Los virus son abundantes, ubicuos, y juegan un papel muy importante en la salud y en la evolución de los organismos vivos. Sin embargo, la mayoría de los biólogos los siguen considerado como entidades separadas de la red de la vida y que actúan como meros artefactos mecánicos a la hora de intercambiar genes entre los diferentes organismos. Este artículo revisa varias definiciones de organismos vivos para determinar si los virus se ajustan a ellas, y adicionalmente, considera los nuevos descubrimientos que retan las definiciones actuales de los virus. La fábricas de virus son discutidas ya que estas mini-organelas son un buen ejemplo de la complejidad de las infecciones virales, no como una usurpación mecánica de las estructuras de la célula, pero como una fuerza vital que lleva a la reorganización y la modificación de las estructuras de las células por enzimas celulares y virales. Los nuevos descubrimientos como los Mimivirus, su virófago y virus que producen colas filamentosas cuando se encuentran fuera de la célula, han estimulado a la comunidad científica a analizar la definición actual de los virus. Para la innovación se debe estar libre de estructuras mentales rígidas o apegadas al pasado, para lograr comprender e integrar los nuevos descubrimientos que traerán las investigaciones futuras. Los procesos de la vida deben verse desde la perspectiva de la complejidad y la trans-disciplinariedad que incluye y acepta la temporalidad de los procesos activos de los organismos vivos y su interdependencia e interrelación entre ellos y su ambiente.

Viruses are known to be abundant, ubiquitous, and to play a very important role in the health and evolution of life organisms. However, most biologists have considered them as entities separate from the realm of life and acting merely as mechanical artifacts that can exchange genes between different organisms. This article reviews some definitions of life organisms to determine if viruses adjust to them, and additionally, considers new discoveries to challenge the present definition of viruses. Definitions of life organisms have been revised in order to validate how viruses fit into them. Viral factories are discussed since these mini-organelles are a good example of the complexity of viral infection, not as a mechanical usurpation of cell structures, but as a driving force leading to the reorganization and modification of cell structures by viral and cell enzymes. New discoveries such as the Mimivirus, its virophage and viruses that produce filamentous tails when outside of their host cell, have stimulated the scientific community to analyze the current definition of viruses. One way to be free for innovation is to learn from life, without rigid mental structures or tied to the past, in order to understand in an integrated view the new discoveries that will be unfolded in future research. Life processes must be looked from the complexity and trans-disciplinarity perspective that includes and accepts the temporality of the active processes of life organisms, their interdependency and interrelation among them and their environment. New insights must be found to redefine life organisms, especially viruses, which still are defined using the same concepts and knowledge of the fifties. Rev. Biol. Trop. 59 (3): 993-998. Epub 2011 September 01.

A través de la historia, los organismos vivos han sido estudiados desde diferentes puntos de vista. Presento tres etapas, la primera totalmente ligada al ambiente que rodea al ser humano, la segunda que se basa en las leyes de la química y la física, y la tercera que es integral o sistémica. Tras pasar revista a los grandes descubrimientos de los humanos primitivos hasta el descubrimiento del ADN y el inicio del reduccionismo en la ciencia,propongo la calidad paradójica de los organismos vivos, que obedecen a las leyes de la física y la química, pero que, creo, no pueden ser explicados en términos de esas ciencias. Analizo las teorías de sistemas y autopoiesis, las estructuras disipativas y la matemática no linear, para afirmar que el paradigma de la naturaleza determinista, lineal y cuantitativa debe dejarse de lado como la única forma de estudiar los organismos vivos e invitarle a explorar el paradigma de la complejidad.

From the mechanical complexity in biology. Through history, each century has brought new discoveries and beliefs that have resulted in different perspectives to study life organisms. In this essay, I define three periods: in the first, organisms were studied in the context of their environment, in the second, on the basis of physical and chemical laws, and on the third, systemically. My analysis starts with primitive humans, continues to Aristoteles and Newton, Lamarck and Darwin, the DNA doble helix discovery, and the beginnings of reduccionism in science. I propose that life is paradigmatical, that it obeys physical and chemical laws but cannot be explained by them I review the systemic theory, autopoiesis, discipative structures and non- linear dynamics. I propose that the deterministic, lineal and quantitative paradigm of nature are not the only way to study nature and invite the reader to explore the complexity paradigm. Rev. Biol. Trop. 56 (1): 399-407. Epub 2008 March 31.

En este artículo se presenta una revisión del virus influenza,su biología,sus mecanismos de variación antigénica,las pandemias que ha producido y la prevención mediante las vacunas y medicamentos antivirales.Se analizan las razones por las cuales aparece el virus H5N1 que produce la fiebre aviar en humanos,la patogénesis de este virus y las estrategias para su prevención.Se informa sobre el plan de preparación para la pandemia en los niveles nacional e internacional.

This article presents a review of Influenza virus,its biology,its mechanism of antigenic variation and its prevention by vaccination and the use of antivirals.The pandemics produced by this virus through history are presented.The appearance of the avian flu virus H5N1 is analyzed and its pathogenesis and strategies of prevention are discussed.National and international information about pandemic preparedness is presented.

Previamente se había identificado un extracto crudo a partir de Chamaecrista nictitans (Fabaceae)con actividad antiviral contra el virus herpes simplex.Los objetivos de esta investigación fueron determinar el paso en el ciclo de replicación del herpes simplex inhibidos por el extracto y caracterizar la naturaleza química de dicho extracto.El extracto crudo de la planta se obtuvo con una mezcla de diclorometano/metanol y fraccionado,utilizando la guía de un bioensayo,mediante cromatografía preparativa de capa fina y cromatografía en columna.Los ensayos se llevaron a cabo en monocapas de células Vero.La actividad antiviral exhibida por el extracto fue determinada mediante la inhibición total del efecto citopático después de tres días de incubación.La concentración máxima de la fracción positiva que no presentó citotoxicidad fue 200 µg/ml.Se utilizaron técnicas inmunoquímicas y de inmunofluorescencia para elucidar el mecanismo antiviral ejercido por el extracto; con este propósito,se infectaron células Vero con el virus herpes simplex y se determinó la producción de proteínas virales a diferentes tiempos después de la infección.Se detectó la producción de una proteína de aproximadamente 60 kDa a las 2 hr y 8 hr luego de la infección;sin embargo no se detectó producción de ningún tipo de proteína tardía, hecho correlacionado con la ausencia de efecto citopático a las 24 hr.Este resultado indica que el extracto actúa intracelularmente siendo capaz de inhibir la transcripción secundaria.Sin embargo,el extracto permite la transcripción y traducción de proteínas tempranas.Estos resultados fueron confirmados mediante inmunofluorescencia.En células control no tratadas con el extracto,se observó una fuerte señal fluorescente acompañada de la aparición del efecto citopático característico 24 hr después de la infección con el virus herpes simplex.Por el contrario,células en presencia de acyclovir o del extracto desarrollaron un patrón muy discreto de inmunofluorescencia sin presencia de efecto citopático.Se realizaron adicionalmente ensayos de neutralización utilizando preincubaciones con un antisuero específico contra herpes simplex 1,200 µg/ml del extracto o 20 µg/ml de acyclovir.Solamente el virus tratado con acyclovir fue capaz de producir un efecto citopático,mientras que el extracto inhibió el virus y no se detectó efecto citopático. Se concluye que el extracto inhibe la adherencia inicial del virus a las células y los eventos de transcripción secundaria del virus.La caracterización química del extracto demostró la presencia de taninos en el mismo.

We have previously identified a crude extract of the plant Chamaecrista nictitans (Fabaceae)with antiviral activity against herpes simplex virus.The main objectives of this research were to identify the step of the replication cycle of herpes simplex inhibited by the extract,and to attempt to characterize the chemical characteristics of this extract.The crude extract from Chamaecrista nictitans (Fabaceae)was extracted with a mixture of diclorometane/methanol,and further fractionated following a bioassay-guided protocol using a combination of preparative thin layer and column chromatography.Toxicity and bioassay experiments were carried out in monolayers of Vero cells.The antiviral activity of the extract was assessed by total inhibition of cytopathic effect after three-day incubation.The highest concentration of the extract which was not toxic to the cells was 200 mu g/ml. Western blot and immunofluorescence techniques were used to elucidate the antiviral mechanism of the extract by infecting Vero cells with the virus at different times and monitoring the synthesis of viral proteins.A 60 kDa protein was detected at 2 hr and 8 hr post-infection but no additional proteins were synthesized at later time intervals,and cytopathic effect was not observed after 24 hr.This result indicates that the extract acts at the intracellular level in order to inhibit late transcription.However,it does not inhibit transcription/translation of early viral proteins.These results were confirmed by immunofluorescence experiments.A strong fluorescent signal was observed in control cell monolayers at 24 hr post infection,accompanied with a clear cytopathic effect.In contrast,in the presence of acyclovir or the extract,cells showed very discrete immunofluorescence,characterized by a punctuated pattern, and no cytopathic effect was observed.Neutralization assays were performed using pre-incubation of virus with either specific herpes simplex-1 antiserum,200 mu g/ml of the extract or 20 mu g /ml of acyclovir.After 1 hr incubation,cells were infected and monitored for cytopathic effect.Only the virus treated with acyclovir showed viral activity,while no cytopathic effect was induced by samples of virus incubated with the extract.It is concluded that the extract inhibits both the attachment of the virus to the cell and the secondary transcription of the virus within the cells.Chemical characterization of the extract showed the presence of tannins.Rev.Biol.Trop.52(3):807-816. Epub 2004 Dic 15.

Seroprevalence of HCMV in Costa Rica is greater than 95% in adults; primary infections occur early in life and is the most frequent congenital infection in newborns. The objectives of this study were to determine the genetic variability and genotypes of HCMV gB gene in Costa Rica. Samples were collected from alcoholics, pregnant women, blood donors, AIDS patients, hematology-oncology (HO) children and HCMV isolates from neonates with cytomegalic inclusion disease. A semi-nested PCR system was used to obtain a product of 293-296 bp of the gB gene to be analyzed by Single Stranded Conformational Polymorphism (SSCP) and sequencing to determine the genetic polymorphic pattern and genotypes, respectively. AIDS patients showed the highest polymorphic diversity with 14 different patterns while fifty-six percent of HO children samples showed the same polymorphic pattern, suggesting in this group a possible nosocomial infection. In neonates three genotypes (gB1, gB2 and gB3), were determined while AIDS patients and blood donors only showed one (gB2). Of all samples analyzed only genotypes gB1, 2 and 3 were determined, genotype gB2 was the most frequent (73%) and mixed infections were not detected. The results of the study indicate that SSCP could be an important tool to detect HCMV intra-hospital infections and suggests a need to include additional study populations to better determine the genotype diversity and prevalence.

La seroprevalencia de citomegalovirus es mayor del 95% en la población adulta de Costa Rica; la infección primaria ocurre muy temprano en la vida y es la infección congénita más frecuente en recién nacidos. El objetivo de este trabajo fue determinar la variabilidad genética y los genotipos del gene gB del citomegalovirus humano. Se recolectaron muestras de sangre de mujeres embarazadas, alcohólicos, pacientes con SIDA, niños con trastornos hemato-oncológicos, donadores de sangre y se incluyeron aislamientos de citomegalovirus de neonatos con enfermedad congénita. Se utilizó un sistema de PCR semi-anidado para obtener una banda de 293-296 pares de bases, la cual fue analizada por la técnica de Polimorfismo conformacional de banda simple (PCBS) y secuenciada para determinar los patrones genéticos polimórficos y los genotipos, respectivamente. La mayor diversidad polimórfica se encontró en los pacientes con SIDA con 14 patrones diferentes mientras que en los niños con trastornos hemato-oncológicos se demostró el mismo patrón en el 56% de los casos, sugiriendo una posible infección nosocomial en este grupo. En los neonatos se encontraron tres genotipos (gB1, gB2, gB3) mientras que en los pacientes con SIDA y en los donadores de sangre solo se demostró el gB2. En las muestras analizadas se determinaron los genotipos gB1, gB2 y gB3 y el gB2 se determinó en el 73% de los casos, no se detectaron infecciones mixtas. Los resultados de este trabajo indican que la técnica del PCBS puede ser una herramienta importante para detectar el citomegalovirus humano en infecciones intrahospitalarias y se sugiere la importancia de incluir poblaciones de estudio adicionales para determinar mejor la diversidad genética y su prevalencia.

Los estudios previos sobre los eventos ultraestructurales en la replicación del virus de la hepatitis Aen cultivos de células infectadas experimentalmente, se han realizado exclusivamente mediante cortes ultrafinos. No obstante, no se han observado diferencias importantes entre células infectadas y no infectadas. Este estudio fue realizado empleando microscopia electrónica de rastreo, tinción negativa de células (LLC-MK2) cultivadas directamente sobre rejillas para microscopia electrónica de transmisión e infectadas con el virus de la hepatitis A. Adicionalmente se analizaron cortes ultrafinos de células infectadas y no infectadas. Se observó una intrincada red de proyecciones entre las superficies de las células, que apareció solo en las células infectadas. Algunas de esas proyecciones medían más de 700 nm de largo y terminaban en extremos abultados. Sin embargo, no se observaron viriones en las células infectadas

Previous electron microscope studies of ultrastructural events during hepatitis A virus replication in experimentally infected cells have used only ultrathin section techniques. Nevertheless, no important differences were observed between infected and uninfected cells. This study was carried out using scanning electron microscopy and negative staining of whole LLC-MK2 cells grown directly on grids covered with support membranes, and then infected with an hepatitis A virus strain. Thin sections of infected and unifected controls were also analyzed. An intricate web of projections forming a net between cell interfaces was observed only in infected cells. Some of these projections were more than 700 nm long and had ballooning tips. Nevertheless, HAV particles were not visualized in the infected cells

Este estudio presencia la evidencia clínica y serológica de la epidemia de conjuntivitis hemorrágica aguda (CHA) que ocurrió en Puriscal, entre de 1981 y 1982, además de presentar la epidemiología en los años siguientes a su primera aparición y se discute sobre el origen del enterovirus 70, el agente etiológico más frecuente de esta entidad clínica. Las características clínicas encontradas fueron similares a otros estudios. En todas las personas estudiadas, al igual que en el personal de campo y de laboratorio, se detectó seroconversión, y infección subclínica. Seis meses después del primer caso de CHA, se determinó un 43 por ciento de seropositividad en 100 sueros recolectados de la población general en Puriscal. Esta virosis se presenta en forma endémica en Costa Rica, presentándose los picos epidémicos cada dos o tres años, con una estacionalidad marcada en los meses de octubre, noviembre y diciembre. Existen varias posibilidades sobre el origen del enterovirus 70; una de ellas es que el virus se haya derivado de algún otro enterovirus humano que afecte la conjuntiva, o pudo haber existido como una forma no patogénica. También se ha sugerido que el EV-70 pudo haberse derivado de un picornavirus de un invertebrado como un insecto, ya que este virus tiene diferencias muy importantes con el resto de los enterovirus humanos. Hasta el momento no hay evidencia para probar ninguna de estas posibilidades, pero en todo caso, el virus tuvo que haber sufrido una mutación para adquirir la patogenicidad en humanos Estudios filogénticos han demostrado que el enterovirus 70 se origina de un ancestro común y en la actualidad circulan diferentes cepas que varían antigénicamente entre sí.

Objetivo: El objetivo de este trabajo fue identificar las cepas de virus de Influenza que circulan en Costa Rica y los meses en que se presentan los picos epidémicos para poder decidir cuál es el momento adecuado en que se debe vacunar a la población y con cuál vacuna: la del hemisferio sur o norte. Métodos: Se analizaron aspirados nasofaríngeos y lavados nasales de niños hospitalizados en el Hospital Nacional de Niños que ingresaron por infección respiratoria aguda utilizando la técnica de inmunofluorescencia. Las muestras positivas por Influenza se inocularon en monocapas celulares de MDCK utilizando tripsina en el medio y los aislamientos fueron identificados por inhibición de la hemaglutinación, y luego fueron enviados al CDC. Resultados: Los resultados obtenidos demuestran que el virus Influenza puede ser aislado durante todo el año, aunque sus picos se presentan en el segundo y tercer trimestre del año. La cepa A/Sydney/05/97-like H3N2 circuló durante tres años consecutivos, apareciendo la cepa A/Panamá/2007/99-like H3N2 en el año 2001. En el caso de las cepas A/H1N1 se mostró variación año tras año 1999 y en el 2000 la A/Bayern/07/95 en el año 1999 y en el 2000 la A/NewCaledonian/20/99. Conclusión: El aislamiento e identificación de los virus Influenza es la primera vex que se realiza en un laboratorio en este país, por lo tanto ha generado una importante información para las autoridades de salud y además será muy provechosa para los países centroamericanos.

The objective of this study was to identify the Influenza virus strains circulating in Costa Rica and determine the months of the year where the highest incidence is present to be able to decide when to vaccinate and which vaccine to use. Nasopharyngeal aspirates and nasal washings were analyzed by inmunofluorescence from samples of children admitted to the National Children Hospital with acute respiratory illness. Positive samples for Influenza viruses were inoculated in MDCK cell monolayers using trypsin in the media. Isolates were typed by the hemagglutination inhibition test and sent to CDC for further testing. Influenza virus can be isolated all year around but peaks during the second and third trimester. The strain AlSydney/05/97 circulated during three consecutive years, appearing the strain AlPanama/2007/99-like H3N2 in 2001. A/Bayern/07/95-like H1N1 was detected in 1999 and the A/NewCaledonia/20/99 in the year 2000. This is the first study done in Costa Rica, its results have been very useful to the health officials and it could be very beneficial for the rest of the Central American countries.