Resumen Introducción. Las rickettsiosis son enfermedades zoonóticas transmitidas por artrópodos que cumplen el papel de vectores y reservorios, y cuyos síntomas son inespecíficos, por lo que su diagnóstico clínico es difícil. La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es el método de referencia para el diagnóstico. En Colombia, ha resurgido el interés por su estudio por los casos de rickettsiosis detectados en el norte del departamento de Caldas a partir del 2001. Objetivo. Establecer la frecuencia de anticuerpos y la seroconversión contra Rickettsia spp. en pacientes atendidos en instituciones de salud del departamento de Caldas, Colombia, entre 2016 y 2019. Materiales y métodos. Se hizo un estudio de diseño cuantitativo, observacional y descriptivo, con una muestra no probabilística de 175 pacientes atendidos en diferentes municipios de Caldas, a quienes se les realizó IFI para la detección de anticuerpos en fase aguda y convaleciente contra Rickettsia rickettsii, R. typhi y R. felis. Resultados. El promedio de edad de los pacientes fue de 31 años. Los municipios con mayor proporción de seropositivos fueron Belalcázar, Chinchiná, Filadelfia, La Dorada, La Merced y Manizales. El 66 % tenía mascotas y el 12 % reportó picaduras por artrópodos. Los signos y síntomas más frecuentes fueron cefalea (69,7 %), artromialgia (60 %), y fiebre (58,2 %). La seroprevalencia por IgG fue de 60 % para R. rickettsii, 47,9 % para R. typhi y 24 % para R. felis. Ocho pacientes presentaron seroconversión. Conclusión. Se encontró evidencia de la circulación de rickettsias del grupo de las fiebres manchadas y del grupo del tifus asociada con casos humanos en el departamento de Caldas.

Abstract Introduction: Rickettsioses are zoonotic diseases transmitted by arthropods acting as vectors and reservoirs. Disease symptoms are nonspecific and, therefore, their clinical diagnosis is difficult. Indirect immunofluorescence (IFA) is the gold standard assay for diagnosis. The interest for conducting studies on these pathologies has resurfaced in Colombia since 2001; besides, previous studies have evidenced cases of rickettsiosis in the north of the department of Caldas. Objective: To establish the frequency of antibodies and seroconversion against Rickettsia spp. In patients consulting health institutions in Caldas, Colombia, from 2016 to 2019. Materials and methods: We conducted a quantitative, observational, and descriptive study on a non-probabilistic sample of 175 patients with symptoms compatible with rickettsiosis who consulted in different municipalities of Caldas, Colombia; IFA was performed to detect antibodies in the acute and convalescent phases against Rickettsia rickettsii, Rickettsia typhi, and Rickettsia felis. Results: The average age of the patients was 31 years. The municipalities with the highest proportion of seropositive cases were Belalcázar, Chinchiná, Filadelfia, La Dorada, La Merced, and Manizales; 66% of patients owned pets and 12% reported arthropod bites. The most frequent signs and symptoms were headache (69.7%), arthromyalgia (60%), and fever (58.2%). IgG seroprevalence was 60% for R. rickettsii, 47.9% for R. typhi, and, and 24% for R. felis. Eight patients presented seroconversion. Conclusion: We found evidence of the circulation of Rickettsia species from the spotted fever group and the typhus group associated with human cases in Caldas.

Resumen Introducción. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) es un microorganismo que coloniza las fosas nasales y diferentes partes del cuerpo, lo cual se considera un factor de riesgo para adquirir infecciones invasivas, especialmente en pacientes sometidos a cirugía cardiovascular. Objetivo. Determinar la colonización nasal por SARM y establecer las características clínicas en pacientes programados para cirugía cardiovascular. Materiales y métodos. Se hizo un estudio descriptivo entre febrero y diciembre de 2015. Se incluyeron pacientes adultos programados para cirugía cardiovascular en el Hospital Universitario San Ignacio de Bogotá. La colonización se identificó mediante reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction, PCR) en tiempo real en muestras obtenidas mediante hisopados nasales. Los pacientes fueron descolonizados con mupirocina al 2,0 % intranasal dos veces al día y baños con gluconato de clorhexidina al 4 % del cuello hacía abajo durante cinco días, al cabo de lo cual se hizo una PCR de control. Resultados. Se incluyeron 141 pacientes, 52 hospitalizados y 89 ambulatorios. Del total, 19 (13,4 %) tenían colonización nasal por SARM, correspondientes a 9 (17,3 %) de los 52 hospitalizados y 10 (11,2 %) de los 89 ambulatorios. Todos los pacientes sometidos a descolonización tuvieron resultado negativo en la PCR al final del proceso y ninguno presentó infección del sitio operatorio por S. aureus. Conclusiones. Se demostró colonización nasal por SARM tanto en los pacientes hospitalizados como en los ambulatorios. La descolonización con mupirocina fue efectiva para erradicar el estado de portador a corto plazo, lo que podría tener efecto en las tasas de infección del sitio operatorio en las cirugías cardiovasculares.

Abstract Introduction: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a microorganism that colonizes nostrils and different parts of the body, which is considered a risk factor to acquire invasive infections, especially in cardiovascular surgery patients. Objective: To determine the frequency of nasal colonization by MRSA and to establish the clinical characteristics in patients scheduled for cardiovascular surgery. Materials and methods: This was a descriptive study conducted between February and December, 2015. We included adult patients scheduled for cardiovascular surgery at the Hospital Universitario San Ignacio in Bogotá, Colombia. Colonization was identified by real-time PCR from nasal swabs. Colonized patients were treated with mupirocin 2.0% intranasally twice a day and bathed with chlorhexidine 4% from the neck downwards for five days. At the end of this treatment, PCR control was carried out. Results: We included 141 patients with a percentage of nasal colonization of 13.4% (19/141). There were 52 hospitalized patients and 89 outpatients with a percentage of nasal colonization of 17.3% (9/52), and 11.2% (10/89), respectively. All colonized patients who received treatment had a negative PCR at the end of the regime and none of the participating patients had a surgical site infection by S. aureus at the end of the study. Conclusions: Nasal colonization was observed both in hospitalized patients and outpatients. Decolonization treatment with mupirocin was effective to eradicate the carrier state in the short term, which could impact the rates of surgical wound infection associated with cardiovascular surgery.

El tifus murino es una enfermedad infecciosa de carácter zoonótico causada por Rickettsia typhi . Se presenta el caso de una paciente femenina de 13 años edad, procedente del área urbana de la ciudad de Cali, quien presentó un cuadro febril asociado a taquipnea y exantema maculopapular generalizado en tronco y extremidades. Durante las primeras 48 h en la UCI pediátrica desarrolló rápido deterioro clínico, fiebre persistente, aumento de reactantes de fase aguda, presencia de infiltrados pulmonares intersticiales bilaterales y derrame pleural, requiriendo ventilación mecánica no invasiva. Se inició tratamiento con doxiciclina frente a la sospecha de una posible infección por agentes rickettsiales. Veinticuatro horas más tarde la paciente presentó mejoría clínica, resolución del exantema y retiro de la ventilación no invasiva. Por medio de la prueba de inmunofluorescencia indirecta se evidenciaron títulos de 1:512 frente al grupo del tifus, constatando el diagnóstico probable de tifus murino.

Murine typhus is a zoonotic infectious disease caused by Rickettsia typhi . We report a case of a 13-year old female patient from the urban area of the city of Cali, who presented with fever, associated with tachypnoea and generalised maculopapular exanthema on the trunk and limbs. During the first 48 h in the paediatric ICU, she rapidly deteriorated, with persistent fever, increased acute phase reactants, bilateral interstitial pulmonary infiltrates and pleural effusion requiring noninvasive ventilation. Treatment with doxycycline was initiated due to a suspected infection by rickettsial agents. Twenty-four hours later the patient presented clinical improvement and resolution of the exanthema, thus the non-invasive ventilation was withdrawn. By means of a indirect immunofluorescence test, titres of 1:512 were shown against the typhus group, leading to the probable diagnosis of murine typhus.

Colombian physician Luis Benigno Patiño Camargo was one of the pioneers in the study of rickettsioses in South America, demonstrating for the first time in Colombia the presence of Rickettsia rickettsii as the etiological agent of a highly deadly exanthematic febrile syndrome in the 1930s. However, Patiño-Camargo performed other investigations from 1917-1943, which represent the first descriptions and scientific evidence of the presence of R. prowazekii and R. typhi in Colombia. Almost 60 years after the latest research conducted by Dr. Patiño-Camargo, rickettsioses were again a matter of interest and research. In the last decade over 20 research studies have been published, showing new endemic areas for R. rickettsii, as well as the description of new rickettsial species in Colombia.

Las rickettsiosis son entidades clínicas de tipo zoonótico, causadas por bacterias intracelulares estrictas de los géneros Rickettsia y Orientia, pertenecientes a la familia Rickettsiaceae. Su ecología está determinada por factores ambientales y la presencia de vectores específicos que condicionan el establecimiento y la epidemiología en diferentes regiones del mundo. En las Américas, durante el siglo XX, únicamente eran reconocidas tres de estas enfermedades: la fiebre manchada de las Montañas Rocosas, el tifus epidémico y el tifus endémico, Sin embargo, a partir del año 2000 se han descrito mas de 10 especies diferentes previamente desconocidas en este continente, tanto en artrópodos como en casos clínicos, hecho que permite clasificarlas como entidades clínicas emergentes y reemergentes. Dadas las manifestaciones clínicas de las enfermedades causadas por rickettsias, siendo la gran mayoría inespecíficas y, por lo mismo, compartidas con otras enfermedades infecciosas, especialmente virales y bacterianas, han sido enmarcadas entre los diagnósticos diferenciales del síndrome febril agudo, tanto en áreas urbanas como tropicales. En la actualidad, se cuenta con métodos diagnósticos directos e indirectos, que son útiles en la identificación del agente infeccioso, en este caso, causante de rickettsiosis.

Rickettsioses are a group of zoonotic diseases caused by strict intracellular bacteria of the genus Rickettsia and Orientia which belong to the Rickettsiaceae family. Their ecology is influenced by environmental factors and the presence of specific vectors that determine the establishment and epidemiology in different world regions. In America, during the 20 th century, only three of these diseases were recognized: Rocky Mountain spotted fever, epidemic typhus and endemic typhus. However, since 2000, more than 10 different species that had previously been unknown in this continent have been described, both in arthropods and in clinical cases, fact that classifies them as emerging and re-emerging diseases. Given the clinical manifestations of the diseases caused by rickettsias, being the majority unspecific and, therefore, shared with other infectious diseases, especially viral and bacterial, they have been framed within the differential diagnoses of acute febrile syndrome in urban and tropical areas. Nowadays, there are direct and indirect diagnostic methods, which are useful in the definition of the infectious agent, in this case, the cause of rickettsioses.

Rickettsia felis es el agente etiológico de la fiebre manchada transmitida por pulgas, cuyo principal vector y reservorio es Ctenocephalides felis . Típicamente, la enfermedad se presenta como fiebre aguda asociada a cefalea, astenia, exantema máculo-papular generalizado y, en algunos casos, con escara de inoculación. En los últimos años, R. felis ha venido adquiriendo un papel importante en la etiología del síndrome febril agudo, calificándola como una enfermedad emergente y subdiagnosticada. La inmunofluorescencia indirecta es actualmente el método diagnóstico de referencia. Sin embargo, esta técnica presenta limitaciones relacionadas con la reacción cruzada que existe entre las diferentes especies del género Rickettsia . En el presente reporte se describe el caso de un paciente de 16 años con síndrome febril agudo secundario a infección probable por R. felis .

Rickettsia felis is the etiologic agent of flea-borne spotted fever, with Ctenocephalides felis as its main vector and reservoir. Typically, the disease presents as acute fever associated with headache, asthenia, generalized maculo-papular rash, and in some cases, an inoculation eschar. In recent years, R. felis has acquired an important role in the etiology of the acute febrile syndrome; it is indeed an emerging infectious disease, albeit underdiagnosed. Indirect immunofluorescence assay (IFA) is currently the reference diagnostic method. However, this technique has limitations related to the cross reactivity among different species of rickettsiae. Herein, we describe a case of a 16 year-old patient with an acute febrile syndrome secondary to probable infection with R. felis.

Introducción. Streptococcus pneumoniae es un agente comúnmente implicado en enfermedad invasora. Los macrólidos constituyen un tratamiento alternativo para las infecciones por S. pneumoniae resistente a los b-lactámicos. Sin embargo, la resistencia a macrólidos se ha incrementado a nivel mundial. Objetivo. Determinar la frecuencia de la resistencia a la eritromicina de S. pneumoniae en 15 años de vigilancia y caracterizar fenotípica y genotípicamente los aislamientos resistentes. Materiales y métodos. Se analizaron los datos demográficos de los pacientes, la sensibilidad antimicrobiana y los serotipos de los aislamientos resistentes a la eritromicina, recuperados entre 1994 y 2008. Se determinaron los fenotipos por la técnica del doble disco, y los genotipos, por PCR y PFGE. Todos los aislamientos se recuperaron de enfermedad invasiva y fueron proporcionados por los laboratorios nacionales de salud pública. Resultados. Se recuperaron 3.241 aislamientos invasores; 136 (4,2 %) presentaron resistencia a la eritromicina. La resistencia a la eritromicina se incrementó entre 1994-1996 y 2006-2008, de 2,4 % a 6,9 % en menores de 6 años y, de 3,3 % a 5,7 %, en adultos. Los serotipos más frecuentes fueron 6B (36,8 %), 14 (16,9 %) y 6A (17,6 %). El fenotipo constitutivo cMLSB se determinó en 87 aislamientos; 82 tenían el gen ermB. Elfenotipo M se determinó en 46; 45 tenían el gen mefA, tres aislamientos expresaron fenotipo inducible (iMLSB) y un aislamiento presentaba el gen ermB. Por PFGE, se determinó que 50 aislamientos estaban relacionados con clones internacionales, de los cuales, 58 % eran España6B ST90, 26 % eran España9V ST156, 8 % eran Colombia23F-ST338 y 8 % eran España23F-ST81. Conclusiones. Se observó incremento en la resistencia a la eritromicina, relacionada principalmente con el mecanismo de metilación ribosómica y con el clon España6B-ST90 que ha circulado en Colombia desde 1994.

Introduction. Streptococcus pneumoniae is a commonly implicated agent in invasive disease. For infections of S. pneumoniae resistant to b-lactam, macrolides are an alternative treatment. However, resistance to macrolides has increased worldwide as well. Objective. The frequency of resistance to erythromycin was determined for S. pneumoniae over a 15-year surveillance period, and the resistant isolates were characterized phenotypically and genotypically. Materials and methods. Demographic data of the patients, antimicrobial susceptibility and serotypes were analyzed for 3,241 S. pneumoniae isolates recovered between 1994 and 2008. The phenotypes were determined by the double-disc technique and genotypes by PCR (polymerase chain reaction) and PFGE (pulsed field gel electrophoresis). Isolates were recovered from invasive diseases and were provided by national public health laboratories. Results. Of the 3,241 isolates, 136 were resistant to erythromycin. In the 12-year period between 1994-1996 and 2006-2008, resistance in each 2-year sampling had increased from 2.4% to 6.9% in children under 6 years and from 3.3% to 5.7% in adults. The most common serotypes were 6B (36.8%), 14 (16.9%) and 6A (17.6%). Constitutive phenotype cMLSB was determined in 87 isolates; 82 of these expressed the ermB gene. Phenotype M was determined in 46 isolates; 45 had the mefA gene. An additional three isolates expressed the inducible phenotype (iMLSB), and one expressed the ermB gene. By PFGE, 50 of the isolates were found to be related to international clones--58% were Spain6B-ST90, 26% Spain9V-ST156, 8% Colombia23F-ST338 and 8% Spain23F-ST81. Conclusion. The increase in erythromycin resistance was primarily related to the mechanism of ribosomal methylation. More than half the cases were congeneric with the clone Spain6B-ST90 that has been circulating in Colombia since 1994.

Rocky Mountain spotted fever (RMSF) is a tick-borne disease caused by the obligate intracellular bacterium Rickettsia rickettsii. Although RMSF was first reported in Colombia in 1937, it remains a neglected disease. Herein, we describe the investigation of a large cluster of cases of spotted fever rickettsiosis in a new area of Colombia.

Introducción. Las fluoroquinolonas son antibióticos de amplio espectro comúnmente utilizados en el manejo de infecciones. Objetivo. Determinar los patrones de resistencia a fluoroquinolonas en aislamientos colombianos de Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, estafilococos coagulasa negativa y enterococos de centros hospitalarios colombianos, recolectados entre 1994 y 2004. Materiales y métodos. Se realizó la determinación de concentraciones inhibitorias mínimas frente a ciprofloxacino, moxifloxacino y gatifloxacino a 270 aislamientos clínicos de S. pneumoniae, 348 de S. aureus, 176 de estafilococos coagulasa negativa y 123 de enterococos. Para los aislamientos de S. aureus resistentes a la meticilina se determinó la concentración inhibitoria mínima frente a levofloxacino y para aislamientos de S. pneumoniae se realizó la prueba de difusión en agar con discos de ofloxacino y levofloxacino. Resultados. Doscientos sesenta y nueve (99,6%) aislamientos de S. pneumoniae fueron susceptibles a gatifloxacino y moxifloxacino; para levofloxacino y ofloxacino la resistencia fue del 1,5% y 8,9%, respectivamente. El 15,9% de S. pneumoniae tuvo una concentración inhibitoria mínima ³ ³³ ³³4 µg/ml frente a ciprofloxacino. Las prevalencias de resistencia para ciprofloxacino, gatifloxacino y moxifloxacino en los 348 aislamientos de S. aureus fueron 55,4%, 54,9% y 52,6%, y en S. aureus resistentes a meticilina, fueron 92,3%, 91,3% y 87,5% y 91,8% para levofloxacino. En estafilococos coagulasa negativa y enterococos susceptibles a vancomicina se observaron tasas de resistencia entre 25,6% y 31,8%. Todos los aislamientos de enterococos resistente a vancomicina fueron resistentes a los compuestos evaluados. Conclusión. Los aislamientos colombianos de S. pneumoniae mantienen susceptibilidad a las fluoroquinolonas de última generación. La resistencia a fluoroquinolonas es alta en S. aureus, especialmente en aislamientos resistentes a la meticilina (cercana al 100%)

Introduction. Fluoroquinolones are broad spectrum antibiotics commonly used in the treatment of infections. Objective. Resistance profiles of coccus bacteria to fluoroquinolones were evaluated in isolates of Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, coagulase negative staphylococci and Enterococcus spp. The samples were recovered from Colombian hospitals between 1994 and 2004. Materials and methods. The minimal inhibitory concentration of ciprofloxacin, moxifloxacin and gatifloxacin was determined in 270 clinical isolates of S. pneumoniae, 348 of S. aureus, 176 of coagulase negative staphylococci and 123 of coagulase-negative enterococci. The minimal inhibitory concentration of levofloxacin was also determined in all isolates of methicillin-resistant S. aureus. An agar diffusion susceptibility test with disks of levofloxacin and ofloxacin was also applied to all isolates of S. pneumoniae. Results. A total of 269 (99.6%) isolates of S. pneumoniae were susceptible to moxifloxacin and gatifloxacin. For levofloxacin and ofloxacin, resistance in S. pneumoniae was found in 1.5% and 8.9% of isolates, respectively. The ciprofloxacin minimal inhibitory concentration was >4 µg/ml in 15.9% of pneumococcal isolates. The rates of resistance to ciprofloxacin, gatifloxacin and moxifloxacin in the 348 S. aureus isolates were 55.4%, 54.9% and 52.6%, respectively; increasing to 92.3%, 91.3% and 87.5%, respectively in methicillin resistant isolates. Resistance to levofloxacin was found in 91.8% of MRSA isolates. The rates of resistance to ciprofloxacin, gatifloxacin and moxifloxacin in coagulase negative staphylococci and vancomycin-susceptible enterococci were between 25.6% and 31.8%. All vancomycin-resistant enterococci were resistant to all fluroquinolones tested. Conclusion. The newer fluoroquinolones have maintained effective activity against clinical isolates of S. pneumoniae. The rates of fluoroquinolone resistance in S. aureus were very high, particularly in methicillin resistant isolates (approaching 100%)

Objetivo:caracterización de un brote de infección por Acinetobacter baumannii y determinación de los factores asociados. Diseño: estudio de casos y controles anidado en una cohorte de pacientes críticos entre octubre de 2003 y marzo de 2004. Criterios de inclusión: haber estado hospitalizado en la unidad de cuidados intensivos en el mismo periodo y ser sometidos a procedimientos invasivos. Se excluyeron los pacientes que fallecieron en las primeras 24 horas de haber ingresado a la unidad de cuidados intensivos o que habían sido remitidos de otras instituciones. Se evaluó edad, sexo, antecedentes de enfermedad crónica, índice de intervención terapéutica (therapeutic index score system, TISS), tiempo de uso de dispositivos invasivos, tipo de nutrición, exposición previa a antibióticos, procedimiento quirúrgico, tiempo de exposición y estancia. La investigación epidemiológica de los aislamientos incluyó la tipificación molecular mediante electroforesis en gel de campo pulsado. Resultados: los aislamientos de A. baumannii provenientes de los pacientes infectados y de los cultivos de vigilancia fueron resistentes a múltiples antibióticos. Los aislamientos se encontraron relacionados genéticamente con un porcentaje de similitud mayor del 97%. Se encontró asociación estadísticamente significativa entre la infección de A. baumannii y un mayor puntaje de intervención terapéutica durante la hospitalización (p=0,030), uso de nutrición parenteral (p=0,030) y tiempo de exposición (p=0,02 super indice 2). Conclusiones: la infección por A. baumannii se asoció a un mayor índice de intervención terapéutica, al uso de nutrición parenteral y al tiempo de exposición. Los aislamientos se encontraron relacionados genéticamente.

Objective: Epidemiological and molecular characterization of an outbreak infection caused byAcinetobacter baumannii and the determination of the associated factors. Design: Case-control study nested in a cohort of patients hospitalized in the intensive care unit (ICU) between October 2003 and March 2004. Inclusion criteria: patients that had been hospitalized in the ICU during the same period of time and patients who underwent an invasive procedure. Patients who died during the first 24 hours of admission to the ICU or those submitted or referred from another institution were excluded. Age, gender, past medical history of chronic disease, therapeutic index score system (TISS), time of use of invasive devices, type of nutrition support, previous exposure to antibiotics, surgical procedure, time of exposition and length of stay at the ICU were assessed. The epidemiological research of the isolates included molecular typification through pulse-field gel electrophoresis. Results: The isolates of A. baumannii obtained from infected patients and those from the surveillance cultures were resistant to multiple antibiotics. The isolates were found to be genetically related, with a similarity percentage of more than 97%. A significant statistic relationship was found between infections by A. baumannii, with a higher therapeutic intervention score system during the ICU hospitalization (p=0.030), parenteral nutrition support (p=0.030), and exposure duration (p=0.02). Conclusions: Infection by A. baumannii was associated to a higher therapeutic intervention score system, parenteral nutrition support (p=0.030), and exposition duration (p=0.02). A. baumannii isolates were found to be genetically related.

El género Cryptococcus comprende, al menos, 38 especies, pero sólo 3 se han informado como patógenas para el hombre y los animales: Cryptococcus laurentii, Cryptococcus albidus y Cryptococcus neoformans; esta última es la más frecuente. La infección se adquiere por la inhalación de los propágulos infectantes del medio ambiente. Los estudios del hábitat se han realizado con técnicas de extracción con soluciones tampón y cultivos en medios selectivos. El objetivo del trabajo fue evaluar varias técnicas de extracción del ADN de Cryptococcus spp . a partir de muestras ambientales. Como controles se emplearon aislamientos de C. neoformans, C. albidus, C. laurentii y Paracoccidiodes brasiliensis. Se emplearon vermiculitas, suelos contaminados en el laboratorio con 10 a 10 6 blastoconidias/g y muestras naturalmente colonizadas con C. neoformans. El ADN se extrajo con métodos físicos, químicos y con un estuche comercial, y se purificó usando bloques de agarosa y columnas de sílica. Para la amplificación con PCR se emplearon los iniciadores CN4-CN5 específicos para C. neoformans. Sólo el estuche comercial permitió extraer y purificar el ADN de las muestras de suelos contaminados hasta una concentración de 10 blastoconidias/g de suelo y de una de las muestras naturalmente colonizadas. Con este trabajo se logró la extracción y amplificación de ADN de Cryptococcus spp. a partir de muestras ambientales lo cual constituye una herramienta importante para delimitar las áreas ecológicas de C. neoformans en nuestro país.

The genus Cryptococcus encompasses 38 species, but only 3 are associated with disease in humans and animals, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus albidus and Cryptococcus neoformans. The last one is the most frequently reported. The disease is acquired by the inhalation of infectious propagules present in the environment. The habitat has been established using extraction techniques with buffer supplemented with antibiotics and plating in selective media. The aim of this work was to evaluate several DNA extraction techniques for Cryptocococus spp . from environmental samples. The control isolates were C. neoformans, C. albidus, C. laurentii and Paracoccidiodes brasiliensis. We also used vermiculita and soil samples contaminated with different yeast concentrations (10 to 10 6 cells/g) and samples naturally contaminated with C. neoformans. DNA was extracted with physical and chemical methods and with a commercial kit, and the DNA was purified with agarose blocks and silica columns. For the PCR amplification we used the CN4-CN5 primers, which are specific for C. neoformans. Only the commercial kit allowed DNA extraction and amplification from contaminated soil samples up to a concentration of 10 cells/g and from one sample naturally colonized. With this work we extracted and amplified DNA from Cryptococcus spp. from environmental samples with appropriate PCR specificity, it will be a tool to establish the ecological areas of C. neoformans in our country.