RESUMO Um método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para pesquisa de aminas bioativas em carne de frango foi validado. Foi utilizado um sistema de gradiente de eluição com detector ultravioleta, após extração com ácido tricloroacético e derivação pré-coluna com cloreto de dansila. Os padrões de putrescina, cadaverina, histamina, tiramina, espermidina e espermina foram utilizados para avaliação dos seguintes parâmetros de desempenho: seletividade, linearidade, precisão, recuperação, limites de detecção, limites de quantificação e robustez. Os resultados mostraram excelente seletividade e separação de todas as aminas, coeficiente de determinação superior a 0,99, recuperação entre 92,25 e 105,25% na concentração 47,2mg.kg-1, limites de detecção de 0,3mg.kg-1 e limite de quantificação de 0,9mg.kg-1 para todas as aminas, com exceção da histamina, que apresentou o limite de quantificação mais alto, de 1mg.kg-1. Foi concluído que os parâmetros de desempenho demonstraram adequação do método para detecção e quantificação de aminas bioativas em carne de frango.

ABSTRACT A high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV) method was validated for the study of bioactive amines in chicken meat. A gradient elution system with an ultraviolet detector was used after extraction with trichloroacetic acid and pre-column derivatization with dansyl chloride. Putrescine, cadaverine, histamine, tyramine, spermidine, and spermine standards were used for the evaluation of the following performance parameters: selectivity, linearity, precision, recovery, limits of detection, limits of quantification and ruggedness. The results indicated excellent selectivity, separation of all amines, a coefficient of determination greater than 0.99 and recovery from 92.25 to 102.25% at the concentration of 47.2mg.kg-1, with a limit of detection at 0.3mg.kg-1 and a limit of quantification at 0.9mg.kg-1 for all amines, with the exception of histamine, which exhibited the limit of quantification, of 1mg.kg-1. In conclusion, the performance parameters demonstrated adequacy of the method for the detection and quantification of bioactive amines in chicken meat.

Com o objetivo de avaliar a qualidade dos ovos de consumo pela pesquisa dos níveis de aminas bioativas, foram coletados, pelos serviços de inspeção oficiais, 224 amostras de ovos provenientes de cinco regiões distintas do estado de Minas Gerais, durante o período de um ano. As aminas biogênicas (putrescina, cadaverina, feniletilamina, histamina e tiramina) e as poliaminas (espermidina e espermina) foram pesquisadas por cromatografia líquida de alta eficiência e detecção ultravioleta (CLAE/UV) após derivação pré-coluna com cloreto de dansila. Os resultados demonstraram que a putrescina estava presente, em baixas concentrações, em todas as amostras de gema e de albúmen. As demais aminas também foram detectadas, porém em menor frequência, e a espermina somente foi encontrada em uma amostra de albúmen. Foi concluído que os ovos de consumo produzidos no estado de Minas Gerais não são uma fonte considerável de poliaminas, importantes para o crescimento e a proliferação celular, e os baixos teores de aminas biogênicas, formadas pela descarboxilação de aminoácidos por enzimas bacterianas, não representam riscos à saúde do consumidor, o que indica que o ovo apresenta boa qualidade, tomando por base o critério de aminas bioativas.

In order to evaluate the quality of commercial eggs by searching the bioactive amine levels, 224 samples of eggs from the five regions of Minas Gerais State were collected during one year by the official inspection service. The biogenic amines (putrescine, cadaverine, phenylethylamine, histamine and tyramine) and the polyamines (spermidine and spermine) were determined by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC/UV) and pre-column derivatization with dansyl chloride. The results demonstrated the presence of putrescine in all samples of yolk and albumen, but in low concentrations. The other amines were also detected, however, with a lower frequency, and spermine was found only in one sample of albumen. It was concluded that the commercial eggs produced in Minas Gerais State are not a considerable source of polyamines, important for growth and cell proliferation; and low levels of biogenic amine, formed by decarboxylation of amino acids by bacterial enzymes, do not represent risks to consumer health, indicating that it has good quality, based on the bioactive amine criterion.

Com o objetivo de avaliar a qualidade da carne de frangos de corte mediante pesquisa dos níveis de aminas bioativas, foram coletadas, pelos serviços de inspeção oficiais, 160 amostras de carcaças provenientes de cinco regiões distintas do estado de Minas Gerais, durante o período de um ano. As poliaminas (espermidina e espermina) e as aminas biogênicas (putrescina, cadaverina, histamina, tiramina) foram pesquisadas por cromatografia líquida de alta eficiência e detecção ultravioleta (CLAE/UV). Os resultados encontrados demonstraram a presença das poliaminas, espermidina e espermina, em todas as amostras, em concentrações médias de 3,56mg/100g e 5,72mg/100g, respectivamente. Em todas as amostras foram detectadas, em concentrações muito baixas, as aminas putrescina, cadaverina, histamina e tiramina. Foi concluído que a carne de frangos de corte produzida no estado de Minas Gerais é uma fonte de poliaminas, importantes para o crescimento e a proliferação celular, e que os baixos teores de aminas biogênicas encontrados não representam riscos à saúde do consumidor, indicando que esse tipo de carne apresenta boa qualidade, tomando por base o critério de aminas bioativas.

ABSTRACT In order to evaluate the meat quality of broiler chickens by searching the bioactive amines level, 160 samples of carcass from the five regions of the Minas Gerais State, were collected during one year by the official inspection service. The poliamines (spermidine and spermine) and the biogenic amines (putrescine, cadaverine, histamine and tyramine) were determined by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC/UV). The results demonstrated the presence of polyamines spermidine and spermine in all samples, at mean concentrations of 3.56mg/100g and 5.72mg/100g, respectively. The biogenic amines putrescine, cadaverine, histamine and tyramine were also found, but in low concentrations. It was concluded that the chicken broiler meat produced in Minas Gerais state is a source of polyamines, important for growth and cell proliferation; and that the biogenic amine levels found were low, and do not represent risks to consumer health, indicating that it has good quality, based on the criterion of bioactive amine.

Com o objetivo de diagnosticar a situação do complexo teníase-cisticercose bovina em Minas Gerais, Brasil, foi selecionado o município de São João Evangelista, onde foram coletadas amostras de sangue de 339 bovinos em 15 propriedades rurais, sorteadas aleatoriamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário socioeconômico para a análise de fatores que favorecem a manutenção do complexo teníase-cisticercose bovina. Foi realizado também o diagnóstico de teníase humana por meio de exame coproparasitológico dos habitantes das propriedades. Encontrou-se a prevalência de 4,1% para cisticercose bovina e a frequência de 2,94% para teníase humana. Entre os fatores de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose analisados, foi observada uma relação estatisticamente significativa (P=0,042) entre a ocorrência de cisticercose bovina e a ingestão de carne malpassada pelos entrevistados. Concluiu-se que a cisticercose bovina está presente no município de São João Evangelista, MG, em índices considerados endêmicos, sendo o consumo de carne malpassada e não inspecionada o principal fator de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose, o que reforça a necessidade da adoção de medidas de controle com contínua vigilância epidemiológica e sanitária.

In order to diagnose the situation of bovine taeniasis-cysticercosis complex in the state of Minas Gerais, Brazil, the city of São João Evangelista was selected, and blood samples were collected from 339 cattle in 15 randomly selected farms. A socioeconomic questionnaire was filled in each property for the analysis of the factors that favor the maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex. Additionally, there was the diagnosis of human taeniasis verified by stool examinations of the properties' inhabitants. A prevalence of 4.1% for bovine cysticercosis and the frequency of 2.94% for human taeniasis were found. Among the risk factors, a statistically significant relation (p = 0.042) was found between the occurrence of bovine cysticercosis and the ingestion of undercooked meat. It was concluded that bovine cysticercosis is broadly distributed in the city of São João Evangelista, with rates considered endemic, being the consumption of raw and not-inspected meat the main risk factors for the maintenance of complex taeniasis-cysticercosis, reinforcing the need to adopt control measures with continuous epidemiological and health surveillance.

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de baixas concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LBD) extraída da gema do ovo de galinha, nas formas natural e liofilizada, na criopreservado do sêmen canino. Diferentes concentrações de sulfato de amônio também foram testadas na extrato da LBD da gema do ovo. A gema foi centrifugada, sendo a LBD isolada usando-se soluto saturada de sulfato de amônio (SSA) nas concentrações de 10, 20, 40, 45 e 50%. A frado rica em LBD foi coletada para caracterizado química. O conteœdo de matéria seca foi menor (P<0,05) na LBD extraída com SSA 50%. A pureza da LBD melhorou medida que se aumentou a concentrado de SSA utilizada. SDS-PAGE mostrou que a SSA 50% produziu uma frado mais pura de LBD oriunda da gema do ovo. Para o congelamento de sêmen, o meio diluidor TRIS teve a gema do ovo a 20% (controle) substituída pela LBD a 1, 2 e 3% (p/v), nas formas natural e liofilizada. O sêmen foi centrifugado (755xg por 7min), diluído em um dos meios diluidores em teste e envasado em palhetas de 0,5mL (100x106sptz/mL), sendo congelado em máquina de congelamento programável. O sêmen descongelado (37°C/30s) foi analisado quanto motilidade e morfologia espermática e nos testes hiposm-tico e de epifluorescência (DACF/IP). A LBD natural extraída com SSA 50% foi tão eficiente quanto a gema do ovo na preservado do espermatozoide canino congelado nas baixas concentrações testadas. A LBD liofilizada, principalmente as duas maiores concentrações (2 e 3%), não foi adequada para manter o efeito crioprotetor da LBD sobre o espermatozoide canino.

The aim of this study was to evaluate the use of low concentrations of natural and lyophilized low density lipoprotein (LDL) from hen's egg yolk for cryopreservation of canine semen. Different ammonium sulphate concentrations were tested to extract LDL from egg yolk. The yolk was centrifuged, and LDL was isolated using 10, 20, 40, 45, or 50% ammonium sulphate solution (ASS). The LDL-rich floating fraction was collected for chemical characterization. Dry matter content was lowest (P<0.05) in the LDL extracted with the 50% ASS. The purification of LDL increased in association with increasing ammonium sulphate concentrations. SDS-PAGE showed that the 50% ASS solution yielded a purer fraction of LDL from egg yolk. For semen cryopreservation, TRIS extender was used replacing 20% egg yolk (control) by natural or lyophilized LDL using 1, 2, and 3% (w/v). Semen was centrifuged (755Xg for 7 min), diluted with one of the extenders, packed into 0.5mL straws (100x106 sperm/mL), and placed in a programmable cryopreservation machine. Thawed semen (37°C/ 30s) was analyzed for sperm motility, morphology, and by the hypoosmotic and epifluorescence tests (CFDA/ PI). Natural LDL extracted with 50% ASS was as effective as whole egg yolk to preserve canine frozen sperm when using low concentrations. The lyophilized LDL, mainly in the two higher concentrations tested (2 and 3%), was unsuitable to maintain the effectiveness of the LDL cryoprotective effect on dog sperm.

Estudou-se a dinâmica das populações de Staphylococcus spp. durante a maturação do queijo Canastra, em três fazendas localizadas no estado de Minas Gerais. A presença dos genes que codificam para a produção das enzimas coagulase (coa), termonuclease (nuc) e produção de enterotoxinas (sea, seb, sec e sed), em linhagens de Staphylococcus isoladas durante os 60 dias de maturação do queijo foi analisada. Também foi investigada a presença de enterotoxina estafilocócica A, C e D nas amostras de queijo. As amostras de queijo com 0, 7, 15, 30 e 45 dias de maturação apresentaram contagens de Staphylococcus spp. entre 10³ e 10(8)ufc / g. Todos os isolados coagulase positivo nos testes fisiológicos apresentaram o gene coa. Não foi observada associação entre os resultados obtidos com os testes bioquímicos e aqueles obtidos com a PCR usando iniciadores gene-específicos para linhagens coagulase negativa. Os genes da coagulase e termonuclease ocorreram simultaneamente em 41,3% dos Staphylococcus spp. testados. Nenhum dos isolados de Staphylococcus apresentou os genes que codificam para a produção das enterotoxinas SEA, SEB, SEC ou SED. As enterotoxinas A, C ou D não foram detectadas em nenhuma das amostras de queijo analisadas.

The population dynamics of Staphylococcus spp. was studied during the ripening of Canastra Minas cheese at three farms located in the State of Minas Gerais, Brazil. The presence of coagulase (coa), thermonuclease (nuc), and enterotoxin (sea, seb, sec, and sed) genes was investigated in Staphylococcus strains isolated during the 60-day cheese-ripening period. The presence of the staphylococcal enterotoxins A, C, and D was also investigated in the cheese samples. Cheese samples that were matured for 0, 7, 15, 30, and 45 days presented staphylococci counts from 10³ to 10(8)cfu/g. All isolates considered coagulase-positive by physiological tests had the coa gene. However, no association was observed between the results obtained with biochemical tests and those obtained by PCR using gene-specific primers for coagulase-negative strains. Coagulase and thermonuclease genes occurred simultaneously in 41.3% of Staphylococcus spp. tested. None of the investigated Staphylococcus strains expressed enterotoxins SEA, SEB, SEC, and SED. Enterotoxins A, C, and D were not detected in any of the cheese samples.

A toxicidade aguda (DL-50) da toxina da síndrome do choque tóxico (TSST-1) foi testada em linhagens de camundongos BALB/c, C57BL/6 e Suíça. Os animais (n=10) inoculados intraperitoneal com doses crescentes de toxina (0,01 - 10,0µg/animal) receberam 4h após 75µg de LPS (E. coli O111: B4). A toxicidade aguda (DL50) foi observada por um período de 72h e os dados submetidos ao teste de qui- quadrado. Os resultados e os limites de confiança foram expressos em µg de toxina/kg. A linhagem BALB/c apresentou maior sensibilidade (20µg/kg - limite de confiança a 95% entre 9,0- 92,0), seguida da C57BL/6 (38,5µg/kg - limite de confiança a 95% entre 9,11 - 401,6). A amplitude dos limites de confiança deve-se à natureza da toxina, ao mecanismo de ação, a via de inoculação e ao animal utilizado. A seleção do modelo animal e a padronização do experimento são fundamentais para o desenvolvimento de testes de soro neutralização para fins de controle de qualidade do processo de produção de vacinas.

Acute toxicity test (LD-50) using toxic shock syndrome toxin (TSST-1) was tested in BALB/c, C57BL/6 and Swiss mice. Animals (n = 10) were intraperitoneally injected with TSST-1 (0.01-10.0µg/mouse) followed 4h later by potentiating dose of lipopolysaccharide (75.0µg of LPS - E. coli O111:B4) and cumulative mortality was recorded over 72h. Control animals received either TSST-1 or LPS alone. The data were submitted to qui-Square test and acute toxicity test was calculated by probit analysis (confidence limits expressed as µg toxin/kg). BALB/c mice was the most sensitive (20.0µg/kg, 95% confidence limits: 9.0-92.0) followed by C57BL/6 (38.5µg/kg, 95% confidence limits: 9.11- 401.6). Data from Swiss mice was not conclusive, indicating only low sensitivity. Selection of the animal model and standardization of the experiment are fundamental for the development of serum neutralization tests used for final quality control of vaccine production.

A prototoxina epsílon de Clostridium perfringens tipo D foi produzida, purificada e destoxificada por estoiquiometria. Diferentes quantidades de iodo foram incorporadas à estrutura protéica da prototoxina e a toxicidade dos derivados foi analisada em estudos in vivo. Verificou-se que a toxicidade diminuiu à medida que os átomos de iodo foram incorporados à prototoxina. A análise eletroforética demonstrou a estabilidade das amostras quando armazenadas a 4ºC, -20ºC e -80ºC. A prototoxina iodada foi estocada por um período de quatro meses.

Purified epsilon prototoxin of Clostridium perfringens type D was produced, purified, and detoxified by the stoiechiometric method of non-radioactive iodine incorporation. Different degrees of iodination were perfomed and the toxicity of the derivatives were analysed by in vivo studies. Toxicity decreased inversely to the iodine incorporation. Eletrophoretic analysis showed different levels of stability of samples kept under different temperatures 4ºC, - 20ºC, and -80 ºC. The iodinated prototoxins were stocked for a period of four months.

Empregaram-se os métodos cromatográficos de afinidade metálica e de imunoafinidade para purificação da toxina beta em sobrenadante de cultivo de Clostridium perfringens tipo C. Observaram-se, na eletroforese das primeiras frações eluidas nos dois métodos de purificação, uma banda de peso molecular aproximado de 38kDa, característica da forma monomérica de toxina beta de Clostridium perfringens tipo C, e bandas de peso moleculares superiores, referentes às suas formas oligoméricas. Maior rendimento foi obtido com a utilização do método de imunoafinidade.