RESUMO: O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é a linhagem de células somáticas mais antiga conhecida. É um câncer transmissível que se propaga naturalmente em cães e mutações genéticas já foram relatadas. O gene RASSF1 atua no reparo de danos ao DNA e presume-se que, quando suprimido ou com expressão gênica reduzida, o TVTC tende a progredir. A expressão do gene supressor de tumor, como RASSF1, foi quantificada em tecidos de dezessete animais e três culturas de células de tecidos tumorais. Em geral, o gene RASSF1 apresentou prevalência de subexpressão (65%) e ausência em 35% dos demais tecidos analisados. Células isoladas de culturas de tecidos tumorais também demonstraram 67% com expressão diminuída e 33% com expressão elevada, com diferença significativa entre os níveis de expressão gênica em amostras de tecido quando comparadas às culturas de células, com tecidos apresentando níveis mais baixos de expressão gênica em comparação com células. Anteriormente, relatamos que tanto o microambiente tumoral quanto o sistema imunológico do hospedeiro parecem influenciar a tumorigênese e o estágio do TVTC. Este é o primeiro artigo a demonstrar a expressão de RASSF1 no TVTC, possivelmente alterando sua tumorigênese e auxiliando no aumento da progressão tumoral.

ABSTRACT: Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is the oldest known somatic cell lineage. It is a transmissible cancer that propagates naturally in dogs and reportedly contains gene mutations. RASSF1 participates in DNA damage repair, and its downregulation, results in tumor progression. Hence, RASSF1 is a tumor suppressor gene. Its expression was quantified in tumors from seventeen animals and three cell cultures derived from tumors. In general, RASSF1 was underexpressed in 65%, and absent in 35% of tumor samples. Cells from tumor tissue cultures showed decreased expression of RASSF1 in 67% and elevated expression in 33% of samples tested. The tumor tissues showed significantly lower levels of RASSF1 expression compared to cultured cells. Previously we reported that both the tumor microenvironment and the host immune system appear to influence the tumorigenesis and stage of CTVT. This is the first article to demonstrate the expression of RASSF1 in CTVT. Decreased RASSF1 possibly helps tumor progression.

ABSTRACT: Mammary carcinomas are relatively common ailments among female canines aged around 10 years old, presenting an important morbidity with an average survival of five years. The cytoinclusion technique is frequently employed in human medicine as the investigative method of choice as it quickly provides resources for the determination of the correct therapeutic response, however, the effectiveness of the technique in canines remains understudied in veterinary medicine. This study aims at evaluating the degree of correlation with immunohistochemical marking for cytokeratin 5 (CK5), oestrogen and progesterone receptors (ER and PR) between the cytoinclusion and the histopathology technique in mammary carcinomas. Twenty-five samples of mammary carcinoma, both for the cytoinclusion and histopathological techniques were submitted for histological processing; microscope slides were created for hematoxylin-eosin (HE) staining and the immunohistochemical technique (IHC) was assessed for the ER, PR and CK5 receptors. Through the HE staining, we reached a concordance rate of 100% between the cytoinclusion and the histopathological analysis in the diagnosis of carcinomas. The immunohistochemical assay presented sensitivity of 85.71%, 95.45% and 100% and Cohen’s kappa of 0.78, 0.84 and 0.95 for ER, PR and CK5, respectively, as well as 100% specificity and P<0.01 for all three markers. Therefore, cytoinclusion represents an accessible, fast and low-cost method, offering high sensitivity for the cytomorphological and immunohistochemical diagnosis of mammary carcinoma in female canines.

RESUMEN: Los carcinomas mamarios son relativamente comunes en hembras caninas con edades de alrededor 10 años y representan un importante factor de morbilidad para estas hembras; la técnica de citoinclusión es frecuentemente empleada en medicina humana como un método de diagnóstico que permite proveer información rápida para la determinación de una conducta terapéutica correcta, sin embargo, la efectividad de esta técnica permanece poco estudiada en medicina veterinaria. El objetivo del estudio fue evaluar el grado de correlación entre marcadores inmunohistoquímicos para citokeratina 5 (CK5), receptores de estrógenos y progesterona (RE y RP) entre la técnica de citoinclusión y la técnica histopatológica en carcinoma mamario. Veinticinco muestras de carcinoma mamario para la técnica de citoinclusión e histopatológica fueron sometidas a procesamiento histológico, láminas fueron confeccionadas para la tinción mediante hematoxilina y eosina (HE), y la técnica de inmunohistoquímica para identificar la expresión de RE, RP y CK5. Mediante la tinción de la HE fue encontrado una proporción de concordancia del 100% entre el análisis de citoinclusión e histopatológico de carcinoma mamario. El análisis inmunohistoquímico evidenció una sensibilidad del 85,71%, 95,45% y 100% y un índice kappa de Cohen de 0,78, 0,84 y 0,95 para RE, RP y CK5, respectivamente, así como 100% de especificidad P<0,01 en todos los marcadores. De esta forma, la citoinclusión representa un método rápido, accesible y de bajo costo, que ofrece alta sensibilidad para el diagnóstico citomorfológico e inmunohistoquímico en carcinoma mamario de perras.