maior nos embriões machos. No período gestacional, fêmeas apresentaram maior taxa de aborto entre 90 e 120 dias de gestação. Esses resultados indicam que células doadoras de núcleos cultivados por longos períodos dificultam a produção de blastocistos e aumentam as chances de perdas durante a gestação. Embriões clonados machos têm maior competência para se desenvolver a blastocisto e resultam em menor taxa de perda gestacional.

The objective of this study was to evaluate the effects of culture time and sex of nuclei donor cells on embryo and fetal development after nuclear transfer. Thus, bovine oocytes were matured, enucleated and reconstructed with somatic cells from an adult animal. After fusion and chemical activation, the reconstituted zygotes were cultured in Charles Rosenkranz 2 (CR2) on a granular monolayer cell at 38.8ºC in a humidified atmosphere 5% CO2 in air for seven days, and transferred to synchronized receptors. Cleavage rates and development to blastocyst of embryo reconstructed with cells cultured for a longer time were lower than rates obtained with other culture times. Moreover, these produced blastocysts did not result in the development of full term pregnancy. Although cleavage rates were higher in female embryos, the number of embryos that reached blastocyst stage was higher in male embryos. During gestation period, females showed higher abortion rates from 90 to 120 days of gestation. These results indicate that cells donnors of nuclei cultured for long periods make the production of blastocysts difficult and increase the chances of losses during pregnancy. Cloned male embryos are more succesful in becoming blastocysts and result in lower gestational loss rate.

Estudou-se a habilidade de juvenis de tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus, em regular a ingestão protéica. Mil exemplares com peso e comprimento de 13,93g ± 0,87g e 8,8cm ± 0,47cm, respectivamente, revertidos sexualmente, foram distríbuídos em oito grupos de 125 peixes, em aquários de 1.000 L com renovação contínua de água e dotados de dois alimentadores de demanda. Duas rações isoenergéticas (2.800 kcal/kg) contendo, respectivamente, 40% e 15% PB foram oferecidas diariamente, ad libitum, em combinações que caracterizaram quatro tratamentos: A: ração de 15% PB de um lado e de 40% PB do outro do aquário; B: idêntico ao tratamento A com inversão dos lados; C: ração de 15% PB fornecida em dois alimentadores; e D: ração de 40% PB fornecida em dois alimentadores. O delineamento em quadrado latino permitiu que os peixes fossem submetidos a cada tratamento durante quatro fases de 15 dias (I, II, III e IV). Entre as fases, houve intervalo de uma semana, quando os peixes receberam dieta contendo 30% PB nos dois alimentadores. O consumo alimentar dos peixes, registrado diariamente, não diferiu significativamente entre os tratamentos A e B. Porém, quando foram apresentadas simultaneamente as dietas contendo mesmo teor de PB (Tratamentos C e D), observou-se consumo significativamente maior da ração contendo 15% de PB (Tratamento C). O ajuste em porcentagem da proteína ingerida pelos peixes revelou média de 24% de PB. Os resultados confirmaram a hipótese de que a tilápia do Nilo apresenta habilidade em regular a ingestão dietética protéica por meio de livre escolha.

The free-choice feed and regulation of protein intake were investigated in juveniles reverted males of tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus. During the experiment 1000 fish (reverted males) with similar weigth and length were maintained in eight aquariuns supplied with recirculated water (groups of 125 fish each aquarium). Fish were fed by demand-feeders, containing the two experimental diets, formulated to contain 15% and 40% protein each and distributed in four treatments (A: 15% protein diet on one hand and 40% protein diet on the other hand, B: alike in A, therefore with an inversion on both hands, C: the two feeders supplied with 15% protein diet, D the two feeders supplied with 40% protein diet) The Latin Square was the estatistical method used for the experiment, and the treatments were distributed into four stages (I, II, III and IV). A one week stop after each stage was stipulated and the fish received a 30% protein diet. The results showed that no differences about the intake was detected between fish fed by diets containing 15% and 40% protein in the same aquarium. However, with same diets in the tanks ( Treatment C and D), the animals that were fed with the 15% protein diet showed better feed intake. The percentage of regulated protein during the experiment was about 24% protein. The results confirm the hipoteses of free-choice ability by tilápia-do-Nilo to detect the level of protein in the diet.

Estudaram-se as respostas comportamentais e fisiológicas de juvenis de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) submetidos a diferentes cores de ambientes e situações sociais. Os animais foram mantidos isolados em aquários recobertos com papel-cartão colorido, compondo cinco tratamentos (preto, verde, marrom, azul e branco).Utilizando-se filmagens semanais realizadas em etapas distintas e alternadas (isolamento e presença de um espelho), registraram-se os seguintes parâmetros: distribuição na coluna d'água, coloração, atividade locomotora, confrontos agonísticos, posição da nadadeira dorsal e postura. Para quantificação dos níveis plasmáticos de glicose, triglicerídeos, proteínas totais e cortisol, coletaram-se amostras de sangue após cada filmagem. As médias obtidas foram analisadas estatisticamente pelo método não-paramétrico de Kruskal-Wallis. Os peixes mantidos nos ambientes preto e verde apresentaram baixas freqüências de confrontos agonísticos, enquanto aqueles mantidos no ambiente branco, altas freqüências, porém com redução do padrão ameaça e não alterando sua locomoção. Animais submetidos às cores marrom e azul apresentaram as mais altas freqüências de comportamentos agonísticos e maior atividade locomotora. Os peixes permaneceram em todos os tratamentos com a coloração clara, ocupando, com maior freqüência, a região inferior da coluna d'água. Não foram observadas diferenças significativas para as concentrações de glicose, triglicerídeos e proteínas totais entre os tratamentos, porém obteve-se elevado nível de cortisol para os animais mantidos nos ambientes azul e marrom, quando submetidos à reflexão da própria imagem em espelho. Estes resultados mostraram que existe influência da cor do ambiente sobre o estresse social, em particular nas interações agonísticas entre coespecíficos e na concentração do hormônio cortisol. Concluiu-se que as cores verde e preta são recomendadas à manutenção da espécie, por amenizarem as interações agonísticas e o estresse, enquanto a marrom e azul devem ser evitadas por estimularem estas respostas.

It was studied the behavior and physiologic answers of juvenile of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, submitted the different backgrounds colors and social situations. The animals were maintained isolated in fishbowls covered with colored paper-card, composing five treatments (black, green, brown, blue and white). Through weekly filmings and in different and alternate stages (isolation and presence of a mirror), it enrolled the following parameters: distribution in the column of water, coloration, motility, agonistic behaviors, position of the dorsal fin and posture. For quantification of the glucose, triglycerides, total proteins and cortisol levels, were collected samples of blood after each filming. The obtained averages were analyzed statistically through the no-parametric Kruskal-Wallis method. The fish maintained in the black and green background presented low frequencies of agonistic behaviors, while those maintained in the white background, high frequencies, even so with low numbers of the alert pattern and not altering its motility. Animals submitted to the brown and blue colors presented the highest frequencies of agonistic behaviors, and larger motility. The fish stayed in all the treatments with the clear coloration, occupying, with larger frequency, the bottom of the column of water. Significant differences were not observed for the glucose, triglycerides and total proteins concentrations among the treatments, even so it was obtained a high level of cortisol for the animals maintained in the blue and brown backgrounds when submitted to the reflection of the own image in mirror. These results showed that there is influence of the background color on the social stress, in particular in the agonistic interactions among individuals of the same specie and in the concentration of the hormone cortisol. It was ended that the green and black colors are recommended to the maintenance of the species, for they liven up the agonistic interactions and the stress, while the brown and blue should be avoided for they stimulate these answers.