RESUMO Introdução: Candida albicans é o principal agente etiológico das vaginites fúngicas. Essas leveduras produzem aspartil proteases secretórias que são codificadas por uma família de 10 genes (SAP1-10). Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a presença dos genes SAP1-7 em linhagens vulvovaginais de C. albicans. Materiais e método: O estudo incluiu 26 isolados vaginais de C. albicans. Os genes de aspartil proteases (SAP1-7) foram detectados por reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: O gene mais frequente em C. albicans isolado de colonização foi SAP6 (93,33%), e de infecção, SAP7 (100%). Foi observada diferença estatística (p = 0,049) na frequência do gene SAP1 entre isolados oriundos de colonização e infecção vulvovaginal. Conclusão: Constatou-se alta frequência dos genes SAP em linhagens vaginais de C. albicans. Os resultados sugerem uma participação de SAP1 no processo infeccioso da candidíase vulvovaginal.

ABSTRACT Introduction: Candida albicans is the most common etiologic agent of fungal vaginitis. These yeasts produce secreted aspartyl proteinases encoded by a family of 10 genes (SAP1-10). Objective: The purpose of this study was to analyze the presence of genes SAP1-7 in vulvovaginal C. albicans. Materials and method: The study included 26 C. albicans vaginal isolates. Detection of aspartyl proteases genes (SAP1-7) was performed by polymerase chain reaction (PCR). Results: The most frequent gene in C. albicans isolated from colonization was SAP6 (93.33%), and from infection, SAP7 (100%). We observed a statistical difference (p = 0.049) in SAP1 gene frequency between isolates from vulvovaginal colonization and infection. Conclusion: High frequency of SAP genes was observed in vulvovaginal C. albicans. The results suggest SAP1 participation in vulvovaginal candidiasis infection.

RESUMO INTRODUÇÃO: A candidíase vulvovaginal é uma prevalente infeccção mucosa oportunista, causada predominantemente por Candida albicans. As espéceis de Candida variam de acordo com a suscetibilidade aos agentes antifúngicos, assim os testes de sensibilidade têm importância clínica para uma adequada escolha terapêutica. OBJETIVO: Investigar a distribuição de leveduras vulvovaginais e o padrão de suscetibilidade a antifúngicos azólicos em isolados do sul de Mato Grosso. MATERIAL E MÉTODOS: Foram obtidas amostras clínicas de 166 pacientes, independentemente de sinais e sintomas para candidíase vulvovaginal. Swabs vaginais foram coletados, semeados em placas contendo ágar Sabouraud e incubados a 35ºC. Uma amostra das colônias que cresceram em cada placa foi subcultivada em meio CHROMagar Candida. Partindo de uma cultura pura, as leveduras foram identificadas por métodos fenotípicos clássicos. Os testes de suscetibilidade aos antifúngicos cetoconazol e fluconazol foram realizados, usando o método de microdiluição de acordo com o protocolo de referência M27A3 do Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). RESULTADOS: A frequência de Candida spp. na população em estudo foi de 30%, sendo 28% no grupo de mulheres assintomáticas e 35% entre as sintomáticas. As espécies isoladas foram C. albicans (50%), C. glabrata (33%) e C. tropicalis (17%). A concentração inibitória mínima (CIM) para o fluconazol variou de 0,5 μg/ml a 16 μg/ml e para o cetoconazol, de 0,03 μg/ml a 4 μg/ml. A frequência de resistência ao fluconazol foi de 1,7% e ao cetoconazol, de 3,4%. CONCLUSÃO: C. albicans foi a espécie predominante. Observamos elevada sensibilidade de Candida spp. aos antifúngicos fluconazol e cetoconazol.

ABSTRACT INTRODUCTION: Vulvovaginal candidiasis is a prevalent opportunistic mucosal infection, caused predominantly by Candida albicans. Candida species vary in their susceptibility to the antifungal agents, thus, the susceptibility tests have clinical significance in determining the appropriate therapeutic choice. OBJECTIVE: To investigate the distribution of vulvovaginal yeasts and the susceptibility pattern to azoles antifungal isolated in southern Mato Grosso State, Brazil. MATERIAL AND METHODS: Clinical samples from 166 patients were obtained regardless signs and symptoms of vulvovaginal candidiasis. Vaginal swabs were collected, seeded onto plates containing Sabouraud Dextrose agar and incubated at 35ºC, for five days. A pool of colonies that grown on each plate was subcultured in CHROMagar Candida medium. On the basis of a pure culture, the yeasts were identified using traditional phenotypic identification methods. Susceptibility tests for antifungal fluconazole and ketoconazole were performed using the broth microdilution method according to the reference protocol M27A3 of the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). RESULTS: The frequency of Candida spp. in the study population was 30%, of which 28% were in the group of asymptomatic women and 35% among symptomatic. Among the isolated strains were C. albicans (50%), C. glabrata (33%) and C. tropicalis (17%). The minimum inhibitory concentration (MIC) for fluconazole ranged from 0.5 μg/ml to 16 μg/ml and for ketoconazole from 0.03 μg/ml to 4 μg/ml. The resistance rates were 1.7% for fluconazole and 3.4% for ketoconazole. CONCLUSION: C. albicans was the predominant species. We observed a high susceptibility of Candida spp. to fluconazole and ketoconazole antifungal.

Comparou-se o desempenho de três meios de cultura na determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de dois antifúngicos frente a 48 amostras de C. neoformans. Para anfotericina B, os meios empregados foram o Caldo RPMI 1640, indicado como referência pelo NCCLS, o Yeast Nitrogen Base (YNB-1) indicado por Ghannoum et al., o Antibiotic Medium 3 (AM3) utilizado por vários autores e o YNB-2, sugerido por nós, que é o mesmo YNB-1, todavia, adequado à técnica preconizada pelo NCCLS. Para a anfotericina B, a mais ampla faixa de CIMs (0,125-1,0 mg/ml) foi obtida no YNB-1; os intervalos de CIMs obtidos no caldo RPMI 1640 e no YNB-2 foram muito similares enquanto que o AM3 evidenciou pequenas variações nas CIMs. Para os testes com o fluconazol utilizou-se o RPMI 1640 e o YNB-1; novamente, o mais amplo intervalo de CIMs, assim como as CIMs mais elevadas, foram observados no YNB-1; as variações de CIM 50% foram de 2,0 mg/ml no RPMI 1640 e 4,0 mg/ml no YNB-1. Os resultados obtidos permitem concluir que: o RPMI 1640 suplementado com dextrose 2% permite um bom crescimento em 48h de incubação; o YNB recomendado por Ghannoum et al. fornece faixas de CIMs mais amplas; que o AM3 forneceu estreito intervalo de CIMs para a anfotericina B e que o YNB-2 utilizado nos testes com anfotericina B, evidenciou resultados muito semelhantes aos do caldo RPMI 1640.

This study compared the performance of three culture media used for the determination of minimal inhibitory concentration (MIC) of amphotericin B and fluconazole against 48 Cryptococcus neoformans strains. For amphotericin B the media employed were RPMI 1640 medium, as indicated by NCCLS as reference, Yeast Nitrogen Base (YNB) as proposed by Ghannoum et al. (YNB-1), Antibiotic medium 3 (AM3) indicated by others, and YNB as proposed by us (YNB-2). In YNB-1, amphotericin B showed broader MIC ranges, varying from 0.125 µg/ml to 1.0 µg/ml; in RPMI 1640 medium and YNB-2 the MICs were similar and in AM3 the MIC ranges were narrower. The same pattern was observed for MIC 90%. For fluconazole the media employed were RPMI 1640 and YNB-1. The MIC ranges were broader and elevated when YNB-1 was employed. MIC 50% were 2.0 µg/ml in RPMI 1640 medium and 4.0 µg/ml in YNB-1. Our results indicate that RPMI 1640 supplemented with 2% glucose allowed a good growth at 48h; YNB as recommended by Ghannoum et al. provided a broader MIC range, AM3 provided a narrow MIC range for amphotericin B, and YNB-2 was very similar to RPMI 1640 medium.