Resumo As amebas de vida livre (AVL) são protozoários ubíquos com quatro gêneros patogênicos para o ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, e Sappinia. Acanthamoeba pode atuar como um reservatório de microrganismos (endossimbiontes), e portanto, em um ambiente hospitalar, representaria um risco de transmissão de bactérias, vírus e fungos intra-nosocomiais. A presença de AVL, com em Acanthamoeba spp. em um hospital pediátrico da província de Buenos Aires, Argentina, foi investigada. Vinte e duas amostras foram coletadas em lavatórios e incubadoras em Salas de Neonatologia e Cuidados Intensivos, cultivadas a 37 e 42 °C. Os isolados foram identificadas molecularmente. Foram encontradas Acanthamoeba spp. em 63,64% das amostras. Esta investigação representa o primeiro estudo realizado na Argentina sobre a detecção de Acanthamoeba spp. em salas fechadas de um hospital. A sua presença é um sinal de alarme e um alvo para investigar possíveis reservatórios de microrganismos patogênicos em ambientes hospitalares.

Abstract Free-living amoebae (FLA) are ubiquitous protozoa with four pathogenic genera for humans: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, and Sappinia. Acanthamoeba can act as a reservoir of microorganisms (endosymbionts), for which reason, in a hospital environment, it would imply a risk for transmission of nosocomial bacteria, viruses and fungi. The presence of AVL, with emphasis on Acanthamoeba spp., was investigated in a pediatric hospital. Twenty-two samples were collected from sinks and incubators in Neonatology and Intensive Care rooms, which were cultured at 37 and 42 °C. The isolates found were molecularly identified. A total of 63.64% of the samples presented Acanthamoeba spp. This research represents the first study in Argentina on the detection of Acanthamoeba spp. in closed rooms of a hospital. Its presence is an alarm signal, and it is a useful target to investigate possible reservoirs of pathogenic microorganisms in hospital environments.

Resumen Las amebas de vida libre (AVL) son protozoos ubicuos con cuatro géneros patógenos para el ser humano: Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, y Sappinia. Acanthamoeba puede actuar como reservorio de microorganismos (endosimbiontes), por lo cual, en medio hospitalario, implicaría un riesgo para la transmisión de bacterias, virus y hongos intranosocomiales. Se investigó la presencia de AVL, con énfasis en Acanthamoeba spp., en un hospital pediátrico de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se colectaron 22 muestras de lavamanos e incubadoras en salas de Neonatología y Terapia Intensiva, las que fueron cultivadas a 37 y 42 °C. Los aislados fueron identificados molecularmente. El 63,64% de las muestras presentaron Acanthamoeba spp. Esta investigación representa el primer estudio realizado en la Argentina sobre la detección de Acanthamoeba spp. en salas cerradas de un hospital. Su presencia es una señal de alarma y resulta un blanco útil para investigar posibles reservorios de microorganismos patógenos en ambientes hospitalarios.

Abstract The objective of the study was to compare the DNA extraction of Acanthamoeba sp. cysts with a commercially available method and four non-commercial ones, with heat and ultrasound treatment that allows amplification by conventional polymerase chain reaction (PCR), reducing sample preparation and extraction times, such as a tool for diagnosis in the clinical laboratory. To this aim, a strain of Acanthamoeba T4 grown on non-nutrient agar was used. Plates with cysts at three different encystation times were stored at room temperature until the study was carried out. DNA was extracted with five methods that included pretreatments (thermal and ultrasound) or combinations of them. PCR was performed using specific primers JDP1/JDP2. Concentration and purity of DNA revealed statistically significant differences (p<0.0001) between methods. Method E (commercial), method A (thermal) and B (ultrasound) got the best yields in amplifying the specific fragment of Acanthamoeba sp. by conventional PCR.

Resumen El objetivo del estudio fue comparar la extracción de ADN de quistes de Acanthamoeba sp. con un método disponible comercialmente y cuatro no comerciales utilizando tratamiento térmico y ultrasonido para la amplificación por una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional, reduciendo tiempos de preparación y extracción de las muestras, como una herramienta para el diagnóstico en el laboratorio clínico. Se utilizó una cepa de Acanthamoeba, genotipo T4, cultivada en agar no nutritivo. Los quistes para analizar, en tres períodos de enquistamiento, se almacenaron a temperatura ambiente. Se extrajo ADN mediante cinco métodos: pretratamiento térmico, ultrasonido y combinaciones de ellos. La PCR se llevó a cabo utilizando cebadores específicos JDP1/JDP2. La concentración y pureza del ADN extraído con los protocolos evaluados revelaron diferencias estadísticamente significativas (p<0,0001). El método E (comercial), el A (térmico) y el B (ultrasonido) lograron los mejores rendimientos en la amplificación del fragmento específico de Acanthamoeba sp. por la PCR convencional.

Resumo O objetivo do estudo foi comparar a extração de DNA de cistos de Acanthamoeba sp. com um método comercialmente disponível e quatro não comerciais utilizando tratamento térmico e ultrassom para amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional, reduzindo os tempos de preparo e extração das amostras, como ferramenta para o diagnóstico no laboratório clínico. Foi utilizada uma cepa de Acanthamoeba, genótipo T4, cultivada em ágar não nutritivo. Os cistos para analisar foram armazenados em temperatura ambiente, correspondendo a três períodos de encistamento. O DNA foi extraído por cinco métodos: pré-tratamento térmico, ultrassom e combinações deles. A PCR foi realizada usando iniciadores específicos JDP1/JDP2. A concentração e a pureza do DNA extraído com os protocolos avaliados revelaram diferenças estatisticamente significativas (p<0,0001). Os métodos E (comercial), A (térmico) e B (ultrassom) alcançaram os melhores rendimentos na amplificação do fragmento específico de Acanthamoeba sp. por PCR convencional.

Foi estudada a associagáo entre a infestagáo, parámetros laboratoriais e sinais clínicos em pessoas expostas à infestagáo por Trichinella spiralis durante um surto de triquinose, no sudoeste da provincia de Buenos Aires, Argentina. Também se pesquisou o grau de concordáncia entre os testes imunosorológicos mais comumente utilizados no diagnóstico de triquinose humana. Em pessoas expostas, a presenga de sintomas clínicos e os níveis elevados da enzima creatina fosfoquinase no dia 7 pós-exposigáo foram associados significativamente à infestagáo no dia 30 pós-exposigáo. Em contraste, a eosinofilia (> 7%) aos sete dias pós-exposigáo náo foi associada ao estado de infestagáo aos 30 dias pós-exposigáo. O maior grau de concordáncia entre testes imunoserológicos ocorreu entre o par de ELISA-Western Blot tanto no dia 7 quanto no dia 30 pós-exposigáo.

The association between infestation, laboratory parameters and clinical signs was investigated in human patients exposed to Trichinella spiralis during an outbreak of human trichinellosis in southwest Buenos Aires province, Argentina. The degree of agreement between immunoserological tests commonly used for diagnosis of human trichinellosis was determined. Among exposed individuals, the presence of clinical symptoms and high concentration of the creatine phosphoquinase enzyme 7 days post-exposure was significantly associated with infestation by day 30 post-exposure. Contrarily, Randazzo V et al. a high level of eosinophils (>7%) 7 days post-exposure was not associated with infestation by day 30 post-exposure. Test agreement was highest between ELISA and Western Blot both by days 7 and 30 post-exposure.

Se estudió la asociación entre infestación, parámetros de laboratorio y signos clínicos en personas expuestas a infestación por Trichinella spiralis durante un brote de trichinellosis en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Asimismo, se investigó el grado de concordancia entre las pruebas inmunoserológicas más comúnmente utilizadas en el diagnóstico de trichinellosis humana. En las personas expuestas, la presencia de síntomas clínicos y los niveles elevados de la enzima creatina fosfoquinasa al día 7 post-exposición se asociaron significativamente con la infestación al día 30 post-exposición. Por el contrario, la eosinofilia (>7%) a los siete días postexposición no se asoció al estado de infestación a los 30 días post-exposición. El mayor grado de concordancia entre pruebas inmunoserológicas se dio entre el par ELISA-Western Blot tanto al día 7 como 30 post-exposición.

Acanthamoeba spp. has been isolated from many habitats, including swimming pools. Investigations on its distribution are relevant because many of its species cause human diseases. The aim of the present work was to investigate, isolate and characterize protozoan of the genus Acanthamoeba from indoor swimming pools in Bahía Blanca, Argentina, in the four seasons, during the 2007-2008 period. Seven pools were studied and samples were collected from the bottom, surface and wall by scraping them. Besides, samples for bacteriological analysis were taken from each pool. The samples were analyzed by direct observation and by culturing on non nutritive agar at 37 °C and at 42 °C. The generic identification was performed according to the morphologic characteristics of cysts and trofozoites, while the amoebo-flagellate transformation test was carried out to identify Naegleria. Free-living amoebas were isolated from five of the seven swimming pools examinated, in at least one season. Naegleria genus was not found as the amoebo-flagellate transformation tests were negative in all samples. All the isolations corresponded to the genus Acanthamoeba belonging to Pussard & Pons morphological Groups II and III. Although elimination of Acanthamoeba from the water is difficult because it is a ubiquitous protozoan. which is highly resistant to the commonly used disinfectants, a thorough cleaning of the pools to minimize the risks of infection is recommended.

Acanthamoeba ha sido aislada de numerosos hábitats incluyendo piletas de natación. Estudiar su distribución es importante ya que algunas especies causan enfermedad en el hombre. El objetivo del presente trabajo fue la búsqueda, aislamiento y caracterización de protozoos del género Acanthamoeba en piscinas cubiertas de la ciudad de Bahía Blanca, Argentina, en las cuatro estaciones del año durante 2007-2008. Se estudiaron 7 piscinas y en cada una se tomaron cuatro muestras: fondo, superficie, raspado de pared y para análisis bacteriológico. Las muestras se analizaron por observación directa y por cultivo en agar no nutritivo a 37 °C y a 42 °C. La identificación genérica se realizó de acuerdo con las características morfológicas de quistes y trofozoítos y para identificar Naegleria se realizó la prueba de transformación ameboflagelar. En 5 de las 7 piscinas se aislaron amebas de vida libre al menos en una época del año. La prueba de transformación ameboflagelar resultó negativa, descartando al género Naegleria. Todos los aislamientos correspondieron al género Acanthamoeba Grupos II y III de Pussard y Pons. Si bien la eliminación de Acanthamoeba en las aguas de natatorios resulta muy difícil por tratarse de un protozoario ubicuo y sumamente resistente a los desinfectantes comúnmente utilizados, se recomienda una limpieza profunda de las piscinas que minimice los riesgos de infección.

This descriptive epidemiological research studies the prevalence of intestinal parasites in 221 children attending school in Mendoza, Argentina, and living in an urban area with potable water and complete sanitary system. Samples of faeces were collected and kept in a sodium acetate-acetic acid-formalin (SAF) solution during 7 days and anal mucus was collected by means of the modified Graham test during the same period of time. Samples were processed by means of the modified Telemann method and Kinyoun staining. Gauzes were put in 30 ml of 5%-formol solution. Results reveal an 80.5% prevalence of intestinal parasites, with values varying between 88% (age group from 5 to 10) and 63.8% (age group from 11 to 14). No significant differences were observed in the distribution by sex. A 37.6% of the positive group showed a unique species whereas the rest of the studied population showed parasite associations of up to 4 different genera. Blastocystis hominis, Giardia lamblia, Endolimax nana, Entamoeba coli, Dientamoeba fragilis, Chilomastix mesnilii, Enterobius vermicularis and Hymenolepis nana were identified, the latter being detected as from the age of 6 years. The study reveals a high prevalence of intestinal parasites in 1-to 14-year-old children. Although both appropriate potable water and sewer system are available, we conclude that the high prevalence of intestinal parasites is due to inappropriate hygienic habits of the population and that education for the prevention of health is therefore as important as appropriate sanitary conditions

En el presente estudio epidemiológico descriptivo, se investigó la presencia de parásitos intestinales en 221 niños de una escuela de la ciudad de Mendoza, Argentina, residentes en zona urbana con agua potable y red sanitaria completa. La comunidad educativa fue motivada a participar mediante la realización de talleres explicativos dirigidos a los docentes y padres en forma separada y en grupos no mayores a 30 personas, lográndose una participación de 89,5% del cuerpo docente y 70,0% de los padres. Las muestras de materia fecal se colectaron durante siete días en solución de acetato sódico - ácido acético - formalina (S AF) y el mucus anal, mediante la prueba Graham modificado en igual período de tiempo. Las heces fueron procesadas por el método de Telemann modificado y se realizaron coloraciones de Kinyoun para la investigación de coccidios intestinales. Para el prueba de Graham modificado, las gasas se colocaron en 30 mi. de solución formolada al 5%. Los resultados mostraron una prevalencia global de parásitos intestinales del 80,5%, con valores que oscilaron entre el 88% (grupo etario de 5 a 10 años) y el 63,8% (grupo etario de 11 a 14 años). No se encontraron diferencias significativas en la distribución por sexo. El 37,6% de los positivos presentó una especie única, mientras que en el resto se hallaron asociaciones parasitarias de hasta 4 géneros diferentes. Se identificaron: Blastocystis hominis, Giardia lamblia, Endolimax nana, Entamoeba coli, Dientamoeba fragilis, Chilomastix mesnilii, Enterobius vermicularis e Hymenolepis nana, siendo detectada esta última a partir de los 6 años

The aim of the present study was to detect the presence of sanitarily important parasit es in the water from Arroyo Napostá as well as in the water used for recreational purposes (public swimming-pools) and for consumption in the city of Bahía Blanca, province of Buenos Aires, Argentina. To this end, 24,000 liters of water from different sectors of Arroyo Napostá; 2,000 liters of water from each of the three public swimming-pools of Bahía Blanca; and 8,000 liters of water for consumption were collected using polypropylene spun cartridge filters with a 1 mm porosity (Cuno Micro Wind II). Further processing was conducted following Madore´s technique (1987) modified by Pezzani (2000). Detection of Cryptosporidium sp. Giardia sp. was carried out via direct immunofluorescence. Our study confirmed the presence of the following parasites in the areas of study: Hymenolepis diminuta eggs, Giardia sp cysts, Toxocara sp eggs, Entamoeba sp cysts, Endolimax sp cysts, Nematode larvae, Trichostrongylus sp eggs, Ascaris sp eggs, and Cryptosporidium sp cysts in the water from Arroyo Napostá; Hymenolepis diminuta eggs, Giardia sp cysts, Toxocara sp eggs, Entamoeba sp cysts, Endolimax sp cysts, Nematode larvae, Trichostrongylus sp eggs, Ascaris sp in the water from swimming-pools; and Cryptosporidium sp in the water for consumption. The results from the present study urge sanitary authorities from the city of Bahía Blanca to take measures in order to prevent not only humans but also animals from getting in contact with these waters which are contaminated and dangerous to health

El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de parásitos de importancia sanitaria para el hombre, en el arroyo Napostá, en aguas recreacionales (piscinas públicas) y de consumo en Bahía Blanca (Provincia de Buenos Aires) Argentina. Se recolectaron 24.000 litros de agua de diferentes sectores del arroyo Napostá, 2.000 litros de cada una de las tres piscinas públicas y 8.000 litros de agua de consumo, mediante filtros de poro de una micra de diámetro (Cuno Micro Wind). El procesamiento posterior se efectuó siguiendo la técnica de Madore (1) modificada por Pezzani (2). La detección de Cryptosporidium sp. Giardia sp. se realizó mediante inmunofluo-rescencia directa. Las formas parasitarias observadas, fueron: huevos de Hymenolepis diminuta, quistes de Giardia sp, huevos de Toxocara sp, quistes de Entamoeba sp. Quistes de Endolimax sp, larvas de Nematodos, huevos de Trichostrongylus sp, huevos de Ascaris sp y quistes de Cryptosporidium sp. en las aguas del Arroyo Napostá; huevos de Hymenolepis diminuta, quistes de Giardia sp, huevos de Toxocara sp, quistes de Entamoeba sp. quistes de Endolimax sp, larvas de Nematodos, huevos de Trichostrongylus sp, huevos de Ascaris sp. en agua de piscina; y quistes de Cryptosporidium sp. en agua de consumo. En conclusión es necesario que las autoridades sanitarias adopten medidas tendientes a evitar que el hombre y los animales tomen contacto con estas aguas contaminadas y peligrosas para la salud

The geometrical patterns of egg cells of Triatoma patagonica Del Ponte, 1929, a species considered to be an active vector of Chagas' disease, were studied by scanning electron microscopy (SEM). Eggs of known age were selected according to their morphological characteristics, namely those which were 5 days old, 14 days old, and those which were hatched. Images of the exchorion were registered in the cephalic, caudal, and medial areas. The results showed that T. patagonica eggs evidence that in their cephalic and caudal areas, cells have either an hexagonal, pentagonal, or quadrilateral configuration, while in the medial area, cells have mainly an hexagonal configuration. It was also observed that the geometrical patterns of the different parts of the egg undergo no changes during embryonal development.

Se estudiaron por microscopía electrónica de barrido (SEM) los patrones geométricos de las células de huevos de Triatoma patagonica Del Ponte, 1929, especie considerada vector activo de la enfermedad de Chagas. Se seleccionaron huevos de edad conocida: 5 días, 14 días y eclosionados, según sus características morfológicas y se registraron imágenes del exocorion en las zonas cefálica (opérculo), caudal y media. Los resultados obtenidos mostraron que los huevos de T. patagonica presentan en sus zonas cefálica y caudal, células con forma de hexágonos, pentágonos y cuadriláteros y en la media principalmente hexágonos. Se observó que los patrones geométricos de las distintas partes del huevo no cambian durante el desarrollo embrionario.

Trichomonas vaginalis laboratory diagnosis is still the focus of attention of several research studies. Mendez et al have proposed a staining-fixing technique for the wet mount examination of this flagellate. The purpose of the present study is to examine the validity of such proposal against the conventional wet mount examination. For this purpose, a hundred vaginal secretions were analyzed. They were obtained from the vaginal cavity of female subjects to whom a microbiological examination had been requested. Samples were collected and processed following Méndez et al's technique. In parallel, and before an hour of obtention had elapsed, a conventional wet mount examination of the obtained material was carried out between the slide and cover glass and with no staining solution. The results obtained were analyzed with EpiDat Software from PAHO/WHO. The total of positive results in both tests was considered as reference test. The results derived from the present study with a 95% confidence level were, for conventional wet mount examination: Sensitivity 66.6%, Specificity 100%, Predictive Value of Positive Result (PVPR) 100%, Predictive Value of Negative Result (PVNR) 93.93% and Global Value of the Test 94.59% and ratio of verisimilitude negative 0.33. For the staining-fixing technique, Sensitivity, Specificity, PVPR, PVNR, Global Value of the Test were 100% and ratio of verisimilitude negative was 0.00. Based on its specificity, diagnostic sensitivity, PVPR, and PVNR, and in view of our results, it can be concluded that staining-fixing technique could be recommended either as a second test or instead of the conventional wet mount examination for the direct diagnosis of T. vaginalis in vaginal secretions.

El diagnóstico de laboratorio del parásito Trichomonas vaginalis, sigue siendo objeto de nuevos estudios. Así, Mendez y col., sugieren la utilización de un fijador-colorante con azul de metileno para el diagnóstico directo de este flagelado. En el presente trabajo se efectuó la validación de la mencionada propuesta frente al examen en fresco. Se analizaron cien flujos vaginales, obtenidos de fondo de saco, de pacientes a las cuales se les había solicitado examen microbiológico de flujo vaginal. Las muestras fueron recolectadas y procesadas siguiendo la técnica de fijador-colorante con azul de metileno, efectuándose, además, un examen en fresco del material obtenido, sin coloración, entre porta y cubreobjetos, antes de transcurrida la hora de la obtención. El análisis de los resultados fue realizado mediante el software EpiDat de la OPS/OMS. La sumatoria de los positivos por ambas pruebas fue considerada como prueba de referencia. Los resultados, para un nivel de confianza del 95%, fueron, para el examen en fresco: Sensiblidad (S) 66,6%, Especificidad (E) y valor predictivo del resultado positivo (VPRP) 100%, valor predictivo del resultado negativo (VPRN) 93,93%, Valor global de la prueba (VGP) 94,59% y Razón de verosimilitud negativa (RVN) 0,33. Para el fijador-colorante con azul de metileno. S, E, VPRP, VPRN y VGP 100%; RVN 0 (cero). De acuerdo con los resultados obtenidos, se puede señalar que el fijador-colorante evaluado, en base a su especificidad, sensibilidad diagnóstica, VPRP y VPRN es recomendable para el diagnóstico directo de T. vaginalis en flujo vaginal, en reemplazo del examen en fresco, o como segundo test.

The purpose of this research is to carry out an epidemiological characterization of the different types of parasitosis detected in the city of Bahía Blanca (Argentina) (1994 to 1999). To this end, the prevalence of: enteroparasitosis, trichomonosis, toxoplasmosis, Chagas disease, malaria, hydatidosis, toxocarosis, cysticercosis, and trichinellosis in human beings is reported in this study. Furthermore, the frequency and spectrum of the parasites found in the dogs´ excrements collected from the public thoroughfare as well as parasitism rates in the vegetables from the truck farms of the city are also included in the present study. The high rates of enteroparasitosis in human beings ranging from 28% to 87.9% depending on the areas of study, those in dogs´ excrements reaching a percentage of 33.1%, and the presence of vegetables from fully contaminated truck farms are indicative of a serious intestinal parasite-transmission problem in the city of Bahía Blanca urging for preventive measures in order to minimize this situation