Resumen Introducción. El tratamiento de las infecciones urinarias constituye un reto creciente por el aumento de Escherichia coli proveniente de la comunidad multirresistente a los medicamentos. Objetivo. Caracterizar aislamientos de E. coli multirresistente causantes de infecciones urinarias adquiridas en la comunidad en Cumaná, Venezuela, y detectar los posibles riesgos de infección por aislamientos productores de betalactamasas de espectro extendido (BLEE). Materiales y métodos. Se incluyeron todos los pacientes atendidos en la consulta externa de urología y en urgencias del Hospital de Cumaná entre enero y junio de 2014 y que evidenciaban infecciones urinarias. La detección de los genes blaTEM, blaSHV y blaCTX-M se hizo mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Resultados. Se encontró una alta prevalencia de E. coli multirresistente a los medicamentos (25,2 %), con 20,4 % de aislamientos productores de BLEE y una gran frecuencia de resistencia simultánea a trimetoprim-sulfametoxazol, fluoroquinolonas y aminoglucósidos (66,7 %) comparados con los no productores (2,4 %). En el 65,4 % de los aislamientos resistentes, se encontró el gen blaTEM; en 34,6 %, el blaCTX-M, y en 23,1 %, el blaSHV. Los genes blaCTX-M detectados pertenecían a los grupos CTX-M-1 y CTX-M-2. Se demostró la transferencia in vitro de plásmidos por conjugación en 17 de los 26 aislamientos productores de BLEE. Los tres tipos de genes detectados se transfirieron a los transconjugantes. La edad mayor de 60 años, las infecciones urinarias con complicaciones y el uso previo de catéter, predispusieron a la infección por cepas de E. coli productoras de BLEE. Conclusiones. La gran frecuencia de aislamientos multirresistentes productores de BLEE debería alertar a las autoridades sanitarias para tomar medidas que reduzcan el riesgo de epidemias causadas por este tipo de bacterias en la comunidad.

Abstract Introduction: The treatment of urinary tract infections has become more challenging due to the increasing frequency of multidrug-resistant Escherichia coli in human populations. Objective: To characterize multidrug-resistant E. coli isolates causing community-acquired urinary tract infections in Cumaná, Venezuela, and associate possible risk factors for infection by extended-spectrum beta-lactamases (ESBL)-producing isolates. Materials and methods: We included all the patients with urinary tract infections attending the urology outpatient consultation and emergency unit in the Hospital de Cumaná, Estado Sucre, Venezuela, from January through June, 2014. blaTEM, blaSHV and blaCTX-M genes detection was carried out by PCR. Results: We found a high prevalence of multidrug-resistant E. coli (25.2%) with 20.4% of the isolates producing ESBL. The ESBL-producing isolates showed a high frequency (66.7%) of simultaneous resistance to trimethoprim-sulphamethoxazole, fluoroquinolones and aminoglycosides compared to non-producing isolates (2.4%). Of the resistant isolates, 65.4% carried the blaTEM gene, 34.6% the blaCTX-M and 23.1% the blaSHV. The blaCTX-M genes detected belonged to the CTX-M-1 and CTX-M-2 groups. Plasmid transfer was demonstrated by in vitro conjugation in 17 of the 26 ESBL-producing isolates. All three genes detected were transferred to the transconjugants. Age over 60 years, complicated urinary tract infections and previous use of a catheter predisposed patients to infection by ESBL-producing E. coli. Conclusions: The high frequency of multidrug-resistant ESBL-producing isolates should alert the regional health authorities to take measures to reduce the risk of outbreaks caused by these types of bacteria in the community.

Background: Enterobacteria resistant to quinolones is increasing worldwide, including Venezuela. The mechanism for this resistance could be due to genes included in the chromosome or in transmissible plasmids. Aim: To evaluate the resistance to quinolones, coded by qnr genes present in enterobacteria species, isolated in the University Hospital of Cumana, Venezuela. Methods: Antimicrobial susceptibility tests to quinolones, beta-lactams and aminoglycosides were carried out to all the isolates. The presence of qnr genes were determined by PCR. The isolates carrying the qnr genes were used for bacterial conjugation tests to determine the presence of transferable plasmids. Antimicrobial susceptibility tests and PCR were carried out in the transconjugants to verify the transfer of the genes. Results: High levels of antimicrobial resistance to quinolones and beta-lactams were found among the isolates. We found that 33.6% of the isolates carry the qnrB gene and 0.9% qnr A gene. Of the 23 transconjugants, 20 showed to have qnrB gene, but none qnrA. Discussion: We concluded that the high frequency of qnr genes found in the enterobacteria isolates and their presence on transferable plasmids, complicate the use of quinolones for the treatment of bacterial infections, thus, a treatment plan should be designed with the rational use and the rotation of different types of antimicrobials, in order to avoid the selection of increasingly resistant strains.

Resumen Introducción: La resistencia de enterobacterias a quinolonas se ha difundido por el mundo, fenómeno presente también en Venezuela. El mecanismo de esta resistencia pudiera estar mediado por genes incluidos en el cromosoma bacteriano o transmitirse en el interior de plásmidos. Objetivo: Evaluar la resistencia a quino-lonas, codificada por genes qnr, presentes en cepas de enterobacterias, aisladas en el Hospital Universitario de Cumaná, Venezuela. Métodos: A las cepas obtenidas se les realizaron pruebas de susceptibilidad antimicrobiana a quinolonas, β-lactámicos y aminoglucósidos. La presencia del gen qnr se determinó por RPC. Las enterobacterias portadoras del gen qnr fueron sometidas al proceso de conjugación bacteriana para comprobar su capacidad de transferencia. A las transconjugantes obtenidas se les realizó pruebas de susceptibilidad antimicrobiana y RPC para comprobar la transferencia de los genes. Resultados: Se encontraron elevados porcentajes de resistencia antimicrobiana a quinolonas y betalactámicos. El 33,6% de las cepas eran portadoras del gen qnrB, y 0,9% del gen qnrA. Se obtuvieron 23 cepas transconjugantes; de éstas, 20 portaban el gen qnrB, no se observó la presencia de qnrA. Discusión: En conclusión, el elevado porcentaje de genes qnr encontrado en las enterobacterias aisladas, y comprobada la presencia de éstos en plásmidos transferibles, complica la aplicación de tratamientos basados en quinolonas y fluoroquinolonas, por lo que es recomendable el uso racional de estos antimicrobianos, y proponer la rotación de la terapia antimicrobiana, a fin de evitar la selección de cepas resistentes.

Las infecciones por Klebsiella pneumoniae, constituyen un problema creciente en los centros hospitalarios. El objetivo de la presente investigación fue evaluar la resistencia a los aminoglucósidos, así como la presencia de genes que codifican enzimas modificadoras de aminoglucósidos (EMA) en aislados intrahospitalarios de Klebsiella pneumoniae. Se analizaron 56 cepas provenientes de pacientes con diagnóstico de infección intrahospitalaria del Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá”, durante el periodo enero-septiembre de 2008. Se determinó la susceptibilidad antimicrobiana mediante los métodos de difusión y dilución en agar, siguiendo los lineamientos del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Se empleó la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar los genes que codifican EMA. Se encontró resistencia a gentamicina y tobramicina en el 33,9% y 35,7%, respectivamente. Los fenotipos de resistencia a aminoglucósidos más frecuentes fueron I (ANGMKTob) y II (GMKTob). Se identificaron los genes aadA (21,4%), aac(3)-IIa (16,1%), aadB (14,3%), aac (6`)-Ib (3,6%) y aph (3`)-Ia (1,8%). En 10 cepas se observó la presencia de más de un gen y en 13 cepas se correlacionó el fenotipo con los genes encontrados. La resistencia a los aminoglucósidos en los aislados evaluados se debe, principalmente, a enzimas de tipo acetiltransferasas.

Klebsiella pneumoniae infection is a growing problem in hospitals. The objective of this study was to evaluate resistance to aminoglycosides and detection of genes encoding for aminoglycoside modifying enzymes (AME) in hospital isolates of K. pneumoniae. Fifty-six isolates from patients with diagnosis of nosocomial infection at the University Hospital Antonio Patricio de Alcala, during the period January to September 2008 were included for study. Antimicrobial susceptibility was determined by the methods of diffusion and agar dilution, following the Institute for Clinical and Laboratory Standards Guidelines. Genes encoding AME were determined by the polymerase chain reaction procedure. Resistance results for Gentamycin were 33.9% and for Tobramycin 35.7%. Aminoglycoside resistance phenotypes most frequently identified were I (ANGMKTob) and II (GMKTob). The genes involved were aadA (21.4%), aac(3)-IIa (16.1%), aadB (14.3%), aac (6`)-Ib (3.6%) y aph (3`)-Ia (1.8%) For 10 of the isolates studied more than one gene was identified. In 13 isolates the phenotype corresponded to the genes found. Aminoglycoside resistance in the isolates studied is mainly due to the presence of acetyltransferase enzymes.

The enzymatic modification of aminoglycosides by aminoglycoside-acetyltransferases (AAC), aminoglycoside-adenyltransferases (AAD), and aminoglycoside-phosphotransferases (APH), is the most common resistance mechanism in P. aeruginosa and these enzymes can be coded on mobile genetic elements that contribute to their dispersion. One hundred and thirty seven P. aeruginosa isolates from the University Hospital, Cumana, Venezuela (HUAPA) were evaluated. Antimicrobial susceptibility was determined by the disk diffusion method and theaac, aadB and aph genes were detected by PCR. Most of the P. aeruginosa isolates (33/137) were identified from the Intensive Care Unit (ICU), mainly from discharges (96/137). The frequency of resistant P. aeruginosaisolates was found to be higher for the aminoglycosides tobramycin and amikacin (30.7 and 29.9%, respectively). Phenotype VI, resistant to these antibiotics, was the most frequent (14/49), followed by phenotype I, resistant to all the aminoglycosides tested (12/49). The aac(6´)-Ib,aphA1 and aadB genes were the most frequently detected, and the simultaneous presence of several resistance genes in the same isolate was demonstrated. Aminoglycoside resistance in isolates ofP. aeruginosa at the HUAPA is partly due to the presence of the aac(6´)-Ib, aphA1 andaadB genes, but the high rates of antimicrobial resistance suggest the existence of several mechanisms acting together. This is the first report of aminoglycoside resistance genes in Venezuela and one of the few in Latin America.

El objetivo de este trabajo fue evaluar el fenotipo de resistencia y la presencia del gen aminoglucósido-O-fosfotransferasa-3´-VIa (aph-(3´)-VIa) en 23 aislamientos identificados como Acinetobacter 13TU:RUH 1139, provenientes de neonatos y soluciones parenterales, administradas a los mismos, en la Unidad de Alto Riesgo Neonatal (UARN) del Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes (IAHULA). Para la determinación de la susceptibilidad antimicrobiana se probaron seis aminoglucósidos mediante la prueba de difusión en agar (amikacina, gentamicina, tobramicina, netilmicina, dibekacina y neomicina), así como kanamicina y estreptomicina por dilución en agar. Todos los aislamientos resultaron resistentes a estreptomicina, más del 90% de los mismos mostraron resistencia ante amikacina, gentamicina y tobramicina, y el 82,6% fue resistente a netilmicina y dibekacina. Se detectó el gen aph-(3´)-VIa en 15 aislamientos de los neonatos y en 2 provenientes de las soluciones parenterales. Debido al elevado porcentaje de aislamientos resistentes a los aminoglucósidos, así como la presencia del gen aph-(3´)-VIa en Acinetobacter 13TU:RUH 1139, el uso de estos antimicrobianos como monoterapia debe ser restringido en el IAHULA y es necesario vigilar continuamente la diseminación genética de dicha resistencia.

The purpose of this work was to evaluate the resistance phenotype and the presence of aminoglucoside-0-phosphotransferase-3’-VIa (aph-(3’)-VIa) in 23 isolates identified as Acinetobacter 12TU:RUH 1139, obtained from neonates and parenteral solutions administered to them, at the Neonatal High Risk Unit (NHRU) of the Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes (IAHULA). Six aminoglucosides were examined for determination of antimicrobial susceptibility by the agar-diffusion test (amikacin, gentamycin, tobramycin, netilmycin, dibekacin, and neomycin), as well kanamycin and streptomycin by the agar-dilution test. All the isolates were streptomycin resistant, and over 90% of them showed resistance to amikacin, gentamycin, and tobramycin, and 82.6% was resistant to netilmycin and dibekacin. Gene aph-(3`)-VIa was detected in 15 isolates from neonates and in 2 from the parenteral solutions. Due to the high percentage of aminoglucoside-resistant isolates, as well as the presence of the gene aph-(3’)-VIa in Acinetobacter 13TU:RUH 1139, the use of these antimicrobials as monotherapy should be restricted at the AUHLA, and it is necessary to constantly survey the genetic dissemination of this resistance.

Background: Integrons are responsible for the capture and dissemination of resistance genes in Gram-negative bacteria. Aim: To characterize the variable region within class 1 integrons in nosocomial strains of Klebsiella pneumoniae. Material and Methods: Twenty-nine Klebsiella pneumoniae strains isolated from hospitalized patients were analyzed. The variable region of class 1 integrons was characterized by polymerase chain reaction and direct sequencing. Genetic localization of class 1 integrons was determined by bacterial conjugation. Results: Ten strains contained class 1 integrons, with sizes ranging from 750 to 2000 base pairs. One integrant element was present in nine strains and two elements in one single strain. Integrons were associated to plasmids. Cassettes aadA, aac(6)-Iq, orfD, dfrA]7, aadA5 and aadB were found. Conclusions: The presence of class 1 integrons may play an important role in the dissemination of hospital resistance against amino glycosides.

En este estudio, 25 cepas de K. pneumoniae aisladas de pacientes con infección nosocomial durante el periodo agosto 2002 a diciembre de 2003 fueron examinadas para determinar su susceptibilidad antimicrobiana, perfil plasmídico, transferencia de determinantes de resistencia y los tipos de genes blaTEM , blaSHV , blaCTX-M. Diecinueve cepas presentaron susceptibilidad disminuida a las cefalosporinas de tercera generación y al aztreonam y fueron productoras de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE). Todas las cepas presentaron plásmidos transferibles con una frecuencia de conjugación de 10-3 a 10-4 transconjugantes/célula donante. El análisis de los patrones de restricción reveló la presencia de tres tipos de plásmidos. Las cepas E. coli transconjugantes, además de ser productoras de BLEE, expresaron resistencia a aminoglucósidos y cloranfenicol. Se encontró la presencia del gen blaTEM en todos los plásmidos transferibles y los genes blaSHV y blaCTX en plásmidos transferibles y no transferibles. Las enzimas identificadas fueron TEM-1, SHV-5-2a y CTX-M-2. Los plásmidos presentes en las cepas de K. pneumoniae, juegan un papel importante en la diseminación de los genes que codifican resistencia a los ß-lactámicos y otros antimicrobianos.

In this study, 25 strains of K. pneumoniae, isolated from patients with nosocomial infections from August 2002 to December 2003, were examined to determine their antimicrobial susceptibility, plasmid profile, transfer capacity of resistance determinants and blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M genes. Nineteen nosocomial strains revealed a weakened susceptibility to third-generation cephalosporins and aztreonam, and were extended-spectrum ß-lactamases (ESBLs) producers. All strains presented conjugable plasmids with a conjugation frequency of 10-3 to 10-4 transconjugants/donor cell. The analysis of restriction patterns revealed the presence of three differents plasmids. The Escherichia coli transconjugants were ESBLs producers and expressed resistance for aminoglucosides and chloramphenicol. The blaTEM gen was found in all transferables plasmids and the blaSHV and blaCTX genes were found in transferables and no transferables plasmids. The enzymes identified in the isolates were TEM-1 SHV-5-2a and CTX-M-2. The plasmids present in the K. pneumoniae strains play an important role in the dissemination of the genes encoding resistance to ß-lactams and other antimicrobial agents.

Los integrones son elementos genéticos captadores de genes de resistencia, usualmente localizados en plásmidos y responsables de la diseminación de la resistencia en bacilos gramnegativos. En el presente trabajo se estudió la presencia de integrones clase 1 y su asociación con plásmidos en 23 cepas de Klebsiella pneumoniae, aisladas de diferentes servicios del Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá” estado Sucre-Venezuela. La transferencia de los determinantes de resistencia fue evaluada mediante conjugación bacteriana y la presencia de integrones clase 1 por la reacción en cadena de la polimerasa. Todos los aislamientos presentaron resistencia para ceftazidima y aztreonan. Los ensayos de conjugación demostraron la presencia de plásmidos conjugativos en todas las cepas de K. pneumoniae analizadas. Los integrones clase 1 fueron detectados en 10 (43,47%) aislamientos. Nueve cepas contenían un integrón y una cepa dos elementos. Todos los integrones identificados están asociados a plásmidos. La presencia de integrones clase 1 en las moléculas plasmídicas juega un papel importante en la epidemiología de la resistencia a los agentes antimicrobianos en las cepas clínicas.

Integrons are genetic elements able to capture resistance genes, usually located in plasmids and responsible for dissemination of resistance in Gram negative bacilli. The presence of class 1 integrons and its association with plasmids in 23 multiresistant Klebsiella pneumoniae strains, isolated from different services of hospital “Antonio Patricio de Alcalá” Sucre-Venezuela was studied. By bacterial conjugation and polymerase chain reaction the transference of resistance determinants and the presence of integrons class 1 were evaluated. All isolates were resistant to ceftazidime and aztreonam. Conjugation assays demonstrated the presence of conjugative plasmids in all K. pneumoniae strains analyzed. Integrons were detected in 10 (43.47%) isolates. One integron element was present in nine strains and two elements in one single strain. Integrons identified were associated a plasmids. The presence of integrons class 1 carried by plamids must play an important role in the epidemiology of antibiotic resistance in clinical strains.

Con el propósito de determinar la presencia de aislados de Salmonella spp. y Shigella spp. y su asociación con manifestaciones clínicas de síndrome diarreico agudo, en niños menores de seis años de edad, se analizaron mediante coprocultivos 96 muestras de heces, entre los meses de julio a octubre de 2002, procedentes de pacientes, asistidos en el Servicio Autónomo Hospital Universitario "Antonio Patricio de Alcalá", Cumaná-estado Sucre. Se obtuvieron 50 casos positivos (52,08%); de los cuales 16,00% correspondieron a Shigella spp. aislándose Shigella sonnei en 50,00% mientras que Salmonella spp. se identificó en el 10,00% de los aislamientos. Salmonella agona y Salmonella enteritidis presentaron una frecuencia de 40,00%. En relación a Shigella spp., el análisis estadístico mostró una asociación altamente significativa (p<0,001) y significativa (p<0,05) en los pacientes con disentería y pujo, respectivamente. Asimismo, los resultados indican que existe asociación estadística muy significativa (p<0,01) entre la presencia de Salmonella spp. y el dolor abdominal y, asociación significativa (p<0,05) con la manifestación de pujo y fiebre. La actividad antimicrobiana in vitro, mostró que Shigella spp. presentó 62,50% de resistencia para ampicilina y 12,50% para cloranfenicol. Salmonella spp. fue resistente en un 20,00% a ampicilina, ciprofloxacina y gentamicina.

In orden to determined the presence the isolates of Salmonella spp. and Shigella spp. and associated with the clinical manifestations the acute diahrreic syndrome from children under six year of age, 96 stool samples were analyzed by carying out coprocultures collected from patients under six years of age at the Servicio Autónomo Hospital Universitario "Antonio Patricio de Alcalá" in Cumaná, state of Sucre from July to October 2002. The analyses resulted in 50 positive cases (52.08%), 5 of which were 16% corresponded to Shigella spp. and 10% of Salmonella spp. The distribution of isolates was 50% for Shigella sonnei and 40% each for Salmonella agona and Salmonella enteritidis. For Shigella spp., the statistical analysis revealed a highly significant association (p<0.001) and a significant association (p<0.05) in patients with dysentery and in those experiencing straining at defecation, respectively. The results indicate that there is a very significant statistical association (p<0.01) between abdominal pain and Salmonella spp., and a significant association (p<0.05) with manifestation of straining at defecation and fever. Shigella spp showed 62.50% the resistance for ampicillin and 12.50% for chloramphenicol. Salmonella spp. showed 20.00% of resistance for ampicillin, ciprofloxacin and gentamicin.

La enfermedad diarreica representa un grave problema de salud pública, siendo las bacterias una de las causas más frecuentes, lo que obliga a realizar su búsqueda con un diagnóstico bacteriológico certero. Con la finalidad de determinar la frecuencia de Aeromonas spp. como agente causal de enfermedades gastrointestinales, se realizó un estudio en pacientes menores de seis años de edad con síndrome diarreico agudo, asistidos en la emergencia pediátrica del Servicio Autónomo Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá” (SAHUAPA), en Cumaná, estado Sucre; para ello se recolectaron 130 muestras de heces durante el período de mayo a septiembre de 2002, a las cuales se les realizaron estudios microbiológicos a través de coprocultivo y susceptibilidad antimicrobiana mediante la técnica de difusión en disco. Del total de muestras analizadas, se obtuvo un porcentaje de positividad de 24,60%; de los cuales 12,50% correspondieron a Aeromonas spp. Las especies identificadas del género Aeromonas, fueron A. caviae, A. hydrophila y A. sobria; Aeromonas caviae fue la más frecuente, representando el 50,00% de las especies aisladas. La distribución por edad, ubicó las especies de Aeromonas spp. en edades comprendidas de 1 a 4 años, específicamente en el grupo de edad de 1 a 2 años se ubicaron tres de los cuatro aislamientos obtenidos. En relación a la susceptibilidad antimicrobiana, las cepas aisladas de Aeromonas spp. fueron sensibles al cloranfenicol en 100,00% y al trimetoprim-sulfametoxazol en un 75,00%; así mismo, se mostraron resistentes a cefalotina en 75,00%. Los resultados obtenidos en este trabajo de investigación, muestran que Aeromonas spp. es una bacteria de baja frecuencia y de fácil tratamiento con antimicrobianos, en el caso de pacientes que así lo requieran; sin embargo, por su repercusión clínica y microbiológica se justifica su búsqueda en muestras intestinales.

Diarrhea represents a serious public health problem, and bacteria is one of the most frequent causes of the same, which requires the need to select an effective bacteriological diagnosis. In order to determine the frequency of Aeromonas spp. as a causal agent of gastrointestinal illnesses, a study was carried out in patients under 6 years of age with acute diarrheic syndrome, who were attended in the pediatric emergency service at the “Antonio Patricio de Alcalá” University Hospital (SAHUAPA), in Cumaná, Sucre state. For this study130 stool samples were collected during the period of May to September 2002, and a microbiological study of the samples was carried out through copro-culture and the antimicrobial susceptibility test using the disk diffusion method. Of the total number of samples analyzed, a positive response was obtained in 24,60%; of which 12,5% corresponded to Aeromonas spp. The species of the Aeromonas gender that were identified were were A. caviae, A. hydrophila and A. sobria. Aeromonas caviae was the most frequent, representing 50% of the isolated species. The distribution for age placed the species of Aeromonas spp. in the 1 to 4 year age group, and more specifically in the age group of 1 to 2 years where three of the four isolates were located. In relation to antimicrobial susceptibility, all the isolates of Aeromonas spp. were sensitive to chloramphenicol at 100,00% and to trimetroprim-sulfamethoxazole at 75,00%. They showed resistant to cefalotin at 75,00%. The results obtained in this research indicate that Aeromonas spp. presented a low frequency and ease of treatment with antimicrobials; however, due to their clinical and microbial repercussion, their identification in intestinal samples is justified.