Abstract To meet the demands of the production chain, breeding programs need to reduce the time for selection and development of higher yielding maize genotypes. This involves application of new strategies, such as the use of the doubled haploid lines. We evaluated the use of stomatal area and density in distinguishing doubled haploids (DH) from false positive (FP) plants derived from nine tropical source populations. We selected four DH plants and two FP plants for identification of DH through leaf anatomy in the populations, in each group. Data on stomatal area and density were considered in a completely randomized model in a factorial scheme (populations and genotypes) and analyzed by restricted maximum likelihood. There were statistically significant effects of populations and genotypes for both traits. For stomatal density, the population by genotype interaction was not verified. Stomatal density proved to be efficient for distinguishing DH and FP for use in selection of doubled haploids.

Abstract The efficiency of maize transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens is influenced by various factors. The aim of this study was to test the effect of different concentrations of N6 salts (50% - half strength, and 100% - full strength) in the infection and cocultivation media on genetic transformation efficiency of the L3 tropical elite maize line. Immature embryos were transformed via A. tumefaciens harboring the binary vector pTF102 containing the genes uidA and BAR under control of the CaMV35S promoter. The efficiency of the transgenic events produced was 3% for full strength and 1.1% for half strength N6 salts. Although under a lower concentration of salts, GUS expression was stronger; under this concentration, regeneration was less efficient. Thus, the results showed that the presence of 100% N6 salts in the infection and cocultivation media favored genetic transformation of the L3 maize inbred line mediated by A. tumefaciens.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade de 24 isolados de Beauveria contra larvas de Spodoptera frugiperda e caracterizá-los molecularmente, por meio do seqüenciamento da região ITS do rDNA e de marcadores RAPD. O seqüenciamento de fragmentos de 570 pares de bases, da região ITS do rDNA, possibilitou a identificação dos isolados como B. bassiana e B. brongniarti, pela comparação com seqüências depositadas no GenBank. Sessenta e sete fragmentos polimórficos de RAPD foram capazes de diferenciar 20 entre 24 isolados de Beauveria, e agrupá-los de acordo com o inseto hospedeiro e com a patogenicidade contra a lagarta-do-cartucho do milho. Os marcadores RAPD foram altamente associados à patogenicidade contra S. frugiperda e explicaram até 67% da variação fenotípica. Além da identificação e caracterização molecular de isolados de Beauveria, o seqüenciamento da região ITS, aliado aos marcadores RAPD, é útil na seleção de isolados potencialmente eficazes contra larvas de S. frugiperda e no monitoramento de liberações desses microrganismos em programas de biocontrole.

The objective of this work was to evaluate the pathogenicity of 24 Beauveria isolates to Spodoptera frugiperda larvae, and characterize them molecularly through rDNA-ITS sequencing and RAPD markers. Sequencing of rDNA-ITS fragments of 570 bp allowed the identification of isolates as B. bassiana or B. brongniarti by sequence comparison to GenBank. Sixty seven polymorphic RAPD fragments were capable to differentiate 20 among 24 Beauveria isolates, grouping them according to the derived host insect and to pathogenicity against maize fall armyworm larvae. Three RAPD markers were highly associated to the pathogenicity against S. frugiperda, explaining up to 67% of the phenotypic variation. Besides identification and molecular characterization of Beauveria isolates, ITS sequence and RAPD markers proved to be very useful in selecting the isolates potentially effective against S. frugiperda larvae and in monitoring field release of these microorganisms in biocontrol programs.

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um sistema de transformação genética para genótipos tropicais de milho pelo bombardeamento de embriões imaturos com micropartículas. O bombardeamento com partículas foi realizado utilizando-se uma construção gênica contendo os genes bar e uidA sob o controle do promotor CaMV35S. As melhores condições para transformação das linhagens de milho tropical L3 e L1345 foram obtidas após o cultivo de embriões imaturos durante 4 horas, antes do bombardeamento, em alta osmolaridade, e bombardeados com a pressão de 1.100 psi de gás hélio, dois tiros por placa e uma distância de vôo da micropartícula de 6,6 cm. As freqüências de transformação obtidas variaram entre 0,9 e 2,31%. A integração dos genes heterólogos no genoma das plantas transgênicas de milho foi confirmada por análises de Southern blot e expressão dos genes bar e uidA. O protocolo de transformação genética de milho desenvolvido neste estudo irá aumentar, provavelmente, a eficiência de produção de novas linhagens tropicais de milho expressando características agronômicas desejáveis.

The objective of this work was to develop a genetic transformation system for tropical maize genotypes via particle bombardment of immature zygotic embryos. Particle bombardment was carried out using a genetic construct with bar and uidA genes under control of CaMV35S promoter. The best conditions to transform maize tropical inbred lines L3 and L1345 were obtained when immature embryos were cultivated, prior to the bombardment, in higher osmolarity during 4 hours and bombarded at an acceleration helium gas pressure of 1,100 psi, two shots per plate, and a microcarrier flying distance of 6.6 cm. Transformation frequencies obtained using these conditions ranged from 0.9 to 2.31%. Integration of foreign genes into the genome of maize plants was confirmed by Southern blot analysis as well as bar and uidA gene expressions. The maize genetic transformation protocol developed in this work will possibly improve the efficiency to produce new transgenic tropical maize lines expressing desirable agronomic characteristics.

Objetivou-se a indução de calos embriogênicos em cupuaçuzeiro, em função do tipo de explante e meio de cultura. Foram testados como explantes, segmentos cotiledonares e eixos embrionários divididos em três partes: região da plúmula, radícula e hipocótilo. Os explantes foram cultivados em 2 diferentes meios de cultura: 1) MS suplementado com 2,4-D (1 mg L-1) e Cinetina (0,25 mg L-1); 2) MS acrescido de ANA (5 mg L-1) e Cinetina (0,25 mg L-1). Constatou-se que a região do hipocótilo foi a parte mais responsiva do eixo embrionário, formando calos com aspecto branco e friável. As auxinas testadas nos meios não estimularam o processo embriogênico em calos de cupuaçuzeiro.

It was studied the induction of embryogenics calli in cupuassu, in function of kind of explant and culture medium. Cotyledons segments and embryonic axes were tested and divided in three parts: region of plumule, radicule and hypocotile. The explants were cultivated in two different culture medium: 1) MS supplemented with 2,4-D (1 mg L-1) and Kinetin (0,25 mg L-1); 2) MS supplemented with NAA (5 mg L-1) and Kinetin (0,25 mg L-1). The hypocotile region demonstrated to be more responsive segment of the embryonic axe, forming callus with white and friable aspect. No somatic embryogenesis was evidenced in callus of cupuassu with auxines testeds in the medium.

A técnica da biobalística foi utilizada com o objetivo de adaptar um protocolo para transformação de plantas de cupuaçu. Segmentos foliares de cupuaçu foram bombardeados com um plasmídio contendo o gene reportador da antocianina, utilizando-se as pressões de hélio de 650, 1000 e 1100psi. Após o bombardeamento, os explantes foram transferidos para meio MS por 24 horas e, após este período de incubação, pontos vermelhos foram detectados utilizando-se um estereomicroscópio Stemi SV11 Zeiss (Germany). A expressão do gene da antocianina foi observada nas pressões de 650 e 1000psi, entretanto necroses foram encontradas na pressão de 1100psi. Demonstrou-se que os genes C1 e R’ da síntese de antocianina, sob o controle do promotor 35S, podem ser utilizados como repórteres para o monitoramento dos eventos de transformação em cupuaçu.

The biolistic technique was used with the objective of adapting a transformation protocol to cupuassu plants. Foliar paths of cupuassu were bombed with a plasmid, containing the antocianine reporter gene with helium pressures of 650, 1000 and 1100 psi. The bombarded explants were transferred to half MS medium for 24 hours for incubation and red points were detected using a stereomicroscope Stemi SV11 Zeiss (Germany). The expression of the antocianine gene (red points) was observed with pressures of 650 and 1000 psi and necroses were found when 1100 psi were used. Genes C1 and R ‘ of the antocianina synthesis, under the control of the promoter 35S, can be used as reporters to monitor transformation events in cupuassu.

Foram estudados os efeitos da concentração de sais, doses de sacarose e freqüência de renovação do meio de cultura para o desenvolvimento de eixos embrionários de cupuaçu (Theobroma grandiflorum Schum.). Testaram-se 2 concentrações de sais MS (100 e 50%), 2 níveis de sacarose (1,5 e 3%) e 3 freqüências de renovação dos meios (sem renovação, renovação aos 30 e aos 60 dias), com os meios acrescidos de ANA (0,5 mg/L) e BAP (0,3 mg/L.), semi-solidificados com ágar 0,7% e pH 5,7. Observou-se que a utilização do meio MS na concentração de sais completa, com a adição de 3% de sacarose e renovações do meio em intervalos de 30 dias, apresentou melhor desenvolvimento dos eixos embrionários.

The effects of concentration of salts and sucrose and culture medium renewal frequency on cupuassu (Theobroma grandiflorum Schum.) embryonic axes development were studied. Two salts concentrations of MS (100 and 50%), two sucrose levels (1.5 and 3%) and three explants subcultives (without medium renewal, renewal at 30 and 60 days) were tested, with NAA (0.5 mg/L) and BAP (0.3 mg/L) in the MS medium. The use of MS at full concentration, with addition of 3% of sucrose, and renewals of the medium at 30 day intervals promoted better cupuassu embryonic axes development.

Objetivou-se estudar o efeito da concentração de auxina e do meio líquido sobre o desenvolvimento de calos de cupuaçuzeiro. Segmentos de eixos embrionários e cotilédones, obtidos de frutos de cupuaçu dos tipos Mamorana e Redondo, foram cultivados em 4 meios de cultura diferentes: 1) meio MS (50%), suplementado com 2,4-D (1; 2; 4; 8 mg/L); 2) sais N6 (SIGMA) (4 g/L), acrescidos de 2,4-D (0; 2; 4 mg/L) e ANA (0; 3; 5 mg/L); 3) igual ao anterior, suplementado apenas com ANA (3 mg/L); e 4) meio MS, acrescido com ANA (1 mM). Calos com aspecto branco e brilhante foram observados em segmentos de eixos embrionários e cotilédones, cultivados nas menores concentrações de meio 1 (1 e 2 mg/L), enquanto nas maiores concentrações (4 e 8 mg/L) se observou a formação de calos e massa calosa branco-opaca, em eixos embrionários e em segmentos cotiledonares, estas estruturas tornaram-se escuras dentro de oito semanas. Usando o meio 2, um grande número de raízes foram formadas, enquanto o mesmo meio suplementado apenas com ANA (3; 5 mg/L) originou uma massa calosa. A combinação de ANA e 2,4-D, 3 e 2 mg/L, respectivamente, promoveu a formação de calos brancos e raízes. A transferência das culturas para meio líquido, sem regulador de crescimento, promoveu aumento de tamanho dos explantes e escurecimento dos mesmos. O cultivo desses explantes no meio 3 resultou no aparecimento de calos amarelos, com aspecto friável, que permaneceram com a mesma aparência no meio 4.

It was studied the effect of auxin concentration and liquid medium on the development of cupuassu calli. Cupuassu embryonic axes segments and cotyledons, from kinds Mamorana and Redondo, were cultivated in four different culture media : 1) MS medium (50%) supplemented with 2,4-D (1; 2; 4; 8 mg/L); 2) N6 salts (SIGMA) (4 g/L) supplemented with 2,4-D (0; 2; 4 mg/L) and NAA (0; 3; 5 mg/L); 3) similar to the previous medium supplemented only with NAA (3 mg/L) and, 4) MS medium, supplemented with NAA (1 mM). Calli with white and bright aspect were observed in embryonic axes and cotyledons, cultivated in the smallest concentrations of medium 1 (1 and 2 mg/L), while in the largest concentrations (4 and 8 mg/L) opaque white calli and calli mass were formed in embryonic axes and in cotyledons segments, these structures became brownish within eight weeks. Using medium 2, a great number of roots were formed, while this same medium supplemented only with NAA (3; 5 mg/L) originated a calli mass. . The presence of NAA and 2,4-D, 3 and 2 mg/L respectively, promoted the formation of white calli and roots. The transfer of the explants to liquid medium, without growth regulator, promoted an increase of explants size and browning of them. The cultivation of those explants in medium 3 resulted in the formation of yellow calli, with friable aspect, that kept the same aspect in medium 4.