RESUMO O objetivo deste estudo foi testar as configurações necessárias para avaliar a motilidade espermática total de garanhões, mediante o uso de ImageJ, microscópio óptico e câmera de celular. Os valores de motilidade total das amostras de sêmen equino congeladas (22) e refrigeradas (48) foram comparados por análise visual (SVA) e pelo plugin do ImageJ (CASAF). Amostras congeladas também foram comparadas por um CASA comercial (CCASA). O teste de Friedman não resultou em diferença estatística (P>0,05) entre as 48 amostras analisadas com CASAF (38,0) e SVA de dois avaliadores (40,0 e 40,0). A comparação das 22 amostras congeladas entre CASAF (23,36±15,9), SVA (25,5±18,8 e 25,8±18,5) e CCASA (25,2±18,3) também não resultou em diferença estatística, sendo que a média dos resultados obtidos com CASAF subestimou a obtida com o CCASA em 7,2%. A correlação entre CASAF e CCASA foi significativamente elevada (r=0,95, P<0,0001). O teste de qui-quadrado resultou em proporção de acertos semelhantes entre o CASAF e o CCASA (P=0,14), enquanto SVA resultou em proporção diferente (P=0,04), indicando menor acurácia. O uso de microscópio óptico e câmera de celular foi útil para obter vídeos de sêmen de garanhões a serem analisados com ImageJ, proporcionando resultados de motilidade total equiparáveis a sistemas comerciais.

ABSTRACT This study aimed to determine the accuracy of assessing stallion sperm motility using a light microscope, a cell phone camera, and a free computer-assisted semen analysis (FCASA) package for ImageJ. The total motility of frozen (n=22) and cooled (n=48) equine semen was determined by FCASA and compared to the results of subjective visual analysis (SVA) by two technicians. Frozen samples were also evaluated by a commercial computer-assisted semen analysis (CCASA) system. The Friedman test revealed no significant differences (P>0.05) between cooled samples analyzed by FCASA (38.0) and SVA (technician 1, 40.0; technician 2, 40.0), nor between frozen samples analyzed by FCASA (23.36 ± 15.9), SVA (25.5 ± 18.8 and 25.8 ± 18.5), and CCASA (25.2 ± 18.3). However, mean FCASA results were underestimated by 7.2% compared with CCASA. The correlation between FCASA and CCASA was significant and strong (P<0.0001, r=0.95). Chi-squared tests indicated that FCASA provided similar results (P=0.14) to the reference method (CCASA), but SVA had lower accuracy (P=0.04). ImageJ analysis of cell phone videos captured under a light microscope can be used for estimation of stallion sperm motility with comparable accuracy to commercial systems.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi determinar se há ou não correlação entre testes de termorresistência (TT) após descongelamento do sêmen e taxa de prenhez (TP) após inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Quatro diferentes TT foram realizados nas 10 amostras utilizadas para a IA; um teste rápido (RTT) (30min/46°C) e três testes lentos (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C) e STT3 (300min/38°C). Duzentas e quinze vacas cruzadas multíparas foram submetidas à IATF sob o seguinte protocolo: no dia zero (d0), os animais receberam um dispositivo de P4+EB; em d7, PGF2α; em d8, retirou-se P4 e eCG+EC administrados; no d10, foi realizada IATF. Três diagnósticos gestacionais (DG) foram feitos, em d40, d70 e d120. As médias de motilidade espermática (%) em RTT e STTs foram 19,84±6,13, 28,55±10,48, 17,62±5,87 e 8,63±3,46, respectivamente, e TP nos três DG 61,86%, 57,67% e 55,81%, respectivamente. Por meio do teste de Person, uma correlação negativa significativa (P<0,05) foi encontrada entre os resultados de STT2 e PR aos 60 dias (r=-0,644) e entre STT3 e todas TPs (r=-0,774, -0,752 e -0,748). Concluiu-se que parâmetros de TT não são capazes de determinar correlação entre qualidade do sêmen e TP.

ABSTRACT The objective of the study was to determine whether or not there is a correlation between thermoresistance tests (TT) after semen thawing and pregnancy rate (PR) after fixed-time artificial insemination (FTAI). Four different TT were performed on ten samples used for AI; a rapid test (RTT) (30min / 46°C) and three slow tests (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C), and STT3 (300min/38°C). Two hundred and fifteen multiparous crossbred cows were submitted to FTAI under the following protocol: on day zero (d0) the animals received a P4 device +EB; on d7 PGF2α; on d8 P4 was removed and eCG+EC were administered; IATF was performed on d10. Three gestational diagnoses (G D) were performed on d40, d70 and d120. The mean sperm motility (%) in RTT and STTs were 19.84±6.13, 28.55±10.48, 17.62±5.87 and 8.63±3.46, respectively, and TP in the three DG 61.86%, 57.67%, and 55.81%, respectively. Through Person test a significant negative correlation (P< 0.05) was found between STT2 and PR at 60 days (r= -0.644) and between STT3 and all TPs (r= -0.774, -0.752, 0.748). It was concluded that TT parameters are not able to determine correlation between semen quality and TP.

RESUMO Os objetivos deste estudo foram avaliar o período pelo qual era possível recuperar espermatozoides ovinos viáveis da cauda de epidídimos mantidos em temperatura ambiente (18-25°C). O sêmen coletado em vagina artificial (AV) foi utilizado como controle. Os espermatozoides foram coletados dos epidídimos à zero hora (G0), às seis (G6), 12 (G12), 24 (G24) e 48 (G48) horas post mortem. A motilidade total (TM), a motilidade progressiva (PM), a integridade de membrana plasmática em solução hiposmótica (HOST) e a morfologia espermática foram avaliadas. A TM diminuiu (P<0,05) a partir de 24 horas após a morte (70,0±1,9%) comparado ao sêmen coletado em AV (86,4±1,0%). A PM diminuiu (P<0,05) a partir de 12 horas após a morte (31,3±4,0%) comparado ao grupo AV (73,2±1,4%). A porcentagem de espermatozoides viáveis no HOST diminuiu (P<0,05) no G48 (60,0±8,9%). A recuperação espermática foi menor (P<0,05) 48 horas após a morte (2064,2±498,1 x 106 espermatozoides) comparado ao G0 (2298,4±288,4 x 106 espermatozoides). Em conclusão, nas condições deste estudo, é possível utilizar espermatozoides epididimários recuperados até 24 horas após a morte para inseminação artificial ou fertilização in vitro, porém testes de fertilidade são necessários para comprovar essa hipótese.

ABSTRACT The objectives of this study were to verify the time during which viable ovine spermatozoa could be recovered from the cauda epididymis kept at ambient temperature (18-25°C). Sperm collected in an artificial vagina (AV) were used as control. Spermatozoa samples were collected with an AV and from epididymis at 0 (G0), 6 (G6), 12 (G12), 24 (G24), and 48 (G48) hours post mortem. Total motility (TM), progressive motility (PM), hypo-osmotic membrane integrity test (HOST) and morphological changes were assessed. TM decreased (P<0.05) from 24 hours post mortem (70.0±1.9%) compared to AV (86.4±1.0%). PM decreased (P<0.05) from 12 hours after death (31.3±4.0%) compared to AV group (73.2±1.4%). The percentage of viable cells in HOST decreased (P<0.05) in the G48 (60.0±8.9%). Spermatozoa recovery was lower (P<0.05) 48 hours after death (2064.2±230.7 x 106 spermatozoa) compared to G0(2623.6±288.4 x 106 spermatozoa). In conclusion, under the conditions of this study, it would be possible to use epididymal spermatozoa recovered up to 24 hours after death for artificial insemination or in vitro fertilization; however, fertility trials are necessary to prove this hypothesis.