RESUMO: Este estudo teve como objetivo avaliar a diversidade genética e a suscetibilidade a antimicrobianos de cepas de Staphylococcus aureus isoladas de vacas leiteiras em Minas Gerais, Brasil. Trinta e sete cepas provenientes de cinco municípios (oito rebanhos) foram genotipadas usando a técnica multi-locus sequence typing (MLST) e a suscetibilidade a 12 antimicrobianos foi avaliada pelo método de difusão em disco. Foram detectadas altas taxas de resistência para penicilina [75,68% (28/37)], ampicilina [70,27% (26/37)] e tetraciclina [70,27% (26/37)] entre os isolados. A multirresistência foi observada em sete [18,92% (7/37)] isolados e dois foram classificados como sugestivos de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Entre os 37 isolados, 33 novos sequence types (ST) e dois STs conhecidos (ST126 e ST746) foram identificados pelo MLST. Os complexos clonais mais frequentemente observados foram: CC97 [78,38%; (29/37)], CC1 [8,11%; (3/37)] e CC5 [5,40%; (2/37)]. Foi construída uma minimum‐spanning tree (MSTs) com todos isolados estudados e esta não mostrou padrão de agrupamento quando comparada com dados epidemiológicos como municípios e rebanho, do qual foi isolado, e perfis de resistência a antimicrobianos. Uma segunda MST foi construída comparando os isolados deste estudo e todas as cepas de S. aureus depositadas no banco de dados PubMLST provenientes do Brasil, que mostrou associação entre o genótipo, STs e a origem da cepa. Foi possível observar entre os isolados do estudo que, aqueles que pertenciam ao CC97, eram geneticamente mais próximos das cepas depositadas no PubMLST isoladas de leite e de produtos lácteos, enquanto aqueles que pertenciam aos CC1 e CC5 estavam mais próximos a cepas isoladas de humanos ou do ambiente de fazendas e indústrias de laticínios. Em conclusão, nossos resultados mostraram um alto índice de resistência às penicilinas e tetraciclinas e grande diversidade genética entre as cepas de S. aureus isoladas de casos de mastite bovina.

ABSTRACT: This study evaluated the genetic diversity and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolates from dairy cows in Minas Gerais, Brazil. Thirty-seven isolates from five municipalities (8 herds) were genotyped using multi-locus sequence typing (MLST) and susceptibility to 12 antimicrobial agents was tested using the disk diffusion method. High resistance rates for penicillin [75.68% (28/37)], ampicillin [70.27% (26/37)], and tetracycline [70.27% (26/37)] were detected. Multidrug resistance was observed in seven [18.92% (7/37)] isolates, and two were suggestive of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Among the 37 isolates, 33 novel sequence types (ST) and two known STs (ST126 and ST746) were identified in MLST. The clonal complexes more frequently observed were: CC97 [78.38%; (29/37)], CC1 [8.11%; (3/37)] and CC5 [5.40%; (2/37)]. Minimum‐spanning tree (MST) analysis according to data from municipalities, herds, and resistance patterns for all isolates did not show any clustering pattern. However, the MST comparing all Brazilian S. aureus isolates deposited in the PubMLST database and from this study depicted an association between the genotype and strain origin (clinical sample). Isolates from this study that belong to CC97 were close to database isolates from milk and dairy products, while those that belong to CC1 and CC5 were close to database isolates from human sources and the environment of dairy farms or industries. In conclusion, our results showed a high rate of resistance to penicillins and tetracyclines and great genetic diversity among the S. aureus isolates from bovine mastitis genotyped in the present study.

RESUMO: Nós comparamos o potencial de técnicas rotineiras utilizadas para a identificação de espécies de Staphylococcus, com o objetivo de avaliar a acurácia delas na detecção de 43 isolados de Staphylococcus chromogenes envolvidos com mastite bovina que, apesar de ser uma espécie coagulase-negativa, são capazes de coagular o plasma. Essas cepas poderiam ser erroneamente suspeitas de serem S. aureus e levarem a um tratamento não adequado da doença. MALDI-TOF, PCR-RFLP do gene da chaperonina groEL e sequenciamento do gene do rRNA 16S e do gene do fator de elongação Tu, tuf, foram avaliados. Os resultados dos quatro métodos foram coincidentes para apenas metade das cepas, devido à baixa precisão da PCR-RFLP com groEL (51,2% de acurácia). Apesar de todos os resultados do sequenciamento serem idênticos, a alta precisão dos resultados do MALDI-TOF (97,7% de acurácia, com apenas uma cepa identificada incorretamente) encoraja o uso dessa técnica, pois, não requer preparação laboriosa de amostras, sendo rápida e simples de executar.

ABSTRACT: We compared the potential of routine techniques used for the identification of Staphylococcus species, aiming to evaluate their accuracy in the detection of 43 Staphylococcus chromogenes strains isolated from bovine mastitis that, despite being a coagulase-negative species, are able to clot plasma. These strains could be mistakenly suspected to be S. aureus and lead to an unappropriated treatment of the disease. MALDI-TOF, PCR-RFLP of the chaperonine gene groEL, and sequencing of the 16S rRNA and elongation factor Tu gene tuf were employed. Results from the four methods were coincident for only half of the strains because of the low accuracy of the groEL PCR-RFLP (51.2% accuracy). Even though all the sequencing results were identical, the high accuracy of the MALDI-TOF results (97.7% accuracy, with only one strain misidentified) encourage the use of this technique, since it does not require laborious sample preparation, being fast and simple to perform.

Este estudo foi realizado com objetivo de estabelecer a relação entre contagem de células somáticas (CCS) e a liberação de bactérias de quartos mamários de acordo com os patógenos da mastite. Amostras de leite de 638 quartos mamários foram examinadas para identificação dos patógenos da mastite, CCS e contagem total de bactérias (CTB). Estatísticas descritivas foram utilizadas para avaliar os dados brutos de CCS e CTB. A diferença entre médias para CCS e CTB de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foi avaliada pelo teste T para amostras independentes. Foram realizadas a correlação de Pearson, de Spearman e regressão linear com os dados transformados. As médias geométricas de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foram (células mL-1; UFC mL-1): sem crescimento (52.000; 12.000), estafilococos coagulase negativo (85.000; 17.000), Staphylococcus aureus (587.000; 77000); outros estreptococus (432.000; 108.000) e Streptococcus agalactiae (1.572.000; 333.000). A correlação de Pearson e Spearman entre CCS e CTB foi maior que 0,60 para todos os patógenos da mastite. O coeficiente angular das regressões lineares mostrou diferentes aumentos da CTB como o mesmo aumento da CCS de acordo com os patógenos da mastite. O coeficiente angular para o S. agalactiae (0.542) foi maior em relação aos outros patógenos da mastite. Os resultados sugerem que a intensidade do processo inflamatório foi associada com a quantidade de bactérias da mastite liberada pela glândula mamária.

This study was conducted to establish the relationship between somatic cell count (SCC) and bacterial shedding from mammary quarters according to mastitis pathogens. Milk samples from 638 mammary quarters were examined for mastitis pathogens, SCC and total bacterial count (TBC). The raw data of SCC and TBC were used to perform descriptive statistics. The significance of the arithmetic mean differences between SCC and TBC according to bacteriological examination results was determined by a two-tailed unpaired t-test. Pearson and Spearman´s correlations were done with logarithmic data and linear regression analyses. The geometric means of the bacteriological examination results were (cells mL-1; CFU mL-1): no growth (52,000; 12,000), coagulase-negative staphylococci (85,000; 17,000), Staphylococcus aureus (587,000; 77,000); other streptococci (432,000; 108,000) and Streptococcus agalactiae (1,572,000; 333,000). The Pearson and Spearman's correlations between SCC and TBC were higher than 0.60 for all mastitis pathogens. The regression analyses slopes showed different increase in TBC with the same increase in SCC according to mastitis pathogens. The slope for S. agalactiae (0.542) was higher than that for other mastitis pathogens. The results suggest that the intensity of inflammatory process was associated with number of mastitis pathogens shedding from the mammary gland.

Com os objetivos de quantificar, isolar e caracterizar bactérias psicrotróficas contaminantes de leite cru refrigerado, produzido na região da Zona da Mata de Minas Gerais e Sudeste do Rio de Janeiro, foram analisadas amostras de leite coletadas de 20 tanques coletivos e 23 tanques individuais. As contagens de bactérias psicrotróficas nas amostras de leite para os dois tipos de tanques de refrigeração variaram entre 10² e 10(7) Unidades Formadoras de Colônias (UFC) ml-1, porém, um maior número de tanques coletivos apresentou contagens acima de 1 x 10(5) UFC ml-1. Foi verificada a predominância de bactérias psicrotróficas gram-negativas (81,2%), que foram identificadas pelos sistemas API 20E e API 20NE nos gêneros: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia,Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia. As bactérias gram-positivas (18,8%) foram identificadas com API 50 CH, API Coryne e API Staph, nos gêneros: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. Os sistemas API utilizados não identificaram todos os isolados bacterianos. Pseudomonas foi o gênero mais isolado e P. fluorescens foi a espécie predominante. A maioria dos isolados bacterianos apresentou atividade proteolítica e/ou lipolítica a temperaturas de refrigeração de 4°C, 7°C e 10°C, evidenciando seu alto potencial de deterioração do leite e dos produtos lácteos. Os resultados ressaltam que maior atenção deve ser dada aos procedimentos que impeçam a contaminação do leite por esses microrganismos.

This study aimed to quantify, isolate and characterize psychrotrophic bacteria from refrigerated raw milk produced at the ‘Mata’ Region of Minas Gerais State and Southeast of Rio de Janeiro State, Brazil. Raw milk samples, were collected at the farms, from 20 collective refrigerated tanks and 23 individual refrigerated tanks. The psychrotrophic bacteria counting ranged from 10² to 10(7) Colony Forming Units (CFU) ml-1 for both types of refrigerated tanks, but most of the collective tanks showed counts higher than 1 x 10(5) CFU ml-1. Predominance of psychrotrophic gram-negative bacteria (81.2%), that were identified by API 20E and API 20NE as belonging to genera: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia, Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia were oserved. The gram-positive bacteria (18.8%), were identified by API 50 CH, API Coryne and API Staph, to genera: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. The API systems utilized could not identify all the bacterial isolates. Pseudomonas was the genus most isolated with P. fluorescens as the predominant species. Most of the isolates presented proteolytic and/or lipolytic activity at 4°C, 7°C and 10°C showing high potential for milk and milk products spoilage. The results indicated that more attention must be taken to the procedures necessaries to reduce milk contamination with psychrotrophic bacteria.

Os testes de produção de acetoína, determinação da atividade da enzima b-galactosidase e utilização anaeróbica do manitol em conjunto com a susceptibilidade à acriflavina foram avaliados para diferenciação de amostras de Staphylococcus coagulase-positivas (SCP) isoladas de mastite bovina. As amostras foram classificadas no gênero Staphylococcus por meio da sensibilidade a furazolidona, resistência à bacitracina, produção de ácido em aerobiose a partir de glicerol na presença de 0,4mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 de eritromicina e catalase, e foram positivas no teste de coagulase do plasma de coelho em tubos. A susceptibilidade à acriflavina foi testada em placas de ágar Baird Parker e ágar P com 7,0mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 de acriflavina. Como controle dos testes, foram incluídas cinco amostras coagulase-negativas de S. hyicus isoladas de leite bovino e identificadas pelo sistema API Staph e a amostra de S. aureus ATCC 29213. Trinta e oito das 49 amostras de SCP foram identificadas como S. aureus e 11 como S. hyicus, não sendo identificada nenhuma como S. intermedius. O sistema API Staph foi empregado para confirmar a identificação das amostras coagulase-positivas de S. hyicus, sete amostras de S. aureus negativas no teste de produção de acetoína e quatro negativas na fermentação anaeróbica do manitol. Todas as amostras de S. aureus foram resistentes a acriflavina, enquanto as de S. hyicus foram sensíveis. Concluiu-se que a sensibilidade a acriflavina pode ser empregada juntamente com os testes de coagulase e produção de acetoína na diferenciação de SCP isolados de mastite bovina.

Production of acetoin, acid production from mannitol under anaerobiosis and b-galactosidase activity in addition to acriflavin susceptibility were evaluated to differentiate between coagulase-positive strains of Staphylococcus (CPS) isolated from bovine mastitis. The strains were classified in the genus Staphylococcus by means of sensitivity to furazolidone, resistance to bacitracin, aerobic acid from glycerol in the presence of 0.4mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 of eritromicin, catalase, and coagulated rabbit plasma by the tube test. The acriflavin susceptibility was tested on Baird Parker and P agar plates containing 7mg m<IMG SRC="http:/img/fbpe/cr/v32n1/a14img01.gif">-1 of acriflavin. Five coagulase-negative S. hyicus strains identified by the API Staph system and S. aureus ATCC 29213 were used as test controls. Thirty-eight out of the 49 CPS were identified as S. aureus and 11 as S. hyicus, while S. intermedius was not found. The API Staph system was used to confirm the identification of the coagulase-positive strains of S. hyicus, seven S. aureus strains not producing acetoin and four negative for anaerobic fermentation of mannitol. All the strains identified as S. aureus were resistant to acriflavin whereas S. hyicus were sensitive. It was concluded that the sensitivity to acriflavin can be used in addition to the tests of coagulase and acetoin production to differentiate CPS isolated from bovine mastitis.

A pele da teta é uma das principais fontes de contaminação microbiana do leite cru, além de ser uma fonte de infecção da glândula mamária. Este estudo comparou diferentes métodos de preparação do úbere, incluindo a participação do bezerro para estimular a descida do leite, em relação à contaminação microbiana da pele da teta. Um experimento com 36 vacas ordenhadas mecanicamente foi conduzido para comparar três procedimentos (A, B, C) de preparação do úbere. Duas tetas de cada vaca foram amostradas para contagem total de bactérias (CTB) e de coliformes, antes e após lavagem com água e secagem com papel toalha descartável (A); procedimento A, mais imersão das tetas em solução de iodo (4.000ppm) e secagem com papel toalha descartável (B); higienização com toalha de papel embebida em solução desinfetante contendo clorexidina (C). O segundo experimento incluiu 16 vacas ordenhadas manualmente, na presença do bezerro. Permitiu-se a cada bezerro mamar as quatro tetas por alguns segundos, de acordo com o manejo do rebanho. Amostras para bacteriologia de duas tetas de cada vaca foram coletadas, antes, após a mamada do bezerro, e após higienização semelhante ao procedimento C, citado acima. Os tratamentos foram analisados usando-se o teste não- paramétrico de Kruskal-Wallis, considerando-se os dados de tCTB após o uso de um dos métodos de preparação do úbere ou da mamada do bezerro. Usou-se a transformação das contagens bacterianas para a escala logarítmica em base 10, com a fórmula tCTB=log10(CTB+0,5). Para os grupos A, B e C (primeiro experimento), os valores médios de diminuição de tCTB foram 1,8, 2,2 e 2,4, respectivamente. No segundo experimento, as CTB's aumentaram significativamente (P<0,05) de 3,2 para 4,3 após a mamada do bezerro, mas houve uma redução (P<0,01) de mais de dez vezes após a aplicação do desinfetante (2,0). Os resultados indicaram que: (a) lavagem das tetas com água seguida de secagem com papel toalha reduz o número de microrganismos da superfície das tetas, mas a redução é muito maior quando se emprega um desinfetante; (b) a mamada do bezerro antes da ordenha aumenta em mais de dez vezes o número de bactérias na superfície das tetas; (c) o número de bactérias na pele das tetas pode ser reduzido em mais de 90% após a mamada do bezerro, se as tetas forem cuidadosamente desinfetadas. Nas condições dos experimentos realizados, a presença de coliformes foi insignificante.

The teat skin is one of the main sources of microbial contamination of raw milk as well as a source of mastitis infection. This study assessed the microbial load of the teat skin following the application of the different practices for preparing the udder, including the use of calf suckling to stimulate the letdown of milk. Thirty-six cows milked by machine were included in one experiment. Two teats of each cow were sampled for bacteriology before and after using one of three methods of udder preparation, as follows: rinsing with water and drying with single paper towels (A); method A plus pre-dipping with an iodine teat dip (4,000ppm) and drying with single paper towels (B); wiping teats using a commercial wet non-woven wipe pre-soaked with a solution containing chlorexidine (C). The second experiment included 16 cows milked by hand. The calf of each cow was allowed to suck the four teats for a few seconds, and then two teats per cow were sampled for bacteriology. Samples were collected before, after calf sucking and following teat pre-milking treatment (as for group C, above). Statistical analysis was conducted on transformed (log10) data with tTBC=log10(TBC+0.5) using a Kruskal-Wallis test. Each treatment was analysed considering the difference in tTBC after the use of either method of preparation of the udder or calf sucking. For groups A, B and C (first experiment), tTBC values were reduced 1.8, 2.2 and 2.4, respectively. In the second experiment, tTBC increased significantly (P<0,05) after calf sucking (from 3.2 to 4.3). After disinfection the tTBC was significantly reduced to 2.0. These results show that: (a) teat rinsing with water and wiping dry reduces the number of microorganisms on the teat skin, but the reduction is significantly higher when teats are disinfected; (b) calf sucking before milking increases significantly the number of microorganisms on teat skin; (c) the number of microorganisms on teat skin can be reduced more than 10 times after calf sucking if teats are disinfected. Very low numbers or no growth of coliforms were observed in all cases.

Um caso de mastite clínica causada por Prototheca zopfii em uma vaca de um rebanho leiteiro localizado na Zona da Mata do Estado de Minas Gerais foi estudado. O animal apresentou sinais clínicos nos quartos mamárias anteriores e queda acentuada na produção de leite. Após o diagnóstico inicial, o animal foi observado durante onze meses, do início da manifestação da doença até 12 dias após o parto. Exames microbiológicos do leite foram realizadas aos 7, 30, 39, 49, 65, 326 e 331 dias após o isolamento inicial, sendo os dois últimos exames realizados 7 e 12 dias após o parto. As amostras de P. zopfii isoladas apresentaram resistência in vitro a: ampicilina, canamicina, cefatoridina, enrofloxacina, estreptomicina, gentamicina, neomicina, oxacilina, penicilina, sulfonamidas e trimetoprim x sulfametoxazol. Foi avaliada a susceptibilidade in vitro das amostras de P. zopfii a um produto natural constituído de extrato de sementes de frutas cítricas, obtido comercialmente. A menor concentração que inibiu totalmente a alga foi 1:500. Recomendou-se um tratamento com a diluição a 1:200 do extrato em solução fisiológica estéril contendo timerosal a 1:30.000 como conservante, em doses diárias de 20ml, por via intramamária. O tratamento foi realizado inicialmente durante sete dias. Após este período houve redução, mas não a completa eliminação dos organismos do leite. Foi, então, recomendado mais um período de 15 dias de tratamento, de modo semelhante ao primeiro. Trinta e nove dias após o diagnóstico inicial não foi mais isolado P. zopfii do leite dos quartos afetados e a produção retornou a níveis semelhantes de antes da infecção. Amostras de leite naturalmente infectadas foram congelados a -20°C. Células viáveis de P. zopfii foram recuperadas de amostras mantidas até 38 dias nestas condições.

A clinical case of mastitis caused by Prototheca zopfii in a cow from a dairy herd located in the region of Zona da Mata, Minas Gerais State, was studied. The cow showed clinical signs of mastitis in both front mammary quarters and marked reduction on milk production. Following the diagnosis the animal was accompanied for 11 months. Milk samples collected at days l, 7, 30, 39, 49, 65, 326 and 331 were cultured. The last two exams were conducted at 7 and 12 days after calving. The P. zopfii strains were resistant in vitro to: ampicillin, kanamycin, cephalothin, enrofloxacin, streptomycin, gentamycin, neomycin, oxacillin, penicillin G, sulfonamides and trimethoprim/sulfamethoxazole. The strains showed sensitivity in vitro to a natural extract made of citrous seed, commercially available. The smallest concentration that completely inhibited the growth of the organisms was 1:500. The infected glands were treated intrammamary, with an extract preparation of a 1:200 dilution in 0.85%(p/v) NaCl containing 1:30,000 thimerosal as preservative. Doses of 20ml were applied daily, during seven days. After this period, P. zopfii was still isolated from milk samples, although in smaller numbers. The treatment was resumed for a period of 15 days. At day 39 after diagnosis the infected quarters were cultured negative and microbiological exams carried out from day 39 onward resulted negative. The milk production returned to levels as before infection. Naturally infected milk samples were kept frozen (-20°C) and viable P. zopfii were recovered until 38 days under this condition.

O "California Mastitis Test" (CMT) estima o conteúdo de células somáticas no leite e é interpretado subjetivamente, estabelecendo-se escores que, na maioria dos casos, variam de 1 a 5. O escore 1 indica uma reação completamente negativa e os de 2-5 indicam graus crescentes de resposta inflamatória do úbere, sendo normalmente considerados como indicativos de mastite subclínica. Dependendo da interpretação dos escores, o CMT pode produzir resultados falso-positivos ou falso-negativos. Esse trabalho teve o objetivo de avaliar a sensibilidade e a especificidade do CMT em relação à contagem de células somáticas (CCS). Foram utilizadas 3.012 amostras de leite provenientes de 760 vacas Holandesas ou mestiças Holandês-Zebu, pertencentes a 15 rebanhos. Todas as amostras foram submetidas ao CMT e processadas para CCS em equipamento Fossomatic 90. Os valores médios de CCS (x 1.000 células/ml) obtidos para os escores de CMT foram 1 (79,9), 2 (333,5), 3 (670,3), 4 (1.354,0) e 5 (4.455,6). Três opções de interpretação (doente/não-doente) para o CMT foram testadas, em relação aos valores de CCS, iniciando com 100.000 células/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, e 5; (b) 1 e 2 versus 3, 4 e 5; (c) 1, 2, 3 versus 4 e 5. As sensibilidades do CMT em identificar corretamente quartos mamários acima de 200.000 células/ml foram 79%, 61% e 34%, para as opções a, b e c, respectivamente. Para identificar corretamente contagens acima de 500.000 células/ml, as sensibilidades do CMT, para as opções a, b e c, foram, respectivamente: 93%, 82% e 54%. A sensibilidade do CMT em identificar quartos mamários com mastite subclínica foi adequada (acima de 80%) quando a interpretação do teste foi mais rigorosa (opções a e b). A interpretação da reação 3 como negativa (opção c) só alcançou sensibilidade de 80% para contagens entre 1.200.000 e 1.400.000 células/ml. As especificidades do CMT, para CCS de 200.000 e 500.000 foram, respectivamente, 90% e 80% (opção a), 97% e 90% (opção b) e 99% e 97% (opção c).

The California Mastitis Test (CMT) is a simple and widely used diagnostic tool for subclinical mastitis. It is used even in areas where laboratory facilities are available for diagnosis and monitoring program purposes. CMT usually score 1-5, where 1 indicates a completely negative reaction and 2-5 increasing degrees of inflammatory reaction of the udder. The reactions 2-5, 3-5 or 4-5 may be considered as indicative of subclinical mastitis, bever, may produce either false-positive or false-negative results. The aim of this study waecause they are related to an increase of the somatic cell count (SCC) in the milk. This variation, hows to assess the sensitivity and specificity of the CMT in comparison with SCC. A total of 3,012 quarter milk samples from 760 lactating cows were examined. CMT was evaluated at the moment of sampling at cow side and SCC in the laboratory, with a fluoro-opto-electronic method (Fossomatic 90). The average CCS (x 1,000 cells/ml) for CMT scores were: 1 (79.9), 2 (333.5), 3 (670.3), 4 (1,354.0) and 5 (4,455.6). Three options for CMT interpretation were evaluated in relation to a range of CCS, starting from 100,000 cells/ml: (a) 1 versus 2, 3, 4, and 5; (b) 1 and 2 versus 3, 4 and 5; and (c) 1, 2 and 3 versus 4 and 5. The sensitivities of CMT scoring to detect quarters with SCC >200,000/ml were 79%, 61% e 34% for options a, b and c, respectively. The sensitivities of CMT scores for SCC >500,000/ml for options a, b and c, were, respectively, 93%, 82% e 54%. The sensitivity of CMT scores to identify subclinical mastitis was satisfactory (above 80%) when options b and c were used. The interpretation of CMT score 3 as negative for subclinical mastitis was considered as adequate (sensitivity around 80%) only when CCS ranged between 1,200,000 and 1,400,000 cells/ml. The specificities of CMT scoring for CCS of 200,000 and 500,000 were, respectively, 90% and 80% (option a), 97% and 90% (option b) and 99% and 97% (option c).

Com o objetivo de verificar a utilidade da detecção de soroalbumina (BSA) e imunoglobulinas (Ig) no leite como diagnóstico da mastite subclínica, avaliou-se a relação entre a concentração dessas proteínas, o exame microbiológico e o teste "California Mastitis Test" (CMT). Amostras de leite de 172 quartos mamários previamente examinadas pelo CMT foram colhidas e levadas imediatamente ao laboratório para exames bacteriológicos. Uma alíquota de cada amostra foi congelada a -20°C e posteriomente testada para a presença de BSA e Ig, por meio da técnica de imunodifusão radial simples. Das amostras testadas, 111 apresentaram níveis fisiológicos de BSA (< 0,2mg/ml) e de Ig (< 0,5 mg/ml), 22 apresentaram níveis elevados de ambas proteínas e 39 apresentaram níveis elevados de Ig, mas níveis fisiológicos de BSA. Concentrações de BSA e Ig acima dos limites fisiológicos foram observadas mais frequentemente em amostras onde o CMT apresentou reação de maior severidade (+++) e naquelas onde foram isoladas Streptococcus spp. e Staphylococcus aureus. Entre as 88 amostras positivas no exame bacteriológico, níveis de BSA e Ig acima do limite fisiológico foram observados em 10 e 35, respectivamente. Em amostras onde não se isolou bactérias (84 das 172 examinadas), níveis fisiológicos de BSA e Ig foram observados em 72 e 58 delas, respectivamente. A detecção de BSA e Ig nas amostras de leite forneceu informações adicionais sobre o grau de lesão tecidual, mas não pode ser considerada como um indicador sensível para detecção precoce da reação inflamatória.

This work aimed to evaluate the feasibility of milk serum albumin (BSA) and immunoglobulin (Ig) detection for the diagnosis of subclinical mastitis. Bacteriological examinations and concentrations of BSA and Ig were determined in 172 milk samples. The samples were also examined by the California Mastitis Test (CMT). Immediately after collection, the samples were taken to the laboratory and bacteriologically examined. An aliquot of each sample was kept at -20°C and later, concentrations of BSA and Ig were determined by radial immunodiffusion. A total of 111 milk samples had physiological levels of BSA (< 0.2 mg/ml) and Ig (< 0.5mg/ml). Twenty-two samples had higher levels of both proteins and 39 samples had higher levels of Ig and physiological levels of BSA. Concentrations of BSA and Ig above the physiological levels were more frequently observed in quarters samples with severo (+++) CMT reaction and udder infection caused by Streptococcus spp and Staphylococcus aureus. In bacteriologically positive quarters (88 out of 172), increased levels of BSA and Ig were found in 10 and 35 samples, respectively. In the bacteriologically negativo quartors (84 out of 172), physiological levels of BSA and Ig were found in 72 and 58 samples, respectively. Although BSA and Ig measurements in milk samples gave further information about udder tissue damage, they can not be used as a sensitive parameter to detect early inflammatory reaction.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar amostras não hemolíticas de bactérias do gênero Haemophilus isoladas de suínos. As bactérias foram isoladas de material clínico de animais com suspeita da doença de Glässer, de leitões aparentemente sadios provenientes de quatro rebanhos com suspeita clínica desta doença e de casos de poliartrites. Além das características culturais e morfotintoriais, foram utilizados os seguintes testes para a identificação: dependência de NAD(fator V), CAMP, produção de hemolisina, indol, urease e catalase, redução do nitrato e produção de ácido dos carboidratos: glicose, sacarose, arabinose e manose. Dezessete dentre 24 amostras foram classificadas como Haemophilus parasuis (dez isoladas de animais clinicamente doentes e sete de leitões normais). Cinco destas amostras foram classificadas nos sorogrupos 2, 4, 7, ND4 e uma foi não tipável. Quatro das 24 amostras apresentaram características do grupo taxonômico C (teste de arabinose positivo) e três produziram urease. Os testes realizados não permitiram distinguir as amostras urease positivas do gênero Haemophilus das amostras não hemolíticas de Actinobacilius pleuropneumoniae. Mais de 60% das amostras apresentaram sensibilidade in vitro a: ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, danofioxacina, nitrofurantoína, penicilina G, polimixina B e tetraciclina.

The aim of this work was to characterize non haemolytic strains of the genus Haemophilus isolated from pigs. The strains were either isolated from pigs with Glässer's disease or from apparently healthy piglets, from four herds supposediy affected by the disease and from pigs with poliarthritis. The strains were characterized by dependence on NAD (V factor), CAMP test, hemolysin, indole, urease and catalase production, nitrate reduction and acid production from glucose, sucrose, arabinose and mannose. Seventeen out of the 24 strains were classified as Haemophilus parasuis (10 isolates from clinically affected animals and seven from healthy piglets). Five of these strains were identified as serovars 2, 4, 7, ND4 and one was nontypeable. Four out of the 24 strains produced acid from arabinose and were tentativelly allocated on taxonomic group C. Three strains produced urease, but the tests did not accuratelly differenciate them from Actinobacilius pleuropneumoniae. In vitro antimicrobial susceptibility test showed that more than 60% of the strains were sensitive to: ampicillin, cephalothin, chloramphenicol, danofioxacin, nitrofurantoin, penicillin, polymyxin B and tetracycline.