O crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), é a principal bacteriose do feijoeiro no Brasil, sendo transmitida principalmente por sementes. O presente trabalho teve como objetivo aperfeiçoar uma técnica, por meio de diferentes métodos de preparação do extrato, para a detecção de Xap, bem como sua detecção simultânea com Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) nos extratos de sementes de feijão,via PCR. A partir de amostras de sementes de feijão inoculadas artificialmente com Xap e lotes comerciais, foram avaliados: extrato bruto obtido diretamente das sementes, extrato concentrado por filtração em membrana de 0,22µM de diâmetro, extrato concentrado por centrifugação e extrato plaqueado em meio semi-seletivo XCP1 com e sem antibióticos (BIO-PCR). Avaliou-se a presença simultânea de Xap e Cff em 10 lotes comerciais de sementes de feijão através da reação multiplex, utilizandos-se os primers X4c, X4e, CffFOR2 e CffREV4. A partir do extrato bruto, do extrato concentrado por centrifugação e por filtragem em membrana Millipore® não foi possível a detecção de Xap nas sementes de feijão artificialmente contaminadas nem nos 47 lotes comerciais de sementes/ grãos de feijão. A técnica de BIO-PCR permitiu a detecção de Xap a partir de extratos de sementes de feijão artificialmente contaminadas e em 18 dos 47 lotes comerciais. A técnica de detecção simultânea de Xap e Cff no mesmo gel é viável, por amplificar fragmentos de DNA típicos de cada fitobactéria. O uso do meio de cultura XCP1 sem adição de antibióticos permitiu detectar Xap com período de incubação menor em um dia em comparação à detecção utilizando-se o meio de cultura com antibióticos
Common bacterial blight, caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), is the major bacteriosis affecting bean plants in Brazil and is mainly transmitted by seeds. This study aimed to improve a technique, using different methods of extract preparation, for the detection of Xap alone and simultaneously with Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) in bean seed extracts, via PCR. Samples of bean seeds artificially inoculated with Xap and commercial batches were used to evaluate: crude extract obtained directly from the seeds, extract concentrated by filtration in 0.22ìM-diameter membrane, extract concentrated by centrifugation and extract plated on semiselective XCP1 medium with and without antibiotics (BIO-PCR). The simultaneous presence of Xap and Cff in 10 commercial batches of bean seeds was assessed through multiplex reaction, using the primers X4c, X4e, and CffFOR2 CffREV4. By using crude extract, extract concentrated by centrifugation and by filtration in millipore® membrane, detection of Xap in bean seeds artificially contaminated or in 47 commercial batches of bean seeds/grains was not possible. BIO-PCR technique allowed the detection of Xap in extracts from artificially contaminated bean seeds and in 18 of the 47 commercials batches. The technique of simultaneous detection of Xap and Cff on the same gel is feasible, for amplifying DNA fragments typical of each phytobacterium. The use of XCP1 culture medium without adding antibiotics allowed the detection of Xap with shorter incubation period in one day, compared to detection using the culture medium with antibiotics.
