A morfologia polínica e a estrutura da exina de 17 espécies de Lippia L. foram investigadas neste trabalho utilizando microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. Dentre as espécies estudadas, 14 apresentaram grãos de pólens tricolporados, duas apresentaram pólens tri e tetracolporados e uma única espécie apresentou pólens tetracolporados. O âmbito variou de triangular a quadrado, e a forma variou de oblato-esferoidal à prolato-esferoidal. Três diferentes tipos de ornamentação da exina foram observados: psilada, escabrada e perfurada. Em adição aos dados morfológicos, encontramos associações positivas entre o número cromossômico e o tamanho dos grãos de pólen e também entre o comprimento e a larguara dos colpos. Os resultados indicaram que as características dos grãos de pólen no gênero Lippia podem ser utilizadas como um caracter taxonômico adicional do gênero.

The pollen morphology and exine structure of 17 species of Lippia L. were investigated in this work using light and scanning electron microscopy. Among the species studied, 14 showed tricolporate pollen grains, two had tri- and tetracolporate pollen grains and a single species exhibited, only tetracolporate pollen. The amb ranged from triangular to square, and the shape varied from oblate-spheroidal to prolate-spheroidal. Three different types of exine ornamentation were observed: psilate, scabrate and perforate. In addition to morphological data, we found positive association between the chromosome numbers and size of pollen grains, and also between the length and width of the colpi. The results indicate that the characteristics of pollen grains in Lippia may be used as an additional taxonomic character of the genus.

Análises citogenéticas, de viabilidade do pólen, do conteúdo de DNA nuclear e marcadores RAPD foram empregadas no estudo de três quimiotipos de Lippia alba (Mill.) (Verbenaceae) visando contribuir para o entendimento da variação genética entre os mesmos. Diferentes níveis de ploidia e indivíduos mixoploides foram observados. Este trabalho compreende o primeiro relato de diferentes números cromossômicos (citótipos) em L. alba. Os números cromossômicos dos quimiotipos La2-carvona e La3-linalol sugere que eles seja poliploides. A análise da citometria de fluxo mostrou um aumento do conteúdo de DNA nuclear que não foi diretamente proporcional à variação no nível de ploidia. A análise de agrupamento baseada nos marcadores RAPD demonstrou que La3-linalol compartilha marcadores genéticos com La1-citral e La2-carvona. A análise mostrou que a maior parte da variação genética de La3-linalol pode ser consequência da mixoploidia. Nossos dados indicam que a reprodução sexual entre os três quimiotipos parece improvável, sugerindo o início de isolamento reprodutivo. Os resultados demonstraram que a análise cromossômica, a quantificação do DNA nuclear estimado e os marcadores RAPD constituem excelentes ferramentas para detecção de variação genética entre quimiotipos de L. alba.

Cytogenetic analyses, of pollen viability, nuclear DNA content and RAPD markers were employed to study three chemotypes of Lippia alba (Mill.) (Verbenaceae) in order to understand the genetic variation among them. Different ploidy levels and mixoploid individuals were observed. This work comprises the first report of different chromosome numbers (cytotypes) in L. alba. The chromosome numbers of La2-carvone and La3-linalool chemotypes suggested that they are polyploids. Flow cytometric analysis showed an increase of nuclear DNA content that was not directly proportional to ploidy level variation. A cluster analysis based on RAPD markers revealed that La3-linalool shares genetic markers with La1-citral and La2-carvone. The analysis showed that the majority of genetic variation of La3-linalool could be a consequence of ixoploidy. ur data indicates that sexual reproduction aong those three chemotypes is unlikely and suggests the beginning of reproductive isolation. The results demonstrated that chromosome analysis, nuclear DNA content estimation and RAPD markers constitute excellent tools for detecting genetic variation among L. alba chemotypes.

A capacidade reduzida de armazenamento apresentada pelas sementes recalcitrantes tem impedido sua inclusão em programas de conservação ex situ. As causas da rápida queda da viabilidade durante o armazenamento ainda não estão totalmente elucidadas. Visando, portanto, a um melhor entendimento desse comportamento, embriões de sementes recalcitrantes de Inga vera subsp. affinis foram armazenados sob várias condições e avaliados periodicamente com relação a aspectos fisiológicos e citológicos. Embriões armazenados sem secagem, a 5ºC, perderam totalmente a viabilidade em 18 dias. Embriões parcialmente desidratados apresentaram 95% de germinação após 14 dias de armazenamento em sacos plásticos selados. Entretanto, após 30 dias de armazenamento, a viabilidade foi totalmente perdida. O armazenamento de embriões sem secagem em solução de polietileno glicol (PEG) a um potencial hídrico de -1,7 MPa foi capaz de manter uma alta capacidade de germinação até 30 dias de armazenamento. Quando adicionado à solução de PEG, o ácido abscísico mostrou uma forte interação com a temperatura de armazenamento, com um efeito positivo na longevidade dos embriões armazenados a 20ºC, porém um efeito negativo nos embriões armazenados a 5ºC. No entanto, em nenhuma condição, a viabilidade dos embriões pôde ser mantida por mais de 50 dias. Embriões de sementes coletadas nas mesmas árvores no ano seguinte mostraram uma melhor capacidade de armazenamento, alcançando 45% de germinação após 62 dias de armazenamento. A análise de alterações celulares durante o armazenamento dos embriões mostrou o desaparecimento de grânulos de amido e vários danos às células, como dobras na parede celular e fragmentação do citoplasma.

The remarkably short storability of recalcitrant seeds has prevented their inclusion in programs of ex situ conservation. The causes of their desiccation sensitivity and rapid decline in viability during storage are not fully elucidated yet. In this study the highly recalcitrant, fully viable embryos of the tree species Inga vera subsp. affinis were stored under various conditions and analyzed physiologically and cytologically at intervals, in order to obtain more insights in their loss of viability during storage. Embryos stored fully hydrated at 5ºC fully lost viability in 18 d. Sealed storage of partially dehydrated embryos slightly prolonged their viability, with 95% germination being attained after 14 d of storage. However, after 30 d of storage, viability was completely lost. Storage of hydrated embryos in a solution of polyethylene glycol (PEG) at -1.7 MPa water potential was capable of maintaining high germinability until 30 d of storage. When added to the PEG solution, abscisic acid showed a strong temperature-dependent interaction, with a positive effect on the longevity of embryos stored at 20ºC and a negative effect on embryos stored at 5ºC. In any case, embryo viability could be maintained no longer than 50 d. Embryos from seeds collected from the same trees in the following year showed better storability and still attained 45% germination after 62 d of storage. Analysis of cellular alterations during storage and viability loss of the embryos showed disappearance of starch granules and various damages to the cells, such as cell wall folding and cytoplasm fragmentation.

Colletotrichum gossypii (Cg) (Glomerella gossipii) e Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides (Cgc) são agentes etiológicos da antracnose e da ramulose no algodoeiro (Gossypium hirsutum). Ambos os patógenos são encontrados na forma mitospórica na natureza e a diferenciação entre eles é feita principalmente a partir dos sintomas das doenças causadas. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de verificar a ocorrência de reações de compatibilidade sexual e incompatibilidade vegetativa entre e dentro de isolados de Cg e Cgc e avaliar alguns aspectos citológicos das formas de esporulação. Pelos resultados, observou-se existência de grande variabilidade dentro dessa espécie. Os conídios diferiram em tamanho em todos os isolados, sendo encontrados conídios bi- e trinucleados. Em cultura, nas áreas de contato (entre as hifas), foram observadas reações de incompatibilidade vegetativa tanto entre quanto dentro dos isolados. Em apenas um dos isolados avaliados ocorreu reprodução sexuada de forma espontânea, sugerindo comportamento homotálico.

Colletotrichum gossypii (Cg) (Glomerella gossypii) and Colletotrichum gossypii var. cephalosporioides (Cgc) are pathogens of anthracnose and ramulose in cotton (Gossypium hirsutum). These pathogens cause typical and distinct symptoms in susceptible plants and they occur in the mitosporic phase of hosts in nature. This work aimed to check the occurrence of sexual and vegetative incompatibility reactions between and within isolates of Cg and Cgc, and also to study some cytological aspects involving the sporulation process. A large variability was observed within these pathogens. Conidia were differentiated in size in all isolates and some presented two or three nuclei. Vegetative incompatibility between and within isolates took place at the contact lines of mycelia growth. Spontaneous sexual reproduction was found in only one isolate, indicating the homothallic behavior of this isolate.

Um estudo citogenético e morfológico foi conduzido em Colletotrichum lindemuthianum (Glomerella cingulata f. sp. phaseoli), o patógeno responsável pela antracnose do feijoeiro (Phaseolus vulgaris). Nesta espécie há algumas evidências de variações genômicas, porém não se sabe se os processos envolvidos são análogos aos que ocorrem com fungos considerados modelos genéticos. Seis isolados de C. lindemuthianum do feijoeiro foram utilizados e a reprodução sexual foi observada in vitro. A meiose e a formação de ascósporos foi estudada utilizando-se técnicas de citogenética e microscopia ótica pela primeira vez. O estudo do núcleo e o número de cromossomos foram estudados utilizando-se uma mistura dos corantes carmin e orceína propiônica. A divisão nuclear e a maturação dos ascósporos foram assincrônicas. A meiose foi observada em três isolados desta espécie. Na fase assexual, polimorfismo cromossômico nos conídios foi observado microscopicamente e o processo de mitose foi descrito.

Cytogenetic and morphological studies were conducted with Colletotrichum lindemuthianum (Glomerella cingulata f. sp. phaseoli), the pathogen responsible for anthracnose of common bean (Phaseolus vulgaris). In this species, there is some evidence of genomic variation but it is unknown whether the process occurs in a manner similar to other fungal genetic models. Six isolates from bean plants were used and sexual reproduction was observed in vitro. Meiosis and ascospore formation were investigated by cytogenetical approaches and light microscopy. To study the nucleus and chromosome numbers, a mixture of carmine and orcein propionic dyes was used. Nucleus divisions as well as ascospore maturation were asynchronous. Meiosis was observed in three isolates. In the asexual form, chromosomal polymorphism in conidia was also observed microscopically and the mitosis process was described.

A extração de DNA para realização de PCR é demorada e envolve vários reagentes. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia rápida e fácil que permita utilizar a técnica de PCR sem necessidade de extração de DNA. Diferentes isolados de Colletotrichum lindemuthianum foram utilizados. Para obtenção do DNA moldes foram testados protoplastos obtidos através do uso de enzimas líticas, incubados sob altas temperaturas e diferentes metodologias. Uma metodologia rápida (10 minutos) foi desenvolvida para produtos de PCR menores (<750 pb).

Isolation of DNA for PCR is time-consuming and involves many reagents. The aim of this work was to optimise a rapid and easy PCR methodology without previous DNA isolation. Different strains of the phytopathogenic fungus Colletotrichum lindemuthianum were used. Protoplasts were generated using lytic enzymes under high incubation temperatures using different methodologies to obtain the template. A rapid (10 minute) methodology was successful for smaller amplicons (<750 bp).